导读:本文包含了乙型肝炎病毒共价闭合环状论文开题报告文献综述及选题提纲参考文献，主要关键词:慢性乙型肝炎,共价闭合环状DNA,分子生物学,治疗靶点
乙型肝炎病毒共价闭合环状论文文献综述
李保胜,孙殿兴[1]（2016）在《乙型肝炎病毒共价闭合环状DNA在慢性乙型肝炎治疗中的分子生物学研究进展》一文中研究指出在乙型肝炎病毒(hepatitis B virus,HBV)感染过程中,共价闭合环状DNA(covalently closed circular DNA,cccDNA)是病毒复制产生的所有RNA和新病毒颗粒合成的模板,而当前的治疗方法很难彻底清除cccDNA.在cccDNA的产生过程中,由病毒前基因组RNA反转录合成松弛环状(relaxed circular,r c)DNA的细节目前已经比较明确,而对rcDNA转变为cccDNA的过程人们还知之甚少.最近的研究把cccDNA的形成和细胞DNA修复联系起来,并表明此过程是病毒与细胞相互作用的关键环节.本文将综述cccDNA的分子生物学研究进展,分析当前研究中遇到的障碍,并讨论把cccDNA作为治疗慢性乙型肝炎的靶点的前景.(本文来源于《世界华人消化杂志》期刊2016年12期）
严磊,赵婷婷,王会娟,李小松,黄爱龙[2]（2015）在《利用乙型肝炎病毒共价闭合环状DNA构建慢性乙型肝炎病毒感染的小鼠模型》一文中研究指出目的通过水动力法注射乙型肝炎病毒(HBV)共价闭合环状DNA(cccDNA)构建C57BL/6小鼠慢性乙型肝炎病毒感染的模型。方法取29只C57BL/6小鼠,分为实验组、对照组和空白组,应用水动力法分别注射HBV cccDNA、pAAV-HBV1.2及等渗盐水,于注射后收集不同时间点的血清和肝组织。利用放射免疫法检测血清样本中乙型肝炎病毒表面抗原(HBsAg)和乙型肝炎病毒e抗原(HBeAg);荧光定量PCR检测血清和肝组织中HBV DNA拷贝数;免疫组织化学法检测肝组织中HBsAg和乙型肝炎病毒核心抗原(HBc Ag)的表达;苏木精-伊红(HE)染色观察肝组织病理变化;使用SPSS 17.0对数据进行统计学分析。结果实验组HBsAg和HBeAg表达均呈现4个上升-下降曲线:HBsAg峰值分别出现在第3天、第3周、第7周和第9周;HBeAg峰值分别出现在第1天、第1周、第4周和第10周。对照组HBsAg和HBeAg表达分别呈现2个或3个明显的峰:HBsAg峰值分别出现在第3天和第8周;HBeAg峰值分别出现在第1天、第3周和第10周。空白组未检测出HBsAg和HBeAg。实验组HBV DNA拷贝数高于对照组的拷贝数(P<0.01);肝组织中HBV DNA拷贝数高于同期血清中的拷贝数(P<0.01);实验组和对照组的肝组织中均有HBsAg和HBc Ag的表达;实验组与对照组出现肝脏细胞炎症、肝细胞纤维化、肝细胞坏死等病理变化,而空白组正常。结论利用水动力法向C57BL/6小鼠体内转入HBV cccDNA,成功建立了慢性乙型肝炎病毒感染的小鼠模型,与对照组比较,新建立的小鼠乙肝模型具有更高的HBV表达,动物模型为研究乙型肝炎病毒HBV cccDNA的感染及其引起肝损伤的机制奠定了基础。(本文来源于《四川动物》期刊2015年02期）
周冬青,刘成永,王骥,王春颖,张克球[3]（2015）在《环介导等温扩增(LAMP)试剂盒检测石蜡包埋肝组织中乙型肝炎病毒(HBV)共价闭合环状DNA(cccDNA)》一文中研究指出目的建立一种检测石蜡包埋的肝组织中乙型肝炎病毒(hepatitis B virus,HBV)共价闭合环状DNA(covalently closed circular DNA,cccDNA)的新方法,并探讨其应用价值和临床意义。方法提取30例慢性HBV感染患者的石蜡包埋肝组织中的DNA,采用质粒安全ATP依赖性DNA酶(plasmid-safe ATP-dependent DNase,PSAD)消化,去除非cccDNA后,加入引物及Bst DNA酶进行环介导等温扩增(loop-mediated isothermal amplification,LAMP),将检测结果与临床实验室资料结合并进行分析,以判断其临床应用价值。结果 30例HBV感染患者中,有17例HBV cccDNA阳性,阳性检测率56.67%。其中肝癌5例、肝硬化4例、重型乙型肝炎5例、慢性乙型肝炎(轻-中度)3例。提示肝组织HBV cccDNA阳性可能与疾病进展密切相关,与血清HBV cccDNA阳性有一定的相关性,与乙型肝炎病毒血清免疫标志物以及肝功能状况无明显相关。结论 LAMP法能检测到石蜡包埋肝组织中的HBV cccDNA,结合临床实验室资料,对判断抗病毒药物疗效及研究乙型肝炎致病机制具有一定的意义。(本文来源于《复旦学报(医学版)》期刊2015年02期）
苏何玲,王慧敏,冉敬塬,王知,李红岩[4]（2014）在《基于滚环扩增的鸭乙型肝炎病毒共价闭合环状DNA检测方法的建立》一文中研究指出滚环扩增(RCA)是新近发展起来的一种能特异性扩增环形DNA的实验技术,自2008年以来被广泛用于HBV基因全长扩增及共价闭合环状DNA(cccDNA)耐药突变分析等研究。为了便于鸭乙型肝炎病毒(DHBV)cccDNA的分析,本研究建立了基于RCA的DHBV cccDNA的检测方法。通过针对DHBV高度保守序列设计的4对RCA硫化修饰引物,以血清DHBV DNA为阴性对照,从肝组织DHBV DNA标本中扩增得到DHBV cccDNA。然后用跨缺口引物扩增RCA产物测序替代限制性内切酶切分析进行DHBV cccDNA鉴定。应用该方法检测39份携带DHBV麻鸭肝组织与血清标本结果显示:全部肝组织标本均检出DHBV cccDNA,而全部血清标本则均无DHBV cccDNA检出,表明本研究建立的基于RCA的DHBV cccDNA检测法具有良好的特异性和灵敏性。该方法的建立为应用鸭乙型肝炎病毒动物模型研究cccDNA在病毒致病机制中的作用以及评价抗病毒疗效奠定了实验基础。(本文来源于《病毒学报》期刊2014年04期）
江军,徐文胜,陈仕祥,范平,缪晓辉[5]（2014）在《慢性乙型肝炎病毒感染者肝组织共价闭合环状DNA的研究》一文中研究指出目的探讨慢性乙肝病毒感染者肝组织HBV cccDNA与血清HBV DNA、肝组织总HBV DNA之间的相关性.方法应用实时荧光定量聚合酶链反应方法检测180例乙型肝炎感染者的血清、肝组织内DNA与肝组织中HBV cccDNA的定量。结果慢性乙肝病毒感染者血清HBV DNA、肝组织总HBV DNA与肝组织HBV cccDNA定量水平叁者之间的两两关系呈正相关(P<0.001);上述叁项指标在HBeAg(本文来源于《中华医学会第十叁次全国感染病学术会议论文汇编》期刊2014-06-13）
周龙,佘会元,王晓英[6]（2014）在《乙型肝炎病毒共价闭合环状DNA》一文中研究指出HBV共价闭合环状脱氧核糖核酸(cccDNA)是嗜肝DNA病毒基因组的复制中间体,是嗜肝DNA病毒部分基因的mRNA和前基因组RNA的合成模板,在HBV感染初期即能检测到,且长期存在于细胞核中。其在HBV复制过程中起着关键的作用,它的长期存在也是乙型病毒性肝炎慢性化的主要原因之一。HBV cccDNA肝细胞中持续感染及抗病毒治疗复发之间的关系受到广泛的关注与肯定,现就HBV cccDNA常用检测方法及其临床意义作一综述。一、HBV cccDNA形成及清除(一)HBV cccDNA的形成在感染初期,HBV侵入人的肝细胞后,在细胞质中脱去核壳后,HBV DNA进入细胞核内。HBV的基因组正链DNA在聚合酶作用下形成全长的松弛环状DNA即rcDNA(relaxed(本文来源于《肝脏》期刊2014年03期）
张咏梅[7]（2014）在《乙型肝炎病毒共价闭合环状DNA（HBV cccDNA）的甲基化及其调控HBV复制和基因表达的作用研究》一文中研究指出尽管乙肝疫苗已普遍接种,乙型肝炎病毒(HBV)感染仍是一个严重的公共卫生问题。HBV属于嗜肝DNA病毒,进入宿主肝细胞核后形成共价闭合环状DNA (cccDNA),以cccDNA为模板转录生成前基因组RNA(pre-genomic RNA, pg RNA)是HBV复制周期中的关键环节。HBV感染诱导宿主细胞上调甲基转移酶的表达,通过DNA甲基化调控HBV cccDNA的转录活性,为了进一步阐明DNA甲基化抑制病毒转录及复制的具体机制,我们开展了以下叁部分研究工作。在第一部分工作中,我们分析了176例基因型A-J的JHBV核苷酸序列中CpG岛(CpG island, CGI)的分布及各型之间的差异。通过MethPrimer软件分析发现HBV基因组有叁个CpG岛,存在被DNA甲基化修饰的基础。岛Ⅰ跨HBV S基因起始位点,岛Ⅱ紧邻核心启动子,和增强子Ⅰ、Ⅱ,与X基因启动子重迭,岛Ⅲ包含HBV P基因的起始位点以及S基因启动子sp1。并且作为DNA甲基化作用靶点的CpG双核苷酸在不同基因型HBV序列中的分布存在明显差异,部分基因型HBV岛Ⅰ缺失。基因型C、F、G、H和J基因型以2岛分布为主,A、B、D、E和I基因型以3岛分布为主。基因型B、C、D和H基因型中存在新的CGI。基因型C与基因型B的岛Ⅰ区域的GC含量存在显着差异。在第二部分工作中,我们分析了30例中国慢性乙型肝炎(CHB)患者肝组织中HBV cccDNA 3个CpG岛的甲基化分布情况。所有入选的患者均未接受过任何抗病毒治疗。通过亚硫酸氢盐转化方法处理肝组织中提取到的HBV cccDNA,PCR扩增病毒基因组中的3个CGI,基因测序分析其甲基化程度。本实验的分析结果显示CHB患者肝组织中的HBV cccDNA存在一定程度的甲基化。其中,岛I中CpG双双核苷酸的胞嘧啶极少发生甲基化,只在5例(18.5%)的患者中检测到少数位点发生甲基化。岛Ⅱ的甲基化与血清病毒载量存在良好的线性关系,低病毒复制组(Log10 copies/mL<5)的岛Ⅱ甲基化程度显着高于高复制组(Log10 copies/mL≥5),提示岛Ⅱ的甲基化抑制病毒复制,可能与核心启动子活性受抑有关。年龄也是岛Ⅱ发生甲基化的相关因素,年龄≥40岁患者的岛Ⅱ甲基化程度高于年龄<40岁组。此外,基因型C患者的岛Ⅱ甲基化程度高于基因型B组；HBeAg(-)患者岛Ⅱ甲基化程度高于HBeAg(+)组；肝脏纤维化分期为S3-4患者的岛Ⅱ甲基化程度高于纤维化分期S0-2组。我们的数据还发现,发生在岛Ⅲ的甲基化与血清低HBsAg滴度有关,推测与sp1启动子活性受抑有关。在第叁部分工作中,我们对体外研究HBV中单个CpG岛功能的方法进行了探索。目前仅有的HBV DNA甲基化体外研究方法是：采用DNA甲基转移酶体外对3.2kb HBV线性单体进行笼统的修饰后,转染肝癌细胞系HepG2后,用real-time方法检测病毒mRNA的转录水平,该方法明确了体外DNA甲基化抑制HBV病毒RNA的转录。但是,这种方法无法分析单个岛的功能,即不能明确DNA甲基化介导转录抑制的作用靶点。在本实验中,我们通过PCR方法分别扩增CpG岛(PCR产物不含甲基,而质粒有甲基化修饰),在体外对其进行甲基化修饰后,再与其互补DNA片段连接成完整的3.2kb HBV环状单体,体外转染HepG2细胞后,通过Northern blot和Southern blot分别检测乙肝病毒的转录和复制水平,发现岛Ⅱ甲基化的HBV单体的RNA转录水平以及病毒复制显着低于对照组,即岛Ⅱ甲基化参与HBV cccDNA转录活性的调控,与第二部分的实验结果也是一致的。此外,既往的观点认为,乙肝病毒的核心蛋白参与组成胞核内的病毒微染色体,通过改变染色体构象调节cccDNA的转录活性。本实验将核心蛋白正常表达或表达缺失的HBV线性单体转染HepG2细胞,检测发现其HBV RNA转录水平无显着差异,即在核心蛋白缺失的情况下,体外瞬时转染HBV线性单体,HepG2细胞中的cccDNA转录水平没有明显差别。(本文来源于《复旦大学》期刊2014-03-20）
李蕊,刘学恩,庄辉[8]（2014）在《石蜡包埋肝组织乙型肝炎病毒共价闭合环状DNA的检测及临床意义研究进展》一文中研究指出目前全世界约有3.5亿慢性乙型肝炎病毒(HBV)感染者[1],每年有约100万人死于乙型肝炎(乙肝)相关肝硬化或肝癌[2]。HBV感染者的临床表现多样化,病毒和疾病活动程度不一,但持续感染的主要原因是肝细胞核内HBV共价闭合环状DNA(covalently closed circular DNA,cccDNA)的存在。HBV cccDNA是HBV复制过程中的重要中间体,是HBV mRNA和前基因组RNA(pgRNA)的合成模板及病毒持续感染的关键因素[3-7]。HBV cccDNA半衰期长,不易降解,现有(本文来源于《中国病毒病杂志》期刊2014年01期）
钟少华,江建宁,苏明华,刘志红,谢榕[9]（2013）在《乙型肝炎病毒共价闭合环状DNA与松弛环状DNA变异对核苷(酸)类药物耐药和复发的研究》一文中研究指出目的了解CHB患者松弛环状DNA(rcDNA)和肝细胞内HBV共价闭合环状DNA(HBV cccDNA)变异的吻合情况,探讨其变异与耐药、复发关系。方法A组:NAs治疗发生耐药的CHB患者,耐药时收集血清和肝组织;B组:未抗病毒的CHB患者;C组:NAs治疗达2008年亚太指南停药标准停药患者,停药时收集肝组织。水煮法提取血清rcDNA;滚环扩增法提取肝细胞全长HBV cccDNA,用(本文来源于《中华医学会第十六次全国病毒性肝炎及肝病学术会议论文汇编》期刊2013-06-20）
陈姝,杨光,刘晓松,崔金环,吴祖常[10]（2012）在《靶向核定位序列siRNA对乙型肝炎病毒共价闭合环状DNA复制的抑制作用》一文中研究指出目的针对乙型肝炎病毒(HBV)核心蛋白羧基端核定位信号(NLS)区设计并化学合成2条小干扰RNA(siRNA),观察其对共价闭合环状DNA(HBV cccDNA)水平的影响。方法将siRNA转染可稳定分泌HBV颗粒的HepG2.2.15细胞,转染后72 h,采用ELISA方法检测上清液中HBsAg、HBeAg的含量,采用Real-time PCR定量检测细胞内cccDNA及细胞培养上清HBV DNA拷贝数。RT-PCR检测靶基因mRNA的抑制效果。结果靶向NLS区的2条siRNA均能不同程度地降低HepG2.2.15细胞cccDNA水平,抑制HBV DNA的复制及HBeAg的分泌,对cccDNA的抑制率分别为93.30%和85.00%(P<0.01),对HBV mRNA抑制率分别为62.80%和48.90%,对HBV DNA抑制率分别为76.56%和66.41%(P<0.01),对HBeAg抑制率分别为57.25%、43.48%(P<0.01)。而无关序列对HBV DNA与cccDNA的复制和HBeAg表达几乎无干扰作用。结论靶向HBV核心蛋白C末端核定位序列的siRNA可特异、高效、稳定地显着降低HBV cccDNA水平,抑制HBV DNA复制及HBeAg分泌,为应用RNA干扰治疗HBV感染奠定了一定基础。(本文来源于《广东医学》期刊2012年20期）
乙型肝炎病毒共价闭合环状论文开题报告
（1）论文研究背景及目的
此处内容要求：
首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景，再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题，并提出你的论文准备的观点或解决方法。
写法范例：
目的通过水动力法注射乙型肝炎病毒(HBV)共价闭合环状DNA(cccDNA)构建C57BL/6小鼠慢性乙型肝炎病毒感染的模型。方法取29只C57BL/6小鼠,分为实验组、对照组和空白组,应用水动力法分别注射HBV cccDNA、pAAV-HBV1.2及等渗盐水,于注射后收集不同时间点的血清和肝组织。利用放射免疫法检测血清样本中乙型肝炎病毒表面抗原(HBsAg)和乙型肝炎病毒e抗原(HBeAg);荧光定量PCR检测血清和肝组织中HBV DNA拷贝数;免疫组织化学法检测肝组织中HBsAg和乙型肝炎病毒核心抗原(HBc Ag)的表达;苏木精-伊红(HE)染色观察肝组织病理变化;使用SPSS 17.0对数据进行统计学分析。结果实验组HBsAg和HBeAg表达均呈现4个上升-下降曲线:HBsAg峰值分别出现在第3天、第3周、第7周和第9周;HBeAg峰值分别出现在第1天、第1周、第4周和第10周。对照组HBsAg和HBeAg表达分别呈现2个或3个明显的峰:HBsAg峰值分别出现在第3天和第8周;HBeAg峰值分别出现在第1天、第3周和第10周。空白组未检测出HBsAg和HBeAg。实验组HBV DNA拷贝数高于对照组的拷贝数(P<0.01);肝组织中HBV DNA拷贝数高于同期血清中的拷贝数(P<0.01);实验组和对照组的肝组织中均有HBsAg和HBc Ag的表达;实验组与对照组出现肝脏细胞炎症、肝细胞纤维化、肝细胞坏死等病理变化,而空白组正常。结论利用水动力法向C57BL/6小鼠体内转入HBV cccDNA,成功建立了慢性乙型肝炎病毒感染的小鼠模型,与对照组比较,新建立的小鼠乙肝模型具有更高的HBV表达,动物模型为研究乙型肝炎病毒HBV cccDNA的感染及其引起肝损伤的机制奠定了基础。
（2）本文研究方法
调查法：该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。
观察法：用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。
实验法：通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。
文献研究法：通过调查文献来获得资料，从而全面的、正确的了解掌握研究方法。
实证研究法：依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。
定性分析法：对研究对象进行“质”的方面的研究，这个方法需要计算的数据较少。
定量分析法：通过具体的数字，使人们对研究对象的认识进一步精确化。
跨学科研究法：运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。
功能分析法：这是社会科学用来分析社会现象的一种方法，从某一功能出发研究多个方面的影响。
模拟法：通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。
乙型肝炎病毒共价闭合环状论文参考文献
[1].李保胜,孙殿兴.乙型肝炎病毒共价闭合环状DNA在慢性乙型肝炎治疗中的分子生物学研究进展[J].世界华人消化杂志.2016
[2].严磊,赵婷婷,王会娟,李小松,黄爱龙.利用乙型肝炎病毒共价闭合环状DNA构建慢性乙型肝炎病毒感染的小鼠模型[J].四川动物.2015
[3].周冬青,刘成永,王骥,王春颖,张克球.环介导等温扩增(LAMP)试剂盒检测石蜡包埋肝组织中乙型肝炎病毒(HBV)共价闭合环状DNA(cccDNA)[J].复旦学报(医学版).2015
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[7].张咏梅.乙型肝炎病毒共价闭合环状DNA（HBVcccDNA）的甲基化及其调控HBV复制和基因表达的作用研究[D].复旦大学.2014
[8].李蕊,刘学恩,庄辉.石蜡包埋肝组织乙型肝炎病毒共价闭合环状DNA的检测及临床意义研究进展[J].中国病毒病杂志.2014
[9].钟少华,江建宁,苏明华,刘志红,谢榕.乙型肝炎病毒共价闭合环状DNA与松弛环状DNA变异对核苷(酸)类药物耐药和复发的研究[C].中华医学会第十六次全国病毒性肝炎及肝病学术会议论文汇编.2013
[10].陈姝,杨光,刘晓松,崔金环,吴祖常.靶向核定位序列siRNA对乙型肝炎病毒共价闭合环状DNA复制的抑制作用[J].广东医学.2012