导读:本文包含了附睾蛋白抑制剂论文开题报告文献综述及选题提纲参考文献，主要关键词:避孕疫苗,Eppin,叁维结构,可溶性蛋白
附睾蛋白抑制剂论文文献综述
陈惠玲[1]（2015）在《人源附睾蛋白酶抑制剂Eppin蛋白的可溶性表达》一文中研究指出人口问题是我国经济可持续发展的重要因素,因此避孕节育研究受到极大的重视。近年来,人类附睾蛋白酶抑制剂Eppin成为男性避孕研究中重要的候选物。人附睾蛋白酶抑制剂(Epidydimal protease inhibitor,Eppin)为分泌蛋白,在结构上包含Kunitze和Wap两个结构域,主要在男性的附睾及睾丸中特异性表达。O’Rond等人于2004年的动物实验中使用重组Eppin蛋白免疫雄猴,获得78%的不育率,抗体高滴度维持数月后下降,72%雄猴恢复了致孕功能;随后的研究发现在射精的过程中Eppin蛋白与精子凝固蛋白(Semenogelin,SEMG1)结合后调控来自前列腺的前列腺特异性抗原(Prostate Specific Antigen,PSA)专一水解SEMG1,并延缓其水解,使得精子处于凝胶保护中,维持精液微环境,免受女性阴道环境的攻击,保证精子正常液化后获能。同时有研究表明Eppin与SEMG1结合能减慢精子运动能力。抗Eppin抗体可能与SEMG1类似,特异性结合Eppin后由于PSA不能水解抗体,精子运动将永久性被抑制,从而导致免疫性不育。两者结合位点所引起的构象改变可能是其抗生育作用的机制。研究Eppin蛋白的叁维结构,解析其构象改变的分子基础将为筛选出具有研发避孕疫苗潜能物提供重要条件。本课题拟表达足量可溶性Eppin重组蛋白为蛋白结晶做准备。第一部分分析了Eppin蛋白的氨基酸序列,并对二级结构和二硫键配对进行预测。第二部分使用真核昆虫杆状病毒及果蝇S2表达体系表达Eppin蛋白。第叁部分利用多种表达载体/宿主菌组合进行原核表达,在最佳诱导温度、诱导剂浓度以及蛋白破碎方式上做了探索。最后以带有麦芽糖结合蛋白MBP标签的方式,借助表达菌株Rossetta2-OrigamiB(DE3)低温诱导表达出首例可溶性Eppin蛋白。为获取大量、纯度高、可溶的Eppin蛋白,我们对pMALc质粒进行改造,加入了TEV酶切位点以及在TEV与Eppin基因序列之间增加用于纯化的组氨酸序列以加强酶切效率。蛋白纯化方式包括了Ni柱、Amylose柱以及分子筛亲和层析。实验结果如下:1、Eppin蛋白的N端有具有柔性的无规则曲卷loop区,相对C端较无序;预测将形成7对二硫键,分别为33-65、40-60、48-61、54-69、77-127、86-110、102-123。2、Eppin蛋白在昆虫Bac-to-Bac杆状病毒系统中以包涵体的方式表达于细胞内。果蝇S2则无表达。3、成功构建多个重组质粒pET22b-Eppin、pET40b-Eppin、p ET28a-Eppin、pET32M-Eppin、p ET15a-Eppin,诱导表达后Eppin蛋白均表达为包涵体。4、成功构建pMALc-2x-Eppin重组质粒,表达可溶性重组MBP-Eppin蛋白,去除标签后获得首例可溶性Eppin蛋白,质谱分析证实为Eppin蛋白,具有抗原性。5、可溶性Eppin蛋白以多聚体状态与MBP共纯化,用于Ni柱纯化的组氨酸标签未暴露。全长表达可溶性表达存在困难,后续研究可考虑以C端一部分序列作为蛋白结晶的研究。本研究对如何获得可溶性Eppin蛋白进行了大量的实验探索,同时也获得了首例可溶性Eppin蛋白,为研究其叁维结构的测定及筛选出具有研发避孕疫苗潜能物提供重要实验基础。(本文来源于《第叁军医大学》期刊2015-05-01）
赵鲁刚,于艳,孙伟,梁明,杨怀亮[2]（2013）在《附睾蛋白酶抑制剂基因及蛋白的研究进展》一文中研究指出附睾蛋白酶抑制剂(epididymis protease inhibitor;Eppin/SPINLW1)基因在附睾和睾丸组织中特异性表达,存在于人类精液和精子表面,是一种编码含丰富胱氨酸残基的蛋白质的单拷贝基因。国内外研究表明Eppin在灵长类动物的生育中可能发挥重要的作用,与生殖和免疫性避孕关系密切。现对Eppin基因及蛋白的发现、特征及其在男性生殖等方面的作用做一综述。(本文来源于《中国性科学》期刊2013年11期）
张洁,丁新良[3]（2011）在《附睾蛋白酶抑制剂Eppin蛋白的原核表达及纯化》一文中研究指出目的构建人附睾蛋白酶抑制剂Eppin蛋白的重组质粒pET28a(+)-Eppin,并研究该质粒在原核细胞中的表达及纯化。方法本研究以人睾丸组织cDNA为模板获得人Eppin基因片段,将其插入pET28a(+)载体His_6-Tag上游,构建重组质粒pET28a(+)-Eppin,转化大肠杆菌BL21(DE3),经IPTG诱导表达重组人Eppin蛋白后,运用SDS-PAGE进行分析和鉴定。大量表达的重组Eppin蛋白经镍柱亲和层析进行纯化,并采用SDS-PAGE进行纯度分析。结果 PCR扩增出约381 bp的Eppin基因片段,双酶切及PCR鉴定证实Eppin基因成功插入pET28a(+)中,SDS-PAGE分析显示表达产物为分子量单位约为17 ku的重组蛋白,与预期结果一致;Eppin的表达量在IPTG诱导表达4 h时最高;约占菌体总蛋白的30%;重组蛋白主要在沉淀中出现,表明原核表达时重组Eppin蛋白以包涵体形式存在;经镍柱纯化后可得纯度高达95%的重组Eppin蛋白。结论成功构建了人附睾蛋白酶抑制剂Eppin蛋白重组质粒pET28a(+)-Eppin,该质粒在原核系统中获得了高效融合表达,进一步纯化后可得高纯度的重组蛋白,为开展免疫避孕与生殖免疫的研究奠定基础。(本文来源于《国外医学(医学地理分册)》期刊2011年02期）
谢淑武,李志玲,王蕾,刘向云,马丽[4]（2007）在《水通道蛋白抑制剂对大鼠附睾精子成熟和生育影响的实验研究》一文中研究指出目的:通过水通道蛋白抑制剂乙酰唑胺对大鼠附睾精子和生育的影响,探索调节雄性生育的睾丸后作用方式和靶点.方法:使用乙酰唑胺30、60和120mg/kg/d 大鼠灌胃给药.同时以氯丙二醇10mg/kg/d 作为阳性对照,以等体积溶媒作为阴性对照,连续10天。给药结束后将各组雄鼠与处于动情前期的雌鼠按1:2合笼,计算交配指数(精子阳性雌鼠/总配对数);精子阳性的雌鼠于交(本文来源于《第一届中华医学会生殖医学分会、中国动物学会生殖生物学分会联合年会论文汇编》期刊2007-04-01）
王增军,吴宏飞,钱立新,乔迪,邵剑锋[5]（2006）在《人类精子表面附睾蛋白激酶抑制剂Eppin和精囊凝固蛋白Semenogelin的相互作用研究》一文中研究指出目的:探讨人类精子表面一种附睾蛋白激酶抑制剂Epp in和精囊凝固蛋白Sem enogelin(Sg)的相互关系。方法:①用抗Epp in的抗体与精子和精浆中Epp in蛋白进行免疫沉淀反应;②免疫荧光法在精浆和精子表面共同显色定位;③重组Epp in(rEpp in)和重组精囊凝固蛋白Sg(rSg)共同孵育,用抗Epp in抗体或抗Sg抗体进行免疫共沉淀;④W estern印迹检测rEpp in和rSg相互作用;⑤放射性125I-rSg与rEpp in结合达饱和后,用未标记的rSg竞争性结合分析;⑥放射性125I-rSg直接与印迹膜上的rEpp in行放射性自显影。结果:人精子表面蛋白Epp in与精囊蛋白Sg发生特异性结合,Sg分子结构中的半胱氨酸残基Cys-239是唯一的结合位点,Cys-239的还原及羧甲基化将阻碍125I-rEpp in与rSg的结合。结论:Epp in与Sg的结合是靠分子结构中二硫化键的参与。在人类射精后的精子表面,精囊蛋白Sg结合在精子表面的Epp in上。(本文来源于《中华男科学杂志》期刊2006年05期）
王增军[6]（2006）在《附睾蛋白激酶抑制剂Eppin和精囊蛋白Semenogelin 1相互关系研究》一文中研究指出EPPIN(SPINLW1；Gene ID：57119)基因是一种在附睾和睾丸组织中特异性双表达并编码含胱氨酸残基丰富的蛋白质的单拷贝基因。其基因结构中含有KUNITZE和WAP两种特点的基因类型，有含四个二硫腱为核心的类似于蛋白激酶抑制剂样结构为特点的基因序列。本研究用六种不同的实验方法表明排精后的精浆中和在精子表面，精子表面的EPPIN结合来自于精囊的凝胶蛋白SEMENOGELIN1：1)用抗EPPIN的多克隆抗体从提取出的人类精子表面蛋白和精浆蛋白中行免疫沉淀法可沉淀出精囊蛋白Semenogelinl；2)用荧光标记的抗Eppin和抗Semenogelinl的抗体行免疫定位法显示Eppin和Semenogelin两者在精子表面共同定位；3)体外重组EPPIN及重组Semenogelinl蛋白质共同孵育，用抗Eppin或抗Semenogelinl的抗体行免疫共沉淀法，可沉降相应的结合蛋白；4)用重组Eppin和重组Semenogelinl进行Far-western印迹法证实两者相互作用；5)放射性碘125标记的重组Semenogelinl能饱和性结合重组Eppin，无放射性标记的Semenogelinl可与之竞争性地结合，反之亦然；6)放射性碘125标记的重组Semenogelin能直接与印迹膜上的重组Eppin结合的放射自显影法。所有这些方法从体内和体外都表明Eppin结合Semenogelinl。为了进一步研究Eppin和Semenogelinl结合的特异性，制作重组Eppin和重组Semenogelinl的不同氨基酸片段，发现C端Eppin75-133氨基酸片段与Sg164-283氨基酸片段结合，这段Semenogelinl片段中含有人类Semenogelinl中唯一的胱氨酸残基(Cys239)。还原化或羧甲基化后的胱氨酸残基失去与放射性碘125标记的重组Eppin的结合能力，表明(本文来源于《南京医科大学》期刊2006-04-20）
附睾蛋白抑制剂论文开题报告
（1）论文研究背景及目的
此处内容要求：
首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景，再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题，并提出你的论文准备的观点或解决方法。
写法范例：
附睾蛋白酶抑制剂(epididymis protease inhibitor;Eppin/SPINLW1)基因在附睾和睾丸组织中特异性表达,存在于人类精液和精子表面,是一种编码含丰富胱氨酸残基的蛋白质的单拷贝基因。国内外研究表明Eppin在灵长类动物的生育中可能发挥重要的作用,与生殖和免疫性避孕关系密切。现对Eppin基因及蛋白的发现、特征及其在男性生殖等方面的作用做一综述。
（2）本文研究方法
调查法：该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。
观察法：用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。
实验法：通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。
文献研究法：通过调查文献来获得资料，从而全面的、正确的了解掌握研究方法。
实证研究法：依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。
定性分析法：对研究对象进行“质”的方面的研究，这个方法需要计算的数据较少。
定量分析法：通过具体的数字，使人们对研究对象的认识进一步精确化。
跨学科研究法：运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。
功能分析法：这是社会科学用来分析社会现象的一种方法，从某一功能出发研究多个方面的影响。
模拟法：通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。
附睾蛋白抑制剂论文参考文献
[1].陈惠玲.人源附睾蛋白酶抑制剂Eppin蛋白的可溶性表达[D].第叁军医大学.2015
[2].赵鲁刚,于艳,孙伟,梁明,杨怀亮.附睾蛋白酶抑制剂基因及蛋白的研究进展[J].中国性科学.2013
[3].张洁,丁新良.附睾蛋白酶抑制剂Eppin蛋白的原核表达及纯化[J].国外医学(医学地理分册).2011
[4].谢淑武,李志玲,王蕾,刘向云,马丽.水通道蛋白抑制剂对大鼠附睾精子成熟和生育影响的实验研究[C].第一届中华医学会生殖医学分会、中国动物学会生殖生物学分会联合年会论文汇编.2007
[5].王增军,吴宏飞,钱立新,乔迪,邵剑锋.人类精子表面附睾蛋白激酶抑制剂Eppin和精囊凝固蛋白Semenogelin的相互作用研究[J].中华男科学杂志.2006
[6].王增军.附睾蛋白激酶抑制剂Eppin和精囊蛋白Semenogelin1相互关系研究[D].南京医科大学.2006