王明星张永和李庆杰（长春中医药大学附属医院吉林长春130017）
【摘要】目的建立仙银参健脑片黄酮类成分的纯化工艺。方法以总黄酮含量为指标，筛选了仙银参健脑片的总黄酮的纯化工艺。结果其醇提物，上已处理好的AB-8大孔树脂后纯化效果最好，收率达到0.89%。结论该方法指标明确，操作合理，便于在生产中使用。
【关键词】仙银参健脑片总黄酮工艺研究
仙银参健脑片由淫羊藿、银杏叶、人参三味中药组成。主要用于治疗轻度认识障碍。淫羊藿为方中君药，银杏叶是臣药，佐药为人参。目前普遍认为黄酮类是淫羊藿，银杏叶的重要活性成分。现欲将淫羊藿及银杏叶二味药材以醇提方式制得粗提物，再以总黄酮为指标进一步筛选纯化工艺。
1仪器与试药
Lambda-25型紫外-可见分光光度计，芦丁对照品购于中国药品生物制品检定所，为含量测定用，批号：1521-2000201。聚酰胺（30-60目），AB-8大孔树脂（青岛海洋化工厂），D101大孔树脂（青岛海洋化工厂）。所用试剂均为分析纯。
2方法与结果
2.1上样液预处理条件的选择
淫羊藿、银杏叶60%乙醇提取后，有大量的色素、粘液质等物质，直接上柱，会使树脂污染严重，造成树脂柱死吸附严重，上样量少。所以必须将提取液预处理后方可上柱。经过多次实验对比，发现冷藏（40℃）放置过液后，过滤，滤液上柱，制得的总黄酮含量及收率均较好。
2.2柱层板分离工艺各分离参数选择
2.2.1层析柱类型的选择
我们在研究工作中，将聚酰胺及两种大孔树脂对黄酮化合物的分离效果进行对比，具体实验如下：
2.2.1.1对照品溶液的制备
精密称取在120℃减压干燥至恒重的芦丁对照品20mg，（实际为21.58mg）置100ml量瓶中，加60%乙醇70ml，置水浴上微热使溶解，放冷，加60%乙醇至刻度，摇匀，即得（每1ml中含无水芦丁0.2158mg）。
2.2.1.2供试品溶液的制备
按最佳工艺方法制备提取液（每1ml含总生药约0.5g），精密吸取100ml共三份，分别上已处理好的层板柱，分别用水及30%乙醇洗脱，至洗脱液无色，再以60%乙醇洗脱，至洗脱液淡黄色，收集洗脱液，适量浓缩，置100ml量瓶中，加60%乙醇至刻度。精密吸取5ml，蒸干，残渣加60%乙醇定容至25ml量瓶中。分别精密量取0.5ml，测定其总黄酮含量，结果见1。
2.2.1.3标准曲线的制备
精密量取对照品溶液0ml、1.0ml、2.0ml、3.0ml、4.0ml、5.0ml与6.0ml,分别置25ml量瓶中，各加60%乙醇至6ml,加5％亚硝酸钠溶液1ml,使混匀，放置6分钟，加10％硝酸铝溶液1ml,摇匀，放置6分钟，加氢氧化钠试液10ml，再加60%乙醇至刻度，摇匀，放置15分钟，以对照品溶液0ml为空白照分光光度法（附录ⅤB），在500nm的波长处测定吸收度，以吸收度为纵坐标，浓度为横坐标，绘制标准曲线。测定数据见表1，图1。
2.1.1.4样品测定
精密量取供试品溶液适量，置25ml量瓶中，照标准曲线的制备方法，自“加60%乙醇至6ml”起依法操作，测定吸光度，从标准曲线上读出供品溶液中芦丁的含量，计算。结果见表2。
表2不同类型树脂对总黄酮纯度影响
由表可知，AB-8大孔树脂对黄酮类成分分离效果最好，总黄酮含量最高。故选择AB-8分离银黄酮。
3讨论
本文重点介绍了仙银参健脑片中淫羊藿及银杏叶醇提物以总黄酮为指标的纯化方法，经多种总黄酮含量测定方法比较，采用亚硝酸钠-硝酸铝比色法测定样品中总黄酮含量，该方法准确度好，灵敏度高，可行性强。
参考文献
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