导读:本文包含了分化的成肌细胞论文开题报告文献综述及选题提纲参考文献，主要关键词:低氧,骨骼肌,成肌细胞,成肌分化
分化的成肌细胞论文文献综述
张维华,于丽明,韩欣欣,刘月华[1]（2019）在《低氧对骨骼肌成肌细胞增殖分化的影响及相关机制研究进展》一文中研究指出骨骼肌中成肌细胞作为肌源性祖细胞具有自我更新和生成新的肌纤维的能力,而氧气水平对调节成肌细胞的肌生成能力至关重要。这篇综述中描述了低氧状态下细胞的分子调控,氧水平对成肌细胞在肌生成中的影响和骨骼肌成肌细胞增殖和分化的转录调节。本文还概述了多种信号通路在分子调控中的机制,其中Notch,Wnt信号通路是依赖于低氧诱导因子HIF-1α介导的机制;PI3K-Akt-mTOR、p38 MAPK、p53信号传导则是独立于HIF-1α在低氧下调节成肌分化的途径。因此,深入研究和进一步揭示机制中涉及的信号通路为治疗低氧对骨骼肌损伤性的疾病提供证据和参考。(本文来源于《生理科学进展》期刊2019年05期）
王海霞,陈小帆,张伟[2]（2019）在《环状RNA circRtn4对小鼠成肌细胞增殖和分化功能的影响》一文中研究指出目的探讨circRtn4在小鼠成肌细胞C2C12细胞中的表达情况及其对成肌细胞增殖和分化功能的影响。方法对数生长期小鼠成肌细胞C2C12细胞,采用PCR检测C2C12细胞中circRtn4表达情况,采用实时荧光定量PCR法检测分化前及分化第1、2、3、4天circRtn4相对表达量,采用核质分离实验确定细胞内定位。对数生长期C2C12细胞分为沉默组和对照组,分别转染特异性靶向circRtn4的siRNA和阴性对照siRNA,采用实时荧光定量PCR检测2组细胞circRtn4沉默效率和脱靶情况,采用CCK-8法检测培养前及培养第1、2、3、4天2组细胞增殖率,采用免疫荧光法和Western blot法检测2组分化第2天MYOG蛋白和分化第4天MHC蛋白表达情况。结果 C2C12细胞分化第3天circRtn4相对表达量(3.72±0.32)高于分化前(1.00±0.01)及分化第1天(0.76±0.03)、第2天(1.21±0.12)和第4天(2.51±0.33)(P<0.05),分化第4天高于分化前及分化第1、2天(P<0.05),分化第1天低于分化前(P<0.05);circRtn4在C2C12细胞质中占67.93%,细胞核中占32.07%;沉默组circRtn4相对表达量(0.03±0.02)低于对照组(0.97±0.03)(P<0.05),Rtn4 mRNA相对表达量(1.11±0.11)与对照组(0.99±0.03)比较差异无统计学意义(P>0.05);培养前及培养第1、2、3、4天,2组细胞增殖率比较差异均无统计学意义(P>0.05);沉默组分化第2天表达MYOG蛋白的细胞数减少,分化第4天表达MHC蛋白的细胞肌纤维化不明显,细胞极化和融合不明显;沉默组分化第2天MYOG蛋白(0.68±0.05)和分化第4天MHC蛋白(0.75±0.06)相对表达量明显低于对照组(1.00±0.09、1.00±0.13)(P<0.05)。结论 circRtn4在成肌细胞C2C12细胞中表达,在成肌细胞分化中后期表达量明显增加;circRtn4表达被沉默后,C2C12细胞增殖无明显变化,但其分化受到抑制。(本文来源于《中华实用诊断与治疗杂志》期刊2019年10期）
刘通,于佳妮,邹德辉,邝伟川,王小寅[3]（2019）在《电针调控miRNA206/HDAC4轴促进损伤多裂肌修复过程中成肌细胞分化的机制》一文中研究指出背景:作者前期的动物及细胞实验研究已证明电针可提高损伤腰多裂肌中Pax7和成肌分化抗原的表达,促进多裂肌的损伤修复。亦有研究证明miRNA206促进成肌分化主要是通过抑制组蛋白去乙酰化酶4实现的。目的:观察电针对布比卡因致大鼠腰多裂肌损伤修复过程中miRNA206/组蛋白去乙酰化酶4表达的影响。方法:实验方案经广东省第二中医院动物实验伦理委员会批准(批准号为048604)。将30只雄性SD大鼠随机分为对照组、模型组、电针组,每组10只。模型组、电针组采用0.5%布比卡因肌内注射复制大鼠多裂肌损伤模型;对照组予注射等量生理盐水。对照组与模型组不进行针刺干预,电针组予针刺双侧委中穴、肾俞穴,针刺后连接电针,波形选用疏密波,电针频率采用2 Hz/10 Hz,电流强度选择1 mA,持续治疗20 min,每天治疗1次,共治疗7 d。干预7 d后,通过苏木精-伊红染色观察损伤部位多裂肌形态学变化,采用qRT-PCR检测多裂肌中miRNA206的表达量,Western-blot检测多裂肌中成肌分化抗原、Myogenin及组蛋白去乙酰化酶4蛋白的表达。结果与结论:(1)苏木精-伊红染色显示,7d后,对照组可见视野中骨骼肌纤维大部分排列整齐,无明显破坏及巨噬细胞浸润;模型组视野内可见大量肌纤维被破坏,但出现部分肌纤维修复,巨噬细胞数量仍较多;电针组新生肌纤维较多,巨噬细胞较模型组减少;(2)Western-blot结果显示,7d后,模型组成肌分化抗原、Myogenin、组蛋白去乙酰化酶4蛋白表达均较对照组升高(P<0.05或P<0.01);电针组成肌分化抗原、Myogenin蛋白表达较模型组升高(P <0.01),组蛋白去乙酰化酶4蛋白较模型组降低(P <0.01);(3)qRT-PCR结果显示,7d后,模型组miRNA206表达高于对照组(P<0.01),电针组miRNA206表达高于模型组(P<0.05);(4)结果说明,电针可促进多裂肌损伤后成肌分化,其作用可能是通过提高miRNA206表达抑制组蛋白去乙酰化酶4活性实现的。(本文来源于《中国组织工程研究》期刊2019年33期）
付绍婷[4]（2019）在《雄激素受体在周期性机械牵拉调控成肌细胞增殖与分化中的作用和机制》一文中研究指出研究目的肌卫星细胞和成肌细胞增殖与分化在骨骼肌肥大中发挥重要作用,对肌卫星细胞/成肌细胞体外施加周期性机械牵拉常被用于模拟运动对骨骼肌肥大的研究。我们前期的研究发现,雄激素受体(androgen receptor,AR)在15%牵拉促进、20%牵拉抑制C2C12成肌细胞增殖中可能起重要作用。本文在前期研究的基础上,先用AR特异性拮抗剂氟他胺证实AR在牵拉调控C2C12细胞增殖中的作用。然后比较15%和20%牵拉对L6(无AR表达)和C2C12(有AR表达)成肌细胞增殖调控的差异,并用AR过表达质粒转染L6细胞来证实AR在15%和20%牵拉调控成肌细胞增殖中的作用。已证实AR对肌肉蛋白质合成的促进作用与其激活胰岛素样生长因子-1(IGF-1)/IGF-1受体(IGF-1R)-磷脂酰肌醇3激酶/蛋白激酶B(PI3K/Akt)和丝裂原活化蛋白激酶(MAPKs)密切相关,但AR在运动或牵拉调控成肌细胞增殖中的作用是否也与上述信号通路有关仍不明确。因此,本研究利用IGF-1中和性抗体、IGF-1重组多肽,以及PI3K/Akt和MAPKs(p38和ERK1/2)抑制剂,研究AR在牵拉调控成肌细胞增殖中的作用机制:是否通过激活IGF-1/IGF-1R-PI3K/Akt和MAPKs(p38和ERK1/2)实现?此外,本研究还检测了15%和20%周期性机械牵拉对C2C12和L6成肌细胞分化的影响,初步探索AR在牵拉调控成肌细胞分化中的作用。本研究为机械牵拉调控成肌细胞增殖和分化提供新的理论解释,也为适度运动增加、过度运动降低骨骼肌质量和力量提供新的理论支持。研究方法1.利用Flexcell-5000T细胞牵拉装置对C2C12和L6细胞施加15%或20%周期性机械牵拉(频率0.5 Hz,持续6 h)。2.研究AR在牵拉调控成肌细胞增殖中的作用,包括以下研究:(1)不同浓度的AR拮抗剂氟他胺(Flutamide,20μM、40μM和60μM)是否减弱15%牵拉对C2C12成肌细胞的促增殖(CCK8法)作用?(2)15%和20%牵拉对L6成肌细胞(无AR表达)增殖的影响,并与相同牵拉条件下的C2C12细胞(有AR表达)做比较;(3)外源转入AR对15%和20%牵拉的L6细胞增殖的影响。3.研究AR在牵拉调控成肌细胞增殖中发挥作用的机制,包括以下研究:(1)15%和20%牵拉对L6细胞IGF-1分泌(ELISA)、IGF-1R蛋白表达(Western blot),以及PI3K/Akt和MAPKs(p38和ERK1/2)蛋白水平和活性(Western blot)的影响,并与相同牵拉条件下的C2C12细胞作比较;(2)IGF-1中和性抗体对15%牵拉的C2C12细胞、IGF-1重组多肽对牵拉L6细胞的增殖以及PI3K/Akt、p38和ERK1/2活性的影响;(3)PI3K/Akt、p38和ERK1/2的特异性抑制剂对15%牵拉的C2C12和L6细胞增殖的影响;(4)外源转入AR对牵拉的L6细胞上述指标的影响。4.研究AR在15%和20%牵拉调控成肌细胞分化中的作用。在C2C12和L6成肌细胞做以下研究:(1)15%和20%牵拉结束后第1、3、5 d,观察是否形成肌管(光学显镜),判断分化是否延迟,并比较两细胞间的差异;(2)牵拉结束后第7 d,检测两细胞间形成肌管数量和直径的差异(MHC免疫荧光)。研究结果1.AR在15%和20%周期性机械牵拉调控成肌细胞的增殖中的作用1)与15%牵拉组相比,AR特异性拮抗剂Flutamide以剂量依赖的方式降低15%牵拉对C2C12细胞的促增殖作用。2)未牵拉状态下,L6成肌细胞增殖速率低于C2C12细胞,而外源转入AR可促进L6成肌细胞的增殖。3)与C2C12细胞类似,15%牵拉促进、20%牵拉抑制L6成肌细胞增殖。但牵拉对C2C12和L6细胞增殖的调控幅度不同,表现为15%牵拉对L6细胞的促增殖作用显着低于C2C12细胞(约是后者1/3),20%牵拉对L6细胞的抑增殖作用明显高于C2C12细胞(约是后者的2倍)。4)外源性转入AR可进一步增强15%牵拉对L6细胞的促增殖作用,以及逆转20%牵拉对L6细胞的抑增殖作用。以上结果证实了AR在15%和20%周期性机械牵拉调控成肌细胞增殖中起重要作用。2.AR在15%和20%周期性机械牵拉调控成肌细胞增殖中的作用机制1)IGF-1/IGF-1R在牵拉调控成肌细胞增殖中的作用,及其对PI3K、p38和ERK1/2活性的调控a.15%牵拉增加、20%牵拉减少C2C12细胞的IGF-1分泌量及IGF-1R蛋白水平(前期研究结果)。本研究发现,L6细胞无论是在安静状态,还是15%和20%的牵拉状态均未检测到IGF-1分泌,但15%牵拉提高、20%牵拉降低L6细胞IGF-1R蛋白水平。b.IGF-1中和抗体不仅抑制15%牵拉的C2C12细胞增殖,还以剂量依赖方式降低15%牵拉的C2C12细胞PI3K、p38和ERK1/2活性。c.外源性IGF-1重组多肽在提高15%牵拉对L6细胞的促增殖作用、逆转20%牵拉抑增殖作用的同时,还增加IGF-1R蛋白水平以及提高PI3K/Akt、p38和ERK1/2的活性。2)PI3K和MAPKs(p38和ERK1/2)在牵拉调控成肌细胞增殖中的作用a.15%牵拉提高、20%牵拉降低C2C12细胞的PI3K/Akt、p38以及ERK1/2活性;且加入PI3K/Akt、p38和ERK1/2的抑制剂能降低15%牵拉对C2C12细胞的促增殖作用(前期研究结果)。b.15%和20%牵拉对C2C12和L6细胞PI3K/Akt、p38以及ERK1/2活性的调控幅度存在差异,表现为:(1)15%牵拉对L6细胞的p38活性无影响,但提高C2C12细胞p38的活性达3倍以上;对L6细胞ERK1/2活性的提高幅度约是C2C12细胞的一半;对于PI3K活性的影响,两细胞间无差异。(2)20%牵拉对L6细胞p38活性的抑制作用约是C2C12细胞的6.7倍;对PI3K和ERK1/2活性的抑制作用,两细胞间无差异。c.PI3K和ERK1/2抑制剂、而非p38抑制剂,能阻断15%牵拉对L6细胞促增殖作用。3)AR对IGF-1/IGF-1R,以及PI3K、p38和ERK1/2的调控a.外源转入AR到L6细胞,在增强15%牵拉促增殖、逆转20%牵拉抑增殖作用的同时,伴随着受牵拉L6细胞IGF-1R蛋白表达水平的增加,尽管仍未检测到IGF-1分泌。b.外源转入AR到L6细胞,还可提高受牵拉L6细胞PI3K/Akt、p38和ERK1/2的活性。以上结果表明,AR在15%和20%牵拉调控成肌细胞增殖中的作用是通过IGF-1/IGF-1R的介导,进而激活p38和ERK1/2活性(15%牵拉)或抑制p38活性(20%牵拉)实现。3.AR在周期性机械牵拉调控成肌细胞分化中的作用1)周期性机械牵拉对C2C12和L6成肌细胞分化(分化延迟、形成的肌管数量和直径)的影响与安静对照组相比,15%和20%牵拉对C2C12和L6成肌细胞分化形成肌管的时间、肌管直径均没有影响。但是15%牵拉增加、20%牵拉减少C2C12和L6细胞分化形成肌管的数量。2)AR在周期性机械牵拉调控成肌细胞分化中的作用对于分化的C2C12和L6细胞,15%牵拉增加、20%牵拉减少肌管数量的程度不同。15%牵拉增加分化L6细胞的肌管数量比C2C12细胞的少,而20%牵拉减少L6细胞的肌管数量要高于C2C12细胞。以上结果提示AR在牵拉调控成肌细胞分化中起作用,体现在影响肌管数量。研究结论1.15%牵拉促进C2C12和L6这两种成肌细胞增殖,而20%牵拉抑制它们增殖,表明机械牵拉对成肌细胞增殖的调控具有普遍性,但调控幅度在两细胞间存在明显差异。2.AR在15%和20%周期性机械牵拉调控C2C12成肌细胞增殖中起重要作用。即使在没有AR表达的L6成肌细胞,外源转入AR也能增强牵拉L6细胞的增殖。3.AR在15%牵拉促增殖中的作用是通过促进IGF-1分泌、增加IGF-1R水平,进而激活p38和ERK1/2的活性实现;而AR在20%牵拉抑制增殖中的作用则通过抑制IGF-1/IGF-1R-p38通路实现。4.15%牵拉增加、20%牵拉减少分化C2C12和L6成肌细胞形成肌管的数量,但两细胞间存在明显差异,提示AR在周期性机械牵拉调控成肌细胞分化中起作用。(本文来源于《上海体育学院》期刊2019-06-18）
范永辉[5]（2019）在《miR-34b通过靶向SYISL调节成肌细胞增殖和分化》一文中研究指出在畜牧生产中,骨骼肌生长发育及品质性状是评价产肉动物产肉性能的重要指标。在骨骼肌发育的调控网络中,非编码基因起着相当重要的调控作用,如目前研究较多的microRNA和lncRNA。本实验室前期发现长链非编码RNA-SYISL能够促进成肌细胞增殖,抑制成肌细胞分化。基于此,本研究通过生物信息学分析,预测miR-34b能够结合SYISL,首先利用对miR-34b的抑制和过表达技术研究了miR-34b对成肌细胞增殖和分化的影响,进一步的研究发现miR-34b可通过靶向SYISL来调控成肌细胞增殖和分化,具体的研究结果如下:1.利用荧光定量PCR技术研究了miR-34b在小鼠不同组织中的表达情况,发现miR-34b在腿肌中高表达,且在C2C12细胞分化过程中表达量逐渐上升。利用荧光定量PCR、Western Blot和细胞免疫荧光技术研究了抑制和过表达miR-34b后对成肌细胞增殖和分化相关基因影响,结果表明miR-34b抑制成肌细胞增殖,促进成肌细胞分化。2.利用生物信息学分析、双荧光素酶报告载体实验、RNA pull-down实验和RNA结合蛋白免疫沉淀(RNA Binding Protein Immunoprecipitation,RIP)实验验证了miR-34b能够与SYISL和AGO2蛋白直接结合。3.通过荧光定量PCR技术发现miR-34b能够降低SYISL的表达量,通过共转染实验发现miR-34b可通过SYISL调控成肌细胞的增殖和分化。4.通过荧光定量PCR和Western Blot技术发现miR-34b能够促进SYISL侧翼基因SYNPO2的表达。综上所述,本实验研究了miR-34b抑制成肌细胞增殖,促进成肌细胞分化,并且发现miR-34b是通过靶向SYISL调控成肌细胞增殖和分化的分子机制。该研究结果为骨骼肌的生长发育调控提供了新的调控机制,对进一步了解骨骼肌生长发育的分子调控具有重要的意义。(本文来源于《华中农业大学》期刊2019-06-01）
王菁男[6]（2019）在《长链非编码RNA-AK017263对成肌细胞增殖和分化过程的调控》一文中研究指出骨骼肌生长和发育的调控机制是动物科学研究中的研究热点之一。骨骼肌主要是由肌纤维组成,内在和表观遗传调控机制的相互作用控制着各个发育阶段的肌纤维生成。长非编码RNA(lncRNA)是长度大于200nt且无蛋白质编码潜力的转录本,通过多种机制发挥众多功能。目前,已鉴定了多种对肌纤维形成具有重要影响的lncRNA,但大部分lncRNA的功能与机制尚不明确。本课题组前期通过高通量芯片技术,筛选出了在成肌细胞中敲低MyoD后显着下调的lncRNA-AK017263。本研究以小鼠C2C12细胞为研究材料,利用RNA干扰和过表达技术研究了lncRNA-AK017263对成肌细胞增殖和分化过程的影响。主要的研究结果如下:1.利用实时荧光定量PCR验证了AK017263在成肌细胞分化过程中,表达水平逐渐上升,并通过2月龄小鼠组织表达谱分析结果发现其在在腿肌、背最长肌和舌中高丰度表达。2.利用实时荧光定量PCR、Western Blot验证了干扰和过表达AK017263后对增殖标志基因Ki67和N-RAS mRNA和蛋白表达水平的影响,发现过表达AK017263可以显着促进增殖标志基因的表达,干扰AK017263可显着降低增殖标志基因的表达。通过EdU实验和流式细胞技术进行了进一步的验证,结果皆显示AK017263可以促进成肌细胞的增殖。3.利用实时荧光定量PCR、Western Blot、细胞免疫荧光技术验证了干扰和过表达AK017263后对分化标志基因MyoD、MyoG和MyHC mRNA和蛋白表达水平的影响,结果显示过表达AK017263后分化标志基因的表达量显着上调,干扰AK017263可显着降低分化标志基因的表达,表明AK017263可以促进成肌细胞的分化。另外,发现AK017263能够促进MyHC1/slow,抑制MyHC2a和MyHC2b基因表达。4.通过在线软件预测发现AK017263与MEF2家族成员Mef2D可能存在互作,同时利用实时荧光定量PCR技术验证了干扰或过表达AK017263后Mef2D基因mRMA水平的表达变化,结果显示干扰AK017263后Mef2D基因的表达量显着降低,过表达AK017263后Mef2D基因的表达量显着上调,说明Mef2D与AK017263的表达存在正相关。本试验结果显示在小鼠肌肉中高表达的lncRNA-AK017263能够促进成肌细胞的增殖和分化,且能够调控不同肌纤维类型基因的表达,并初步预测了其发挥促分化功能的作用方式。本研究结果为进一步研究AK017263的作用机制奠定了基础,也为挖掘骨骼肌生长发育过程中重要lncRNA提供了新的证据。(本文来源于《华中农业大学》期刊2019-06-01）
胡晓阳[7]（2019）在《Ran对小鼠C2C12成肌细胞分化的影响》一文中研究指出随着生活水平的提高,肉类食品在食物构成中所占的比例不断增加,人们对肉类食品品质的要求也越来越高。目前,国内肉用牛养殖中品种繁多,牛肉产量偏低、品质也参差不齐,牛肉的产量和质量已不能满足人们的需求。通过遗传育种的方式获得高品质的肉牛品种是目前解决这一问题最快速有效的方法。另外,在骨骼肌受到损伤时,潜伏的骨骼肌卫星细胞可以通过增殖和分化完成肌纤维的再生,修复损伤的肌肉组织。因此,研究肌肉分化的机理不仅具有巨大的商业价值,也能够为医学领域内相关疾病的治疗提供新思路。Ran(Ras-related nuclear protein,Ran)作为真核生物细胞中含量最为丰富的小G蛋白,参与细胞分裂间期的核质转运、DNA复制和RNA转录;在细胞分裂期参与核膜破裂、纺锤体组装、染色体分配、核膜装配和细胞分裂等细胞过程。肌肉分化是肌源性细胞通过增殖、分化和彼此间相互融合成多核肌管,并最终形成具有收缩功能的肌纤维的过程。本研究以小鼠C2C12成肌细胞为研究对象,通过Ran的过表达和siRNA干扰研究Ran的对C2C12细胞体外分化过程的影响,并进一步探究Ran对分化影响的可能机制。具体实验内容及结果如下:(1)Ran在C2C12细胞分化过程中的表达:分别收集分化0 d至5 d的C2C12细胞蛋白样,进行Western blot实验。结果显示,随着C2C12细胞分化程度的提高,Ran的表达量也逐渐升高。(2)Ran在C2C12细胞分化过程中的分布:通过对未分化、分化早期、分化中期和分化晚期的C2C12细胞进行间接免疫荧光染色。发现在未分化的C2C12细胞中,Ran主要聚集于细胞核内;随着分化时间的延长,Ran在细胞质中的浓度升高。(3)Ran过表达对C2C12细胞分化的影响:构建Ran的过表达载体,转入C2C12细胞中。Western blot结果表明,Ran表达量升高,MyoG和MYH的表达量也显着升高;间接免疫荧光染色结果显示,C2C12细胞的肌管融合率明显升高。Ran表达量的升高促进了C2C12细胞的分化。(4)Ran的siRNA干扰对C2C12细胞分化的影响:Ran的siRNA干扰片段转入C2C12细胞中。Western blot结果表明,Ran表达量降低,MyoG和MYH的表达量也明显降低;间接免疫荧光染色结果显示,C2C12细胞的肌管融合率明显下降。Ran表达量的降低抑制了C2C12细胞的分化。(5)TGF-β/Smad信号通路对C2C12细胞分化的影响:C2C12细胞中添加TGF-β/Smad信号通路抑制剂LY2109761。Western blot检测发现,磷酸化smad2的含量降低,MyoG和MYH的表达量也明显降低。LY2109761的添加抑制了C2C12细胞的分化。(6)Ran对TGF-β/Smad信号通路的影响:分别使用Ran的过表达载体和siRNA干扰片段来改变Ran在C2C12细胞分化过程中的表达量。Western blot结果表明,在C2C12细胞分化第2 d,Ran的表达量升高,Smad2的蛋白含量也显着提高;Ran的表达量降低,Smad2的蛋白含量也明显降低。而在分化第4 d和第6 d,Smad2的蛋白含量不受Ran表达量变化的影响。在C2C12细胞分化的不同时期,Ran表达量升高时,磷酸化Smad2的含量均显着升高;Ran的表达量下降时,磷酸化Smad2的含量也均显着降低。Ran的表达量升高激活TGF-β/Smad信号通路,Ran的表达量下降抑制TGF-β/Smad信号通路。(7)C2C12细胞的分化过程中,Ran与TGF-β/Smad信号通路之间的关系:LY2109761处理后,C2C12细胞中磷酸化Smad2的含量降低,MyoG和MYH的表达量也显着降低;LY2109761处理C2C12细胞并转入Ran过表达载体,Ran表达量的升高,使磷酸化Smad2的含量和MyoG与MYH的表达量恢复到不添加抑制剂时的水平。说明Ran可以通过提高TGF-β/Smad信号通路中Smad2和磷酸化Smad2的含量促进C2C12细胞分化。(本文来源于《东北农业大学》期刊2019-06-01）
葛瑶[8]（2019）在《TCEA3通过ANXA1介导TGF-β通路进而影响小鼠成肌细胞分化》一文中研究指出骨骼肌生成是一个高度有序的过程,包括成肌细胞的增殖、细胞融合形成肌管以及这些肌管进一步分化为肌纤维。这一过程需要依赖转录因子和信号转导途径之间的连续级联调节作用。实验室之前的一项研究表明,TCEA3能促进牛骨骼肌卫星细胞的分化,但是其作用的分子机制尚不清楚。本实验以小鼠为模型,研究TCEA3的作用及分子机制。TCEA3是转录延伸因子家族的成员。其不仅可以促进转录,在细胞质中还行使其他作用。我们通过免疫共沉淀实验发现ANXA1与TCEA3相互作用,我们推测TCEA3和ANXA1在小鼠成肌细胞分化的过程中扮演重要角色。在本研究中,我们检测了TCEA3和ANXA1在C2C12成肌细胞中的表达,定位和作用;检测了TCEA3在过表达和抑制后蛋白质表达量的变化和肌纤维数量的改变;并发现TCEA3与ANXA1相互作用通过调节TGF-β途径影响细胞分化;以此说明TCEA3在小鼠成肌细胞分化中的作用。主要获得的研究结果如下:(1)随着C2C12成肌细胞肌管的增加TCEA3的表达逐渐增加。在增殖期(0 D)和不同分化期(分化1-9 D)间,随着C2C12成肌细胞肌管逐渐增加,TCEA3的荧光强度逐渐增加。Western blotting结果显示随着C2C12成肌细胞分化的进行,MyoG和TCEA3蛋白的表达逐渐增加。(2)TCEA3主要在细胞质中积聚,随着分化的进展,细胞质中TCEA3的表达水平呈上升趋势。将pEGFP-N2-TCEA3转染到C2C12成肌细胞中并在荧光显微镜下观察,利用核质蛋白分离检测TCEA3在细胞核和细胞质中的表达。(3)过表达TCEA3可促进C2C12成肌细胞分化,在抑制TCEA3后观察到相反的结果。siRNA、TCEA3过表达载体和CRISPR/Cas9构建技术分别激活和抑制TCEA3的表达。肌细胞生成素(MyoG)、肌管融合指数和表达水平随着TCEA3过表达而增加。在抑制TCEA3后观察到相反的结果。(4)ANXA1作为TCEA3潜在结合配偶体的膜联蛋白。我们通过免疫共沉淀进行蛋白质分离和凝胶染色并进行测序来检测与其相互作用的蛋白。检测到ANXA1,其与TCEA3相似,它位于细胞质中。(5)过表达ANXA1可促进C2C12成肌细胞分化,在抑制ANXA1后观察到相反的结果。转染ANXA1抑制性载体后,ANXA1和MYOG蛋白的表达显着降低。形态学上,ANXA1的抑制影响肌管形成。ANXA1过表达载体转染C2C12细胞,Western blot检测当ANXA1表达增加时,MYOG的表达增加。结果表明ANXA1的活化可以在体外激活C2C12分化。(6)TCEA3通过ANXA1影响TGF-β信号通路,从而影响C2C12细胞分化。首先我们证明TGF-β信号通路促进C2C12分化。当抑制TGF-β信号传导时,TCEA3促进C2C12分化的功能也被抑制。为了测试TCEA3是否通过ANXA1起作用,我们在ANXA1抑制后过表达TCEA3并检测smad2,p-smad2,MYOG,TCEA3和ANXA1蛋白水平的变化。与单独抑制ANXA1相比,抑制ANXA1同时过表达TCEA3,检测p-smad2,MYOG水平并没有显着变化。通过以上研究,TCEA3与ANXA1相互作用,通过影响TGF-β信号通路,从而影响C2C12细胞分化。研究结果为进一步了解骨骼肌生长发育机制和基因治疗肌肉病变奠定理论基础。(本文来源于《东北农业大学》期刊2019-06-01）
黄凯,林亚秋,朱江江,马洁琼,王永[9]（2019）在《山羊FGF9基因克隆及其在成肌细胞分化中的表达模式研究》一文中研究指出旨在克隆山羊FGF9基因序列并对其进行生物信息学分析,阐明FGF9基因组织表达特性及其在成肌细胞分化过程中的表达差异。试验动物为简州大耳羊,利用RT-PCR技术克隆FGF9基因序列,再用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)技术检测FGF9在山羊各组织中的表达特性及其在成肌细胞不同分化阶段的表达情况。结果显示,克隆得到山羊FGF9基因序列818 bp,其中ORF区627 bp,编码208个氨基酸,其CDS区核苷酸序列与牛和绵羊有99%的同源性。FGF9蛋白具有1个跨膜结构域和1个FGF家族同源性结构域,为不稳定亲水蛋白。FGF9基因在山羊各组织中均有表达,在肾脏中表达水平最高,极显着高于其他组织(P<0.01)。FGF9基因在诱导分化第2天表达水平显着高于分化前(P<0.05),且在第4天达到极显着水平(P<0.01)。推测其可作为调控山羊成肌细胞分化的候选基因。为进一步探究FGF9基因在山羊肌肉生长中的作用提供理论依据。(本文来源于《华北农学报》期刊2019年03期）
荆海军[10]（2019）在《PPARδ在小鼠成肌细胞分化过程中对肌纤维类型的影响》一文中研究指出目的:通过小鼠成肌细胞分化过程中添加PPARδ特异性激动剂GW0742和拮抗剂GSK0660的方法,研究小鼠成肌细胞分化过程中肌球蛋白重链(MHC)亚型的表达水平,进一步探讨PPARδ在成肌细胞分化过程中对肌纤维类型的影响。方法:培养C2C12成肌细胞株和新生昆明小鼠原代成肌细胞。各自分为叁组,分别为对照组(DMSO组)、PPARδ激动剂组(GW0742组)、PPARδ拮抗剂组(GW0742+GSK0660组)。培养各组细胞至90%左右汇合度时,C2C12细胞株换生长培养基(DMEM培养基+10%FBS)为分化培养基(DMEM培养基+2%HS),小鼠原代成肌细胞换生长培养基(F10培养基+20%FBS+5ng/ml鼠bFGF)为分化培养基(DMEM培养基+2%HS);分别在C2C12成肌细胞株分化培养基培养的第4、8、12天和昆明小鼠原代成肌细胞分化培养基培养的第2、4、6天收取细胞样品;MHC免疫荧光鉴定成肌细胞分化情况;q-RT-PCR检测MHC各亚型和PPARδ表达情况。结果:(1)C2C12成肌细胞分化第4天,MHC免疫荧光可见有肌管形成,叁组细胞分化形成的肌管数量大致相当;分化第8天和12天,PPARδ激动剂组形成的肌管数量显著大于其余两组。(2)小鼠原代成肌细胞分化第2天,MHC免疫荧光可见PPARδ激动剂组形成的肌管数量显著大于对照组;分化第4天和第6天,PPARδ激动剂组形成的肌管数量显著大于其余两组。(3)C2C12成肌细胞分化的第4天,PPARδ激动剂组MHC各亚型表达量均显着高于其余两组;分化第8天,PPARδ激动剂组MHCⅠ和MHCⅡx表达量较对照组相比上调大于2倍,MHCⅡa上调大于3倍;分化第12天,MHCⅠ表达量较对照组相比上调大于3倍,MHCⅡa上调大于4倍。(4)原代成肌细胞分化第2天,PPARδ激动剂组MHCⅠ、MHCⅡa表达量较对照组相比上调大于2倍,分化第4天,MHCⅠ、MHCⅡx表达量较对照组相比上调大于2倍,MHCⅡa表达量上调大于3倍;分化第6天,MHCⅠ表达量较对照组相比上调大于4倍,MHCⅡa表达量较对照组相比上调大于6倍。结论:1 PPARδ可以促进小鼠成肌细胞分化。2 PPARδ在C2C12成肌细胞株和小鼠原代成肌细胞分化过程中显着上调氧化型纤维的表达量。(本文来源于《遵义医科大学》期刊2019-05-01）
分化的成肌细胞论文开题报告
（1）论文研究背景及目的
此处内容要求：
首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景，再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题，并提出你的论文准备的观点或解决方法。
写法范例：
目的探讨circRtn4在小鼠成肌细胞C2C12细胞中的表达情况及其对成肌细胞增殖和分化功能的影响。方法对数生长期小鼠成肌细胞C2C12细胞,采用PCR检测C2C12细胞中circRtn4表达情况,采用实时荧光定量PCR法检测分化前及分化第1、2、3、4天circRtn4相对表达量,采用核质分离实验确定细胞内定位。对数生长期C2C12细胞分为沉默组和对照组,分别转染特异性靶向circRtn4的siRNA和阴性对照siRNA,采用实时荧光定量PCR检测2组细胞circRtn4沉默效率和脱靶情况,采用CCK-8法检测培养前及培养第1、2、3、4天2组细胞增殖率,采用免疫荧光法和Western blot法检测2组分化第2天MYOG蛋白和分化第4天MHC蛋白表达情况。结果 C2C12细胞分化第3天circRtn4相对表达量(3.72±0.32)高于分化前(1.00±0.01)及分化第1天(0.76±0.03)、第2天(1.21±0.12)和第4天(2.51±0.33)(P<0.05),分化第4天高于分化前及分化第1、2天(P<0.05),分化第1天低于分化前(P<0.05);circRtn4在C2C12细胞质中占67.93%,细胞核中占32.07%;沉默组circRtn4相对表达量(0.03±0.02)低于对照组(0.97±0.03)(P<0.05),Rtn4 mRNA相对表达量(1.11±0.11)与对照组(0.99±0.03)比较差异无统计学意义(P>0.05);培养前及培养第1、2、3、4天,2组细胞增殖率比较差异均无统计学意义(P>0.05);沉默组分化第2天表达MYOG蛋白的细胞数减少,分化第4天表达MHC蛋白的细胞肌纤维化不明显,细胞极化和融合不明显;沉默组分化第2天MYOG蛋白(0.68±0.05)和分化第4天MHC蛋白(0.75±0.06)相对表达量明显低于对照组(1.00±0.09、1.00±0.13)(P<0.05)。结论 circRtn4在成肌细胞C2C12细胞中表达,在成肌细胞分化中后期表达量明显增加;circRtn4表达被沉默后,C2C12细胞增殖无明显变化,但其分化受到抑制。
（2）本文研究方法
调查法：该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。
观察法：用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。
实验法：通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。
文献研究法：通过调查文献来获得资料，从而全面的、正确的了解掌握研究方法。
实证研究法：依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。
定性分析法：对研究对象进行“质”的方面的研究，这个方法需要计算的数据较少。
定量分析法：通过具体的数字，使人们对研究对象的认识进一步精确化。
跨学科研究法：运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。
功能分析法：这是社会科学用来分析社会现象的一种方法，从某一功能出发研究多个方面的影响。
模拟法：通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。
分化的成肌细胞论文参考文献
[1].张维华,于丽明,韩欣欣,刘月华.低氧对骨骼肌成肌细胞增殖分化的影响及相关机制研究进展[J].生理科学进展.2019
[2].王海霞,陈小帆,张伟.环状RNAcircRtn4对小鼠成肌细胞增殖和分化功能的影响[J].中华实用诊断与治疗杂志.2019
[3].刘通,于佳妮,邹德辉,邝伟川,王小寅.电针调控miRNA206/HDAC4轴促进损伤多裂肌修复过程中成肌细胞分化的机制[J].中国组织工程研究.2019
[4].付绍婷.雄激素受体在周期性机械牵拉调控成肌细胞增殖与分化中的作用和机制[D].上海体育学院.2019
[5].范永辉.miR-34b通过靶向SYISL调节成肌细胞增殖和分化[D].华中农业大学.2019
[6].王菁男.长链非编码RNA-AK017263对成肌细胞增殖和分化过程的调控[D].华中农业大学.2019
[7].胡晓阳.Ran对小鼠C2C12成肌细胞分化的影响[D].东北农业大学.2019
[8].葛瑶.TCEA3通过ANXA1介导TGF-β通路进而影响小鼠成肌细胞分化[D].东北农业大学.2019
[9].黄凯,林亚秋,朱江江,马洁琼,王永.山羊FGF9基因克隆及其在成肌细胞分化中的表达模式研究[J].华北农学报.2019
[10].荆海军.PPARδ在小鼠成肌细胞分化过程中对肌纤维类型的影响[D].遵义医科大学.2019