本文主要研究内容
作者何泊宁（2019）在《牛多杀性巴氏杆菌分离鉴定及应用噬菌体展示技术筛选TbpA蛋白抗原表位》一文中研究指出：多杀性巴氏杆菌是动物机体上呼吸道和眼部黏膜的常在菌群,当机体受到应激或其他呼吸性病原体感染时,常发生内源性感染。牛巴氏杆菌病多发于运输应激的牛群或者犊牛群中。现有的牛出败灭活疫苗免疫原是荚膜血清型B型的多杀性巴氏杆菌,然而大量的研究表明A型多杀性巴氏杆菌引起的牛呼吸道感染较为普遍,不同荚膜血清型间的交叉保护效果并不理想。本研究从黑龙江省两个规模化奶牛场发生严重呼吸道感染的病死牛肺脏和患病牛鼻拭子中分离鉴定致病菌,筛选多杀性巴氏杆菌转铁蛋白结合蛋白TbpA的抗原表位,对于研制高效疫苗防治该病具有重要的现实意义。首先,无菌采集病死牛的肺脏和患病牛鼻拭子,进行病原分离培养、染色镜检及生化试验、细菌16S rDNA及OmpH基因PCR鉴定,应用PCR方法确定分离株的荚膜血清型和毒力因子。结果表明,两个分离株WC16551、LY01均为荚膜血清型A型多杀性巴氏杆菌,药敏试验显示对恩诺沙星、环丙沙星高度敏感。检测22种毒力因子,两株菌均携带19种毒力因子（oma87、fimA、ompA、tonB、exbD、Fur、hgbA、sodC、PmHAS、TbpA、hsf-2、hsf-1、PfhA、ptfA、sodA、nanH、plpB、exbB和tadD）,有三种未被检出（toxA、hgbB和nanB）。LD50分别为:2.3×108CFU/mL和2.08×105 CFU/mL。其次,构建pET-32a-TbpA蛋白原核表达质粒,蛋白诱导表达,Western Blot检测;用Ni-NTA对蛋白进行纯化,蛋白复性及浓缩,选用ISA206佐剂制备免疫原,免疫小鼠,制备高免血清,随后进行抗体纯化。结果表明,目的蛋白大小为104 KDa,当IPTG浓度为0.1 mM时37℃诱导5 h表达量较多,以包涵体形式存在,目的蛋白具有较好的抗原性。第三,构建十五肽库质粒,电转入TG1感受态中,制备噬菌体随机十五肽库,检测肽库多样性及库容量,计算噬菌体滴度,进行三次淘洗,将筛选出噬菌体进行测序,与TbpA蛋白进行同源性分析,最终获得TbpA蛋白抗原表位。结果表明,成功构建了十五肽库质粒和随机肽库,库容量为1.32×109CFU/mL,经多抗淘洗筛选,确定G103和W232两个模拟结合位点,抗原表位主要分布于95-265、573-765蛋白序列中。综上所述,本研究确定了发病牛的病原为荚膜血清型A型多杀性巴氏杆菌,成功筛选出TbpA蛋白抗原表位,为研制牛多杀性巴氏杆菌病基因工程亚单位疫苗奠定了基础。
Abstract
duo sha xing ba shi gan jun shi dong wu ji ti shang hu xi dao he yan bu nian mo de chang zai jun qun ,dang ji ti shou dao ying ji huo ji ta hu xi xing bing yuan ti gan ran shi ,chang fa sheng nei yuan xing gan ran 。niu ba shi gan jun bing duo fa yu yun shu ying ji de niu qun huo zhe du niu qun zhong 。xian you de niu chu bai mie huo yi miao mian yi yuan shi jia mo xie qing xing Bxing de duo sha xing ba shi gan jun ,ran er da liang de yan jiu biao ming Axing duo sha xing ba shi gan jun yin qi de niu hu xi dao gan ran jiao wei pu bian ,bu tong jia mo xie qing xing jian de jiao cha bao hu xiao guo bing bu li xiang 。ben yan jiu cong hei long jiang sheng liang ge gui mo hua nai niu chang fa sheng yan chong hu xi dao gan ran de bing si niu fei zang he huan bing niu bi shi zi zhong fen li jian ding zhi bing jun ,shai shua duo sha xing ba shi gan jun zhuai tie dan bai jie ge dan bai TbpAde kang yuan biao wei ,dui yu yan zhi gao xiao yi miao fang zhi gai bing ju you chong yao de xian shi yi yi 。shou xian ,mo jun cai ji bing si niu de fei zang he huan bing niu bi shi zi ,jin hang bing yuan fen li pei yang 、ran se jing jian ji sheng hua shi yan 、xi jun 16S rDNAji OmpHji yin PCRjian ding ,ying yong PCRfang fa que ding fen li zhu de jia mo xie qing xing he du li yin zi 。jie guo biao ming ,liang ge fen li zhu WC16551、LY01jun wei jia mo xie qing xing Axing duo sha xing ba shi gan jun ,yao min shi yan xian shi dui en nuo sha xing 、huan bing sha xing gao du min gan 。jian ce 22chong du li yin zi ,liang zhu jun jun xie dai 19chong du li yin zi （oma87、fimA、ompA、tonB、exbD、Fur、hgbA、sodC、PmHAS、TbpA、hsf-2、hsf-1、PfhA、ptfA、sodA、nanH、plpB、exbBhe tadD）,you san chong wei bei jian chu （toxA、hgbBhe nanB）。LD50fen bie wei :2.3×108CFU/mLhe 2.08×105 CFU/mL。ji ci ,gou jian pET-32a-TbpAdan bai yuan he biao da zhi li ,dan bai you dao biao da ,Western Blotjian ce ;yong Ni-NTAdui dan bai jin hang chun hua ,dan bai fu xing ji nong su ,shua yong ISA206zuo ji zhi bei mian yi yuan ,mian yi xiao shu ,zhi bei gao mian xie qing ,sui hou jin hang kang ti chun hua 。jie guo biao ming ,mu de dan bai da xiao wei 104 KDa,dang IPTGnong du wei 0.1 mMshi 37℃you dao 5 hbiao da liang jiao duo ,yi bao han ti xing shi cun zai ,mu de dan bai ju you jiao hao de kang yuan xing 。di san ,gou jian shi wu tai ku zhi li ,dian zhuai ru TG1gan shou tai zhong ,zhi bei shi jun ti sui ji shi wu tai ku ,jian ce tai ku duo yang xing ji ku rong liang ,ji suan shi jun ti di du ,jin hang san ci tao xi ,jiang shai shua chu shi jun ti jin hang ce xu ,yu TbpAdan bai jin hang tong yuan xing fen xi ,zui zhong huo de TbpAdan bai kang yuan biao wei 。jie guo biao ming ,cheng gong gou jian le shi wu tai ku zhi li he sui ji tai ku ,ku rong liang wei 1.32×109CFU/mL,jing duo kang tao xi shai shua ,que ding G103he W232liang ge mo ni jie ge wei dian ,kang yuan biao wei zhu yao fen bu yu 95-265、573-765dan bai xu lie zhong 。zeng shang suo shu ,ben yan jiu que ding le fa bing niu de bing yuan wei jia mo xie qing xing Axing duo sha xing ba shi gan jun ,cheng gong shai shua chu TbpAdan bai kang yuan biao wei ,wei yan zhi niu duo sha xing ba shi gan jun bing ji yin gong cheng ya chan wei yi miao dian ding le ji chu 。
论文参考文献
论文详细介绍
论文作者分别是来自黑龙江八一农垦大学的何泊宁，发表于刊物黑龙江八一农垦大学2019-07-06论文，是一篇关于牛多杀性巴氏杆菌论文,荚膜血清型论文,转铁蛋白结合蛋白论文,噬菌体随机十五肽库论文,抗原表位论文,黑龙江八一农垦大学2019-07-06论文的文章。本文可供学术参考使用，各位学者可以免费参考阅读下载，文章观点不代表本站观点，资料来自黑龙江八一农垦大学2019-07-06论文网站，若本站收录的文献无意侵犯了您的著作版权，请联系我们删除。
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