导读:本文包含了胚胎发育能力论文开题报告文献综述及选题提纲参考文献，主要关键词:牦牛,卵母细胞,肿瘤坏死因子(TNF-α),低氧诱导因子1α(HIF-1α)
胚胎发育能力论文文献综述
许涛,潘阳阳,何翃闳,李谷月,张慧珠[1]（2019）在《TNF-α对牦牛卵母细胞HIF-1α和HSP70的表达及后续胚胎发育能力的影响》一文中研究指出旨在研究肿瘤坏死因子(TNF-α)对牦牛卵母细胞体外成熟和对低氧诱导因子1α(HIF-1α)、热休克蛋白70(HSP70)的表达以及后续胚胎发育能力的影响。在牦牛卵母细胞体外成熟培养液中添加不同浓度的TNF-α(最终浓度分别为0、10、25、50 ng·mL~(-1)),牦牛卵丘-卵母细胞复合体(cumulus-oocyte complexes,COCs)培养成熟后,统计其卵母细胞成熟率及体外受精后早期胚胎的发育率,采用RT-PCR扩增牦牛HIF-1α、HSP70基因,采用实时荧光定量PCR(qRT-RCR)、蛋白免疫印迹法(Western blotting)和免疫荧光染色技术检测HIF-1α、HSP70在基因和蛋白水平的表达情况。结果发现:1)成熟液中加入TNF-α,卵母细胞的成熟率提高,且随着TNF-α浓度的升高,卵母细胞的成熟率、卵裂率和囊胚率逐渐升高,当TNF-α浓度为25 ng·mL~(-1)时,卵母细胞的成熟率和卵裂率达到最高,分别为84.98%和66.85%,而囊胚率也达到了21.48%,均显着高于对照组(P<0.05);2)随着TNF-α浓度的升高,HIF-1α的表达量逐渐降低,对照组HIF-1α的表达量极显著高于其他组(P<0.01),50 ng·mL~(-1) TNF-α组HIF-1α的表达量极显著低于其他组(P<0.01),HIF-1α在卵丘细胞和卵母细胞上均有表达;3)25 ng·mL~(-1)TNF-α组的HSP70表达量最高,极显着高于其他组(P<0.01),而当TNF-α达到50 ng·mL~(-1)时,HSP70的表达量最低。综上表明,在牦牛卵母细胞体外成熟过程中,TNF-α明显提高了卵母细胞的发育能力,同时还诱导了HSP70的表达,抑制了HIF-1α的表达,为今后探讨TNF-α、HIF-1α和HSP70在牦牛生殖过程中发挥的作用以及对胚胎发育的影响提供理论依据。(本文来源于《畜牧兽医学报》期刊2019年06期）
郭庆[2]（2019）在《黄芩苷对猪卵母细胞体外成熟和胚胎体外发育能力的影响》一文中研究指出黄芩苷(baicalin)是一种从黄芩植物根部提取的传统中药单体,因其具有抗氧化、抗凋亡、抗炎症等功能,被用于治疗多种由炎症因子引起的疾病,同时在生殖上具有治疗不孕不育,保胎的作用。然而,baicalin对于卵母细胞体外成熟(IVM),胚胎体外发育的影响及其机制尚不清楚。卵母细胞IVM和胚胎体外培养会受到高浓度活性氧(ROS)的破坏作用使其效率降低,这使卵母细胞和胚胎相关机理的研究及二者在辅助生殖技术上的应用都受到很大限制。因此本实验在猪卵母细胞IVM培养液和胚胎IVC培养液中添加baicalin可以通过抑制凋亡显着提高卵母细胞IVM能力、卵母细胞质量、胚胎体外发育能力、胚胎质量。同时,利用成年雄性昆明鼠体内实验验证baicalin对酒精诱导精子损伤的保护作用。一、Baicalin对猪卵母细胞IVM及其后胚胎体外发育能力的影响1.本实验探索不同浓度的baicalin对猪卵母细胞IVM能力的影响,发现0.1μg/mL和0.5 μg/mL的baicalin均可以显着的提高猪卵母细胞IVM 能力(68.1,70.2 vs.59.7;P<0.05)。Baicalin 具有显着的抗氧化能力,因此,通过荧光染色的方法发现0.05,0.1和0.5μg/mL baicalin处理组中卵母细胞内产生活性氧(ROS)水平均显着的低于对照组(P<0.05)。在最小试验药物浓度获得最佳实验效果的原则下,后续实验选择0.1 μg/mL的baicalin作为最佳处理浓度。同时RT-PCR结果显示baicalin处理组中卵母细胞和卵丘细胞的促凋亡相关基因(Bax)mRNA表达量显着低于对照组(P<0.05)。2.荧光染色和RT-PCR方法进一步检测baicain处理后卵母细胞的质量,结果显示0.1μg/mL的baicalin处理组中线粒体潜能性(△Ψm)和ATP含量均显着的高于对照组(P<0.05)。同时,RT-PCR检测到baicalin处理组中卵母细胞成熟相关基因(BMP15,GDF9,CyclinB,CDK1)和卵丘细胞扩增相关基因(PTGS1,PTX3,TNFIP6,SHAS2)的mRNA表达量显着的高于对照组(P<0.05)。3.检测baicalin处理的卵母细胞经孤雌激活(PA)后胚胎的体外发育能力。结果显示处理组获得的胚胎体外发育能力显着的高于对照组(49.5 vs.27.2;P<0.05)。同时,baicalin处理后获得的胚胎发育到囊胚阶段时细胞数也显着的高于对照组(P<0.05)。RT-PCR检测到baicalin处理组中胚胎达到囊胚阶段时全能性相关基因(Nanog,Sox2)和Bcl2基因的mRNA表达量显着的高于对照组(P<0.05),而Ba基因mRNA表达量显着的低于对照组(P<0.05)。同时,Tunel染色发现baicalin处理组囊胚细胞凋亡数显着的低于对照组(P<0.05)。二、Baicalin对PA,体细胞核移植(SCNT)和体外受精(IVF)胚胎发育能力的影响1.检测baicalin对猪PA胚胎体外发育能力的影响。结果表明0.1μg/mL的baicalin处理可以显着提高猪PA胚胎的体外发育能力(21.7 vs.36.7;P<0.05),囊胚细胞数也显着高于对照组(P<0.05)。Tunel染色检测了囊胚的质量,结果显示baicalin处理组囊胚凋亡细胞数显着的低于对照组(P<0.05)。RT-PCR结果表明全能性基因(Oct4,Sox2)的mRNA表达量显着高于对照组(P<0.05)。Bax和Bcl2基因的mRNA表达量显着低于和高于对照组(P<0.05)。2.检测baicalin对猪PA胚胎ROS表达量,Bax和Bcl2基因mRNA表达量,△Ψm,ATP含量的影响。利用荧光染色检测0.1μg/mL baicalin处理对猪PA胚胎质量的影响,结果显示baicalin处理组2/4-cell时期ROS的表达量显着低于对照组和其他浓度处理组(P<0.05)。同时RT-PCR结果显示胚胎在2/4-cell时期Bax基因的mRNA表达量均显着的低于对照组(P<0.05),Bcl2基因在2-cell时期的mRNA表达没有显着的变化,而在4-cell时期mRNA的表达量显着高于对照组(P<0.05)。同时,荧光染色显示baicalin处理组中△Ψm和ATP含量显着高于对照组(P<0.05)。3.检测baicalin处理对猪PA胚胎中sonic hedgehog(SHH)信号途径的影响。RT-PCR结果显示,baicalin处理组中SHH信号途径相关基因(SHH,PTCH1,GdI1,SMO)的mRNA表达量均显着高于对照组(P<0.05)。免疫荧光染色检测发现baicalin处理可以显着的提高SHH信号途径相关蛋白(SHH,GLI1)的表达量。为了进一步检测baicalin处理对胚胎体外发育能力影响的机制,我们将胚胎分为叁个组:对照组;baicalin处理组;baicalin和SHH信号抑制剂(Cyclopamine,Cy)共同处理组,结果显示Cy可以恢复baicalin对胚胎产生ROS和凋亡的抑制作用及baicalin对△Ψm和ATP含量的增加。最后,我们检测叁个处理组胚胎的体外发育能力,结果显示Cy可以抑制baicalin对胚胎体外发育能力的提高。4.检测0.1 μg/mL baicalin对猪SCNT和IVF胚胎的影响。结果表明0.1 μg/mL的biacalin可以显着提高猪SCNT和IVF胚胎的发育能力(14.9 vs.25.9;14.9 vs.25.9;P<0.05)。叁、Baicalin对酒精诱导的成年雄性昆明鼠精子损伤的保护作用1.本实验建立了酒精诱导成年雄性昆明鼠精子损伤模型。实验分为两组,10只同窝出生,表型一致的成年雄性昆明鼠随机分为实验组和对照组,每组各5只。实验组进行每天连续四周酒精灌胃实验,灌胃剂量按酒精质量和小鼠体重比如下:第一周每天2g/kg、第二周每天4g/kg、第叁周每天6 g/kg、第四周每天8 g/kg、对照组饲喂等量的生理盐水。第四周结束时对小鼠进行剖检,检测到小鼠体重下降,死亡率增加,精子密度显着的低于对照组(P<0.05)。2.检测不同浓度baicalin处理对酒精诱导成年雄性小鼠精子损伤的保护作用。实验分为对照组(等量生理盐水)、酒精组、酒精和25 mg/kg baicalin共同处理组、酒精和50 mg/kg baicalin共同处理组(mg/kg即baicalin重量和小鼠体重比值,酒精剂量按照实验一)。结果显示,50 mg/kg的biacalin灌胃量对酒精诱导的小鼠精子密度下降和精子畸形率升高等具有部分保护作用(P<0.05)。3.检测不同浓度baicalin对酒精诱导的成年雄性昆明鼠睾丸组织凋亡和炎症因子相关基因mRNA表达量的影响。结果显示,酒精处理会显着的增加睾丸组织中凋亡基因(Caspse3,Bax)和炎症因子(IL-6,TNF-a)mRNA表达量,同时降低Bcl2基因mRNA的表达量(P<0.05)。相比于酒精组,50 mg/kg的biacalin处理可以显着降低caspase3,Bax,IL-6,TNF-a基因的mRNA表达量,同时提高Bcl2基因的mRNA表达量(P<0.05)。结论:本研究确定了 0.1 μg/mL baicalin可以显着提高猪卵母细胞IVM和PA,IVF及SCNT胚胎体外发育能力。主要表现为降低卵母细胞和胚胎中ROS水平,提高△Ψm和ATP含量等。同时证明baicalin是通过激活SHH信号途径来影响猪胚胎体外发育潜能。此外,本研究也进一步利用体内实验证明了 baicalin对酒精诱导雄性昆明鼠精子损伤具有潜在的保护作用。(本文来源于《延边大学》期刊2019-05-30）
张春强,张通,张桂英,刘宇,王淑英[3]（2019）在《C型钠肽预处理小鼠卵母细胞后的胚胎发育能力》一文中研究指出背景:C型钠肽作为生理抑制剂可抑制小鼠卵母细胞的减数分裂,但其是否对所获得胚胎的发育能力具有促进作用尚不完全明确。目的:研究C型钠肽预处理对小鼠胚胎质量的影响。方法:利用C型钠肽预处理小鼠卵母细胞8 h后,再进行体外成熟24 h,将成熟后的卵母细胞体外受精,获得体外胚胎(实验组),以小鼠卵母细胞常规体外成熟培养24h后所获得的胚胎为对照组。实验方案中有关动物伦理问题已经得到乌兰察布医学高等专科学校动物实验伦理委员会的批准,伦理批号:WYZLL[2016]1601。结果与结论:实验组平均囊胚细胞数明显高于对照组平均囊胚细胞数(P<0.05);2组的线粒体DNA拷贝数均随胚胎发育逐渐增加,且实验组增长速度较对照组快(P <0.05);实验组的活性氧水平显着低于对照组(P <0.05),实验组各胚胎时期胚胎细胞的谷胱甘肽水平显着高于对照组(P<0.05)。提示C型钠肽预处理对小鼠胚胎的发育能力有了明显的提高。(本文来源于《中国组织工程研究》期刊2019年17期）
颜晓红,李友筑,周卫东,林莉,吴荣锋[4]（2018）在《密闭式体外培养系统对胚胎发育及小鼠学习和记忆能力的影响》一文中研究指出目的探讨密闭式培养系统对胚胎发育及子代小鼠学习和记忆能力的影响。方法建立胚胎密闭式培养体系,分组为密闭培养组和常规培养组(对照组),比较两种培养方式小鼠胚胎的发育和着床情况;Morris水迷宫实验和小鼠跳台实验研究两种培养方式获取的胚胎移植后新生小鼠学习和记忆能力。结果密闭培养组小鼠胚胎发育和着床能力与常规培养组相比无显着差异(P>0.05);Morris水迷宫和小鼠跳台实验结果显示,密闭培养组小鼠胚胎移植后新生小鼠学习和记忆能力与常规培养组无显着差异(P>0.05)。结论密闭培养体系培养的胚胎与常规培养得到的胚胎相比,在胚胎质量、着床能力以及子代小鼠学习和记忆能力方面均无统计学差异。(本文来源于《生殖医学杂志》期刊2018年10期）
徐士儒,李观贵,熊风,万才云,陈培林[5]（2018）在《授精方式对不同原核数目及D3评级胚胎继续发育能力的影响》一文中研究指出目的评估授精方式对不同原核数目及D3评级胚胎体外发育形成囊胚能力的影响。方法回顾性分析2015年4月至2017年2月期间深圳中山泌尿外科医院生殖医学中心3 610个新鲜取卵周期的囊胚培养结局。根据授精方式将行囊胚培养的胚胎分为IVF组和ICSI组,每组再根据原核数目(0PN、1PN和2PN)以及受精后第3天(D3)卵裂期胚胎评级(优质和非优质,分别简称为H及L)将胚胎分为6个亚组,即2PN-H、2PN-L、1PN-H、1PN-L、0PN-H以及0PN-L亚组,比较分析各组的囊胚形成率(BR)、优质囊胚形成率(HBR)、可利用囊胚形成率(ABR)、D5BR、D5 HBR、D5ABR等指标。结果 ICSI组的总BR、HBR以及ABR与IVF组相比均无显着性差异(P>0.05)。ICSI-1PN-H亚组、ICSI-1PN-L亚组的BR、HBR、ABR以及ICSI-0PN-L亚组的BR、ABR均显着性地低于IVF相应亚组(P<0.05),而ICSI-2PN-H亚组、ICSI-2PNL亚组以及ICSI-0PN-H亚组的BR、HBR以及ABR与IVF相应亚组间的差异无统计学意义(P>0.05)(除ICSI-2PN-L亚组的ABR外)。另外,ICSI组的总D5BR、D5 HBR以及D5ABR均显着低于IVF组(P<0.01),但是ICSI-0PN-H亚组的D5BR、D5HBR、D5ABR却显着高于IVF-0PN-H亚组(P<0.01)。结论通过ICSI获得的1PN胚胎(无论D3胚胎评级)以及0PN-L胚胎的继续发育能力较低,并且ICSI会降低大部分胚胎的发育速度。(本文来源于《生殖医学杂志》期刊2018年08期）
张奇波,皮文辉[6]（2018）在《Ala-Gln二肽代替Gln提高绵羊体外受精胚胎发育能力试验》一文中研究指出L-谷氨酰胺二肽比L-谷氨酰胺(L-glutamine,Gln)稳定。用Gln二肽代替Gln,降低了培养液中铵离子蓄积,有利于培养液的稳定,改善了细胞或胚胎健康状态。在绵羊体外受精的胚胎发育液(Synthetic Oviduct Fluid,SOFaa)中,添加丙氨酰-谷氨酰胺(alanyl-L-glutamine,AlaGln)二肽或Gln,比较2种成分对绵羊体外受精胚胎发育能力的影响。结果表明,Ala-Gln代替Gln,提高了绵羊体外受精胚胎的卵裂率、囊胚率。绵羊体外胚胎发育液中,可以采用商品化的Ala-Gln溶液代替Gln。(本文来源于《新疆农垦科技》期刊2018年01期）
杨明辉,陶景丽,吴昊,柴孟龙,姬鹏云[7]（2017）在《褪黑素改善低质量牛卵母细胞质量提高受精胚胎发育能力》一文中研究指出前言:从卵巢中收集到的未成熟牛卵母细胞,有1/3以上因为质量低下的原因无法进行正常的基础研究或者体外胚胎生产,这就造成了很大的资源浪费和经济损失。因此研究如何改善低质量牛卵母细胞质量,提高优质胚胎的生产效率具有很大的商业价值。褪黑素作为一种神经生殖激素和有效的抗氧化剂,对卵母细胞成熟及胚胎发育有着显着的促进作用。(本文来源于《中国生理学会生殖科学专业委员会—中国动物学会生殖生物学分会第二次联合学术年会暨“生殖科学专业委员会第二次学术交流会”和“生殖生物学分会第十六次学术年会”论文集》期刊2017-08-25）
张艳[8]（2017）在《PCOS患者卵泡液中代谢产物的差异对IVF助孕患者胚胎发育能力和妊娠结局的影响》一文中研究指出第一部分:NMR分析PCOS患者卵泡液中代谢物改变及对胚胎发育质量的影响目的PCOS是引起育龄期女性无排卵及不孕的主要原因之一。本文通过收集PCOS患者和正常对照人群进行辅助生殖助孕过程中产生的卵泡液,采用核磁共振(nuclear magnetic resonance,NMR)测定其中代谢物的存在及其浓度差异,从卵泡发育的局部代谢微环境揭示PCOS患者卵泡与正常人群卵泡发育的差异,为了解PCOS的病因和改善妊娠结局提供新的思路。方法1.研究对象:研究对象为2014年期间于武汉大学人民医院行IVF-ET或ICSI助孕的患者。正常对照组36例和PCOS组15例。2.控制性卵巢刺激方案:所有研究对象均采用标准长方案促排卵。定期监测卵泡发育情况和血清性激素水平至HCG注射日。在促排卵过程中根据卵泡发育情况和激素水平调整药物用量。3.采卵和卵泡液收集:在定期监测排卵的过程中,当双侧卵巢出现至少2个卵泡直径大于18mm后给予HCG I0000U肌肉注射。HCG注射后34-36小时在引导超声的引导下穿刺采卵。卵细胞置于培养基中培养,卵泡液收集于EP管中。收集的卵泡液于4℃,12000rpm离心10分钟,收集上清液,-80℃冻存,进行下一步的检测。4.受精和胚胎质量评估:采卵后3小时受精,继而将其移至新的培养基中。观察2原核出现情况并记录。对D3胚胎进行形态学评价。5.NMR样品准备:将卵泡液样品从-80℃冰箱内取出,依次解冻、充分震荡、离心,然后每个样品移取530μL到5mm核磁管内,将一个装有60μL TSP(3-叁甲基硅基-丙酸钠)D20溶液的同轴离心管置入核磁管内作为位移外标(CH3,δ0.00)。6.NMR图谱采集:将样品在25℃下,以随机顺序置入BrukerDRX 500MHz核磁共振谱仪,以CMPG脉冲序列采集记录NMR谱图。实验参数为预扫(DS)16次,累积扫描(NS)128次,采样数据点(TD)32K,谱宽(SW)6000 Hz、预扫延迟时间(DE)为30μs、混合时间(tm)为0.1s等。7.NMR图谱分析:运用MestReNova软件(version 6.6.1)对谱图进行基线及相位调整预的处理后,用1.46 ppm处的来自丙氨酸的特征双峰将每个谱图进行对齐。接着,分别对每个样品的谱图数据点进行适当合并,每个谱图最终合并成为含有4000个数据点的谱图,每个点之间相隔0.003ppm。将谱图中残留的水和尿素区(δ4.7～5.2 ppm)去除后,参考总谱图积分(δ10～0.40 ppm)对每个谱图进行归一化。将归一化后的谱图以平均值为中心进行预处理后,依次运用非监督性模型主成分分析(Principal Component Analysis,PCA)和监督性模型偏最小二乘法回归分析(partial least-squares,PLS)、正交修正-偏最小二乘法回归分析(orthogonal signal correction partial least-squares,OSC-PLS)对整体谱图进行全面观测,以发掘PCOS与正常对照组间的区别。8.PCOS差异代谢物定位:参照文献及数据库(HMDB),进一步对NMR特征峰进行识别和积分。运用t检验和多重检验校正(Bonferroni校正),对识别出的特征峰进行显着性检验,找出在PCOS卵泡液中呈显着差异(p<0.05),以及较显着差异(p<0.1)的代谢物。结果1.卵泡液中的代谢改变:由PCOS患者和正常对照组卵泡液的平均谱图对比,我们可以看到一些显着的差异代谢物的信号:包括丙氨酸、乳酸、胆固醇、和丙酮酸。在PLS得分图中PCOS和正常对照组这两类人群是分离的。OSC-PLS得分图更为清晰地呈现了两组间的差异。59 pks模型结果显示总体的准确度是0.68±0.06,灵敏度是 0.62±0.10,特异性是 0.71±0.08,AUROC 是 0.77±0.08。2.滤波器法选择生物标志物:PLS负载分析显示乙酸、胆碱、甘油和脂区、糖蛋白、谷氨酸是在LV1得分分离中贡献最大的5大代谢产物。OSC-PLS负荷分析表明醋酸、α-羟丁酸、乙酰乙酸、甘油和脂区、异亮氨酸(PK 58)有最高的载重量。p值选择模型显示在PCOS中呈升高趋势的有甘油和脂质区域,糖蛋白,乙酸盐,胆固醇;在PCOS中呈下降趋势的有乳酸,谷氨酰胺,丙酮酸和丙氨酸。这9种代谢物组合构建了 PLS-DA模型(p值选择模型),采用交义结果验证显示器具有0.73的灵敏度,0.86的特异度和0.88的AUROC。这个模型进一步使用MCCV算法进行验证,结果显示其平均灵敏度和特异性分别为 0.72±0.08 和0.81±0.04。3.L-1 Penalized Logistic回归法选择生物标志物:所有的样本结合59个特征峰区域采用L-1 Penalized Logistic回归法分析结果显示,包括谷氨酰胺、丙酮酸、醋酸和胆固醇在内的代谢物特征峰区域在PCOS和正常对照者卵泡液标本中均存在显着性差异。与正常对照组相比谷氨酰胺、丙酮酸在PCOS患者的卵泡液中含量减少,而胆固醇和乙酸的含量在PCOS的卵泡液中明显升高。特别是乙酸的变化率高达41%。使用这5种区域构建了 PLS-DA模型。交叉分析结果验证了该模型的灵敏度为0.73,特异性为0.83,AUROC是0.86。进一步使用MCCV算法评估PLS-DA模型,结果显示其准确度为0.79±0.03和AUROC为0.87±0.02。丙酮酸、醋酸、胆固醇均在100%预测准确率的模型中出现。利用这叁种物质建立PLS-DA模型。交叉验证结果显示其灵敏度是0.80,特异度是0.83,AUROC 是 0.90。4.PCOS患者卵泡液代谢途径的改变:两组之间平p值小于0.05的所有代谢物都被导入MetPA,结果显示在PCOS卵泡液中改变的代谢途径包括丙酮酸代谢、糖酵解、丙氨酸、大冬氨酸和谷氨酸代谢等。5.代谢物与卵细胞发育潜能之间的相关性分析:我们将收集的辅助生殖中获得的临床数据与用NMR从卵泡液中检测到的代谢物进行相关性分析,发现优质胚胎率与肌酸呈紧密的负相关关系,且PCOS病人卵泡液中的组氨酸与优胚率呈非常显着的特异相关性(p-value=4.8E-3)。另外,PCOS卵泡液中的甲酸、葡萄糖,和羟基丁酸也显示出与其他卵细胞发育指数(卵裂率和受精率)明显的相关性。结论1.无论是得分图还是59-pks的PLS-DA模型都显示正常对照人群和PCOS患者的卵泡液样本中物质成分存在明显的分离,从而说明通过比较两组参与者卵泡液代谢产物的差异可以用于鉴别其母体状态。2.相比于59种代谢物构建的模型,用p<0.05的9个代谢物区域构建的模型在鉴别PCOS患者和正常组的灵敏度、特异度和AUROC等各方面均有所改善。3.建立在丙酮酸、醋酸、胆固醇上的PLS-DA模型对于PCOS患者和正常对照人群具备更好的鉴别能力。4.与对照组相比PCOS患者的酸代谢、糖酵解、丙氨酸、天冬氨酸和谷氨酸等代谢途径存在差异。5.卵泡液中组氨酸、甲酸、葡萄糖,和羟基丁酸与卵细胞发育潜能密切相关。第二部分:PCOS患者卵泡液中核酸代谢产物的表达差异及其对于胚胎发育潜能和妊娠结局的预测能力目的在妇科生殖领域,PCOS是引起女性不孕的常见原因之一。本文通过收集PCOS患者和正常对照人群进行辅助生殖助孕过程中产生的卵泡液,并采用质谱分析以测定其中核酸代谢物的存在及其浓度差异,进而与胚胎发育潜能进行相关性分析,并比较了其对于妊娠结局的预测能力,从而为了解PCOS的病因和改善妊娠结局提供新的思路。方法1.研究对象:2014年期间于武汉大学人民医院行体外受精-胚胎移植或卵泡浆内单精子注射助孕的患者。正常对照组和PCOS组各16例。2.控制性卵巢刺激方案:采用标准长方案促排卵。定期监测卵泡发育情况和血清性激素水平至HCG注射日。在促排卵过程中根据卵泡发育情况和激素水平调整药物用量。3.采卵和卵泡液收集:在定期监测排卵的过程中,当双侧卵巢出现至少2个卵泡直径大于18mm后给予HCG肌肉注射,注射后34-36小时在阴道超声的引导下穿刺采卵。卵细胞置于培养基中培养,卵泡液收集于EP管中。收集的卵泡液于4℃,12000rpm离心10分钟,收集上清液,-80℃冻存,进行下一步的检测。4.受精和胚胎质量评估:采卵后3小时受精,继而将其移至新的培养基中。观察2原核出现情况并记录。进行卵裂期第叁天(D3)胚胎质量评价。5.统计学分析:所有数据均以均数±标准差表示,并使用SPSS19.0统计学软件进行分析。Kolmogorov-Smirnov检验以评价数据的正态性,正态分布的数据使用独立样本T检验进行分析,非正太分布的数据使用Kruskal-Wallis检验进行分析。受试者工作特征曲线(receiver operating characteristic curve,ROC 曲线)分析用以评价5'-脱氧腺苷,5-甲基胞嘧啶和5-甲氧羰基甲基-2'-硫尿核苷对妊娠结局的预测能力。P<0.05被认为差异具有统计学意义。结果1.参与者的一般特征:PCOS组患者的平均年龄为28.6±2.68,正常对照组的平均年龄为29.5±2.45,两组之间无统计学差异。由于PCOS疾病本身的代谢特点,与正常对照组相比PCOS组具有更高的体重指数(23.49±4.06 vs 20.39±2.10,p=0.01)。与正常对照组相比,PCOS组LH/FSH的比值升高(1.08±0.62 vs 0.70±0.41,p=0.48),AMH 升高(4.21±0.29vs2.26±0.26,p<0.001)。绝大多数的参与者采用IVF-ET方式助孕(53%),余下的47%采用ICSI方式助孕。最终,41%的参与者成功妊娠。2.参与者的实验室信息:与正常对照组相比,PCOS组患者表现出不同的促排卵结局,主要包括基础窦卵泡计数增加,获卵数增加,2 PN受精数增加,优胚数增加,而2PN卵裂数在两组参与者之间无明显差异。3.5'-脱氧腺苷,5-甲基胞嘧啶和5-甲氧羰基甲基-2'-硫尿核苷在PCOS组患者和正常对照组的卵泡液中的浓度差异:5'-脱氧腺苷(p=0.001)和5-甲氧羰基甲基-2'-硫尿核苷(p=0.005)在PCOS组患者卵泡液样本中的含量明显高于正常健康人群。而与正常健康人群相比,5-甲基胞嘧啶(p=0.002)在PCOS组卵泡液样品中的表达是明显降低的。由于这几种物质在卵泡液中的含量相对较低,其标准差均较大,但是这几组之间存在统计学差异。4.5'-脱氧腺苷的浓度,5-甲基胞嘧啶和5-甲氧羰基甲基-2'-硫尿核苷的浓度与卵细胞发育能力的相关性分析:5'-脱氧腺苷的浓度与卵泡发育潜能正相关,主要表现为与获卵数具有0.389的相关系数(p=0.028),与2PN受精数具有0.527的相关系数(p=0.002),与2PN卵裂数具有0.520的相关系数(p=0.002),与优胚数具有0.506的相关系数(p=0.003)。在对所有的PCOS卵泡液样本中的5'-脱氧腺苷的浓度与卵细胞质量进行相关性分析之后,我们发现5'-脱氧腺苷的浓度与2PN受精数具有0.521的相关系数(p=0.039),与2PN卵裂具有0.513的相关系数(p=0.042),与优胚数具有0.570的相关系数(p=0.021),即5'-脱氧腺苷的浓度与卵细胞质量中度相关。然而,在健康对照人群里5'-脱氧腺苷的浓度不具有明显的相关性。我们也发现5-甲氧羰基甲基-2'-硫尿核苷的浓度与卵细胞的发育潜能中度正相关。表现为与获卵数具有0.572的相关系数(p=0.00]),与2PN受精数具有0.679的相关系数(p<0.001),与2PN卵裂具有0.684的相关系数(p<0.001)。而在PCOS患者卵泡液样本中分析5-甲氧羰基甲基-2'-硫尿核苷的浓度与卵细胞的发育潜能,我们也得到了相同的结果。表现为与获卵数具有0.516的相关系数(p=0.041),与2PN受精数具有0.685的相关系数(p=0.003),与2PN卵裂数具有0.695的相关系数(p=0.003),与优胚数具有0.816的相关系数(p<0.001)。然而,在健康对照人群的卵泡液样品中分析5-甲氧羰基甲基-2'-硫尿核苷的浓度与卵细胞的发育潜能,没有发现明显的相关性。5.卵泡液样本中5'-脱氧腺苷,5-甲基胞嘧啶,5-甲氧羰基甲基-2'-硫尿核苷的浓度和2PN受精率之间的相关性分析:5'-脱氧腺苷的浓度和2PN受精率之间存在明显的正相关,表现为在所有的参与对象里分析具有0.226的相关系数(p=0.213),在正常对照组进行分析具有0.499的相关系数(p=0.049),在PCOS人群里进行分析具有0.530的相关系数(p=0.035)。与此同时,我们发现卵泡液中5-甲氧羰基甲基-2'-硫尿核苷的浓度与2PN受精率高度正相关,表现为对在PCOS患者人群中具有0.627的相关系数(p=0.009)。而在健康对照人群中以及所有参与者中进行分析未见明显的相关性。6.卵泡液中5-甲氧羰基甲基-2'-硫尿核苷的浓度对于妊娠结局是一个很好的预测指标:在前期研究的基础上我们推测卵泡液中核酸结合物的浓度可能是预测临床妊娠结局的潜在的预测指标。我们通过分析卵泡液中5-甲氧羰基甲基-2'-硫尿核苷的浓度与妊娠结果的关系发现,5-甲氧羰基甲基-2'-硫尿核苷的浓度对于妊娠结局具有很好的预测能力,表现为95%的AUC是0.942。对PCOS患者卵泡液中5-甲氧羰基甲基-2'-硫尿核苷的浓度与妊娠结局进行分析,我们也得到了相同的结果,但是无明显的统计学差异。结论1.与正常对照组相比,PCOS组患者表现出不同的促排卵结局,主要包括基础窦卵泡计数增加,获卵数增加,2PN受精数增加,优胚数增加,而2PN卵裂数在两组参与者之间无明显差异。2.5'-脱氧腺苷和5-甲氧羰基甲基-2'-硫尿核苷在PCOS组患者卵泡液样本中的含量明显高于正常健康人群。而与正常健康人群相比,5-甲基胞嘧啶在PCOS组卵泡液样品中的表达是明显降低的。3.5'-脱氧腺苷的浓度与卵细胞发育潜能正相关;5-甲氧羰基甲基-2'-硫尿核苷的浓度与卵细胞的发育潜能中度正相关。4.卵泡液中5-甲氧羰基甲基-2'-硫尿核苷的浓度对于妊娠结局是一个很好的预测指标。(本文来源于《华中科技大学》期刊2017-05-01）
张欣欣[9]（2016）在《沉底油对海胆繁殖能力和子代胚胎发育的影响》一文中研究指出为研究沉底油对海洋底栖生物的繁殖和子代胚胎发育的毒性影响,本实验以380#船用燃料油为实验油品模拟沉底油,以虾夷马粪海胆(Strongylocentrotus intermedius)为受试生物进行研究,实验设定了母本暴露、父本暴露和双亲本暴露,运用紫外分光光度法和气相-质谱联用法(GC-MS)分别测定上覆水(与空气直接接触的暴露液)和间隙水(含油砂砾空隙中的暴露液)中总石油烃(TPH)和总多环芳烃(TPAH)含量,并结合配子的受精能力和其子代胚胎个体发育情况对实验结果进行分析。实验结果表明:相同暴露时间下,随着沉底油油砂配比浓度的增加,上覆水和间隙水中TPH浓度也随之增加,且间隙水的TPH浓度高于上覆水的TPH浓度,胚胎的生长抑制率和畸形率的变化趋势与TPH的变化趋势基本一致。通过GC-MS检测发现,单位质量含油砂砾中TPAH的最大值为10.277μg/g;上覆水中TPAH的最大值为14.826μg/L,其中菲的含量相对较高,因此可推测本实验中菲是影响海胆子代胚胎个体发育的主要原因。将亲代暴露于不同油砂配比浓度的沉底油中7d,其配子的受精率仍可达98%以上,但性腺指数降低,最高排卵抑制率为50.89%,且子代出现大量体长较小、发育迟缓及畸形的个体。说明亲代暴露虽然不会影响配子的受精能力,但亲本繁殖能力降低,沉底油释放的毒性会随海胆配子传递给子代,影响子代的胚胎发育。并且实验发现,长腕幼虫期(受精后48h)的生长抑制率和畸形率高于原肠胚期(受精后24h)。表明亲代暴露对子代胚胎发育的毒性影响会在长腕幼虫期被放大。因此,可将长腕幼虫期的海胆胚胎作为沉底油污染损害评估及早期预警的模式生物。亲代暴露和亲子双代持续暴露中,子代胚胎的生长抑制率在父本暴露时最大,母本暴露时最小;子代胚胎的畸形率在双亲本暴露时最大。该结果表明父本暴露和双亲本暴露会产生更为严重的遗传毒性,其子代胚胎的发育情况可为海洋生态风险评估、自然资源损害评估以及船舶溢油索赔提供重要的科学依据。(本文来源于《大连海事大学》期刊2016-12-01）
潘阳阳,王立斌,樊江峰,余四九[10]（2016）在《EGF通过调控survivin和HSP70提高牦牛移植前胚胎发育能力》一文中研究指出目的:为了确定EGF对牦牛胚胎发育的潜在作用机制,本研究分析在牦牛体外受精胚胎发育过程中加入不同浓度的EGF,分析EGF对牦牛胚胎发育能力、囊胚质量的影响,并采用Real-time PCR和间接免疫荧光方法检测检测细胞凋亡相关基因的表达变化。材料与方法:受精后,将受精的卵母细胞放入含1%BSA的SoFaa液~([11]),每100μL的微滴含有20个卵母细胞,38℃、5%CO_2和饱和湿度下培养。同时设计实验检测组,在SoFaa液中分别加入ng·mL~(-1),50 ng·mL~(-1),100 ng·mL~(-1),和200 ng·mL~(-1)EGF,在受精后24,48,120,和168 h统计2细胞,8细胞,桑葚胚和囊胚的发育率。每个处理组收集8个囊胚用于后续的mRNA和蛋白检测,在囊胚的细胞数统计过程中每个重复收集5个囊胚,固定于免疫染色固定液中,每个处理组5个重复。结果:加入EGF可以显着提高胚胎的发育能力和囊胚质量,最佳的作用浓度为100 ng·mL~(-1),囊胚中HSP70和Survivin的表达也可在100 ng·mL~(-1)EGF处理组中显着提高。结果表明牦牛胚胎发育过程中EGF作为重要细胞因子,可通过调HSP70和Survivin等凋亡相关基因的表达提高体外受精胚胎的发育能力。结论:本研究结果表明EGF可以显着的提高牦牛移植前胚胎的发育能力,其作用效果主要集中于囊胚时期,囊胚的细胞数也显着增加。这些效果与EGF调控囊胚的Survivin和HSP70表达相关,且具有剂量依赖性。(本文来源于《中国畜牧兽医学会兽医产科学分会第十叁次学术研讨会论文集》期刊2016-10-22）
胚胎发育能力论文开题报告
（1）论文研究背景及目的
此处内容要求：
首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景，再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题，并提出你的论文准备的观点或解决方法。
写法范例：
黄芩苷(baicalin)是一种从黄芩植物根部提取的传统中药单体,因其具有抗氧化、抗凋亡、抗炎症等功能,被用于治疗多种由炎症因子引起的疾病,同时在生殖上具有治疗不孕不育,保胎的作用。然而,baicalin对于卵母细胞体外成熟(IVM),胚胎体外发育的影响及其机制尚不清楚。卵母细胞IVM和胚胎体外培养会受到高浓度活性氧(ROS)的破坏作用使其效率降低,这使卵母细胞和胚胎相关机理的研究及二者在辅助生殖技术上的应用都受到很大限制。因此本实验在猪卵母细胞IVM培养液和胚胎IVC培养液中添加baicalin可以通过抑制凋亡显着提高卵母细胞IVM能力、卵母细胞质量、胚胎体外发育能力、胚胎质量。同时,利用成年雄性昆明鼠体内实验验证baicalin对酒精诱导精子损伤的保护作用。一、Baicalin对猪卵母细胞IVM及其后胚胎体外发育能力的影响1.本实验探索不同浓度的baicalin对猪卵母细胞IVM能力的影响,发现0.1μg/mL和0.5 μg/mL的baicalin均可以显着的提高猪卵母细胞IVM 能力(68.1,70.2 vs.59.7;P<0.05)。Baicalin 具有显着的抗氧化能力,因此,通过荧光染色的方法发现0.05,0.1和0.5μg/mL baicalin处理组中卵母细胞内产生活性氧(ROS)水平均显着的低于对照组(P<0.05)。在最小试验药物浓度获得最佳实验效果的原则下,后续实验选择0.1 μg/mL的baicalin作为最佳处理浓度。同时RT-PCR结果显示baicalin处理组中卵母细胞和卵丘细胞的促凋亡相关基因(Bax)mRNA表达量显着低于对照组(P<0.05)。2.荧光染色和RT-PCR方法进一步检测baicain处理后卵母细胞的质量,结果显示0.1μg/mL的baicalin处理组中线粒体潜能性(△Ψm)和ATP含量均显着的高于对照组(P<0.05)。同时,RT-PCR检测到baicalin处理组中卵母细胞成熟相关基因(BMP15,GDF9,CyclinB,CDK1)和卵丘细胞扩增相关基因(PTGS1,PTX3,TNFIP6,SHAS2)的mRNA表达量显着的高于对照组(P<0.05)。3.检测baicalin处理的卵母细胞经孤雌激活(PA)后胚胎的体外发育能力。结果显示处理组获得的胚胎体外发育能力显着的高于对照组(49.5 vs.27.2;P<0.05)。同时,baicalin处理后获得的胚胎发育到囊胚阶段时细胞数也显着的高于对照组(P<0.05)。RT-PCR检测到baicalin处理组中胚胎达到囊胚阶段时全能性相关基因(Nanog,Sox2)和Bcl2基因的mRNA表达量显着的高于对照组(P<0.05),而Ba基因mRNA表达量显着的低于对照组(P<0.05)。同时,Tunel染色发现baicalin处理组囊胚细胞凋亡数显着的低于对照组(P<0.05)。二、Baicalin对PA,体细胞核移植(SCNT)和体外受精(IVF)胚胎发育能力的影响1.检测baicalin对猪PA胚胎体外发育能力的影响。结果表明0.1μg/mL的baicalin处理可以显着提高猪PA胚胎的体外发育能力(21.7 vs.36.7;P<0.05),囊胚细胞数也显着高于对照组(P<0.05)。Tunel染色检测了囊胚的质量,结果显示baicalin处理组囊胚凋亡细胞数显着的低于对照组(P<0.05)。RT-PCR结果表明全能性基因(Oct4,Sox2)的mRNA表达量显着高于对照组(P<0.05)。Bax和Bcl2基因的mRNA表达量显着低于和高于对照组(P<0.05)。2.检测baicalin对猪PA胚胎ROS表达量,Bax和Bcl2基因mRNA表达量,△Ψm,ATP含量的影响。利用荧光染色检测0.1μg/mL baicalin处理对猪PA胚胎质量的影响,结果显示baicalin处理组2/4-cell时期ROS的表达量显着低于对照组和其他浓度处理组(P<0.05)。同时RT-PCR结果显示胚胎在2/4-cell时期Bax基因的mRNA表达量均显着的低于对照组(P<0.05),Bcl2基因在2-cell时期的mRNA表达没有显着的变化,而在4-cell时期mRNA的表达量显着高于对照组(P<0.05)。同时,荧光染色显示baicalin处理组中△Ψm和ATP含量显着高于对照组(P<0.05)。3.检测baicalin处理对猪PA胚胎中sonic hedgehog(SHH)信号途径的影响。RT-PCR结果显示,baicalin处理组中SHH信号途径相关基因(SHH,PTCH1,GdI1,SMO)的mRNA表达量均显着高于对照组(P<0.05)。免疫荧光染色检测发现baicalin处理可以显着的提高SHH信号途径相关蛋白(SHH,GLI1)的表达量。为了进一步检测baicalin处理对胚胎体外发育能力影响的机制,我们将胚胎分为叁个组:对照组;baicalin处理组;baicalin和SHH信号抑制剂(Cyclopamine,Cy)共同处理组,结果显示Cy可以恢复baicalin对胚胎产生ROS和凋亡的抑制作用及baicalin对△Ψm和ATP含量的增加。最后,我们检测叁个处理组胚胎的体外发育能力,结果显示Cy可以抑制baicalin对胚胎体外发育能力的提高。4.检测0.1 μg/mL baicalin对猪SCNT和IVF胚胎的影响。结果表明0.1 μg/mL的biacalin可以显着提高猪SCNT和IVF胚胎的发育能力(14.9 vs.25.9;14.9 vs.25.9;P<0.05)。叁、Baicalin对酒精诱导的成年雄性昆明鼠精子损伤的保护作用1.本实验建立了酒精诱导成年雄性昆明鼠精子损伤模型。实验分为两组,10只同窝出生,表型一致的成年雄性昆明鼠随机分为实验组和对照组,每组各5只。实验组进行每天连续四周酒精灌胃实验,灌胃剂量按酒精质量和小鼠体重比如下:第一周每天2g/kg、第二周每天4g/kg、第叁周每天6 g/kg、第四周每天8 g/kg、对照组饲喂等量的生理盐水。第四周结束时对小鼠进行剖检,检测到小鼠体重下降,死亡率增加,精子密度显着的低于对照组(P<0.05)。2.检测不同浓度baicalin处理对酒精诱导成年雄性小鼠精子损伤的保护作用。实验分为对照组(等量生理盐水)、酒精组、酒精和25 mg/kg baicalin共同处理组、酒精和50 mg/kg baicalin共同处理组(mg/kg即baicalin重量和小鼠体重比值,酒精剂量按照实验一)。结果显示,50 mg/kg的biacalin灌胃量对酒精诱导的小鼠精子密度下降和精子畸形率升高等具有部分保护作用(P<0.05)。3.检测不同浓度baicalin对酒精诱导的成年雄性昆明鼠睾丸组织凋亡和炎症因子相关基因mRNA表达量的影响。结果显示,酒精处理会显着的增加睾丸组织中凋亡基因(Caspse3,Bax)和炎症因子(IL-6,TNF-a)mRNA表达量,同时降低Bcl2基因mRNA的表达量(P<0.05)。相比于酒精组,50 mg/kg的biacalin处理可以显着降低caspase3,Bax,IL-6,TNF-a基因的mRNA表达量,同时提高Bcl2基因的mRNA表达量(P<0.05)。结论:本研究确定了 0.1 μg/mL baicalin可以显着提高猪卵母细胞IVM和PA,IVF及SCNT胚胎体外发育能力。主要表现为降低卵母细胞和胚胎中ROS水平,提高△Ψm和ATP含量等。同时证明baicalin是通过激活SHH信号途径来影响猪胚胎体外发育潜能。此外,本研究也进一步利用体内实验证明了 baicalin对酒精诱导雄性昆明鼠精子损伤具有潜在的保护作用。
（2）本文研究方法
调查法：该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。
观察法：用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。
实验法：通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。
文献研究法：通过调查文献来获得资料，从而全面的、正确的了解掌握研究方法。
实证研究法：依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。
定性分析法：对研究对象进行“质”的方面的研究，这个方法需要计算的数据较少。
定量分析法：通过具体的数字，使人们对研究对象的认识进一步精确化。
跨学科研究法：运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。
功能分析法：这是社会科学用来分析社会现象的一种方法，从某一功能出发研究多个方面的影响。
模拟法：通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。
胚胎发育能力论文参考文献
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标签：牦牛; 卵母细胞; 肿瘤坏死因子(TNF-α); 低氧诱导因子1α(HIF-1α);