本文主要研究内容
作者王冲（2019）在《夹心平板技术在海洋细菌资源挖掘中的初步应用及三株新菌的分类鉴定》一文中研究指出：宏基因组和单细胞测序方法不仅可以检测到环境中未培养微生物所含有的未知基因,而且可以发现这些未培养微生物潜在的重要代谢功能和生态位;但是,这些以基因或基因组为基础的技术不能对培养物进行全面仔细的研究,获得菌株的纯培养仍然是非常必要的;为了解决这个问题,目前己开发出多种未培养细菌的培养方法,但对细菌的纯培养中仍有许多困难亟待解决,如分离效率的下降,优势菌群对其他物种的影响,细菌细胞间信息的交流对生长的影响分离过程中所涉及的高端仪器的使用问题等。本文以实验室常用的培养基和可培养细菌为基础,结合自然界中细菌个体之间会产生相互作用的现象,设计了夹心平板技术,并且通过对海洋细菌的多样性研究对本方法进行了初步的验证。夹心平板技术中,夹心培养基共分为上、中、下三层;下层为实验室常用的2216E培养基,上层为改良的1/10 2216E培养基,中间用可培养细菌作为夹心菌株;通过对夹心菌株的涂布面积,夹心菌株的处理方式,上层培养基琼脂的浓度等方面的优化,最终确定夹心菌株在下层培养基表面涂布区域的直径约为70mm,上层培养基的琼脂浓度为4%（w/v）,并且直接将上层培养基倾倒在夹心菌株表面。采用夹心平板法对威海近海沉积物中的细菌多样性进行研究,结果表明:实验组S25、S63、S69和S70在其夹心菌株的作用下可以使表面细菌的多样性增加,而S08、S09、S12、S38和S39组在其夹心菌株的作用下可以使表面细菌的多样性降低;在属水平,各实验组中优势菌群丰度变化较为明显的是Psychrobacter、Ruegeria、、Microbulbifer、Aequorivita和Bacillus五个属;在潜在新物种方面,各组在夹心菌株的作用下均可以增加新菌的比例,尤以S08、S25、S38、S39、S69 和 S70 组最为明显,并且Flavbbacteriaceaae、Moraxellaceae、Rhldobacteraceae、Halomonadaceae和Phyllobacteriacea 等科的潜在新物种在各组之见差异性较为明显;通过纯培养,共得到481株菌,分布于Actinoba和Pria、Bacteroidetes、Firmicutes和Prottobacter 4 4个门中,其中共有149株潜在新物种,新种124株,新属新种24株,新科新种1株;并且,通过对分离菌株的筛选和验证,得到17株具有生长依赖现象的菌株。此外,本文对三株新菌进行了多相分类。菌株M1309T分离于威海海参养殖池沉积物,为革兰氏阴性菌,杆状且具有滑动性;生长温度范围16-42℃,最适生长温度为37℃;生长pH范围为6.5-8.0,最适pH为7.0-7.5;生长盐度范围为 2.0-6.5%（w/v）NaCl,最适盐度为 2.0-3.0%（w/v）NaCl;根据 16S rRNA基因序列构建系统发育树,发现菌株M1309bT属于Winogradskgella属,与其最相似的物种为Winogradskyella porferorum JCM 12885T,相似度为95.5%;通过对菌株M1309T的化学特征分析,发现其呼吸醌型只有一种为MK-6,主要脂肪酸种类为iso-C15:0、iso-C15:1G和iso-C17:03-OH,主要极性脂为PE、两种AL和三种未知的脂肪酸L;基因组DNA含量为36.1mol%;根据表型的特异性和系统发育的差异性,认为菌株M1309T为Wnogradskye为 属的新物种,并将其命名为Winogradskyella tangerina;模式菌株为 M1309T（=KCTC 52896T= MCCC 1K03310T）。菌株ELS1360-T分离自内蒙古湖泊沉积物,为革兰氏阴性菌、兼性好氧、运动形式为滑动、菌体为杆状、菌落为粉红色;在不含NaCl的R2A培养基上,温度为33℃,pH为6.5-7.0时生长最佳;根据16S rRNA基因序列,菌株ELS1360T与菌株Hymenobacter luteus JCM 30328T和Hymenobacterlatericoloratus JCM 30327T最为相似,相似度分别为96.9%和96.8%,与Hymenobacter属的其他成员的相似度均在90.3-96.7%之间;通过发育树分析菌株ELS1360T属于Hymenobacter属,并且与菌株Hymenobacterluteus JCM 30328T和Hymenobacte lericoloratul JCM 30327T聚在一枝;呼吸醌型为MK-7;主要脂肪酸为iso-C15:0,Summed feature 3和C16:1ω5c;主要极性脂为PE、APL和未知的脂肪酸L;基因组DNA的G+C为57.1mol%;通过系统发育、表型、基因型和化学分类学分析,认为菌株ELS1360T是Hymenobacte是属的一个新物种,并命名为Hymenobacter sediminis;模式菌株为ELS1360T（=KCTC62449T=MCCC 1H00319T）。菌株N24T分离自西安温泉水,为革兰氏阴性菌、具有滑动性、杆状（宽约0.4-0.8μm,长约1.8-7.8μm）;最适生长温度为33℃,最适生长pH为7.0;可以产生胞外多糖;通过系统发育树分析,发现菌株N24T在Chitinophagaceae科中形成单独的一枝,最相似的属为Flavisobacter、Cnuella、Niveitalea、Flavitalea、Flaviaiaturariibacter和Niatella,16S rRNA基因的相似度为91.7-93.9%;主要脂肪酸种类为iso-C15:0（31.8%）、iso-C17:0 3-OH（16.1%）和iso-C15：1 G（12.9%）;极性脂成分为PE、两种AL和六种未知的脂肪酸L;呼吸醌型为MK-7;基因组DNA的G+C含量为49.3mol%;通过系统发育、表型、基因型和化学分类学分析,认为菌株N24T是Chitinophagaceae科的一个新属新种,并命名为Paracnuella aquatica;模式菌株为N24T（=KCTC62083T=MCCC 1H00301T）。
Abstract
hong ji yin zu he chan xi bao ce xu fang fa bu jin ke yi jian ce dao huan jing zhong wei pei yang wei sheng wu suo han you de wei zhi ji yin ,er ju ke yi fa xian zhe xie wei pei yang wei sheng wu qian zai de chong yao dai xie gong neng he sheng tai wei ;dan shi ,zhe xie yi ji yin huo ji yin zu wei ji chu de ji shu bu neng dui pei yang wu jin hang quan mian zai xi de yan jiu ,huo de jun zhu de chun pei yang reng ran shi fei chang bi yao de ;wei le jie jue zhe ge wen ti ,mu qian ji kai fa chu duo chong wei pei yang xi jun de pei yang fang fa ,dan dui xi jun de chun pei yang zhong reng you hu duo kun nan ji dai jie jue ,ru fen li xiao lv de xia jiang ,you shi jun qun dui ji ta wu chong de ying xiang ,xi jun xi bao jian xin xi de jiao liu dui sheng chang de ying xiang fen li guo cheng zhong suo she ji de gao duan yi qi de shi yong wen ti deng 。ben wen yi shi yan shi chang yong de pei yang ji he ke pei yang xi jun wei ji chu ,jie ge zi ran jie zhong xi jun ge ti zhi jian hui chan sheng xiang hu zuo yong de xian xiang ,she ji le ga xin ping ban ji shu ,bing ju tong guo dui hai xiang xi jun de duo yang xing yan jiu dui ben fang fa jin hang le chu bu de yan zheng 。ga xin ping ban ji shu zhong ,ga xin pei yang ji gong fen wei shang 、zhong 、xia san ceng ;xia ceng wei shi yan shi chang yong de 2216Epei yang ji ,shang ceng wei gai liang de 1/10 2216Epei yang ji ,zhong jian yong ke pei yang xi jun zuo wei ga xin jun zhu ;tong guo dui ga xin jun zhu de tu bu mian ji ,ga xin jun zhu de chu li fang shi ,shang ceng pei yang ji qiong zhi de nong du deng fang mian de you hua ,zui zhong que ding ga xin jun zhu zai xia ceng pei yang ji biao mian tu bu ou yu de zhi jing yao wei 70mm,shang ceng pei yang ji de qiong zhi nong du wei 4%（w/v）,bing ju zhi jie jiang shang ceng pei yang ji qing dao zai ga xin jun zhu biao mian 。cai yong ga xin ping ban fa dui wei hai jin hai chen ji wu zhong de xi jun duo yang xing jin hang yan jiu ,jie guo biao ming :shi yan zu S25、S63、S69he S70zai ji ga xin jun zhu de zuo yong xia ke yi shi biao mian xi jun de duo yang xing zeng jia ,er S08、S09、S12、S38he S39zu zai ji ga xin jun zhu de zuo yong xia ke yi shi biao mian xi jun de duo yang xing jiang di ;zai shu shui ping ,ge shi yan zu zhong you shi jun qun feng du bian hua jiao wei ming xian de shi Psychrobacter、Ruegeria、、Microbulbifer、Aequorivitahe Bacilluswu ge shu ;zai qian zai xin wu chong fang mian ,ge zu zai ga xin jun zhu de zuo yong xia jun ke yi zeng jia xin jun de bi li ,you yi S08、S25、S38、S39、S69 he S70 zu zui wei ming xian ,bing ju Flavbbacteriaceaae、Moraxellaceae、Rhldobacteraceae、Halomonadaceaehe Phyllobacteriacea deng ke de qian zai xin wu chong zai ge zu zhi jian cha yi xing jiao wei ming xian ;tong guo chun pei yang ,gong de dao 481zhu jun ,fen bu yu Actinobahe Pria、Bacteroidetes、Firmicuteshe Prottobacter 4 4ge men zhong ,ji zhong gong you 149zhu qian zai xin wu chong ,xin chong 124zhu ,xin shu xin chong 24zhu ,xin ke xin chong 1zhu ;bing ju ,tong guo dui fen li jun zhu de shai shua he yan zheng ,de dao 17zhu ju you sheng chang yi lai xian xiang de jun zhu 。ci wai ,ben wen dui san zhu xin jun jin hang le duo xiang fen lei 。jun zhu M1309Tfen li yu wei hai hai can yang shi chi chen ji wu ,wei ge lan shi yin xing jun ,gan zhuang ju ju you hua dong xing ;sheng chang wen du fan wei 16-42℃,zui kuo sheng chang wen du wei 37℃;sheng chang pHfan wei wei 6.5-8.0,zui kuo pHwei 7.0-7.5;sheng chang yan du fan wei wei 2.0-6.5%（w/v）NaCl,zui kuo yan du wei 2.0-3.0%（w/v）NaCl;gen ju 16S rRNAji yin xu lie gou jian ji tong fa yo shu ,fa xian jun zhu M1309bTshu yu Winogradskgellashu ,yu ji zui xiang shi de wu chong wei Winogradskyella porferorum JCM 12885T,xiang shi du wei 95.5%;tong guo dui jun zhu M1309Tde hua xue te zheng fen xi ,fa xian ji hu xi kun xing zhi you yi chong wei MK-6,zhu yao zhi fang suan chong lei wei iso-C15:0、iso-C15:1Ghe iso-C17:03-OH,zhu yao ji xing zhi wei PE、liang chong ALhe san chong wei zhi de zhi fang suan L;ji yin zu DNAhan liang wei 36.1mol%;gen ju biao xing de te yi xing he ji tong fa yo de cha yi xing ,ren wei jun zhu M1309Twei Wnogradskyewei shu de xin wu chong ,bing jiang ji ming ming wei Winogradskyella tangerina;mo shi jun zhu wei M1309T（=KCTC 52896T= MCCC 1K03310T）。jun zhu ELS1360-Tfen li zi nei meng gu hu bo chen ji wu ,wei ge lan shi yin xing jun 、jian xing hao yang 、yun dong xing shi wei hua dong 、jun ti wei gan zhuang 、jun la wei fen gong se ;zai bu han NaClde R2Apei yang ji shang ,wen du wei 33℃,pHwei 6.5-7.0shi sheng chang zui jia ;gen ju 16S rRNAji yin xu lie ,jun zhu ELS1360Tyu jun zhu Hymenobacter luteus JCM 30328The Hymenobacterlatericoloratus JCM 30327Tzui wei xiang shi ,xiang shi du fen bie wei 96.9%he 96.8%,yu Hymenobactershu de ji ta cheng yuan de xiang shi du jun zai 90.3-96.7%zhi jian ;tong guo fa yo shu fen xi jun zhu ELS1360Tshu yu Hymenobactershu ,bing ju yu jun zhu Hymenobacterluteus JCM 30328The Hymenobacte lericoloratul JCM 30327Tju zai yi zhi ;hu xi kun xing wei MK-7;zhu yao zhi fang suan wei iso-C15:0,Summed feature 3he C16:1ω5c;zhu yao ji xing zhi wei PE、APLhe wei zhi de zhi fang suan L;ji yin zu DNAde G+Cwei 57.1mol%;tong guo ji tong fa yo 、biao xing 、ji yin xing he hua xue fen lei xue fen xi ,ren wei jun zhu ELS1360Tshi Hymenobacteshi shu de yi ge xin wu chong ,bing ming ming wei Hymenobacter sediminis;mo shi jun zhu wei ELS1360T（=KCTC62449T=MCCC 1H00319T）。jun zhu N24Tfen li zi xi an wen quan shui ,wei ge lan shi yin xing jun 、ju you hua dong xing 、gan zhuang （kuan yao 0.4-0.8μm,chang yao 1.8-7.8μm）;zui kuo sheng chang wen du wei 33℃,zui kuo sheng chang pHwei 7.0;ke yi chan sheng bao wai duo tang ;tong guo ji tong fa yo shu fen xi ,fa xian jun zhu N24Tzai Chitinophagaceaeke zhong xing cheng chan du de yi zhi ,zui xiang shi de shu wei Flavisobacter、Cnuella、Niveitalea、Flavitalea、Flaviaiaturariibacterhe Niatella,16S rRNAji yin de xiang shi du wei 91.7-93.9%;zhu yao zhi fang suan chong lei wei iso-C15:0（31.8%）、iso-C17:0 3-OH（16.1%）he iso-C15：1 G（12.9%）;ji xing zhi cheng fen wei PE、liang chong ALhe liu chong wei zhi de zhi fang suan L;hu xi kun xing wei MK-7;ji yin zu DNAde G+Chan liang wei 49.3mol%;tong guo ji tong fa yo 、biao xing 、ji yin xing he hua xue fen lei xue fen xi ,ren wei jun zhu N24Tshi Chitinophagaceaeke de yi ge xin shu xin chong ,bing ming ming wei Paracnuella aquatica;mo shi jun zhu wei N24T（=KCTC62083T=MCCC 1H00301T）。
论文参考文献
论文详细介绍
论文作者分别是来自山东大学的王冲，发表于刊物山东大学2019-07-16论文，是一篇关于夹心平板技术论文,未培养细菌论文,依赖型菌株论文,多相分类论文,山东大学2019-07-16论文的文章。本文可供学术参考使用，各位学者可以免费参考阅读下载，文章观点不代表本站观点，资料来自山东大学2019-07-16论文网站，若本站收录的文献无意侵犯了您的著作版权，请联系我们删除。
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