导读:本文包含了口蹄疫病毒蛋白论文开题报告文献综述及选题提纲参考文献，主要关键词:口蹄疫病毒,3A-3B1-3B2蛋白,可溶性表达,ELISA
口蹄疫病毒蛋白论文文献综述
孙雨,宋晓晖,肖颖,王旭,董浩[1]（2019）在《羊血清中口蹄疫病毒非结构蛋白3A-3B1-3B2抗体ELISA检测方法的建立》一文中研究指出为建立检测羊血清中口蹄疫病毒非结构蛋白抗体的间接ELISA方法,通过优化抗原表达条件,在大肠杆菌原核表达系统中获得了可溶性的3A-3B1-3B2融合蛋白,基于纯化的可溶性融合蛋白建立了口蹄疫病毒非结构蛋白抗体间接ELISA检测试剂盒。该方法对其他相关的羊类病毒病原无交叉反应,其重复性组内与组间变异系数均低于10%,具有良好的重复性。对300份临床血清样品进行检测,与国内市售的口蹄疫非结构蛋白抗体检测试剂盒进行比较,阳性样品符合率为96.67%,阴性样品符合率为94%,总符合率为95.33%。本研究建立的羊血清中口蹄疫病毒3A-3B1-3B2蛋白抗体间接ELISA检测方法,特异性高、敏感性强,操作简单快速,具有较高的应用推广价值。(本文来源于《畜牧与兽医》期刊2019年10期）
吴文星,吴鹏,易继海,徐明国,陈创夫[2]（2019）在《口蹄疫病毒非结构蛋白3B的生物信息学分析》一文中研究指出为详细了解口蹄疫病毒(Foot-and-mouth disease virus,FMDV)非结构蛋白3B的基本结构与功能,试验采用生物信息学方法研究了非结构蛋白3B的一般理化性质、亲疏水性、跨膜区、信号肽、糖基化位点、磷酸化位点、二级结构、叁级结构、潜在的抗原表位,并对该蛋白进行了多重序列比对。结果表明:在NCBI数据库中检索到39个中国上传的口蹄疫病毒非结构蛋白3B序列,其中从新疆地区获得的分离株1株(Akesu/58),属于O型毒株,非结构蛋白3B具有71个氨基酸,分子式为C_(356)H_(596)N_(98)O_(93)S_1,相对分子质量为7 769.31,等电点为10.11,带负电荷氨基酸残基总数为6个,带正电荷氨基酸残基总数为16个,不稳定指数为28.67;亲水性平均系数为-0.731,无跨膜区,无信号肽;无糖基化位点,该蛋白在氨基酸序列第26位和第50位各存在1个酪氨酸磷酸化位点;二级结构延伸链占所有氨基酸比例的23.94%,β-折迭占所有氨基酸比例的4.23%,无规则卷曲占所有氨基酸比例的71.83%;叁级结构蛋白覆盖率只有28%,可信度为10%;非结构蛋白3B有3个抗原决定簇,具有6个优势的B细胞抗原表位,4个优势的CD_8~+抗原表位,1个强结合多肽段和14个弱结合多肽段的CD_4~+抗原表位;非结构蛋白3B与NCBI公布的中国O型、A型和Asia 1型血清型核苷酸序列同源性分别为94.24%、91.55%和97.48%,氨基酸序列同源性分别为97.29%、92.96%、98.49%。说明非结构蛋白3B基因编码的蛋白质为亲水性蛋白,结构较为松散,同源性高,且具有保守的抗原决定簇,可作为区分疫苗接种和自然感染抗体诊断方法的候选蛋白靶标。(本文来源于《黑龙江畜牧兽医》期刊2019年15期）
高雅,李平花,马雪青,寻广谨,白兴文[3]（2019）在《口蹄疫病毒衣壳蛋白氨基酸突变对病毒热稳定性的影响》一文中研究指出口蹄疫是世界范围内广泛流行的一种偶蹄动物的烈性传染病,其病原为口蹄疫病毒(FMDV),它对热比较敏感,当温度高于30℃时,病毒衣壳容易解离为五聚体亚单位而影响疫苗的免疫保护效果。因此,改善病毒的热稳定性,制备热稳定优良的口蹄疫疫苗具有重大的应用价值。在实验室建立的口蹄疫病毒型内嵌和全长感染性克隆的基础上,在结构蛋白引入1个或2个氨基酸突变,分别构建了2种基因修饰的口蹄疫病毒全长重组质粒。全长质粒经NotⅠ线化后分别转染表达T7 RNA聚合酶的BSR/T7细胞以拯救重组病毒。间接免疫荧光和电镜分析表明,成功拯救到2株口蹄疫重组病毒。重组病毒经RT-PCR和序列测定证实只有1株重组病毒所含的耐热突变可以稳定遗传。热失活试验显示,拯救病毒与亲本病毒的耐热特性基本一致。结果表明在结构蛋白上引入V2090A-S2093F-H30568R的突变,并对口蹄疫病毒的热稳定性并没有明显的影响,为未来发展热稳定的口蹄疫疫苗提供了一定的参考。(本文来源于《动物医学进展》期刊2019年07期）
汪肖肖,孙普,贾怀杰,李冬,付元芳[4]（2019）在《A型口蹄疫病毒衣壳蛋白主要抗原表位区的原核表达及免疫效果分析》一文中研究指出为了探索更有效的A型口蹄疫(FMD)表位疫苗,根据已鉴定的A型口蹄疫病毒(FMDV)主要抗原位点,结合基因序列比对分析,选择了A型FMDV流行毒株的主要抗原位点区进行表位蛋白分子的设计表达。所用表位序列包括A/QH/CHA/2013的VP2 70～81位、118～140位,VP1 G-H环131～157位、C末端188～212位,A/WH/CHA/09 VP1 43～48位、VP3 55～72位,以及非结构蛋白3A中的T细胞表位和通用性T细胞表位,构建免疫原蛋白分子命名为ANX2和ANX3,其中ANX2采用了表位序列反向串联的方式进行设计,用大肠杆菌表达免疫原基因,纯化表位蛋白免疫小鼠和猪,分析特异性体液免疫和细胞免疫应答水平,并对免疫猪进行了攻毒保护试验,评价表位疫苗的保护效果。结果显示,ANX2、ANX3重组蛋白以包涵体表达为主,蛋白大小约为41 ku和39 ku,均能与A型FMDV阳性血清发生特异性反应;免疫小鼠和猪后都能产生抗A型FMDV特异性抗体;用表位蛋白刺激免疫小鼠脾淋巴细胞,细胞因子IFN-γ和IL-4均有明显的升高;攻毒后对猪有一定的保护作用,ANX2的免疫效果略优于ANX3,证明表位序列反向串联更有利于抗原表位的展示,从而增强其免疫效果。本研究为A型FMDV表位疫苗的研究积累了经验。(本文来源于《中国兽医科学》期刊2019年10期）
王燕琴,徐松鹤[5]（2019）在《口蹄疫病毒蛋白对先天免疫的影响》一文中研究指出口蹄疫病毒(FMDV)抑制宿主的翻译机制,阻断蛋白质分泌,并裂解与信号转导和先天免疫应答有关的细胞蛋白。FMDV是一种单链阳性RNA病毒,由衣壳和核酸组成,其基因组长度约为8500个碱基,该基因组被一个二十面体衣壳包裹,衣壳由VP1、VP2、VP3和VP4四种结构蛋白各60个拷贝组成(图1)。VP1、VP2、VP3折迭成一个八链的楔形β-折迭形成外层(本文来源于《兽医导刊》期刊2019年11期）
王旭,孙雨,王睿男,肖颖,蒋菲[6]（2019）在《牛血清中口蹄疫病毒非结构蛋白抗体时间分辨荧光免疫分析检测方法的建立》一文中研究指出为研究快速定量检测牛血清中口蹄疫病毒非结构蛋白抗体的方法,试验通过优化抗原表达条件等步骤,在大肠杆菌原核表达系统中表达可溶性的3A-3B融合蛋白,并基于纯化的可溶性融合蛋白建立口蹄疫病毒非结构蛋白抗体时间分辨荧光免疫分析检测试剂盒。结果表明:建立的方法能够检测牛血清中的口蹄疫病毒非结构蛋白抗体,敏感性高,特异性强,对其他相关的牛类病原无交叉反应,其组内与组间变异系数分别低于10%和15%,具有良好的重复性。对300份临床牛血清样品进行检测,同Procheck公司的口蹄疫非结构蛋白抗体试剂盒进行比较,阳性样品符合率96%,阴性样品符合率93.3%,总的符合率95.7%。重复性试验组内与组间变异系数均小于10%。文章首次建立了口蹄疫病毒非结构蛋白抗体时间分辨荧光免疫分析检测方法,同传统的ELISA方法相比,该检测方法特异性相当、敏感性更高,操作更简单、快速,具有较高的应用推广价值。(本文来源于《中国草食动物科学》期刊2019年03期）
王省,李坤,卢曾军,刘在新,李冬[7]（2019）在《口蹄疫病毒VP2蛋白特异性单克隆工程抗体的表达与活性鉴定》一文中研究指出为了在牛上应用单个B细胞抗体技术制备口蹄疫病毒(FMDV)特异性单克隆抗体,本研究利用生物素标记O型FMDV 146S抗原,从免疫牛外周血单个核细胞(PBMCs)中分选单个抗原特异性B细胞,通过单个B细胞抗体基因测定,获得Ig G抗体重链与轻链可变区编码序列,将可变区基因插入含有牛Ig G抗体恒定区的pcDNA3.4载体中,构建完整Ig G抗体的表达质粒。将表达质粒转染中国仓鼠卵巢悬浮细胞(CHO-S)进行抗体表达与纯化。经病毒中和试验(VNT)、间接免疫荧光试验(IFA)、酶联免疫吸附试验(ELISA)、Western-blot验证抗体的生物活性。结果显示,获得了4株FMDV特异性单克隆工程抗体,其中2株(A35、B57)可以中和O型FMDV;2株(A7、E32)IFA检测为阳性,其中E32可特异性结合O型和A型FMDV两种抗原,但没有病毒中和活性;ELISA结果显示,E32具有较好的亲合力;Western-blot结果显示,E32可特异性结合衣壳蛋白VP2,说明在衣壳蛋白VP2存在型间保守的抗原位点,为通用型FMDV抗原检测方法的研究提供了材料。(本文来源于《中国兽医科学》期刊2019年08期）
李明[8]（2019）在《口蹄疫病毒2B、3B蛋白对RLRs介导的Ⅰ型干扰素抑制作用研究》一文中研究指出口蹄疫(Foot-and-mouth disease,FMD)是由口蹄疫病毒(Foot-and-mouth disease virus,FMDV)引起的一种猪、牛、羊等偶蹄动物急性、高度传染性的疾病。鉴于口蹄疫能够对畜牧业生产造成严重经济损失,世界动物卫生组织(OIE)将其列为法定报告动物疫病,在我国为一类动物疫病。当前研究已证实FMDV编码的非结构蛋白L~(pro)、3A、3C~(pro),和结构蛋白VP1等具有抑制宿主先天性免疫应答的特性,但非结构蛋白2B、3B是否在抑制宿主天然免疫应答中发挥作用尚属未知。因此本研究主要对FMDV 2B、3B在天然免疫应答过程中的作用开展研究,以期阐明其在RIG-Ⅰ样受体(RIG-Ⅰ like receptors,RLR)介导的Ⅰ型干扰素应答中是否具有抑制作用及其作用机制。本研究利用反转录实时定量PCR(RT-qPCR)和双荧光素酶报告基因实验发现FMDV 2B能显着降低HEK293T细胞中IFN-β、IL-6、ISG15的mRNA水平,并且能够显着抑制由Poly(I:C)诱导或SeV触发的IFN-β、NF-κB、ISRE启动子的激活,结果表明2B能抑制Ⅰ型干扰素和促炎细胞因子的转录激活。为探究FMDV 2B通过何种机制抑制HEK293T细胞中RLR介导的Ⅰ型干扰素应答,通过磷酸化检测发现FMDV 2B过表达后能抑制HEK293T细胞中TBK1和IRF3的磷酸化水平;免疫共沉淀(Co-Immunoprecipitation,Co-IP)和Pull-Down实验结果表明FMDV 2B可与RIG-Ⅰ样受体RIG-Ⅰ、MDA5相互作用;此外,在HEK293T细胞中过表达2B后发现,FMDV2B能抑制RIG-Ⅰ、MDA5的转录水平,并能够抑制外源性和内源性RIG-Ⅰ、MDA5在蛋白水平表达,但不抑制VISA、TBK1、IRF3的表达。本研究还发现在HEK293T细胞中过表达FMDV 3B能显着抑制IFN-β、IL-6、ISG15的转录,并降低由Poly(I:C)诱导或SeV触发的IFN-β、NF-κB、ISRE启动子的激活。双荧光素酶报告基因实验表明,FMDV 3B在RIG-Ⅰ和MDA5水平调节RLR介导的Ⅰ型干扰素应答;RT-qPCR实验结果显示FMDV 3B过表达能下调RIG-Ⅰ、MDA5的转录水平。同时,我们发现FMDV 3B1/3B2/3B3叁种蛋白均能抑制HEK293T细胞中Ⅰ型干扰素相关启动子的活化。综上所述,本研究发现FMDV 2B能与RIG-Ⅰ和MDA5相互作用,并抑制RIG-Ⅰ和MDA5的转录、表达;此外,FMDV 2B能抑制RLR信号通路中TBK1和IRF3的磷酸化,从而抑制Ⅰ型干扰素的表达。另外,FMDV 3B对HEK293T细胞中的Ⅰ型干扰素应答也具有抑制作用,并且FMDV3B1/3B2/3B3叁种蛋白均能够抑制Ⅰ型干扰素相关启动子的活化。本研究结果可以进一步提高我们对FMDV逃避宿主免疫系统机制的理解,同时也为开发新型口蹄疫疫苗以及制定更加有效的口蹄疫防控策略提供借鉴。(本文来源于《中国农业科学院》期刊2019-05-01）
汪肖肖[9]（2019）在《A型口蹄疫病毒衣壳蛋白主要抗原表位区的原核表达及免疫效果分析》一文中研究指出口蹄疫(foot-and-mouth disease,FMD)是由口蹄疫病毒(foot-and-mouth disease virus,FMDV)引起的急性高度接触性动物传染病,主要感染猪、牛与羊等偶蹄动物,造成了严重的经济损失和社会影响。防控FMD仍然是每年我国动物防疫工作的首要任务。目前,我国对FMD主要采取疫苗免疫为主的综合性防控措施,其中灭活疫苗应用最为广泛,但灭活疫苗在生产与使用过程中存在病毒逃逸的安全风险,需要开发新型疫苗来应对未来FMD的防控问题。其中表位疫苗是最具有潜力的FMD新型疫苗之一。2013年A型FMDV SEA/97-G2亚型毒株传入我国后,造成了巨大的经济损失,为了进一步探明当前A型FMDV衣壳蛋白的主要抗原表位区及其免疫原性,原核表达了A型FMDV衣壳蛋白的主要抗原表位区并进行了免疫效果评价,以期为A型FMDV表位疫苗的研究提供线索。根据已鉴定的FMDV A型毒株的主要抗原位点,结合基因序列比对结果,选择了当前A型FMDV流行毒株的主要抗原位点区:包括A/QH/CHA/2013的VP2 70~81位、118~140位,VP1G-H环131~157位、C末端188~212位;A/WH/CHA/09 FMDV VP1 43~48位,VP3 55~72位;以及非结构蛋白3A中的T细胞表位和通用性T细胞表位,用于构建免疫原分子。通过柔性Linker将各表位基因串联,在串联基因的3'端融合了6个His标签,构建了含多个抗原表位基因的原核表达载体pET28a-ANX2和pET28a-ANX3,其中pET28a-ANX2采用了氨基酸反向串联的方式;通过SDS-PAGE电泳和Western blot鉴定目的蛋白ANX2和ANX3的表达。将ANX2和ANX3表位蛋白大量表达和纯化后,与CpG-ODNs和ISA201乳化后免疫小鼠和猪,对目的蛋白诱导宿主体液免疫和细胞免疫应答水平进行了鉴定,并在免疫后28日用流行毒株对免疫猪进行了攻毒试验,评价疫苗的保护效力。研究结果表明,表位重组蛋白ANX2和ANX3表达形成包涵体,蛋白分子质量分别约为41kDa和39 kDa,Western blot鉴定均能与A型FMDV阳性血清特异性反应;免疫小鼠和猪后能产生抗A型FMDV抗体,细胞因子IFN-γ和IL-4也有明显升高,攻毒后对猪有一定的保护作用;ANX2的免疫原性略高于ANX3,证明氨基酸反向串联方式的串联更有利于重组蛋白展示抗原表位,从而增强其免疫效果。本研究为A型FMDV表位疫苗的研究积累了数据。(本文来源于《中国农业科学院》期刊2019-05-01）
Liu,Hui-sheng,Zhu,Zi-xiang,Xue,Qiao[10]（2019）在《口蹄疫病毒抑制NOD2蛋白表达及其抗病毒功能的机制》一文中研究指出天然免疫系统在病毒感染早期识别和诱发抗病毒反应中发挥重要作用,宿主模式识别受体(PRRs,如RIG-I、Toll和NOD样等受体)识别病原微生物结构上保守组分病原相关分子模式(PAMPs),进而激活下游级联信号通路,诱导干扰素、细胞因子和促炎性因子等产生,激发抗病毒天然免疫。而病毒通过降解天然免疫信号通路分子或抑制其激活,从而抑制抗病毒应答。口蹄疫病毒(FMDV)通过多种蛋白抑制天然免疫,肖少波团队和杜以军团队鉴定了非结构蛋白L~(pro)和3C~(pro),作为水解酶蛋白,抑制RIG-I通路分子的激活,并阐明其抑制天然免疫的(本文来源于《中国预防兽医学报》期刊2019年04期）
口蹄疫病毒蛋白论文开题报告
（1）论文研究背景及目的
此处内容要求：
首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景，再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题，并提出你的论文准备的观点或解决方法。
写法范例：
为详细了解口蹄疫病毒(Foot-and-mouth disease virus,FMDV)非结构蛋白3B的基本结构与功能,试验采用生物信息学方法研究了非结构蛋白3B的一般理化性质、亲疏水性、跨膜区、信号肽、糖基化位点、磷酸化位点、二级结构、叁级结构、潜在的抗原表位,并对该蛋白进行了多重序列比对。结果表明:在NCBI数据库中检索到39个中国上传的口蹄疫病毒非结构蛋白3B序列,其中从新疆地区获得的分离株1株(Akesu/58),属于O型毒株,非结构蛋白3B具有71个氨基酸,分子式为C_(356)H_(596)N_(98)O_(93)S_1,相对分子质量为7 769.31,等电点为10.11,带负电荷氨基酸残基总数为6个,带正电荷氨基酸残基总数为16个,不稳定指数为28.67;亲水性平均系数为-0.731,无跨膜区,无信号肽;无糖基化位点,该蛋白在氨基酸序列第26位和第50位各存在1个酪氨酸磷酸化位点;二级结构延伸链占所有氨基酸比例的23.94%,β-折迭占所有氨基酸比例的4.23%,无规则卷曲占所有氨基酸比例的71.83%;叁级结构蛋白覆盖率只有28%,可信度为10%;非结构蛋白3B有3个抗原决定簇,具有6个优势的B细胞抗原表位,4个优势的CD_8~+抗原表位,1个强结合多肽段和14个弱结合多肽段的CD_4~+抗原表位;非结构蛋白3B与NCBI公布的中国O型、A型和Asia 1型血清型核苷酸序列同源性分别为94.24%、91.55%和97.48%,氨基酸序列同源性分别为97.29%、92.96%、98.49%。说明非结构蛋白3B基因编码的蛋白质为亲水性蛋白,结构较为松散,同源性高,且具有保守的抗原决定簇,可作为区分疫苗接种和自然感染抗体诊断方法的候选蛋白靶标。
（2）本文研究方法
调查法：该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。
观察法：用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。
实验法：通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。
文献研究法：通过调查文献来获得资料，从而全面的、正确的了解掌握研究方法。
实证研究法：依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。
定性分析法：对研究对象进行“质”的方面的研究，这个方法需要计算的数据较少。
定量分析法：通过具体的数字，使人们对研究对象的认识进一步精确化。
跨学科研究法：运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。
功能分析法：这是社会科学用来分析社会现象的一种方法，从某一功能出发研究多个方面的影响。
模拟法：通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。
口蹄疫病毒蛋白论文参考文献
[1].孙雨,宋晓晖,肖颖,王旭,董浩.羊血清中口蹄疫病毒非结构蛋白3A-3B1-3B2抗体ELISA检测方法的建立[J].畜牧与兽医.2019
[2].吴文星,吴鹏,易继海,徐明国,陈创夫.口蹄疫病毒非结构蛋白3B的生物信息学分析[J].黑龙江畜牧兽医.2019
[3].高雅,李平花,马雪青,寻广谨,白兴文.口蹄疫病毒衣壳蛋白氨基酸突变对病毒热稳定性的影响[J].动物医学进展.2019
[4].汪肖肖,孙普,贾怀杰,李冬,付元芳.A型口蹄疫病毒衣壳蛋白主要抗原表位区的原核表达及免疫效果分析[J].中国兽医科学.2019
[5].王燕琴,徐松鹤.口蹄疫病毒蛋白对先天免疫的影响[J].兽医导刊.2019
[6].王旭,孙雨,王睿男,肖颖,蒋菲.牛血清中口蹄疫病毒非结构蛋白抗体时间分辨荧光免疫分析检测方法的建立[J].中国草食动物科学.2019
[7].王省,李坤,卢曾军,刘在新,李冬.口蹄疫病毒VP2蛋白特异性单克隆工程抗体的表达与活性鉴定[J].中国兽医科学.2019
[8].李明.口蹄疫病毒2B、3B蛋白对RLRs介导的Ⅰ型干扰素抑制作用研究[D].中国农业科学院.2019
[9].汪肖肖.A型口蹄疫病毒衣壳蛋白主要抗原表位区的原核表达及免疫效果分析[D].中国农业科学院.2019
[10].Liu,Hui-sheng,Zhu,Zi-xiang,Xue,Qiao.口蹄疫病毒抑制NOD2蛋白表达及其抗病毒功能的机制[J].中国预防兽医学报.2019
标签：口蹄疫病毒; 3A-3B1-3B2蛋白; 可溶性表达; ELISA;