本文主要研究内容
作者刘芸宏（2019）在《猕猴桃Psa-V检测方法的研究》一文中研究指出：猕猴桃溃疡病是细菌性疾病,已严重危害到了中国乃至全球猕猴桃产业的发展,已经成为了全国森林植物的重点检疫对象。丁香假单胞杆菌猕猴桃致病变种(Pseudomonas syringae pv.actinidiae,Psa)是引发猕猴桃溃疡病的病原菌,Psa-V(Pseudomonas syringae pv.actinidiae virulent strains)是Psa中的强毒株,致病力强,是导致我国猕猴桃溃疡病爆发的主要病原菌。猕猴桃花粉携带Psa-V是导致其远距离传播的重要因素。因此加大对猕猴桃花粉中Psa-V检测力度对防止猕猴桃溃疡病的发生具有比较重要的意义。本研究采用普通PCR对陕西猕猴桃花粉样品进行Psa-V检测,并建立利用PMA-qPCR以及RT-PCR对Psa-V活菌进行检测的方法,为花粉消毒,减少花粉传播Psa-V提供技术支撑。主要结果及结论如下:1.陕西猕猴桃产区商品花粉中Psa-V普通PCR检测抽取36份商品花粉样品采用普通PCR进行Psa-V检测。结果表明,共有27个样品结果呈阳性,阳性概率为75%,对结果为阳性的样品进行测序分析可得出,呈现出阳性结果的27个样品均为Psa-V。2.基于PMA-qPCR的Psa-V活菌检测将叠氮溴化丙啶(PMA)与实时荧光定量(qPCR)相结合,建立陕西猕猴桃产区Psa-V活菌定量检测方法。通过优化PMA最佳浓度、暗育时间、曝光时间,确定PMA-qPCR区别溃疡菌活、死菌的最佳条件,结果表明,Psa-V经98.3℃沸水浴处理13 min可完全致死,Psa-V死菌浓度为1×107 CFU/mL时PMA与死菌共价交联的最佳浓度为105 ug/mL,最佳暗育时间为8 min,最佳曝光时间为20min,在此条件下死菌DNA无扩增,而对活菌DNA扩增无影响;Psa质粒标准品建立的线性回归方程是Y=-3.2204x+37.73,R2=0.9955,最低可检出6.39×102拷贝/反应体系的Psa-V;检测限为2.38×102拷贝/μL反应体系;应用人工染菌后的枝条样品检测,则最低检出限是6.30×104 CFU/mL,与菌落计数检测结果相符。3.基于RT-PCR的Psa-V活菌检测应用RT-PCR技术,建立陕西猕猴桃产区Psa-V活菌检测方法。结果表明,RT-PCR法可有效检测出Psa-V活菌,在纯培养物中,最小检出限为1.26×104拷贝/μL反应体系;对于染菌花粉样品,增菌12h,灵敏度可达1.39×101 CFU/g。
Abstract
mi hou tao hui yang bing shi xi jun xing ji bing ,yi yan chong wei hai dao le zhong guo nai zhi quan qiu mi hou tao chan ye de fa zhan ,yi jing cheng wei le quan guo sen lin zhi wu de chong dian jian yi dui xiang 。ding xiang jia chan bao gan jun mi hou tao zhi bing bian chong (Pseudomonas syringae pv.actinidiae,Psa)shi yin fa mi hou tao hui yang bing de bing yuan jun ,Psa-V(Pseudomonas syringae pv.actinidiae virulent strains)shi Psazhong de jiang du zhu ,zhi bing li jiang ,shi dao zhi wo guo mi hou tao hui yang bing bao fa de zhu yao bing yuan jun 。mi hou tao hua fen xie dai Psa-Vshi dao zhi ji yuan ju li chuan bo de chong yao yin su 。yin ci jia da dui mi hou tao hua fen zhong Psa-Vjian ce li du dui fang zhi mi hou tao hui yang bing de fa sheng ju you bi jiao chong yao de yi yi 。ben yan jiu cai yong pu tong PCRdui shan xi mi hou tao hua fen yang pin jin hang Psa-Vjian ce ,bing jian li li yong PMA-qPCRyi ji RT-PCRdui Psa-Vhuo jun jin hang jian ce de fang fa ,wei hua fen xiao du ,jian shao hua fen chuan bo Psa-Vdi gong ji shu zhi cheng 。zhu yao jie guo ji jie lun ru xia :1.shan xi mi hou tao chan ou shang pin hua fen zhong Psa-Vpu tong PCRjian ce chou qu 36fen shang pin hua fen yang pin cai yong pu tong PCRjin hang Psa-Vjian ce 。jie guo biao ming ,gong you 27ge yang pin jie guo cheng yang xing ,yang xing gai lv wei 75%,dui jie guo wei yang xing de yang pin jin hang ce xu fen xi ke de chu ,cheng xian chu yang xing jie guo de 27ge yang pin jun wei Psa-V。2.ji yu PMA-qPCRde Psa-Vhuo jun jian ce jiang die dan xiu hua bing ding (PMA)yu shi shi ying guang ding liang (qPCR)xiang jie ge ,jian li shan xi mi hou tao chan ou Psa-Vhuo jun ding liang jian ce fang fa 。tong guo you hua PMAzui jia nong du 、an yo shi jian 、bao guang shi jian ,que ding PMA-qPCRou bie hui yang jun huo 、si jun de zui jia tiao jian ,jie guo biao ming ,Psa-Vjing 98.3℃fei shui yu chu li 13 minke wan quan zhi si ,Psa-Vsi jun nong du wei 1×107 CFU/mLshi PMAyu si jun gong jia jiao lian de zui jia nong du wei 105 ug/mL,zui jia an yo shi jian wei 8 min,zui jia bao guang shi jian wei 20min,zai ci tiao jian xia si jun DNAmo kuo zeng ,er dui huo jun DNAkuo zeng mo ying xiang ;Psazhi li biao zhun pin jian li de xian xing hui gui fang cheng shi Y=-3.2204x+37.73,R2=0.9955,zui di ke jian chu 6.39×102kao bei /fan ying ti ji de Psa-V;jian ce xian wei 2.38×102kao bei /μLfan ying ti ji ;ying yong ren gong ran jun hou de zhi tiao yang pin jian ce ,ze zui di jian chu xian shi 6.30×104 CFU/mL,yu jun la ji shu jian ce jie guo xiang fu 。3.ji yu RT-PCRde Psa-Vhuo jun jian ce ying yong RT-PCRji shu ,jian li shan xi mi hou tao chan ou Psa-Vhuo jun jian ce fang fa 。jie guo biao ming ,RT-PCRfa ke you xiao jian ce chu Psa-Vhuo jun ,zai chun pei yang wu zhong ,zui xiao jian chu xian wei 1.26×104kao bei /μLfan ying ti ji ;dui yu ran jun hua fen yang pin ,zeng jun 12h,ling min du ke da 1.39×101 CFU/g。
论文参考文献
论文详细介绍
论文作者分别是来自陕西师范大学的刘芸宏，发表于刊物陕西师范大学2019-10-14论文，是一篇关于猕猴桃溃疡菌论文,强毒株论文,活菌检测论文,陕西师范大学2019-10-14论文的文章。本文可供学术参考使用，各位学者可以免费参考阅读下载，文章观点不代表本站观点，资料来自陕西师范大学2019-10-14论文网站，若本站收录的文献无意侵犯了您的著作版权，请联系我们删除。
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