导读:本文包含了鸡胚原代细胞论文开题报告文献综述及选题提纲参考文献，主要关键词:新城疫,F基因,杆状病毒,鸡胚原代细胞
鸡胚原代细胞论文文献综述
高冬妮,平文祥,金丽颖,沈万力,宋刚[1]（2014）在《以具有WPRE调控元件的杆状病毒为载体在鸡胚原代细胞中表达新城疫病毒F基因》一文中研究指出【目的】构建具有哺乳动物细胞特异性启动子和基因转录后调控元件的重组杆状病毒转移载体,优化的重组杆状病毒可介导新城疫病毒(Newcastle disease virus,NDV)F基因在鸡原代骨骼肌细胞中进行高效表达。【方法】提取NDV La Sota株病毒RNA基因组,用RT-PCR技术扩增F基因,将其克隆到自主构建的具有转录后调控元件(Woodchuck hepatitis virus post-transcriptional regulatory element,WPRE)的杆状病毒转移载体的CMV启动子下游,通过Bac-to-Bac系统获得F重组Bacmid,经转染Sf9昆虫细胞后获得F重组杆状病毒。重组病毒经扩增后以50个MOI感染鸡原代骨骼肌细胞,接种72 h后裂解细胞收获蛋白。比较分析WPRE调控元件对蛋白表达水平的影响。【结果】经Western blot证实在鸡原代骨骼肌细胞中表达了NDV F蛋白,分子量约56 kDa,与预测蛋白大小一致,且能被NDV阳性血清所识别。添加WPRE转录后调控元件的重组杆状病毒介导F蛋白的表达效果与添加10 mmol/L丁酸盐法基本相同,但对细胞几乎没有毒性。【结论】优化后的重组杆状病毒可以向鸡原代细胞中传递NDV F基因,并在CMV的启动下表达具有反应原性的F蛋白,添加的转录后调控元件WPRE可以增强杆状病毒介导外源基因在鸡原代细胞中的表达水平。本研究为研制NDV及其他重要禽类传染病的杆状病毒载体基因工程疫苗奠定了基础。(本文来源于《微生物学报》期刊2014年04期）
宋姗姗,葛菁萍,李梅,高冬妮,金丽颖[2]（2013）在《构建具有巨细胞病毒(CMV)启动子的杆状病毒高效表达载体并利用其在鸡胚原代细胞中表达eGFP基因》一文中研究指出【目的】杆状病毒载体在哺乳动物细胞中不复制,具有极高的生物安全性,而通过引入细胞特异性启动子、"病毒假型化"、添加不同功能调控元件等优化手段,杆状病毒可转导的细胞类型明显增多、转导效率明显增高。优化的重组杆状病毒可以在鸡细胞中表达,确定重组杆状病毒在鸡细胞中高效表达的条件,为禽类基因工程疫苗的开发奠定了坚实的基础。【方法】本研究以增强型绿色荧光蛋白(Enhanced GreenFluorescent Protein,eGFP)为报告基因,构建含巨细胞病毒(Cytomegaoviyns,CMV)启动子启动的重组转座载体,并且通过病毒假型化(TM/CTD of VSV-GED)、添加转录后调控元件(Woodchuck hepatitis virus post-transcriptional regulatory element,WPRE)和腺病毒反向重复序列(Inverted terminal repeats,ITRs)等手段优化重组杆状病毒表达载体,最终利用重组杆状病毒对鸡胚原代细胞的侵染进行eGFP的表达,比较分析不同重组载体对蛋白表达水平的影响。【结果】eGFP表达结果显示,12 h便可在倒置荧光显微镜下检测出eGFP的表达,随着时间的延长,eGFP表达效率先增加后降低。经过VSVGED病毒假型化的重组杆状病毒转导效率从36%增加至48.2%。添加转录后调控元件WPRE的重组杆状病毒介导eGFP的表达效果与添加10mmol/L丁酸盐法基本相同,但对细胞几乎没有毒性。从72 h内的eGFP表达强度看,只有添加ITRs元件的重组杆状病毒的表达强度随时间的延长而极缓慢增加。【结论】eGFP表达结果显示,利用VSVGED病毒假型化手段可以提高杆状病毒转导鸡胚原代细胞的效率;添加转录后调控元件WPRE的重组杆状病毒介导eGFP的表达效果与添加丁酸盐法基本相同,可以增强杆状病毒介导报告基因在鸡胚原代细胞中的表达水平;添加ITRs元件的重组杆状病毒具有延长eGFP表达时间的作用。(本文来源于《微生物学报》期刊2013年06期）
李梅[3]（2009）在《杆状病毒高效表达载体构建及其介导eGFP在鸡胚原代细胞中的表达》一文中研究指出Bac-to-Bac杆状病毒表达载体系统( Baculovirus Expression Vector System, BEVS)是一类真核表达系统。近年来,杆状病毒作为基因转移载体介导外源基因在哺乳动物细胞中表达已在生物、医学等领域得到广泛应用。杆状病毒载体在哺乳动物细胞中不复制,具有极高的生物安全性,而通过引入细胞特异性启动子、“病毒假型化”、添加不同功能调控元件等优化手段,杆状病毒可转导的细胞类型明显增多、转导效率明显增高。本研究以增强型绿色荧光蛋白(eGFP)为报告基因,构建CMV启动子启动的重组转座载体,并且通过病毒假型化(TM/CTD of VSV-GED)、添加转录后调控元件(WPRE)和腺病毒反向重复序列(ITRs)等手段优化重组杆状病毒表达载体,最终利用重组杆状病毒对鸡胚原代细胞的侵染进行eGFP的表达,比较分析不同重组载体对蛋白表达水平的影响。首先,设计特异引物PCR扩增目的片段“PH”、“gp64SP”、“TM/CTD”、“CMV”、“WPRE”及“pA”;应用融合PCR法及传统酶切连接法相结合的方式将以上六个片段连接于骨架质粒pFastBac[PH],构建成重组转移载体“pLM”;然后,PCR扩增目的片段“ITRs”,即“Left ITRs”和“Right ITRs”,分别插入到pLM中CMV表达盒的两侧,构建成重组转移载体“pLM-ITRs”;通过酶切法将报告基因eGFP的DNA片段插入pLM和pLM-ITRs,构建成重组转移质粒pLM-eGFP和pLM-ITRs-eGFP,并转化至DH10Bac大肠杆菌感受态细胞,通过Bac-to-Bac BEVS生成重组穿梭质粒Bac-LM-eGFP和Bac-LM-ITRs-eGFP,转染Sf9昆虫细胞后,获得BV-LM-eGFP和BV-LM-ITRs-eGFP P1代病毒储备;继续扩增病毒至P3代,空斑法分析病毒滴度分别为1.1×108 pfu/mL、1.2×108 pfu/mL ;最后,将BV-LM-eGFP、BV-LM-ITRs-eGFP及阴性对照BV-FB-eCMV-eGFP同时侵染鸡胚原代细胞,获得报告基因eGFP的表达。eGFP表达结果显示,利用VSVGED病毒假型化手段可以提高杆状病毒转导鸡胚原代细胞的效率;而添加了转录后调控元件WPRE的重组杆状病毒介导eGFP的表达效果与添加丁酸盐法基本相同,即可以增强杆状病毒介导报告基因在鸡胚原代细胞中的表达水平。这为进一步系统的、量化的研究VSVGED病毒假型化及添加转录后调控元件对报告基因eGFP表达水平的影响奠定了坚实的理论与实验基础。(本文来源于《黑龙江大学》期刊2009-06-01）
彭广东[4]（2007）在《鸭肿头败血症病毒XD株的鸭胚原代细胞培养特性及免疫电镜观察研究》一文中研究指出鸭肿头败血症病毒(Duck Swollen Head Septicemia Virus，DSHSV)，隶属于呼肠孤病毒科正呼肠孤病毒属，鸭肿头败血症病毒呈球形，大小约65～80nm，无囊膜，该病毒核酸类型为双链RNA，基因组大于19Kbp。该病2002年首次报道，主要以病鸭头部肿大，全身弥漫性出血为特征。本试验通过对鸭胚日龄，胰酶浓度和营养液小牛血清浓度的选择，经过反复试验，采用14日龄鸭胚，经0.125％胰酶消化15～20min，使用含15％小牛血清的营养液成功培养鸭胚肝细胞，采用20日龄鸭胚，经0.25％胰酶消化5～10min，使用含20％小牛血清的营养液成功培养鸭胚肾细胞。通过鸭肿头败血症病毒(DSHSV)在鸭胚成纤维细胞，鸭胚肝细胞，鸭胚肾细胞上的培养特性观察，发现鸭肿头败血症病毒在鸭胚成纤维细胞和鸭胚肾细胞上不生长，病毒首次接种于鸭胚肝细胞上，24h开始出现细胞病变效应(CPE)，48h细胞病变达一半以上，随着在鸭胚肝细胞上继续传代，能稳定的出现一致的细胞病变，同时病变时间开始提前，细胞在接毒后8h开始出现细胞病变效应，几乎所有的细胞都可见明显的细胞病变，主要表现为细胞界限变清晰，胞核肿胀，胞内颗粒增多，16h原肿胀且颗粒增多的细胞出现明显的脱落，并且漂浮在细胞培养液中，脱落细胞约占50％。由于周边细胞脱落，未脱落细胞占据原飘落细胞的位置，使得单个细胞体积变大，细胞间隙增宽，接种24h后原致密的单层肝细胞因为病变细胞脱落而产生大量的空斑，细胞脱落约75％。病毒液中悬浮大量散在的脱落细胞。经纯化的鸭肿头败血症毒添加弗氏佐剂后，制备兔抗鸭肿头败血症病毒血清，处理后的鸭肿头败血症肝细胞毒和该血清做免疫电镜观察，观察到大小约65～70nm的球形鸭肿头败血症病毒粒子，另外通过鸭胚肝细胞毒回归鸭胚，发现整个胚体及头部出血，呈“红胚”，喙严重变型。通过免疫电镜观察和鸭胚回归实验证明在鸭胚肝细胞上的细胞病变为鸭肿头败血症病毒引起。(本文来源于《四川农业大学》期刊2007-06-01）
李富强[5]（1998）在《禽腺病毒鸽分离株在鸡胚原代细胞上的生长特性和血清学特征》一文中研究指出禽腺病毒（ＦＡＶ）在禽类中广泛分布，现有知识大多来源于由１２个血清型（ＦＡＶ１－１２）组成的Ⅰ群鸡腺病毒。ＭｃＦｅｒａｎ等（１９７６）首次报道了鸽的腺病毒，两个分离株被鉴定为ＦＡＶ血清型８。以后的几篇报道表明腺病毒很可能与幼鸽的包涵体肝炎有关。最近有...(本文来源于《国外畜牧科技》期刊1998年06期）
陈明勇,郭建华,高齐瑜,王彩虹[6]（1997）在《应用鸡胚法氏囊原代细胞培养鸡IBDV的研究》一文中研究指出试用鸡胚法氏囊原代细胞传代、增殖鸡传染性法氏囊病病毒（ＩＢＤＶ），均不同程度地产生特征性细胞病变效应。采用双抗体夹心法ＥＬＩＳＡ和细胞毒回归鸡试验证实，ＩＢＤ－ＶＨ株组织毒适应于鸡胚法氏囊细胞，并随传代次数增加，病毒增殖能力增强；而在鸡胚成纤维细胞上盲传２代之后才开始出现细胞病变效应。比较了ＩＢＤＶ在鸡胚法氏囊细胞和鸡胚成纤维细胞上增殖能力的差异，讨论了培养基ＰＨ值、小牛血清浓度对鸡胚法氏囊细胞培养及病毒增殖的影响。(本文来源于《中国畜禽传染病》期刊1997年05期）
缪从容,吴贤福[7]（1997）在《几种鸡胚原代细胞的制备方法》一文中研究指出在病毒分离、繁殖，中和试验及药物毒理试验中，细胞培养是经常被选用的技术。本文描述通过选择不同日龄的鸡胚，分别对皮肤上皮细胞、肝细胞和肾细胞进行了组织培养，确定了生长所需的培养液要求。认为１２日龄鸡胚适于皮肤上皮细胞的制备，１７～２０日龄鸡胚适合于肝细胞、肾细胞的制备，并确定了细胞生长的ｐＨ条件。(本文来源于《中国兽药杂志》期刊1997年01期）
陈嘉棣,杨惠萍,杨颐,黎济申,赵洪兴[8]（1991）在《细胞微载体培养技术用于鸡胚原代细胞培养及鸡新城疫病毒的增殖》一文中研究指出以细胞微载体培养技术,用DEAE-Sephadex A 50,Cytodex 3二种微载体,对鸡胚原代细胞进行培养研究,并用在微载体上培养的鸡胚细胞感染鸡新城疫Ⅰ系毒,制备鸡新城疫Ⅰ系细胞苗免疫鸡,与普通细胞培养及鸡胚增殖病毒制备的鸡新城疫Ⅰ系苗比较,我们得到了在微载体培养系统有较高的细胞产量,较高的病毒滴度,培养物制备疫苗抗原性也好的结果。(本文来源于《上海农业学报》期刊1991年01期）
鸡胚原代细胞论文开题报告
（1）论文研究背景及目的
此处内容要求：
首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景，再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题，并提出你的论文准备的观点或解决方法。
写法范例：
【目的】杆状病毒载体在哺乳动物细胞中不复制,具有极高的生物安全性,而通过引入细胞特异性启动子、"病毒假型化"、添加不同功能调控元件等优化手段,杆状病毒可转导的细胞类型明显增多、转导效率明显增高。优化的重组杆状病毒可以在鸡细胞中表达,确定重组杆状病毒在鸡细胞中高效表达的条件,为禽类基因工程疫苗的开发奠定了坚实的基础。【方法】本研究以增强型绿色荧光蛋白(Enhanced GreenFluorescent Protein,eGFP)为报告基因,构建含巨细胞病毒(Cytomegaoviyns,CMV)启动子启动的重组转座载体,并且通过病毒假型化(TM/CTD of VSV-GED)、添加转录后调控元件(Woodchuck hepatitis virus post-transcriptional regulatory element,WPRE)和腺病毒反向重复序列(Inverted terminal repeats,ITRs)等手段优化重组杆状病毒表达载体,最终利用重组杆状病毒对鸡胚原代细胞的侵染进行eGFP的表达,比较分析不同重组载体对蛋白表达水平的影响。【结果】eGFP表达结果显示,12 h便可在倒置荧光显微镜下检测出eGFP的表达,随着时间的延长,eGFP表达效率先增加后降低。经过VSVGED病毒假型化的重组杆状病毒转导效率从36%增加至48.2%。添加转录后调控元件WPRE的重组杆状病毒介导eGFP的表达效果与添加10mmol/L丁酸盐法基本相同,但对细胞几乎没有毒性。从72 h内的eGFP表达强度看,只有添加ITRs元件的重组杆状病毒的表达强度随时间的延长而极缓慢增加。【结论】eGFP表达结果显示,利用VSVGED病毒假型化手段可以提高杆状病毒转导鸡胚原代细胞的效率;添加转录后调控元件WPRE的重组杆状病毒介导eGFP的表达效果与添加丁酸盐法基本相同,可以增强杆状病毒介导报告基因在鸡胚原代细胞中的表达水平;添加ITRs元件的重组杆状病毒具有延长eGFP表达时间的作用。
（2）本文研究方法
调查法：该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。
观察法：用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。
实验法：通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。
文献研究法：通过调查文献来获得资料，从而全面的、正确的了解掌握研究方法。
实证研究法：依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。
定性分析法：对研究对象进行“质”的方面的研究，这个方法需要计算的数据较少。
定量分析法：通过具体的数字，使人们对研究对象的认识进一步精确化。
跨学科研究法：运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。
功能分析法：这是社会科学用来分析社会现象的一种方法，从某一功能出发研究多个方面的影响。
模拟法：通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。
鸡胚原代细胞论文参考文献
[1].高冬妮,平文祥,金丽颖,沈万力,宋刚.以具有WPRE调控元件的杆状病毒为载体在鸡胚原代细胞中表达新城疫病毒F基因[J].微生物学报.2014
[2].宋姗姗,葛菁萍,李梅,高冬妮,金丽颖.构建具有巨细胞病毒(CMV)启动子的杆状病毒高效表达载体并利用其在鸡胚原代细胞中表达eGFP基因[J].微生物学报.2013
[3].李梅.杆状病毒高效表达载体构建及其介导eGFP在鸡胚原代细胞中的表达[D].黑龙江大学.2009
[4].彭广东.鸭肿头败血症病毒XD株的鸭胚原代细胞培养特性及免疫电镜观察研究[D].四川农业大学.2007
[5].李富强.禽腺病毒鸽分离株在鸡胚原代细胞上的生长特性和血清学特征[J].国外畜牧科技.1998
[6].陈明勇,郭建华,高齐瑜,王彩虹.应用鸡胚法氏囊原代细胞培养鸡IBDV的研究[J].中国畜禽传染病.1997
[7].缪从容,吴贤福.几种鸡胚原代细胞的制备方法[J].中国兽药杂志.1997
[8].陈嘉棣,杨惠萍,杨颐,黎济申,赵洪兴.细胞微载体培养技术用于鸡胚原代细胞培养及鸡新城疫病毒的增殖[J].上海农业学报.1991