导读:本文包含了椎间盘细胞论文开题报告文献综述及选题提纲参考文献，主要关键词:椎间盘,细胞凋亡,白细胞介素1β
椎间盘细胞论文文献综述
韩敦富,尹荷珊,管晨彤,王磐,张培国[1]（2019）在《IL-1β诱导椎间盘细胞凋亡通路再认识》一文中研究指出目的探讨IL-1β对体外培养的大鼠椎间盘髓核细胞凋亡作用的途径。方法原代大鼠腰椎间盘髓核细胞和含不同浓度IL-1β(0,10,20,50 ng/mL)的1%FBS培养基共培养24 h,显微镜下观察细胞形态、Annexin V-FITC/PI双染流式细胞仪检测细胞凋亡情况,检测Fas,Caspase-8,9,3及Bid mRNA的表达水平,检测Caspase-8,9,3的酶活性、线粒体膜电势。结果髓核细胞的凋亡率、Caspase-9和Caspase-3 mRNA的表达、Caspase-9和Caspase-3的酶活性、线粒体膜电势均随IL-1β浓度的升高而升高;50 ng/mL的IL-1β可使Caspase-8及Bid mRNA的表达、Caspase-8的酶活性明显增强。结论 IL-1β通过双途径诱导椎间盘细胞凋亡,以线粒体途径为主,较高浓度时可以激活膜途径诱发凋亡。(本文来源于《福建医科大学学报》期刊2019年04期）
周文明,林一峰,张震,白荣飞[2]（2019）在《补肾壮督方对大鼠退变椎间盘细胞线粒体凋亡通路的影响》一文中研究指出目的:观察补肾壮督方对大鼠退变椎间盘细胞凋亡的影响,探讨其改善椎间盘退变的机制。方法:100只SD雄性大鼠,采用纤维环全层针刺造模,随机分为空白组,模型组,补肾壮督方低、中、高剂量组(0. 38,0. 77,1. 53 g·kg-1),连续中药灌胃4周后,苏木素-伊红(HE)染色观察大鼠椎间盘组织病理学变化;原位末端转移酶标记法(TUNEL)检测退变椎间盘中髓核细胞凋亡率,蛋白免疫印迹法(Western blot)检测椎间盘组织中活化半胱氨酸蛋白酶-3(active Caspase-3),B淋巴细胞瘤-2(Bcl-2),细胞色素C(cyt C)及Bcl-2相关X蛋白(Bax)蛋白水平。结果:与空白组比较,模型组大鼠椎间盘组织病理学评分显着增加,髓核细胞凋亡率明显增加(P <0. 05),active Caspase-3,cyt C和Bax表达量均明显增加(P <0. 05),Bcl-2表达量明显下降(P <0. 05)。与模型组比较,补肾壮督方低、中、高剂量组组织病理学评分明显降低(P <0. 05),髓核细胞凋亡率明显减少(P <0. 05),active Caspase-3,cyt C及Bax表达量均明显下降(P <0. 05),Bcl-2表达量明显增加(P <0. 05)。结论:补肾壮督方可能通过减少active Caspase-3,cyt C和Bax蛋白表达,增加Bcl-2蛋白表达,抑制线粒体凋亡通路,并存在一定剂量依赖性,从而改善椎间盘退变。(本文来源于《中国实验方剂学杂志》期刊2019年19期）
王宇翔,徐海栋[3]（2019）在《艾拉莫德对功能退变椎间盘细胞炎症因子表达的影响》一文中研究指出目的炎症因子的过量表达在椎间盘功能退变过程中起重要作用。文中旨在探究艾拉莫德对功能退变椎间盘细胞炎症因子表达的影响。方法选用8～12周龄SD大鼠共60只,随机分为加压组(使用外固定加压装置加压大鼠尾部)和对照组(未加压),每组30只。分离培养大鼠退变椎间盘的髓核细胞。在髓核细胞中加入0、0.3、3、10、20、30μg/mL的艾拉莫德培养后,检测髓核细胞分泌的炎症因子和基质降解酶(MMP)的含量,并通过RT-PCR测定不同浓度的艾拉莫德对髓核细胞的炎症相关基因的表达的影响。结果 3、10、20、30μg/mL的艾拉莫德处理后,髓核细胞IL-6表达量分别为(204.18±6.96)、(122.73±9.38)、(97.87±7.81)、(86.31±8.57)pg/mL,TNF-α表达量分别为(202.46±7.84)、(132.52±11.4)、(101.26±10.38)、(96.89±9.60)pg/mL,均呈浓度依赖性降低(P<0.05);MMP-2、MMP-3和MMP-9分泌量亦呈浓度依赖性降低(P<0.05)。结论艾拉莫德在髓核细胞内具有有效的抗炎作用,阻断了炎症反应的进程,为早期治疗椎间盘功能退变性疾病提供了新的思路。(本文来源于《医学研究生学报》期刊2019年04期）
韩敦富,尹荷珊,王延,王鹏云,汪震[4]（2019）在《siRNA可降低IL-1β刺激椎间盘细胞所致凋亡敏感性》一文中研究指出目的明确siRNA是否可降低大鼠椎间盘细胞对IL-1β预刺激导致的凋亡敏感性,并初步探讨其机制。方法用阴性对照siRNA转染原代大鼠腰椎间盘细胞后,用含10ng/ml IL-1β的1%胎牛血清(FBS)培养基和被转染椎间盘细胞共培养,分别在4、8、16、32 h检测其对Fas受体(Fas)表达的影响。利用Fas-siRNA和阴性对照siRNA分别对原代大鼠椎间盘细胞进行转染48 h后,实验分组和处理:共分5组,N、N-20 ng、N-IL为阴性对照siRNA转染细胞,Si-20 ng、Si-IL为Fas-siRNA2转染的细胞。N为对照组,只加1%FBS培养基; N-20 ng和Si-20 ng在1%FBS培养基培养8 h后,更换为含20 ng/ml Fas配体(Fas L)的1%FBS培养基; NIL和Si-IL:与10 ng/ml IL-1β在1%FBS培养基中培养8 h后,更换为含20 ng/ml Fas L的1%FBS培养基;以上各组加入20 ng/ml Fas L后均继续培养24 h,观察细胞的凋亡情况,Annexin V-FITC/PI双染流式细胞仪检测各组细胞凋亡率,RT-PCR、Western blot分别检测Fas mRNA和蛋白表达水平。结果 (1)与10 ng/ml IL-1β共培养的阴性对照siRNA转染细胞的Fas mRNA在4 h时开始升高,但32 h时才出现统计学差异;而蛋白检测各时间点均未出现表达差异。(2)经IL-1β预处理的Si-IL、N-IL细胞组较相应的未经IL-1β预处理的Si-20 ng、N-20 ng细胞组,细胞凋亡率均升高; Fas-siRNA转染的Si-IL细胞组较阴性siRNA转染的N-IL细胞组的细胞凋亡率明显下降。(3)细胞凋亡率与Fas的表达具有相关性。结论 siRNA可降低大鼠椎间盘细胞对IL-1β预刺激导致的凋亡敏感性,但其确切机制尚需进一步研究。(本文来源于《安徽医科大学学报》期刊2019年01期）
王湘江[5]（2018）在《无机多聚磷酸盐对人椎间盘细胞基质代谢的影响及作用机制研究》一文中研究指出椎间盘退变(intervertebral disc degeneration,IDD)被认为是骨科最常见的疾病之一,也是导致颈部或腰背部疼痛的主要原因,已成为主要的公共卫生问题,在世界范围内对社会经济造成重大影响。IDD的病因是复杂和多因素的,包括基因遗传、年龄、营养代谢、生物力学等。尽管引发该疾病的机制乃存在争议,但普遍认为IDD是由于椎间盘细胞合成代谢和分解代谢之间不平衡导致椎间盘细胞外基质减少所致。目前临床治疗方法包括保守治疗和手术治疗,仅能减轻症状,无法阻止IDD的发生和发展,目前缺乏理想的治疗方法能够逆转IDD病变。近来生物治疗IDD的技术逐渐得到发展,包括细胞治疗、组织工程、生长因子和/或生物活性化合物。无机多聚磷酸盐(inorganic polyphosphate,PolyP)作为一种生物活性化合物广泛存在自然界和所以生物体中,它是由几个至数百个无机磷酸盐单体通过高能磷酸键聚合而成的线性多聚体。研究认为PolyP的共价键中储存高能量,其释放出来的能量可参与氨基酸、核苷酸、糖和脂类这些主要分子的构建。在体外实验中已报道PolyP能够增加软骨细胞及软骨组织基质的合成。此外,研究发现在牛的椎间盘组织中检测到PolyP,0.5-1.0mM浓度的PolyP可以通过上调髓核细胞基质基因的表达从而提高髓核组织合成代谢。目前PolyP对人的椎间盘细胞基质和能量代谢的影响尚未见研究报道。因此,我们假设PolyP作为一种能量来源,能增加人椎间盘细胞外基质的合成从而有利于干预和逆转IDD。第1部分无机多聚磷酸盐对椎间盘细胞增殖和基质代谢的影响目的:研究PolyP对人椎间盘纤维环细胞增殖和基质代谢的影响。方法:体外分离培养人椎间盘纤维环细胞,用叁种不同浓度0,0.5mM和1.OmM PolyP-22(22磷酸盐单位长度的PolyP)处理人的椎间盘纤维环细胞,在倒置的显微镜下观察PolyP处理后的纤维环细胞在不同时间点的细胞形态学变化,并采用CyQUANT细胞增殖试剂法检测细胞的增殖活性变化。利用不同浓度 PolyP 处理纤维环细胞 48 小时后,用 1,9-DimethylmethyleneBlue(DMMB)方法测定细胞糖胺聚糖含量、采用同位素35S-硫酸盐标记法检测细胞蛋白聚糖的合成量,采用同位素3H-脯氨酸标记法检测细胞胶原蛋白和总蛋白的合成量。结果:PolyP能够提高人椎间盘纤维环细胞的增殖活性;采用DMMB方法测定和同位素标记法检测的结果也表明PolyP能够增加细胞糖胺聚糖,蛋白聚糖,胶原蛋白和总蛋白的合成量。结论:PolyP能够促进纤维环细胞增殖,并能提高细胞基质的合成量。第2部分无机多聚磷酸盐对椎间盘细胞基质代谢的作用机制目的:探讨PolyP对椎间盘内细胞基质合成和分解代谢动态平衡的影响;以及探讨PolyP对椎间盘细胞ATP生成量的影响。方法:用叁种不同浓度0,0.5mM和1.OmM的PolyP-22处理人的椎间盘纤维环细胞48小时后;用qRT-PCR检测合成代谢的活性介质聚集蛋白聚糖(aggrecan)和I型胶原(collagenI)的mRNA的表达,以及检测分解代谢的活性介质基质金属蛋白酶-1(matrix metalloprotease-1,MMP-1)、MMP-3、血小板结合蛋白基序的解聚蛋白样金属蛋白酶-4(a disintegrin and metalloproteinase with thrombospondin motifs,ADAMTS-4)和 ADAMTS-5 的 mRNA 的表达;采用蛋白免疫印迹(Western Blot)和免疫荧光细胞化学检测法在蛋白水平检测合成代谢的标志物aggrecan和collagen I的表达,并采用Western Blot检测分解代谢标志物aggrecan-fragment的蛋白表达;最后,利用ATPlite荧光免疫法测定叁种不同浓度PolyP处理椎间盘细胞后在不同时间点的ATP生成量的变化。结果:qRT-PCR结果分析说明PolyP处理的人椎间盘纤维环细胞中,细胞代谢合成的aggrecan和collagen I的mRNA表达得到上调,但是在代表分解代谢的基因表达中,PolyP上调MMP-3和ADAMTS-4的mRNA表达而降低MMP-1和ADAMTS-5的mRNA表达。免疫荧光和Western Blot的结果同样证明PolyP能够增加椎间盘治疗纤维环细胞中aggrecan和collagen I的蛋白表达。但是Western Blot的结果表明分解代谢aggrecan-fragment的蛋白表达升高。同时PolyP能够增加人椎间盘纤维环细胞的ATP的生成量。结论:在椎间盘纤维环细胞中,增加PolyP含量可以上调细胞基质合成基因的表达和ATP生成量,促进纤维环细胞的合成代谢,但要确定PolyP如何在椎间盘细胞中调节分解基质代谢和整体代谢平衡还需要更多的验证性研究。(本文来源于《南方医科大学》期刊2018-05-10）
佟德民,孙凤杰,孙利群,冯福盈,梁健宁[6]（2017）在《自体垂直悬吊牵引与靶向调控caspase3对兔退变椎间盘细胞的影响》一文中研究指出目的探讨自体垂直悬吊牵引与靶向调控caspase 3对兔退变椎间盘细胞凋亡的影响。方法体外实验:分离培养兔椎间盘髓核细胞,进行caspase3 siRNA和阴性对照siRNA转染,分别置于血清饥饿培养基中培养6h和48h,设正常细胞和血清饥饿细胞对照,应用RT-q PCR法和流式细胞术Annexin V法分析caspase3 mRNA表达和细胞凋亡情况。体内实验:将35只新西兰大白兔随机分为模型组(n=10)、阴性siRNA对照组(n=10)、caspase3 siRNA组(n=10)和caspase3siRNA牵引组(n=5),采用16G针刺损伤腰椎椎体右前侧纤维环制备椎间盘退变模型;后3组按照造模入路用26G针头从造模对侧分别注入阴性对照siRNA或caspase3 siRNA转染复合体至兔髓核中心,模型组不予处理。48h后前3组每组随机选取5只实验兔,处死取髓核组织,提取总RNA,采用RT-q PCR和Western blotting分析退变椎间盘内caspase3 mRNA和蛋白表达情况;同时caspase3 siRNA牵引组再行自体垂直悬吊牵引,30min/d,连续2周后处死获取髓核组织,采用ELISA检测髓核内TNF-α和IL-1β表达情况,HE染色观察组织形态学变化。结果 Caspase 3 siRNA转染后兔髓核细胞caspase3 mRNA表达水平明显降低,在饥饿培养条件下细胞凋亡明显减少(P<0.05)。椎间盘退变模型兔在纤维环穿刺注入caspase3 siRNA后,椎间盘髓核内caspase3 mRNA和蛋白表达明显下调;2周后caspase3 siRNA牵引组TNF-α和IL-1β表达与模型组和阴性siRNA对照组比较显着减少(P<0.05),但与caspase3 siRNA组比较差异无统计学意义(P>0.05)。HE染色显示caspase3 siRNA牵引组椎间盘内活细胞和细胞外基质明显增多,胶原纤维排列整齐。结论自体垂直悬吊牵引和靶向调控caspase3能有效阻止细胞凋亡的发生,延缓早期椎间盘退变。(本文来源于《解放军医学杂志》期刊2017年12期）
卢巍,王文彪,胡琰如,李飞祥[7]（2017）在《推拿手法下椎间盘细胞中肌动蛋白变化的观察》一文中研究指出目的:通过观察推拿手法下椎间盘细胞中肌动蛋白的变化,分析其变化及意义,从分子生物学的角度阐述推拿手法治疗椎间盘突出症的作用机理。方法:选取符合条件猪12只,随机分为治疗组与对照组,每组6只。其中治疗组以手法推拿猪的腰部,每周实施手法2次;对照组不作处理。观察各组椎间盘细胞中肌动蛋白的变化,并总结椎间盘细胞中肌动蛋白在推拿手法作用下变化的意义。结果:治疗组肌动蛋白表达明显高于对照组(P<0.05)。结论:推拿手法治疗椎间盘突出症能够增加椎间盘细胞中肌动蛋白的表达,对腰椎间盘突出症的治疗具有重要意义。(本文来源于《实用中西医结合临床》期刊2017年11期）
黄黎珊,黄萍萍,童秀冰,李忠丽,方燕平[8]（2017）在《捏脊对颈椎病大鼠椎间盘细胞外基质及代谢酶的影响》一文中研究指出目的:观察捏脊对颈椎病大鼠椎间盘基质金属蛋白酶(MMP)-1、MMP-3、MMP-13、细胞内Ⅱ型胶原(COL-Ⅱ)、基质金属蛋白酶抑制因子1(TIMP-1)以及细胞外基质(ECM)的影响,探讨捏脊治疗颈椎病的可能机制。方法:SD大鼠随机分为假手术组、模型组、捏脊组、莫比可组,每组8只。采用动静力失衡法建立颈椎病大鼠模型。捏脊组予捏脊干预治疗,每天14次;莫比可组予莫比可0.78mg/kg灌胃干预,每日1次,14d为1个疗程,共2个疗程。免疫组化法检测大鼠椎间盘组织中MMP-1、MMP-3、MMP-13、COL-Ⅱ、TIMP-1的表达量,免疫印迹法检测ECM的蛋白表达水平。结果:与假手术组比较,模型组大鼠椎间盘组织中MMP-1、MMP-3、MMP-13表达量均升高(P<0.05),COL-Ⅱ、TIMP-1表达均降低(P<0.05);与模型组比较,捏脊组与莫比可组大鼠椎间盘组织中MMP-1、MMP-3、MMP-13表达均降低(P<0.05),COL-Ⅱ、TIMP-1表达均升高(P<0.05)。与假手术组比较,模型组大鼠椎间盘组织中ECM蛋白表达降低(P<0.05);与模型组比较,捏脊组与莫比可组ECM蛋白表达升高(P<0.05)。结论:捏脊治疗颈椎病大鼠椎间盘退变可能是通过调节椎间盘ECM系统及相关代谢酶表达量实现的。(本文来源于《针刺研究》期刊2017年04期）
丁海霞,樊成虎,王玉泉,兰晓飞[9]（2017）在《黄芪总苷对脊髓型颈椎病大鼠模型椎间盘细胞因子IL-6、TNF-α的影响》一文中研究指出目的:观察黄芪总苷对脊髓型颈椎病(CSM)模型大鼠椎间盘中细胞因子白细胞介素-6(IL-6)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)含量及脊髓形态变化的影响,探讨黄芪总苷在治疗脊髓型颈椎病中的可能机制。方法:110只大鼠除去空白对照组18只外,其余大鼠在颈椎间盘后缘植入BMP复合剂制作CSM大鼠模型后随机分为5组,即模型组,黄芪总苷高、中、低剂量组和甲钴胺药物组,根据实验设计分别做相应的灌胃处理,严格无菌条件取材后HE染色观察脊髓形态学变化,检测椎间盘中IL-6、TNF-α的含量。结果:模型组及黄芪总苷高、中、低剂量组和甲钴胺药物组内IL-6、TNF-α的含量高于空白对照组(P<0.05);黄芪总苷高、中、低剂量组和甲钴胺药物组内IL-6、TNF-α的含量均低于模型组(P<0.05);黄芪总苷中剂量组内IL-6、TNF-α的含量低于黄芪总苷高、低剂量组,用药1周后与甲钴胺药物组比较无差异,用药4周后较甲钴胺药物组低(P<0.05)。组织HE切片显示空白对照组、模型组及黄芪总苷高、中、低剂量组比较有差异,黄芪总苷中剂量组和甲钴胺药物组比较有差异。结论:黄芪总苷显着降低了颈椎间盘中细胞因子IL-6、TNF-α的含量,且存在量效差异;黄芪总苷通过降低颈椎间盘中细胞因子的含量,减缓或改善椎间盘的退变,对CSM起预防和治疗作用。(本文来源于《西部中医药》期刊2017年07期）
吕锋[10]（2017）在《MicroRNA-146a通过抑制TRAF6/NF-κB通路减轻椎间盘细胞炎症反应》一文中研究指出研究背景:椎间盘退变性疾病(Disc Degeneration Disease, DDD)已被公认为腰痛的主要原因。越来越多的研究证明,椎间盘退变与多种促炎细胞因子及其代谢产物有关。近年来,大量研究证明,MicroRNA (miRNA)在包括退行性椎间盘疾病在内的大多数疾病的发生发展中具有重要作用。目前研究表明,椎间盘退变和炎症因子之间存在密切联系,但是在炎性通路的角度上分析两者相关性的研究较少,椎间盘退变和炎症因子之间具体的作用过程也不明确。虽然我们了解两者之间存在相关性,但仍未找到靶基因来减轻椎间盘细胞炎症反应,所以大部分此类研究应用性不强,缺乏实际意义。MicroRNA-146a作为一种短小的非编码RNA,是一种反调控因子,通过对基因表达转录后调节参与许多生物学过程,尤其是在炎症反应中扮演了重要的角色。基于以上研究成果,本研究拟通过体内和体外实验,从分子水平来研究探讨MicroRNA-146a在椎间盘退变疾病中的调控机制,寻找MicroRNA-146a与TRAF6/NF-K B信号通路交互作用功能分子,为脊椎退变性病变寻找新的治疗靶标。本研究提出MicroRNA-146a过表达可以通过抑制TRAF6/NF-K B通路减轻椎间盘退变炎症反应的假设,期待通过相应的后期实验证明MicroRNA-146a可作为治疗椎间盘退变的一个新靶点。研究目的:1.研究MicroRNA-146a在椎间盘退变患者体内的表达水平,进一步探讨椎间盘退变与MicroRNA-146a表达水平的关系。2.通过人髓核细胞体外实验,研究分析MicroRNA-146a和TRAF6、NF-κ B的相关性,进一步探讨MicroRNA-146a、炎性通路、椎间盘退变叁者之间的关系。材料与方法:1.研究对象选自2013年5月至2014年3月在山东省立医院就诊患者及健康体检人员,分为叁组;组一为椎间盘退变患者组,共21例,其中男12例,女9例;年龄18-30岁,平均25. 6岁;组二为其他脊柱疾病患者组,共21例,其中男11例,女10例;年龄18-31岁,平均26. 1岁;组叁为对照组,健康体检人群21例。其中男13例,女8例;年龄18-32岁,平均26. 7岁。叁组人群在年龄,男女比例等方面均无明显差异,具有可比性(P>0. 05)。实时定量PCR(Quantitive Real-Time PCR, qRT-PCR)比较叁组对象外周血单核细胞中MicroRNA-146a水平,ELISA法比较叁组对象血清NF-κB、TNF-α和IL-1的水平。将所有得到的结果数据资料输入SPSS 18.0软件来进行统计分析,用均数±标准差( ±s)形式来表示实验数据资料,用成组t检验方法来对组间均数进行比较,如果P<0. 05表示具有统计学差异。2.选择人髓核细胞株(Nucleus Pulposus Cells,NP-CELLS), HNPC4800,放置在DMEM培养基中,并在温育箱中进行培养。载体系统的组成包含了载体成分和包装成分:MicroRNA-146amimic (模拟物)和不含有MicroRNA-146a的空白质粒;包装质粒pHelper 1. 0和pHelper2. 0。这些包装质粒提供了病毒包装所需要的结构蛋白和包膜蛋白。我们将NP细胞根据本实验要求因素的不同,进行相应不同的干预和处理,总共分为以下4组:MicroRNA-146a组给予包含NP MicroRNA-146a siRNA 序列的载体干预;NC (Negative Control, NC)组给予包含不对任何基因产生干扰作用的无意义阴性对照;LPS (Lipopolysaccharide,LPS,脂多糖)组是对siRNA序列的载体干预的细胞进行LPS刺激;BL组是空白细胞组,只在相同的培养条件下观察而不做任何干预处理。将所有实验细胞在处理时均设置3个复孔。转染人髓核细胞(NP cells),测试转染率,经LPS (10μ M)刺激以诱导炎症。qRT-PCR检测MicroRNA-146a在NP cells中的表达水平,用qRT-PCR 和 Western blot 检测 NP cells 中的 TNF-α、TRAF6 和 NF-κ B 的基因和蛋白表达,以及MicroRNA-146a和TNF-α、TRAF6和NF-κ B的相关性。实验重复3次,电脑扫描记录实验结果的X光胶片,BandScan 5.0图像分析软件读取胶片上各蛋白条带的灰度值,内参数为β-actin,我们在本实验中将目的蛋白的相对表达量用目的条带和空白对照条带比值的形式来表示,所有实验数据资料我们均采用SPSS18. 0统计学软件来进行分析处理,本实验中的数据资料均以均数±标准差(X± s)的形式来表示。在本实验中,两组间的比较采用的是两个独立样本t检验方法,多组别间的比较采用的是单因素方差分析(One Way ANOVA)方法,如果P<0. 05表示具有统计学差异。结果:1.叁组研究对象的MicroRNA-146a表达水平比较,椎间盘退变患者组的MicroRNA-146a表达为1.092±0.453mol/L,明显低于其他两组(其他脊柱疾病患者组2. 871±1. 265 mol/L,对照组3. 122±2. 132 mol/L),差异有统计学意义(P<0.05)。而对照组和其他脊柱疾病患者组相比,差异没有统计学意义(P>0. 05)。叁组研究对象的NF-κ B表达水平比较,椎间盘退变患者组表达为137.52±11.45mg/L,明显高于其他两组(其他脊柱疾病患者组25. 12±10. 36 mol/L,对照组28. 11 ±3. 87 mol/L),差异有统计学意义(P<0. 05),而对照组和其他脊柱疾病患者组相比,差异没有统计学意义(P>0. 05)。叁组研究对象的TNF-α表达水平比较,椎间盘退变患者组表达为257. 12±10.43mg/L,明显高于其他两组(其他脊柱疾病患者组127.21±21.37 mol/L,对照组118. 12±7.56 mol/L),差异有统计学意义(P<0. 05),而对照组和其他脊柱疾病患者组相比,差异没有统计学意义(P>0. 05)。而叁组的IL-1表达水平相比(椎间盘退变患者组124.27±11.25 mol/L,其他脊柱疾病患者组110. 34±7. 57 mol/L,对照组120. 12±4. 58 mol/L),差异均没有统计学意义(P>0. 05)。以上实验结果显示,椎间盘退变患者组MicroRNA-146a表达量明显低于其他脊柱疾病患者组及对照组,且NF-κ B、TNF-α表达量明显高于其他两组。2.将已经线性化的MicroRNA-146a mimic载体与合成的DNA oligo经过连接及转化,然后将含有NP-siRNA序列的重组质粒抽取出来之后再经过测序,我们实验结果显示重组质粒符合我们对本研究的设计要求。本实验将携带增强型绿色荧光蛋白(Enhanced Green Fluorescent Protein,EGFP)报告基因的载体MicroRNA-146a mimic进行包装而成为载体颗粒,当感染细胞后而在其中表达EGFP,我们在倒置荧光显微镜下发现其发绿色荧光。然后我们进行相应的的预实验条件筛查后表现为,在6 板中每孔细胞数为1 × 105个,我们观察到细胞融合度在转染时可以达到30%～50%,并且当感染复数(multiplicity of infection,M0I) =50,polybrene 5ug/mL的时候我们可以得到较高的感染效率。将各组细胞的总RNA抽提后,再用2%琼脂糖凝胶、100V恒压电泳进行实验,研究结果表明,本实验中总RNA的完整性均较好,其中RNA显示的3条带亮度分别是28S>18S>5S,如图3。然后我们通过核酸蛋白检测仪进行相应检测,结果表明本实验总的RNA没有发生降解,并且RNA的纯度也满足本研究要求,其实验样本的光密度值 OD260/OD280 在 1. 8～2.0 之间。qRT-PCR 检测 MicroRNA-146a,TRAF6和NF-κ B等基因表达水平结果显示,MicroRNA-146a的低表达和TRAF6、NF-κ B的高表达有明显的相关性。使用Western blot方法来检测分析本研究中各组细胞的蛋白表达水平,本实验将β -actin作为内参,将空白细胞组在相同观察时间点的表达量做为100%,并且利用以下公式来计算各组TRAF6及NF-κ B的相对表达量:TRAF6及NF-κ B的表达率(%)=100%X (干预组表达量/空白组表达量),在研究分析获得的各组细胞TRAF6和NF-K B蛋白表达情况后,我们发现两者之间在LPS组都显示较高蛋白浓度,说明了这两者与MicroRNA-146a的表达呈现相关性,抑制MicroRNA-146a的表达可以上调TRAF6和NF-κ B的表达水平,说明MicroRNA-146a与TRAF6和NF-K B之间呈负相关。MicroRNA-146a过表达可以显着降低LPS刺激的NP细胞促炎性细胞因子的水平,并下调TRAF6和NF-κB的mRNA和蛋白表达水平。结论:1. MicroRNA-146a表达量可能与椎间盘细胞炎症反应相关。2. MicroRNA-146a过表达可能会减轻椎间盘细胞炎症反应。3. TRAF6/NF-K B途径的关键因子、蛋白水平与MicroRNA-146a表达水平呈现相关性。4. MicroRNA-146a通过调控通路上的关键因子、蛋白的表达,可能参与椎间盘细胞炎症反应的调节。5.MicroRNA-146a过表达可以通过抑制TRAF/NF-κ B通路减轻椎间盘退变炎症反应。MicroRNA-146a可作为治疗椎间盘退变一个新的靶点。(本文来源于《山东大学》期刊2017-06-16）
椎间盘细胞论文开题报告
（1）论文研究背景及目的
此处内容要求：
首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景，再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题，并提出你的论文准备的观点或解决方法。
写法范例：
目的:观察补肾壮督方对大鼠退变椎间盘细胞凋亡的影响,探讨其改善椎间盘退变的机制。方法:100只SD雄性大鼠,采用纤维环全层针刺造模,随机分为空白组,模型组,补肾壮督方低、中、高剂量组(0. 38,0. 77,1. 53 g·kg-1),连续中药灌胃4周后,苏木素-伊红(HE)染色观察大鼠椎间盘组织病理学变化;原位末端转移酶标记法(TUNEL)检测退变椎间盘中髓核细胞凋亡率,蛋白免疫印迹法(Western blot)检测椎间盘组织中活化半胱氨酸蛋白酶-3(active Caspase-3),B淋巴细胞瘤-2(Bcl-2),细胞色素C(cyt C)及Bcl-2相关X蛋白(Bax)蛋白水平。结果:与空白组比较,模型组大鼠椎间盘组织病理学评分显着增加,髓核细胞凋亡率明显增加(P <0. 05),active Caspase-3,cyt C和Bax表达量均明显增加(P <0. 05),Bcl-2表达量明显下降(P <0. 05)。与模型组比较,补肾壮督方低、中、高剂量组组织病理学评分明显降低(P <0. 05),髓核细胞凋亡率明显减少(P <0. 05),active Caspase-3,cyt C及Bax表达量均明显下降(P <0. 05),Bcl-2表达量明显增加(P <0. 05)。结论:补肾壮督方可能通过减少active Caspase-3,cyt C和Bax蛋白表达,增加Bcl-2蛋白表达,抑制线粒体凋亡通路,并存在一定剂量依赖性,从而改善椎间盘退变。
（2）本文研究方法
调查法：该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。
观察法：用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。
实验法：通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。
文献研究法：通过调查文献来获得资料，从而全面的、正确的了解掌握研究方法。
实证研究法：依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。
定性分析法：对研究对象进行“质”的方面的研究，这个方法需要计算的数据较少。
定量分析法：通过具体的数字，使人们对研究对象的认识进一步精确化。
跨学科研究法：运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。
功能分析法：这是社会科学用来分析社会现象的一种方法，从某一功能出发研究多个方面的影响。
模拟法：通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。
椎间盘细胞论文参考文献
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