南华大学儿科学院（湖南省儿童医院）湖南长沙410007
摘要：支气管镜肺泡灌洗在儿童肺部疾病已广泛应用，收集肺泡灌洗液分析细胞成分，随着分析技术发展，支气管肺泡灌洗液蛋白质和基因研究兴起，促进了解小儿呼吸系统疾病的发病机制、探索疾病相关新生物标志物、为疾病的治疗提供有效指导。本文就支气管肺泡灌洗液细胞学、蛋白学、基因学方面研究作一综述。
关键词：支气管肺泡灌洗，细胞，蛋白质，基因
1、支气管肺泡灌洗
自1974年Reynolds和Newball[1]首次报道支气管肺泡灌洗（BAL）以来，BAL临床应用越来越广泛。BAL最初在动物模型中作为一种获取呼吸道分泌物的方法，后来用于肺部疾病的临床研究。支气管肺泡灌洗文献报道集中在成人及BAL技术和执行过程方面，有关儿童支气管肺泡灌洗文献相对缺乏。小儿纤维支气管镜和BAL是一种安全可耐受的操作，支气管肺泡灌洗液（BALF）通过行支气管镜获取，在镇静和局麻下执行，灌洗肺段的选择目前主要根据胸片或者胸部CT的肺部改变情况，经口或鼻插入纤支镜，嵌于目的肺段后，注入温（37℃）无菌生理盐水，以3.33~13.3kPa压力用注射器回抽或机械吸引入无菌容器中，灌洗液分三等份，第一份用于培养，另外两等份用于细胞和非细胞成分研究[2]。支气管肺泡灌洗液获取后立即用无菌纱布过滤去除粘液，离心后BALF的上清液用于蛋白质或核酸研究，沉淀用于细胞学分析，上清液冻存在-80℃冰箱以后进行分析，应避免降解[3]。
2.支气管肺泡灌洗液细胞研究
支气管肺泡灌洗液细胞计数常用涂片检查或自动化流式细胞分析仪计数。部分细胞采用特殊染色或技术分析，脂酶染色区分淋巴细胞和幼稚巨噬细胞；淋巴细胞使用免疫荧光标记单克隆抗体、流式细胞计数和多克隆性评估。健康人BALF中巨噬细胞占80%-90%，淋巴细胞占5%-15%，中性粒细胞占3%，噬酸性粒细胞仅占1%[2]；肺部疾病可导致细胞亚型所占比例变化。淋巴细胞>50%提示过敏性肺炎或非特异性间质性肺炎，淋巴细胞>25%提示肉芽肿疾病如结节病、淋巴细胞性间质性肺炎或淋巴瘤；嗜中性粒细胞>50%高度提示肺炎、肺脓肿或急性呼吸窘迫综合症；BAL中性粒细胞增高可见于囊性纤维化、哮喘、麻疹、闭塞性细支气管炎[4]，嗜酸性粒细胞>25%提示嗜酸性粒细胞肺疾病尤其是急性嗜酸细胞性肺炎，特发性肺纤维化患者的BAL中嗜酸性粒细胞升高提示病情更严重和预后较差，BALF出现红细胞提示肺出血。鳞状上皮细胞表明BALF被口咽分泌物污染，反映纤维支气管镜的操作者缺乏经验或吸入气道分泌物。
4、支气管肺泡灌洗液蛋白质研究
双向凝胶电泳技术、多维液相色谱技术、质谱技术、蛋白质芯片技术广泛用于蛋白质研究，这使研究蛋白质组成为可能，评估基因表达功能性和了解蛋白质表达和修饰。支气管肺泡灌洗液中约411种蛋白质，如血清分子、炎性蛋白、表面活性剂等，不同蛋白质在疾病发生和发展过程中起着直接或间接地作用。间质性肺疾病中，由于肺部疾病的慢性炎症导致BAL中蛋白升高；间质性肺疾病患儿研究发现BAL中单核细胞趋化蛋白-1及其受体CCR2比健康儿童显著升高。儿童慢性哮喘可出现慢性气道炎症和气道重塑，HaukPJ等对18名慢性哮喘和持续性喘息患者BAL进行研究，发现BALF中脂多糖、白细胞介素-8、MMP-9、TIMP-1水平增加，这些有助于触发气道炎症和早期气道重塑[5]。蛋白质中有关肺表面活性物质的研究被受青睐，肺表面活性物质由特定的磷酸和表面活性蛋白组成，在肺疾病中BAL的表面活性蛋白对于肺上皮细胞功能的改变能提供重要信息；在囊性纤维化患者由于渐进的气道炎症和小气道功能丧失使表面活性物质功能损伤，表面活性物质功能与其疾病程度呈负相关。
5、支气管肺泡灌洗液基因研究
支气管肺泡灌洗液细胞基因表达研究在小儿呼吸道疾病有报道，通常核苷酸序列分析检查各种感染性病原体是有用的，具有高度灵敏性和特异性分子技术如聚合酶链反应和杂交可识别细菌、分枝杆菌、真菌、衣原体、支原体、病毒；但真菌用聚合酶链反应检查价值没有达成共识，由于没有发展为真菌相关疾病可出现阳性反应。重症呼吸道合胞病毒细支气管炎婴儿可从BALF中性粒细胞中检测到呼吸道合胞病毒的蛋白质和mRNA转录物即RSVNmRNA，健康的婴儿不能检测到[6]。哮喘儿童中通过聚合酶链反应可检查肺炎支原体和衣原体，肺炎衣原体阳性患者表现出高浓度IL-8，通过诱导IL-8有助于控制效果不佳的哮喘。
随着分子生物技术发展，支气管肺泡灌洗液的细胞、蛋白质及基因方面有待研究，从而了解儿童肺部疾病发病机制，对疾病早期干预治疗。
参考文献：
[1]ReynoldsHY，NewballHH.Analysisofproteinsandrespiratorycellsobtainedfromhumanlungsbybronchiallavage[J].JLabClinMed，1974，84（4）：559-573.
[2]deBlicJ，MidullaF，BarbatoA，etal.Bronchoalveolarlavageinchildren.ERST-askForceonbronchoalveolarlavageinchildren.EuropeanRespiratorySociety[J].EurRespirJ，2000，15（1）：217-231.
[3]WiktorowiczJE，JamaluddinM.Proteomicanalysisoftheasthmaticairway[J].AdvExpMedBiol，2014，795：221-232.
[4]KohYY，JungDE，KohJY，etal.Bronchoalveolarcellularityandinterleukin-8levelsinmeaslesbronchiolitisobliterans[J].Chest，2007，131（5）：1454-1460.
[5]HaukPJ，KrawiecM，MurphyJ，etal.Neutrophilicairwayinflammationandassociationwithbacteriallipopolysaccharideinchildrenwithasthmaandwheezing[J].PediatrPulmonol，2008，43（9）：916-923.
[6]HalfhideCP，FlanaganBF，BreareySP，etal.Respiratorysyncytialvirusbindsandundergoestranscriptioninneutrophilsfromthebloodandairwaysofinfantswithseverebronchiolitis[J].JInfectDis，2011，204（3）：451-458.
作者单位：410007湖南省长沙市，南华大学儿科学院