导读:本文包含了酶特性鉴定论文开题报告文献综述及选题提纲参考文献，主要关键词:耐热木聚糖酶,组氨酸标签,Ni亲和层析,蛋白纯化
酶特性鉴定论文文献综述
陈丰[1]（2015）在《组氨酸标签木聚糖酶的构建表达和酶特性鉴定》一文中研究指出半纤维素(hemicollulose)与纤维素、木质素共同组成植物细胞壁的叁大主要成分,木聚糖是半纤维素中的最主要成分。木聚糖酶(endo-1,4-xylanase,EC 3.2.1.8)是糖苷水解酶家族的成员,可以水解纤维素的主要成分——木聚糖。近几十年来,木聚糖酶广泛应用在工业生产中,包括纺织、食品、饲料、造纸和纸浆工业。同时有研究报道,这类酶在生物降解和生物转化农业废弃物和副产品方面有广阔的前景。根据氨基酸序列的相似程度以及核心催化区域的结构特点,木聚糖酶被分入糖苷水解酶第10和第11家族。第11家族木聚糖酶具有较小的分子质量,在结构上高度相似,并且有相似的木聚糖底物特异性。11家族耐热木聚糖1YNA分离自嗜热真菌Thermomyces lanuginosus DSM10635,在Escherichia coli.BL21(DE3)中表达。为提高其稳定性,利用PCR手段,在其N末端添加了一个二硫键Q1C-Q24C。得到重组酶DSB在pH 6.5环境下最适反应温度提高了10°C,达到了75°C。为简化DSB纯化方式,本研究以木聚糖酶DSB基因为模板,利用PCR去除其终止密码子后插入表达载体pET-22b(+),得到C末端添加多聚组氨酸标签(His·Tag)的木聚糖酶表达载体,构建基因命名为dsb-his,并利用大肠杆菌表达。表达产物经Ni Sepharose亲和层析纯化,得到电泳纯的酶。酶蛋白的大小,酶特性没有受到组氨酸标签的影响。蛋白纯化操作得到了简化。虽然组氨酸标签在蛋白纯化方面应用广泛,其对酶特性的影响还没有系统的研究和总结。结合11家族木聚糖酶的3D结构分析,分析是因为C末端在酶蛋白表面且组氨酸标签较小,形成无规则卷曲。本研究说明组氨酸标签木聚糖酶的生化特性和原始酶没有差异,提供了高效纯化相应木聚糖酶的方法,为相关小分子酶蛋白的纯化提供了更简便的操作途径。(本文来源于《中南民族大学》期刊2015-04-15）
熊海容,陈丰,王亚伟,张巍[2]（2014）在《组氨酸标签木聚糖酶的构建表达和酶特性鉴定》一文中研究指出通过改变终止密码子位点,在一个耐热木聚糖酶突变株DSB的C末端添加了6聚组氨酸标签(His-tag),并完成了表达和酶特性鉴定.通过PCR将嗜热真菌DSM 10635来源的木聚糖酶突变体基因dsb的终止密码子序列定点突变为谷氨酸密码子序列,连接到表达载体pET-22b(+),转化Escherichia coli.BL21(DE3),诱导表达的耐热木聚糖酶DSB在C端含有6×His-tag.表达产物经硫酸铵分级沉淀和Ni Sepharose层析纯化,获得了电泳纯重组酶DSB.结果表明:添加组氨酸标签的酶与原始酶相比,酶学特性无变化.SDS-PAGE电泳结果显示该酶分子量约为23 kDa,重组酶最适pH为6.5,最适温度为75℃,在pH 5~10具有良好的稳定性,在pH 6.5,70℃条件下处理30min相对酶活力仍保留80%以上.(本文来源于《中南民族大学学报(自然科学版)》期刊2014年03期）
李思佳[3]（2013）在《木聚糖酶1YNA及其突变体在毕赤酵母中的表达和酶特性鉴定》一文中研究指出木聚糖酶是可以把半纤维素中的木聚糖成分降解为低聚木糖和木糖的一类酶的总称。木聚糖酶主要存在于微生物，植物及一些低等动物中等等，其应用涉及到很多领域，如造纸、饲料、食品、能源及医药环保等方面。本研究是在原始菌株嗜热真菌所产木聚糖酶在大肠杆菌中表达的基础上，进一步将该木聚糖酶在毕赤酵母表达系统中进行表达，得到具有生物活性的木聚糖酶，并对其进行了部分酶特性的研究。实验通过设计合理的PCR引物，克隆该木聚糖酶野生型基因及其突变型基因，测序验证这两个酶基因序列，并将它们重新命名为tlx和dsb。tlx和dsb木聚糖酶基因与表达载体pPIC9γ连接转化构建重组质粒，之后将重组质粒导入到毕赤酵母GS115中进行诱导表达。利用DNS法检测发酵液上清，从中筛选出表达量高的菌株GS115-TLX与GS115-DSB，其酶活力分别为566.65IU/mL和2496.03IU/mL。并将发酵上清液做SDS-PAGE凝胶电泳，电泳结果显示一条带，说明表达产物达到电泳纯级别，且表达量较高。对GS115-TLX与GS115-DSB部分酶学的分析结果显示：野生型木聚糖酶TLX最适温度为68°C，突变型木聚糖酶DSB的最适温度为75°C；TLX最适pH约为6.5，DSB在pH5～6.5之间相对酶活力能达到85%以上；在热稳定性方面，结果显示DSB比TLX其具有良好的热稳定性。DSB在75°C，pH6.5下处理30min后仍能保持60%左右的酶活力，而TLX则只有20%左右，DSB热稳定性明显高于野生型。另外，实验还通过Bradford法对野生型和突变型木聚糖酶的蛋白质进行测定，结果显示，其发酵液蛋白含量分别为1.75mg/mL和1.82mg/mL，突变株蛋白表达量要高于野生型菌株，与SDS-PAGE显示结果一致。实验最后还对GS115-DSB在发酵罐水平上诱导产酶进行了初步探索。在实验过程中对发酵液测得菌体湿最大重达到115g/L，酶活力最高达到59000IU/mL。这一结果比摇瓶水平高出很多，为以后更好的研究细胞高密度发酵打下基础。(本文来源于《中南民族大学》期刊2013-05-01）
李晓峰,陈水平,姜涛,邓永强,秦成峰[4]（2008）在《重组西尼罗病毒NS5融合蛋白依赖RNA的RNA聚合酶特性鉴定》一文中研究指出西尼罗病毒(West Nile virus,WNV)非结构蛋白NS5是病毒基因组复制的关键蛋白.以病毒全长cDNA克隆为模板,PCR扩增获得NS5的RNA依赖的RNA聚合酶(RdRp)活性区(NS5pol)及该蛋白完整的编码序列(NS5F),分别克隆于原核表达载体pET-28a并转化至大肠杆菌E.coli BL21(DE3)中诱导表达.表达的可溶性重组蛋白经Ni柱亲和层析纯化后进行SDS-PAGE和Western印迹鉴定.结果显示,二者均为病毒特异蛋白,且纯度均在90%以上.进一步的体外RdRp分析及EMSA的结果表明,NS5pol和NSF5均有较高的RdRp活性,且该活性具有RNA模板序列和二级结构的特异性.获得的具有RdRp活性的NS5pol和NS5F为西尼罗病毒基因组复制相关元件的研究奠定了基础.(本文来源于《中国生物化学与分子生物学报》期刊2008年07期）
酶特性鉴定论文开题报告
（1）论文研究背景及目的
此处内容要求：
首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景，再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题，并提出你的论文准备的观点或解决方法。
写法范例：
通过改变终止密码子位点,在一个耐热木聚糖酶突变株DSB的C末端添加了6聚组氨酸标签(His-tag),并完成了表达和酶特性鉴定.通过PCR将嗜热真菌DSM 10635来源的木聚糖酶突变体基因dsb的终止密码子序列定点突变为谷氨酸密码子序列,连接到表达载体pET-22b(+),转化Escherichia coli.BL21(DE3),诱导表达的耐热木聚糖酶DSB在C端含有6×His-tag.表达产物经硫酸铵分级沉淀和Ni Sepharose层析纯化,获得了电泳纯重组酶DSB.结果表明:添加组氨酸标签的酶与原始酶相比,酶学特性无变化.SDS-PAGE电泳结果显示该酶分子量约为23 kDa,重组酶最适pH为6.5,最适温度为75℃,在pH 5~10具有良好的稳定性,在pH 6.5,70℃条件下处理30min相对酶活力仍保留80%以上.
（2）本文研究方法
调查法：该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。
观察法：用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。
实验法：通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。
文献研究法：通过调查文献来获得资料，从而全面的、正确的了解掌握研究方法。
实证研究法：依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。
定性分析法：对研究对象进行“质”的方面的研究，这个方法需要计算的数据较少。
定量分析法：通过具体的数字，使人们对研究对象的认识进一步精确化。
跨学科研究法：运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。
功能分析法：这是社会科学用来分析社会现象的一种方法，从某一功能出发研究多个方面的影响。
模拟法：通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。
酶特性鉴定论文参考文献
[1].陈丰.组氨酸标签木聚糖酶的构建表达和酶特性鉴定[D].中南民族大学.2015
[2].熊海容,陈丰,王亚伟,张巍.组氨酸标签木聚糖酶的构建表达和酶特性鉴定[J].中南民族大学学报(自然科学版).2014
[3].李思佳.木聚糖酶1YNA及其突变体在毕赤酵母中的表达和酶特性鉴定[D].中南民族大学.2013
[4].李晓峰,陈水平,姜涛,邓永强,秦成峰.重组西尼罗病毒NS5融合蛋白依赖RNA的RNA聚合酶特性鉴定[J].中国生物化学与分子生物学报.2008