本文主要研究内容
作者孙珂,祝昊丹,何孔旺,王丹丹,周俊明,俞正玉,吕立新,倪艳秀（2019）在《猪链球菌4型转录调控因子GalR的生物学特性》一文中研究指出：【目的】研究分析猪链球菌4型（Streptococcus suis serotype 4,SS4）强毒株SH1510转录调控因子GalR基因的缺失对细菌生物学特性的影响,为进一步研究GalR对半乳糖代谢途径的调控及其致病机理提供理论依据。【方法】利用同源重组双交换的方法构建了SS4强毒株SH1510转录调控因子GalR基因缺失株SH1510ΔGalR,通过GalR基因内部扩增引物I1/I2进行缺失株初步筛选,进一步通过PCR和Western blotting鉴定缺失株SH1510ΔGalR。对亲本株SH1510和缺失株SH1510ΔGalR进行革兰氏染色以比较形态差异;配置基础培养基,分别加入葡萄糖、蔗糖、D-半乳糖后培养细菌,绘制细菌生长曲线,比较细菌对不同糖的利用率;将亲本株和缺失株的菌液浓度分别调整为2.5×109、5×108、1×108、2×107CFU/mL,对BALB/c小鼠进行腹腔注射以观察小鼠致死率并使用Reed-Muench法计算菌株LD50。将浓度为2×107 CFU/mL的亲本株和缺失株1﹕1等体积混合后腹腔注射BALB/c小鼠,24 h后取脑、脾、血在氯霉素抗性和无抗性THB平板上进行细菌计数,比较细菌在小鼠体内的定植能力;并以健康猪的全血模仿体内环境,将亲本株和缺失株分别加入含有SS4抗血清的健康猪全血中,37℃孵育2 h进行平板计数,比较细菌在全血中的存活能力。【结果】使用内部检测引物I1/I2做PCR,缺失株SH1510ΔGalR检测为阴性,进一步使用引物C1/C2、O1/C2、O2/C1、O1/O2鉴定缺失株SH1510ΔGalR,分别扩增出1 056、2 121、2 094、3 147 bp的片段,结果和预期相符。Western blotting鉴定结果表明亲本株SH1510可与粗制GalR多抗兔血清发生特异性结合,在37 kD处出现单一条带,但缺失株SH1510ΔGalR没有条带出现。PCR和Western blotting鉴定结果均表明缺失株SH1510ΔGalR已构建成功。亲本株和缺失株经革兰氏染色,光学显微镜下观察可见亲本株和缺失株均呈链状排列,长度相似,形态无显著差异。在葡萄糖和蔗糖作为唯一糖原的生长条件下,亲本株和缺失株的生长情况相仿,而当糖原为D-半乳糖时,缺失株的生长速率和OD600值明显低于亲本株。另外,从最高OD600值可以看出,猪链球菌SH1510对糖的利用率为葡萄糖>蔗糖>D-半乳糖。小鼠致病性试验中,亲本株和缺失株的LD50分别为1×108CFU和1.62×108CFU,缺失株对小鼠的致病性下降了1.62倍。体内竞争感染试验结果显示,缺失株在小鼠的脑、脾、血液中的细菌分离数均远低于亲本株,差异极显著（P<0.01）。全血存活试验表示,亲本株的存活率为35.2%,缺失株的存活率为27.3%,缺失株SH1510ΔGalR比亲本株SH1510在全血中的存活率显著下降（P<0.05）。【结论】GalR基因可促进猪链球菌4型对半乳糖的利用,同时对SH1510的毒力有直接或间接的调控作用。
Abstract
【mu de 】yan jiu fen xi zhu lian qiu jun 4xing （Streptococcus suis serotype 4,SS4）jiang du zhu SH1510zhuai lu diao kong yin zi GalRji yin de que shi dui xi jun sheng wu xue te xing de ying xiang ,wei jin yi bu yan jiu GalRdui ban ru tang dai xie tu jing de diao kong ji ji zhi bing ji li di gong li lun yi ju 。【fang fa 】li yong tong yuan chong zu shuang jiao huan de fang fa gou jian le SS4jiang du zhu SH1510zhuai lu diao kong yin zi GalRji yin que shi zhu SH1510ΔGalR,tong guo GalRji yin nei bu kuo zeng yin wu I1/I2jin hang que shi zhu chu bu shai shua ,jin yi bu tong guo PCRhe Western blottingjian ding que shi zhu SH1510ΔGalR。dui qin ben zhu SH1510he que shi zhu SH1510ΔGalRjin hang ge lan shi ran se yi bi jiao xing tai cha yi ;pei zhi ji chu pei yang ji ,fen bie jia ru pu tao tang 、zhe tang 、D-ban ru tang hou pei yang xi jun ,hui zhi xi jun sheng chang qu xian ,bi jiao xi jun dui bu tong tang de li yong lv ;jiang qin ben zhu he que shi zhu de jun ye nong du fen bie diao zheng wei 2.5×109、5×108、1×108、2×107CFU/mL,dui BALB/cxiao shu jin hang fu qiang zhu she yi guan cha xiao shu zhi si lv bing shi yong Reed-Muenchfa ji suan jun zhu LD50。jiang nong du wei 2×107 CFU/mLde qin ben zhu he que shi zhu 1﹕1deng ti ji hun ge hou fu qiang zhu she BALB/cxiao shu ,24 hhou qu nao 、pi 、xie zai lv mei su kang xing he mo kang xing THBping ban shang jin hang xi jun ji shu ,bi jiao xi jun zai xiao shu ti nei de ding zhi neng li ;bing yi jian kang zhu de quan xie mo fang ti nei huan jing ,jiang qin ben zhu he que shi zhu fen bie jia ru han you SS4kang xie qing de jian kang zhu quan xie zhong ,37℃fu yo 2 hjin hang ping ban ji shu ,bi jiao xi jun zai quan xie zhong de cun huo neng li 。【jie guo 】shi yong nei bu jian ce yin wu I1/I2zuo PCR,que shi zhu SH1510ΔGalRjian ce wei yin xing ,jin yi bu shi yong yin wu C1/C2、O1/C2、O2/C1、O1/O2jian ding que shi zhu SH1510ΔGalR,fen bie kuo zeng chu 1 056、2 121、2 094、3 147 bpde pian duan ,jie guo he yu ji xiang fu 。Western blottingjian ding jie guo biao ming qin ben zhu SH1510ke yu cu zhi GalRduo kang tu xie qing fa sheng te yi xing jie ge ,zai 37 kDchu chu xian chan yi tiao dai ,dan que shi zhu SH1510ΔGalRmei you tiao dai chu xian 。PCRhe Western blottingjian ding jie guo jun biao ming que shi zhu SH1510ΔGalRyi gou jian cheng gong 。qin ben zhu he que shi zhu jing ge lan shi ran se ,guang xue xian wei jing xia guan cha ke jian qin ben zhu he que shi zhu jun cheng lian zhuang pai lie ,chang du xiang shi ,xing tai mo xian zhe cha yi 。zai pu tao tang he zhe tang zuo wei wei yi tang yuan de sheng chang tiao jian xia ,qin ben zhu he que shi zhu de sheng chang qing kuang xiang fang ,er dang tang yuan wei D-ban ru tang shi ,que shi zhu de sheng chang su lv he OD600zhi ming xian di yu qin ben zhu 。ling wai ,cong zui gao OD600zhi ke yi kan chu ,zhu lian qiu jun SH1510dui tang de li yong lv wei pu tao tang >zhe tang >D-ban ru tang 。xiao shu zhi bing xing shi yan zhong ,qin ben zhu he que shi zhu de LD50fen bie wei 1×108CFUhe 1.62×108CFU,que shi zhu dui xiao shu de zhi bing xing xia jiang le 1.62bei 。ti nei jing zheng gan ran shi yan jie guo xian shi ,que shi zhu zai xiao shu de nao 、pi 、xie ye zhong de xi jun fen li shu jun yuan di yu qin ben zhu ,cha yi ji xian zhe （P<0.01）。quan xie cun huo shi yan biao shi ,qin ben zhu de cun huo lv wei 35.2%,que shi zhu de cun huo lv wei 27.3%,que shi zhu SH1510ΔGalRbi qin ben zhu SH1510zai quan xie zhong de cun huo lv xian zhe xia jiang （P<0.05）。【jie lun 】GalRji yin ke cu jin zhu lian qiu jun 4xing dui ban ru tang de li yong ,tong shi dui SH1510de du li you zhi jie huo jian jie de diao kong zuo yong 。
论文参考文献
论文详细介绍
论文作者分别是来自中国农业科学的孙珂,祝昊丹,何孔旺,王丹丹,周俊明,俞正玉,吕立新,倪艳秀，发表于刊物中国农业科学2019年19期论文，是一篇关于猪链球菌型论文,生物学特性论文,毒力论文,中国农业科学2019年19期论文的文章。本文可供学术参考使用，各位学者可以免费参考阅读下载，文章观点不代表本站观点，资料来自中国农业科学2019年19期论文网站，若本站收录的文献无意侵犯了您的著作版权，请联系我们删除。
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