导读:本文包含了脂肪酶基因合成论文开题报告文献综述及选题提纲参考文献，主要关键词:脂肪酶,基因合成,毕赤酵母,表达
脂肪酶基因合成论文文献综述
焦亮[1]（2012）在《变形杆菌脂肪酶基因合成和毕赤酵母表达》一文中研究指出脂肪酶在生物催化领域有广泛的应用。脂肪酶广泛存在于动物组织、植物种子和微生物体中,其中微生物来源的脂肪酶在生物催化中应用的最多。本研究对变形杆菌属SW1产的脂肪酶LipSW1进行基因合成和表达。根据变形杆菌脂肪酶SW1的氨基酸序列及毕赤酵母密码子的偏爱性,设计合成了适合在毕赤酵母中表达的SW1基因。将优化后的基因克隆到表达载体pPIC9K上,获得重组质粒pPIC9K-SW1;重组质粒通过BglⅡ酶切线性化后,转化到毕赤酵母GS115菌株中,构建分泌型表达SW1的酵母工程菌,经酶切、底物平板和SDS-PAGE筛选验证后,得到稳定的整合菌株,为重组变形杆菌脂肪酶催化方面的应用及其在规模化生产奠定基础。(本文来源于《湖北大学》期刊2012-05-25）
连英丽,蓝东明,杨博,王永华[2]（2011）在《寄生曲霉脂肪酶的全基因合成、原核表达及其结构分析》一文中研究指出根据寄生曲霉脂肪酶基因序列(GenBank登录号:AF404488)及大肠杆菌密码子的偏爱性,应用重迭延伸PCR技术,人工合成了寄生曲霉脂肪酶基因lip AP。将基因克隆到pFL-B13cl载体上获得重组质粒pFL-B13cl/Lip AP,并在大肠杆菌BL21(DE3)中进行优化表达。融合蛋白Sumo-LipAP在0.1 mmol/L IPTG、37℃条件下诱导6 h表达量最高。SDS-PAGE分析显示融合蛋白His-Sumo-LipAP以包涵体形式表达,大小约为53 kD。复性后透析处理,大部分融合蛋白转化为正确构象且具有催化活性,经一步疏水层析其纯度可达98%。生物信息学工具预测和分析发现,LipAP空间结构保守,具有催化叁联体(Ser173-Asp226-His288)、活性部位盖子(S111YSIRNWVTDAT122)及保守五肽(GHSLG)3个功能域。(本文来源于《生物技术通报》期刊2011年07期）
连英丽[3]（2011）在《寄生曲霉脂肪酶的全基因合成、表达及生物信息学分析》一文中研究指出脂肪酶作为催化剂在工业上被广泛应用,也是生物催化发展过程中一个很大的限制性因素。野生菌株脂肪酶产量低,利用常规育种方法已不能满足工业化生产的需求。本论文根据寄生曲霉脂肪酶基因lipAP序列首次利用两步法合成得到全基因,并在大肠杆菌中实现了异源表达,且对寄生曲霉脂肪酶进行了生物信息学分析,为进一步的理论研究及应用奠定了基础。主要研究结果包括:(1)根据寄生曲霉脂肪酶基因序列(GenBank: AF404488)及大肠杆菌密码子的偏爱性,优化密码子并设计9对重迭引物,利用改进后的两步法分别合成lipAP的上下游片段,通过重迭延伸PCR连接两片段得到lipAP基因全长序列。(2)将合成的基因构建到pFL-B13cl载体上获得重组表达质粒pFL-B13cl/Lip AP,并在大肠杆菌BL21(DE3)中进行优化表达。SDS-PAGE分析显示融合蛋白His-sumo-Lip AP以包涵体形式表达,大小约将为53kD,且在0.1 mmol/L IPTG、37°C条件下诱导6 h表达量最高。融合蛋白变复性后经疏水层析柱一步纯化,纯度可达95%以上。复性融合蛋白对底物p-NPB的酶活性可达到121 U/mg,蛋白酶UlpⅠ酶切His-sumo-Lip AP结果证实Lipase AP复性成功。(3)利用生物信息学工具预测和分析发现,Liapse AP空间结构保守,具有催化叁联体(catalytic triad)、活性部位盖子(active site flag/lid)及亲核弯头(nucleophilic elbow)等叁个功能域。系统发育进化分析表明寄生曲霉与米曲霉的进化距离最近。(本文来源于《华南理工大学》期刊2011-06-01）
刘立营[4]（2011）在《基于全基因合成技术的南极假丝酵母脂肪酶B基因的密码子优化研究》一文中研究指出南极假丝酵母脂肪酶B (Candida antarctica lipase B, CALB)具有广谱底物接受性和对映体选择性,广泛应用于食品、化工、前体药物的合成和生物能源等领域。利用基因工程技术实现其异源高效表达,对该酶的工业化生产具有重要意义。本研究以C. antarctica LF058菌株lipB基因(GenBank: Z30645.1)为出发基因,为提高CalB在毕赤酵母(Pichia pastoris)中的表达量,在利用生物信息学技术对CalB进行了密码子优化和改造的基础上,采用PCR-based accurate synthesis全基因合成方法(PAS)分别合成了原始基因CalB与优化后基因CalBM;以CalB和CalBM基因为基础,构建了一系列适于在P. pastoris中表达的组成型和诱导型载体,并分别转至P. pastoris GS115、SMD1168和X-33中,实现了该基因在各宿主菌中的功能性表达,获得了高效表达的基因工程菌,并初步分析了重组CALB的酶学性质。本文主要工作如下:1.为提高CalB在P. pastoris中的表达量,在DNA2.0软件的辅助下,以P. pastoris密码子使用频率为基准,在不改变氨基酸顺序的前提下,将Leu、Thr、Gly、Val、Ala、Arg、Ser、Pro、Lys、Ile、Gln、Tyr、Asn、Phe、Cys和Asp等在P. pastoris中使用频率低的密码子进行了改造。共计172个位点的低频密码子替换为使用频率最高、次高频和第叁高频密码子;优化了CalB基因的G+C含量,优化基因G+C含量为53.99%(优化前为61.89%);在碱基编排过程中去除了富含GC和AT的区域,降低了RNA二级结构的复杂性。2.基于PAS全基因合成技术合成了CalBSP,CalBP,CalB和CalB His-tag四种不同一级结构形式的基因。3.本研究以原始基因(CalB)和优化基因(CalBM)为外源基因,以pPIC9K、pPIC9KM和pPICZα为诱导型表达载体,以pGAPZα为组成型表达载体,构建了pPIC9K-CalB、pPIC9KM-CalB、pGAPZα-CalB、pPICZα-CalB、pPIC9K-CalBM、pPIC9KM-CalBM、pGAPZα-CalBM、pPICZα-CalBM、pPIC9K-CalB-His和pPIC9K-CalBM-His 10个重组表达质粒,并分别转至P. pastoris GS115、SMD1168和X-33,实现了各基因在宿主菌中的功能性表达,获得了高效表达的基因工程菌。结果表明,密码子优化明显提高了CalB在P. pastoris中的水解酶活与蛋白表达量,较原始基因提高40%了左右。以pPICZα为表达载体,X-33为宿主菌株筛选到的转化子表达水平最高,最高辛酸乙酯水解活力和最高总蛋白表达量分别为246.3 U/mL和179.1 mg/L。4.对经Ni-NTA亲和层析和超滤浓缩纯化的CALB进行SDS-PAGE分析,发现在CalB基因在P. pastoris中表达产物的大小为35 kDa(含糖基化侧链)。经Endo H糖苷内切酶酶切的CALB约为33 kDa,与实际CALB大小一致,证实了CALB在P. pastoris的异源表达蛋白加工过程中进行了糖基化修饰。5.对重组CALB进行了初步的酶学性质分析。结果表明,CALB的最适底物为C8,最适反应温度和pH分别为40℃和pH 8.0;Ca~(2+)、Mg~(2+)、K+和吐温80对其水解有激活作用;Cu~(2+)、TrionX-100与SDS对其水解具有抑制作用。(本文来源于《华中科技大学》期刊2011-01-01）
李娜,袁利玲,张玮莹,李书祥,袁永泽[5]（2010）在《黑曲霉脂肪酶全基因合成及其在毕赤酵母中的表达》一文中研究指出黑曲霉脂肪酶是重要的工业用酶,在食品、制药、前体化合物的合成和手性化合物的拆分等方面有广泛的用途。获得高效表达黑曲霉脂肪酶的基因工程菌是该酶工业化生产的前提。根据黑曲霉脂肪酶LIP的氨基酸序列及毕赤酵母密码子的偏爱性,设计合成26条相互重迭20 bp的引物,通过组装PCR分别合成lip基因的4个片段lipA1(300bp)l、ipA2(237 bp)l、ipA3(234 bp)和lipA4(210 bp)。再以基因头lip1和基因尾lip26为引物,以lipA1l、ipA2l、ipA3和lipA4混合物为模板进行第二轮PCR扩增,得到的产物经加A处理后,连接到载体pMD18-T上,挑取重组子测序。通过PCR扩增对人工合成的基因进行校正,得到完全正确的lip基因。将优化后的基因克隆到表达载体pPIC9K上,获得的重组质粒pPIC9K-lip经线性化后转化毕赤酵母GS115菌株,构建分泌型表达LIP的酵母工程菌,G418梯度筛选,得到高拷贝稳定整合菌株。为重组黑曲霉脂肪酶的规模化制备奠定了基础。(本文来源于《化学与生物工程》期刊2010年06期）
杨江科,严翔翔,张正平,江雪青,闫云君[6]（2009）在《二步法黑曲霉脂肪酶基因lipA的全基因合成及其在毕赤酵母中的高效表达》一文中研究指出黑曲霉脂肪酶是重要的工业用酶,在食品、制药等领域具有广泛的用途。获得黑曲霉脂肪酶高效表达的基因工程菌是该脂肪酶规模化应用的前提。通过全基因合成对目的基因进行分子改造和人工组建是实现基因高效表达和体外分子进化的有效手段。本研究主要针对一步法长片段基因合成中复杂结构的非特异性配对和过多的PCR引入碱基错配等问题,采用二步法(组装PCR和酶切-酶连)合成了黑曲霉脂肪酶基因lipA。首先在DNA2.0和Gene2Oliga软件辅助下对lipA基因密码子及RNA二级结构进行优化并引入ClaI(237位)和PstI(475位)酶切位点;通过组装PCR分别合成lipA基因的各片段F1(237bp)、F2(238bp)和F3(422bp);通过该基因内的ClaI和PstI限制性酶切位点连接成完整的全长lipA基因。本方法有效地降低了长片段合成过程中寡核苷酸片段的非特异性配对、复杂的二级结构以及碱基突变对DNA合成的影响,提高了长片段合成的成功率。经密码子优化后的脂肪酶基因(lipA-syn)在毕赤酵母GS115中经诱导表达72h后,发酵液酶活达176.0U/mL,蛋白质含量为143.7mg/L,较出发基因分别提高了10.8倍和5.6倍。实现了该基因的高效表达,并为产酶参数的优化和酶的规模化制备奠定了基础。(本文来源于《生物工程学报》期刊2009年03期）
脂肪酶基因合成论文开题报告
（1）论文研究背景及目的
此处内容要求：
首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景，再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题，并提出你的论文准备的观点或解决方法。
写法范例：
根据寄生曲霉脂肪酶基因序列(GenBank登录号:AF404488)及大肠杆菌密码子的偏爱性,应用重迭延伸PCR技术,人工合成了寄生曲霉脂肪酶基因lip AP。将基因克隆到pFL-B13cl载体上获得重组质粒pFL-B13cl/Lip AP,并在大肠杆菌BL21(DE3)中进行优化表达。融合蛋白Sumo-LipAP在0.1 mmol/L IPTG、37℃条件下诱导6 h表达量最高。SDS-PAGE分析显示融合蛋白His-Sumo-LipAP以包涵体形式表达,大小约为53 kD。复性后透析处理,大部分融合蛋白转化为正确构象且具有催化活性,经一步疏水层析其纯度可达98%。生物信息学工具预测和分析发现,LipAP空间结构保守,具有催化叁联体(Ser173-Asp226-His288)、活性部位盖子(S111YSIRNWVTDAT122)及保守五肽(GHSLG)3个功能域。
（2）本文研究方法
调查法：该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。
观察法：用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。
实验法：通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。
文献研究法：通过调查文献来获得资料，从而全面的、正确的了解掌握研究方法。
实证研究法：依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。
定性分析法：对研究对象进行“质”的方面的研究，这个方法需要计算的数据较少。
定量分析法：通过具体的数字，使人们对研究对象的认识进一步精确化。
跨学科研究法：运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。
功能分析法：这是社会科学用来分析社会现象的一种方法，从某一功能出发研究多个方面的影响。
模拟法：通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。
脂肪酶基因合成论文参考文献
[1].焦亮.变形杆菌脂肪酶基因合成和毕赤酵母表达[D].湖北大学.2012
[2].连英丽,蓝东明,杨博,王永华.寄生曲霉脂肪酶的全基因合成、原核表达及其结构分析[J].生物技术通报.2011
[3].连英丽.寄生曲霉脂肪酶的全基因合成、表达及生物信息学分析[D].华南理工大学.2011
[4].刘立营.基于全基因合成技术的南极假丝酵母脂肪酶B基因的密码子优化研究[D].华中科技大学.2011
[5].李娜,袁利玲,张玮莹,李书祥,袁永泽.黑曲霉脂肪酶全基因合成及其在毕赤酵母中的表达[J].化学与生物工程.2010
[6].杨江科,严翔翔,张正平,江雪青,闫云君.二步法黑曲霉脂肪酶基因lipA的全基因合成及其在毕赤酵母中的高效表达[J].生物工程学报.2009