导读:本文包含了长期不进展论文开题报告文献综述及选题提纲参考文献,主要关键词:人类免疫缺陷病毒-1,长期不进展者,基因型,中和活性抗体
长期不进展论文文献综述
陈敏,戴洁,傅莉莉,陈会超,董莉娟[1](2019)在《云南省142例HIV-1感染长期不进展者的病毒学和中和活性抗体分析》一文中研究指出目的分析云南省HIV-1感染长期不进展者中HIV-1基因型的分布特征,探索中和活性抗体产生的相关因素。方法 2016年收集云南省报告8年以上、CD4+T淋巴细胞计数>500个/μl的HIV-1感染者142例,进行病毒基因扩增和分型,通过假病毒中和实验对样品的中和活性进行分析。结果研究对象诊断为HIV-1感染的年限为8~24年,以静脉注射吸毒感染为主(71.1%,101/142)。研究对象中检测到9种HIV-1基因分型,其中主要的为CRF08_BC(74.6%,94/126)和CRF07_BC(11.1%, 14/126)。HIV-1基因型的分布在人口学特征方面无统计学差异。以中和抑制率大于50%为具有中和活性的判断标准,142份样品中,对BC重组假病毒(CNE15)有中和活性的样品的比例(59.2%,84/142)分别大于对CRF01_AE(CNE5)和B亚型(CNE11)假病毒有中和活性的样品的比例(28.9%,41/142,χ2=26.421,P<0.001;45.8%,65/142,χ2=5.097,P=0.032)。按对3种假病毒中和抑制率均大于50%的标准筛选到具有交叉中和活性的样品22个,这22个样品在病毒载量从低到高的分组中的比例相应增加(trendχ2=4.455,P=0.041)。结论云南省HIV-1感染长期不进展者中HIV-1基因型复杂,存在不同活性的中和抗体,抗体中和活性具有HIV-1基因型的特异性,而高病毒载量与中和抗体的强度和中和谱具有相关性。(本文来源于《现代预防医学》期刊2019年12期)
陈荣凤[2](2019)在《HIV-1感染长期不进展者全转录组测序分析以及关键天然免疫通路激活水平研究》一文中研究指出背景及目的HIV-1感染长期不进展者(Long term non-progressors,LTNPs)是能天然控制HIV、维持宿主良好免疫的一类特殊人群,其机制与病毒、宿主遗传特征、免疫应答等多种因素有关,但天然免疫激活水平与长期不进展的关系尚未明确。本研究基于全转录组测序展示HIV-1感染长期不进展者和典型进展者的mRNA和非编码RNA表达谱,通过功能富集分析和ceRNA调控网络分析,从全转录水平分析mRNA和编码RNA在HIV-1感染长期不进展中的作用,并基于测序结果,在人群水平深入探讨关键天然免疫信号通路的激活水平与HIV-1感染长期不进展的关系。方法1.转录组测序及差异表达分析:选取3例HIV-1感染长期不进展者和3例典型进展者,采集静脉血,分离PBMC并提取总RNA,构建cDNA文库并进行高通量测序。经过数据过滤和注释,获得mRNA、lncRNA、small RNA和circRNA的表达量并进行差异表达分析。2.功能富集分析:对差异表达的mRNA进行PPI互作网络分析、GO功能富集分析和KEGG通路富集分析。对差异表达lncRNA、small RNA和circRNA进行靶基因预测,对靶基因进行GO功能富集分析和KEGG通路富集分析。3.ceRNA网络构建:根据靶基因预测结果,对具有靶向关系的差异lncRNA、miRNA、mRNA进行共表达分析,表达量呈负相关的miRNA-mRNA对、miRNA-lncRNA对,经过超几何分布检验筛选lncRNA-miRNAmRNA互作关系,构建lncRNA-miRNA-mRNA互作网络。以同样的方法构建circRNA-miRNA-mRNA互作网络。4.NOD样受体信号通路激活水平检测:招募HIV-1感染长期不进展者(LTNPs组)、典型进展者(TPs组)、抗病毒治疗患者(ART组)和健康对照者(HC组),采集静脉血,分离PBMC。使用PCR检测NOD样受体信号通路中NLRP3、IL-1β和caspase-1的mRNA表达水平,采用流式细胞术检测各组人群caspase-1即细胞焦亡发生水平,ELISA检测血浆中caspase-1、IL-1β含量。5.胞内DNA识别信号通路激活水平检测:PCR检测NOD样受体信号通路cGAS、IFI16等因子的mRNA表达,Western Blot检测IFI16、STING蛋白表达水平。结果1.差异表达mRNA及其功能:与典型进展者相比,长期不进展者中差异表达的mRNA有543个,其中上调的mRNA 205个,下调338个。GO富集显示差异表达mRNA主要富集在胞内过程、细胞组分、催化活性等二级GO条目。KEGG富集分析显示,差异表达mRNA主要富集在胞内DNA识别通路、NOD样受体信号通路和TNF信号通路等天然免疫相关信号通路。2.差异表达lncRNA及功能:共发现1297个差异表达lncRNA,长期不进展者中上调的lncRNA 1108个,下调的lncRNA 189个,其中负调控宿主抗病毒应答的lncRNA-NRAV在LTNP组表达下调。3.差异表达small RNA、circRNA及其功能:两组间差异表达的small RNA有45个,已有功能报道的miRNA有8个。两组间差异表达的circRNA155个,均为本次研究新预测的circRNA,其中circRNA 090的来源基因为NLRP3。4.lncRNA-miRNA-mRNA互作网络包含14个miRNA、16个lncRNA和64个mRNA构成的100对互作关系,circRNA-miRNA-mRNA包含17个miRNA、34个circRNA和71个mRNA构成的142对互作关系。T细胞专向分化相关的转录因子TCF7均处于以上两个互作网络中。5.NOD样受体信号通路激活水平:LTNPs组、TPs组、ART组和HC组四组人群NOD信号通路中NLRP3的mRNA表达量分别为4.14±3.76、1.90±1.57、2.60±2.73、1.33±1.23,差异具有统计学意义(F=3.202,P=0.030),LTNPs组表达量高于TPs组(t=2.542,P=0.015)。在NLRP3诱导的细胞焦亡发生水平方面,四组人群外周血PBMC发生焦亡的水平均较低,caspase-1阳性细胞比例差异无统计学意义(F=0.529,P=0.672)。同样,血浆的caspase-1含量也未在各组发现统计学差异(F=0.852,P=0.475)。在通路下游炎症因子方面,四组人群IL-1β的mRNA表达量和蛋白表达量差异均无统计学意义(P>0.05)。6.胞内DNA识别信号通路激活水平:四组人群胞内DNA识别信号通路中,模式识别受体cGAS和IFI16的mRNA表达水平在各组间的差异均有统计学意义(P<0.01),并且LTNPs组均低于TPs组(P<0.01);通路关键中间因子STING和TBK1的mRNA表达水平呈现同样的趋势,LTNPs组均低于低于TPs组(P=0.024);进一步在蛋白水平发现,LTNPs组和TPs组IFI16蛋白相对表达量分别为0.19±0.08、0.54±0.19,LTNPs组低于TPs组,差异有统计学意义(t=2.908,P=0.044);而STING在LTNPs组和TPs组的蛋白相对表达也存在显着差异(t=3.015,P=0.039),平均值分别为1.85±0.73、3.37±0.47,LTNP组低于TP组。结论1.HIV感染长期不进展人群和典型进展人群的mRNA、lncRNA、miRNA和circRNA表达谱存在较大的差异,富集到多条天然免疫通路可能与HIV长期不进展相关,而非编码RNA可能通过ceRNA机制调控天然免疫通路中关键因子mRNA的表达。2.在HIV感染长期不进展者人群中,未发现NOD样受体信号通路的激活,但胞内DNA识别信号通路的cGAS/IFI16-STING的激活水平明显被抑制,这可能是该人群的疾病不进展的原因之一。(本文来源于《广西医科大学》期刊2019-05-01)
殷林波[3](2019)在《HIV感染长期不进展低病毒复制者中miRNA对外周血CD8~+T细胞功能的调控研究》一文中研究指出目的:获得性免疫缺陷综合症(Acquired Immune Deficiency Syndrome,AIDS)是由人类免疫缺陷病毒(Human Immunodeficiency Virus,HIV)引起的一种传染性疾病,虽然抗逆转录病毒治疗(ART)的出现大大降低了HIV感染者的发病率和死亡率,然而抗逆转录病毒治疗却不能完全治愈HIV感染患者,一旦停药,病毒会迅速反弹。HIV感染后,不同个体疾病进程呈现明显的不均一性。具有非典型疾病进展的HIV感染患者特别重要,因为它们可以为HIV发病机理和治疗方案的研究提供重要的信息,因此这些非典型疾病进展的患者也是我们研究的重点。在1993年报告了长期非进展者(LTNPs)的第一个证据,有约15%的HIV感染者能够在未接受抗病毒治疗室维持CD4计数大于500个cells/u L以上[1,2].。2005年,研究表明,大约1/300的HIV感染患者在没有抗逆转录病毒治疗(ART)的情况下在血浆中检测不到HIV病毒载量[3]。2007年,一些患者被描述为“精英控制者”(EC),他们在没有抗逆转录病毒治疗的情况下将HIV病毒载量维持在50拷贝/ml以下至少1年[4-8]。虽然这部分患者数量很少,但这些患者能够很好的维持自身免疫功能,对抗病毒的有效复制,其中的具体机制值得我们去研究和探索。尽管从定义上看,LTNPs和ECs之间存在重迭,但它们并不相同。一些LTNPs虽然能够在未接受抗病毒治疗的情况下较好的维持CD4细胞的计数,但仍然正在进行病毒复制,而另一些LTNPs则没有[3,5,7,9-11]。LTNPs对病毒的控制水平不尽相同,导致这种差异的原因目前尚不清楚。以往研究报道指出与HIV阴性个体相比,维持高病毒载量的LTNPs在后期易于长期疾病进展,CD4 T细胞水平降低,病毒水平大幅度提高并且其预期寿命降低[12,13].。分析LTNPs中不同水平的病毒控制的潜在原因可能有助于理解HIV发病机制,并可能提供免疫干预的新方法。病毒控制水平多种因素的影响,包括受免疫和病毒学等。mi RNA虽然是一种小分子的非编码RNA,但由于在细胞内的表达丰度较高,种类繁多,学者们已经发现了超过1500多种不同的mi RNA,其能够通过与靶基因的m RNA特异性结合,参与调控机体内复杂的生理活动。在HIV感染的各个过程中,HIV病毒的进入、整合、逆转录等过程中是否受到一些宿主mi RNA的调节,HIV本身是否可以产生特异性的mi RNA影响宿主以及其它细胞的存活以及功能,还有两者之间是以如何形式相互影响的相关机制尚不明确,因此mi RNA与HIV-1的之间的相互关系是学者们的研究热点。通过相关的研究发现HIV-1感染后宿主的mi RNA表达谱会发生明显改变,这为我们研究HIV感染调控机制提供重要的信息,值得我们做进一步的深入研究。相关研究已经表明mi RNA在免疫应答和病毒产生的过程中发挥着重要的调节作用,在HIV感染中,mi RNA可以通过靶向HIV-1基因组或通过调控宿主靶基因来影响抗病毒细胞因子的释放来调控病毒的产生[14-18]。micro RNAs(mi RNAs)作为的小分子非编码RNA,能够参与多种基因的转录及转录后的调控,对于mi RNAs与HIV之间的相互调控关系的研究,可以为我们提供关于HIV感染后机体的复杂的调控机制提供很多重要的信息,有利于我更好的了解HIV感染的发病机制[19]。大量的研究报告指出,细胞内源性mi RNA表达水平的改变对HIV病毒的复制过程中发挥着重要的作用,并且细胞的耗竭能够影响了内源性mi RNA对靶基因的调控作用[20][21]。研究表明,mi RNAs对于相关细胞因子的产生也会产生复杂的调控作用[22]。在HIV感染后,mi RNA调节细胞因子如白介素2(IL-2)和白介素10(IL-10)的表达,IL-2和IL-10是机体重要的免疫调节因子,因此mi RNA能够通过调控细胞因子来参与调控机体的免疫功能[23,24]。对免疫细胞的发育和功能方面,学者们也进行了大量的相关mi RNA的研究,包括CD8 T细胞,它是抗病毒免疫反应的关键参与者[25,26]。在HIV感染过程中,CD8 T细胞发挥重要的作用,其能够有效增殖来进行CTL应答或者分泌相关抗病毒细胞因子IFN-r、GRanzyan B等发挥抗病毒作用。前人的研究报道指出mi RNA参与调节CD8 T细胞的发育、分化和发挥功能所需的许多调节蛋白的表达。在本研究中,我们分析了HIV感染长期不进展不同病毒控制水平的患者PBMC中mi RNA表达情况以及差异性的mi RNA对CD8 T细胞相关免疫功能的影响及其作用机制。研究方法:1研究对象:论文第一部分收集27例HIV感染长期不进展者(Long-term non-progressors,LTNPs)、6例典型进展者(Typical Progressors,TP)和4例健康对照(Healthy Control,HC)。筛查组用9例LTNPs、6例TPs和4例HCs的PBMC进行Mi RNA的筛查,验证组新纳入18例LTNPs对筛查组筛查出来的mi RNA进行验证论文第二部分共收集27例健康对照(HCs)。采用ficoll密度梯度离心法分离外周血单个核细胞(Peripheral blood mononuclear cells,PBMCs),磁珠法负选PBMC中的CD8 T细胞,经过流式检测,CD8 T细胞的纯度大于98%。论文第叁部分共收集7例HIV感染未接受抗病毒治疗的患者。采用ficoll密度梯度离心法分离外周血单个核细胞(Peripheral blood mononuclear cells,PBMCs)。磁珠法负选PBMC中的CD8 T细胞,经过流式检测,CD8 T细胞的纯度大于98%。ELISPOT实验的标本,磁珠法去除PBMC中的CD4 T细胞,经过流式检测,CD4 T细胞的纯度小于3%。病毒体外感染实验的标本,磁珠法负选PBMC中的CD4 T细胞,经过流式检测,CD4 T细胞的纯度大于98%2 mi RNA筛查阵列分析基于q RT-PCR的高通量mi RNA谱分析在Quanto Bio Biotechnology Co.Ltd公司(中国北京)进行。首先,使用TRIZOL(Invitrogen,Carlsbad,USA)分离从外周血单核细胞(PBMC)提取的总RNA。然后使用大肠杆菌poly(A)聚合酶将腺嘌呤添加到缺少poly(A)尾的RNA分子的3'末端,逆转录酶Superscript ⅡⅠ(Invitrogen)在c DNA合成期间将通用标签连接到c DNA的3'末端。使用这种通用标签,使用mi RNA特异性正向引物和反向通用引物混合物进行q RT-PCR,U1和U6作为内参,用-CT的变化用作相对定性值。。3外周血单核细胞亚群分选密度梯度离心法提取外周血单个核细胞(PBMC),分别不同荧光抗体标记的CD3(FITC)、CD4(APC)、CD8(APC-CY7)、CD14(PE-CY7)、7-AAD(PERCP),4℃避光染色30min,取出离心洗涤细胞,弃上清,使用流式细胞仪FACS AriaTM(美国BD公司)进行单核细胞亚群分选。4逆转录和荧光实时定量PCR总RNA提取采用RNeasy Micro kit(Qiagen),为防止基因组DNA污染,提取后的RNA采用DNase Ⅰ进行纯化。逆转录试剂Primpscript?RT reagent kit(TAKARA)将RNA逆转录。检测mi RNA相对表达量的实时荧光定量PCR采用SYBR?Premix Ex Taq?Ⅱ(TAKARA)。mi RNA相对表达量内参基因为small nucleolar RNA(sn RU6),m RNA内参基因为GAPDH。mi RNA和m RNA相对表达量的计算采用2~(-ΔΔCt)法5原代细胞的分离和Jurkat细胞的培养提取全血的PBMC,采用磁珠法负选PBMC中的CD8 T细胞,经过流式检测,CD8 T细胞的纯度大于98%。CD8细胞和Jurkat细胞株培养于含有10%FBS和1%PS的RPMI 1640(Hy Clone)中。为了检测CD8细胞的增殖、凋亡和胞内细胞因子,用CD3/28刺激,浓度为3ug/m L。6转染mi RNA mimics、inhibitor将mi RNA的mimics或inhibitor(20μM)和阴性对照(control)(上海Gene Pharma公司)用Hi Per Fect转染试剂(Qiagen公司)转染至Jurkat细胞,原代CD8T细胞用RNAi MAX(Invitrogen)进行转染。收集细胞用于流式检测和mi RNA的提取、检测。7转染si RNA-PTEN经负选得到CD8 T细胞后,PTEN的敲除采用si RNA-PTEN(20μM,Invitrogen),cs/control,转染试剂为RNAi MAX(Invitrogen),孵育6h后加CD3/28刺激,收集细胞流式检查。si RNA阴性对照为非特异性Stealth RNAi?Negative Control Duplexes8增殖试验转染(24小时)后,用Cell Trace TM Violet(Thermo Fisher Scientific,Waltham,USA)在37℃下标记Jurkat细胞和原代CD8 T细胞15分钟,用完全培养基洗涤。在抗CD3/CD28(3μg/ml;Gibco,New York,NY,USA)存在下培养原代CD8 T细胞,孵育5天后,使用BD LSR Ⅱ流式细胞仪和Flow Jo软件分析分裂细胞。9检测细胞凋亡转染(72小时)后,用PE-Annexin V和7-AAD(Biolegend)染色Jurkat细胞。转染后(24小时),使用抗CD3/CD28(3μg/ml)刺激原代CD8 T细胞,刺激(48小时)后,用PE-cy7-CD3,APC-cy7-CD8,PE-Annexin V和7-AAD(Biolegend)对CD8 T细胞染色。使用BD LSR Ⅱ流式细胞仪和Flow Jo软件分析细胞。10细胞周期测定使用BD Cycletest TM Plus DNA试剂盒(BD Biosciences)根据制造商提供的说明书测定细胞周期阶段。简而言之,转染后将Jurkat细胞培养72小时。转染后(24小时),使用抗CD3/CD28(3μg/ml)在刺激下培养原代CD8 T细胞48小时。使用BD LSR Ⅱ流式细胞仪测定DNA含量的分布,并使用Flow Jo软件进行分析。11 IFN-γ和颗粒酶B的细胞内染色转染后(24小时),使用抗CD3/CD28(3μg/ml)刺激原代CD8 T细胞24小时。流式检测前6小时,将蛋白质转运抑制剂(Golgi Stop;1μl/ml,BD Biosciences)加入培养物中。用PE-cy7-CD3和APC-cy7-CD8(Biolegend)对细胞染色。随后,通过在1X Perm/Wash缓冲液中在黑暗中孵育细胞15分钟,然后在4℃下与APC-IFN-γ和FITC-Granzyme B孵育30分钟来进行细胞内染色。染色后,将细胞固定在1%甲醛中。使用BD LSR Ⅱ流式细胞仪测定IFN-γ和颗粒酶B的细胞内表达,并使用Flow Jo软件分析数据。12 IFN-γELISPOT测定如制造商提供的说明书中所述,使用抗CD4 MAb包被的磁珠(Biolegend)从PBMC中去除CD4+T细胞。根据说明书,使用人IFN-γELISpot试剂盒(Mabtech,Nacka,Sweden)检测IFN-γ的分泌。转染后(24小时),每孔加入2×105个CD4+T细胞耗尽的PBMC(一式两份),体积为200μl。加入HIV-1 gag肽库(10μg/ml,Sigma)20小时。抗CD3/CD28(3μg/ml)用作阳性对照,阴性对照由无刺激的细胞组成。通过减去阴性对照(仅培养基)值计算IFN-γ分泌细胞的数量。阳性反应定义为>50个斑点形成单位/106个PBMC。13体外感染通过用HIV-1 p NL4-3质粒和水泡性口炎病毒糖蛋白质粒(VSV-G)转染293T细胞产生病毒颗粒。将mi R-19b mimcs,p NL4-3质粒和VSV-G质粒转染到293T细胞中以检测mi R-19对HIV产生的影响。2天后,通过ELISA(河北医科大学生物医学工程中心,河北,中国)测量上清液中p24的水平。对于Clone-X细胞的感染,用mi R-19b mimcs转染细胞24小时,随后用VSV-G假型HIV-1(NL4-3)病毒感染。感染后48小时通过流式细胞术检测GFP阳性细胞的表达。使用具有复制能力的HIV-1病毒测试mi R-19b在原代CD4 T细胞中的作用。用mi R-19b mimcs或对照转染来自健康对照的分离的原代CD4 T细胞。转染后(24小时),使用抗CD3/CD28(3μg/ml)刺激细胞。冷冻保存的初级HIV-1分离物(通过使用来自HIV-1感染的患者和健康供体的混合PBMC的共培养获得)被解冻并添加到细胞中。感染3天后收集上清液,通过ELISA测量上清液中p24的水平14统计分析主成分分析(Principal component analysis,PCA,Origin 9.1软件)分析具有不同疾病进展的HIV感染患者中mi RNA的分布。非参数Mann-Whitney检验用于确定LTNP-Hs和LTNP-Ls之间差异的mi RNA。配对t检验用于分析组间细胞功能的差异。使用SPSS 21.0和Graph Pad Prism Version 5.0软件包进行数据分析,P<0.05认为有统计学差异。结果:1.mi RNA表达谱将HIV感染长期不进展者分为两组对15例HIV感染者(9 LTNPs,6 TPs)和4例健康人的PBMC标本进行mi RNA表达谱(347个mi RNA)的分析,比较mi RNA在各组中的表达情况。对mi RNA表达的结果进行PCA分析,发现9例LTNPs、6例TPs和4例HCs能够明显的分为A、B两组。TPs与HCs分区较明显,所有的HCs都在B组中,绝大部分的TPs集中在A组中。而对于LTNPs,有6例集中在A组中,与TPs交互在一起,表明其mi RNA表达谱与TPs相近;而其它3例则集中在B组中表明其mi RNA表达谱与HCs相近。A、B两组中的LTNPs的病毒载量间有明显差异(P=0.024)。2.LTNP-Ls与LTNP-Hs之间差异性表达的mi RNA对mi RNA表达谱进行分析,按adj.P<0.05(adj.P,Benjamini-Hochberg FDR矫正后的P值)并且Fold Change>2的标准来分析在LTNP-Ls与LTNP-Hs间差异表达的mi RNA,发现有78个mi RNA符合标准,其中有55个mi RNA表达上调,23个mi RNA表达下调(见附表1),无监督的聚类分析发现,这78个mi RNA能够很好的区分LTNP-Ls与LTNP-Hs。为了排除由于HIV感染以及感染时间的不同导致的mi RNA表达差异,我们排除了LTNPs分别与HCs和TPs差异性表达的75个mi RNA(P<0.05,Fold Change>2)。在排除LTNPs分别与HCs和TPs差异的mi RNA后,只留下了3个mi RNA,分别是mi R-15a、mi R-19b和mi R-33。根据筛查结果,我们比较了mi R-15a、mi R-19b和mi R-33在LTNP-Ls与LTNP-Hs之间的表达情况,发现mi R-15a(adj.P=0.024)、mi R-19b(adj.P=0.048)和mi R-33(adj.P=0.024)均在LTNP-Ls的PBMC中高表达3.mi R-19b在LTNP-Ls中高表达为了进一步的验证在LTNP-Hs与LTNP-Ls组件差异性表达的mi RNA,我们又选取了18例符合标准的LTNPs标本,其中,10例为LTNP-Hs,8例为LTNP-Ls,。通过提取PBMC中的RNA,逆转录并q RT-PCR分析mi RNA分别在LTNP-Hs与LTNP-Ls中mi R-19b、mi R-15a和mi R-33的表达情况。相对定量分析发现,与LTNP-Hs相比,mi R-19b在LTNP-Ls中高表达(P=0.034),而mi R-15a与mi R-33在两组间没有差异。筛查与验证结果表明,mi R-19b在LTNP-Ls中特异性高表达。4.mi R-19b在LTNP-Ls的CD4和CD8细胞中高表达前期实验结果均是在PBMC的水平上进行检测的,而PBMC的成分比较复杂,包含了淋巴细胞、单核细胞等,。为了进一步明确mi R-19b在细胞亚群中表达情况。用流式的方法将LTNPs的PBMC进行分选,分得CD4 T淋巴细胞、CD8 T淋巴细胞以及单核细胞。q RT-PCR检测mi R-19b在这叁个细胞亚群中的表达情况,发现mi R-19b在LTNP-Ls的CD4(P=0.041)和CD8(P=0.028)中显着高于LTNP-Hs,而在单核细胞中,LTNP-Hs与LTNP-Ls间没有统计学差异,见图4。结果表明,mi R-19b主要是在LTNP-Ls的淋巴细胞中高表达。5.mi R-19b在Jurkat细胞系中对细胞增殖、凋亡及细胞周期的影响用转染试剂将mi R-19b mimcs转染入Jurkat T细胞系中高表达mi R-19b,分析其对细胞增殖的影响,转染5天后,流式细胞仪检测细胞表面Celltrace TM Violet平均荧光强度,结果发现,高表达mi R-19b的Jurkat细胞Celltrace TM Violet平均荧光强度显着低于对照组(P=0.013),说明mi R-19b的高表达能够促进细胞的增殖。转染2天后,流式细胞仪检测,发现mi R-19b能够促进G2/M的表达(P=0.033),说明mi R-19b的高表达能够促进细胞的周期。转染2天后,细胞染色7-AAD和Annexin V,流式检测细胞凋亡,发现mi R-19b能够抑制Jurkat细胞的早起凋亡(P=0.005)。6.mi R-19b调控CD8细胞功能为了检测mi R-19b对CD8细胞增殖的影响,在转染mi R-19b mimcs后加入CD3/28刺激,刺激浓度为3ug/m L,培养5天后流式检测,结果表明mi R-19b的上调促进对CD8细胞的增殖(P=0.010)。培养2天后流式检测,发现mi R-19b的上调抑制CD8细胞的早期凋亡(P=0.009)。为了研究mi R-19b对CD8细胞胞内IFN-γ和Granzyme B的调控作用,在转染mi R-19b mimcs后加入CD3/28刺激,培养24小时后流式检测,在检测前6小时加入胞内蛋白转运抑制剂(Golgi Stop),流式结果表明mi R-19b的上调能够显着促进对CD8细胞IFN-γ(P=0.006)和Granzyme B(P=0.002;)的分泌。7.mi R-19b靶向调控PTEN运用生物信息学分析的方法,分析mi R-19b靶基因的涉及到的细胞信号通路((http://diana.imis.athena-innovation.gr/),结果发现Fox O信号通路是mi R-19b靶基因参与的重要信号通路并且与细胞周期的调控严密相关。因此,我们在Jurkat T细胞中转染mi R-19b mimcs高表达mi R-19b,q RT-PCR检测Fox O信号通路中关键基因的表达情况,发现基因PTEN被显着下调(P<0.001),而以往的研究已经明确了PTEN是mi R-19b的靶基因,mi R-19b能够下调PTEN。8.PTEN的下调影响CD8细胞功能为了检测PTEN的下调对CD8细胞增殖的影响,在转染si RNA-PTEN后加入CD3/28刺激,刺激浓度为3ug/m L,培养5天后流式检测,结果表明PTEN的下调促进对CD8细胞的增殖(P=0.040)。培养2天后流式检测,发现PTEN的下调抑制CD8细胞的早期凋亡(P=0.047)。为了研究PTEN的下调对CD8细胞胞内IFN-γ和Granzyme B的调控作用,在转染si RNA-PTEN后加入CD3/28刺激,培养24小时后流式检测,在检测前6小时加入胞内蛋白转运抑制剂(Golgi Stop),流式结果表明PTEN的下调能够显着Granzyme B(P=0.006)的分泌,而对CD8细胞IFN-γ的分泌也有明显的上调趋势(P=0.094)。9.在HIV感染者中,mi R-19b对CD8细胞功能的影响在HIV感染者的CD8细胞中,通过转染mi R-19b mimcs的方法高表达mi R-19b,发现mi R-19b的高表达能够促进HIV感染者CD8细胞的增殖(P=0.010;),促进分泌Granzyme B(P=0.003)和IFN-r(P=0.010),而对CD8细胞的早期凋亡有抑制作用(P=0.040)。在HIV感染者的CD8细胞中,通过转染mi R-19b inhibitor的方法下调mi R-19b的表达,与mi R-19b高表达的结果相反,mi R-19b的低表达能够抑制HIV感染者CD8细胞的增殖(P=0.043),抑制分泌Granzyme B(P=0.049)和IFN-r(P=0.023),而对CD8细胞的早期凋亡有促进作用(P=0.035)。在HIV感染者的CD8细胞中,通过转染si RNA-PTEN的方法下调PTEN的表达,与mi R-19b高表达的结果一致,PTEN的下调能够促进HIV感染者CD8细胞的增殖(P=0.043),促进分泌Granzyme B(P=0.049)和IFN-r(P=0.023),而对CD8细胞的早期凋亡有抑制作用(P=0.035)。10.mi R-19b通过靶向PTEN调控HIV感染者CD8细胞在HIV感染者分选的CD8细胞中,共转mi R-19b inhibitor和si RNA-PTEN,检测CD8细胞增殖、凋亡、分泌Granzyme B和IFN-r的能力。。mi R-19b inhibitor和si RNA-PTEN共转后,与对照组相比,CD8细胞增殖、凋亡、分泌Granzyme B和IFN-r的能力没有统计学差异,结果表明PTEN的下调扭转了mi R-19b inhibitor对HIV感染者CD8 T细胞功能的影响,进一步的证实了mi R-19b通过靶向PTEN影响CD8细胞的功能。11.在HIV特异性多肽刺激下,mi R-19b对IFN-r分泌的影响前期实验结果表明,在CD3/28刺激条件下,mi R-19b能够靶向PTEN促进CD8T细胞分泌IFN-r,为了更进一步的探索mi R-19b在HIV特异性抗原刺激条件下依然能够调节CD8细胞分泌IFN-r的能力,对HIV感染者的PBMC细胞,利用磁珠法去除CD4 T淋巴细胞,在HIV Gag多肽刺激的条件下进行ELISPOT检测IFN-r的分泌情况。结果表明,在HIV Gag多肽刺激下,mi R-19b高表达能够促进IFN-r的分泌(P=0.041);mi R-19b低表达能够抑制IFN-r的分泌(P=0.020)12.mi R-19b的高表达抑制HIV病毒的产生在293 T细胞系中,共转包装HIV病毒的质粒p NL4-3和mi R-19b mimcs,48小时后ELISA法检测细胞上清中P24的表达情况。结果发现,mi R-19b高表达的293T细胞上清中P24的浓度显着低于对照组(P=0.040)。接着在Clone X细胞(GFP表达指示病毒感染)中,高表达mi R-19b后,用相同滴度HIV假病毒感染,结果发现,GFP的表达率在mi R-19b高表达组显着低于对照组(P=0.007)。最后,我们分选了正常人的CD4 T淋巴细胞,转染mi R-19b mimcs高表达mi R-19b后,用从HIV感染者中分离出来的真病毒感染CD4细胞,检测上清中P24的表达情况,结果显示,mi R-19b高表达的CD4 T淋巴细胞上清中P24的浓度显着低于对照组(P=0.001)。结论:1通过对LTNPs的mi RNA表达谱分析,发现mi RNA的表达能够将LTNPs对病毒的不同控制水平很好的分开,mi R-19b在LTNP-Ls中特异性高表达。2.通过检测mi R-19b高表达后对CD8细胞功能的影响,证实mi R-19b能够靶向PTEN促进CD8细胞的增殖、促进分泌IFN-r和Granzyme B、抑制早期凋亡。3.在HIV感染者中,mi R-19b靶向PTEN调控CD8细胞功能并在HIV特异性抗原刺激下,mi R-19b能促进HIV感染者的抗病毒反应。4 mi R-19b抑制T细胞中HIV的产生。(本文来源于《中国医科大学》期刊2019-01-01)
李斯斯,徐永芳,农丽萍,邓小芳,姚敏[4](2018)在《广西南宁HIV感染长期不进展者流行病学特征分析》一文中研究指出目的了解广西壮族自治区南宁市艾滋病病毒(HIV)感染者中长期不进展者(LTNP)的流行病学特征及影响因素。方法从国家艾滋病综合防治信息管理系统下载1996—2014年8月31日的历史卡片,选取报告时间≥10年(即2004年及以前报告)、现住址为南宁的574例艾滋病病例进行描述性流行病学分析及logistic回归分析。结果符合入选标准的研究对象574例,根据严格定义归类为LTNP 202例(1.6%, 202/12 545),可随访并存活病例95例。多因素logistic回归分析显示年龄、感染途径、抗病毒治疗情况、随访状态是LTNP分布的影响因素。结论南宁市存在一定比例的LTNP,为艾滋病长期不进展状态的前瞻性研究和相关性研究提供基础数据。(本文来源于《中国公共卫生》期刊2018年12期)
曹齐,陈思源[5](2017)在《HIV感染长期不进展者抑郁状况分析》一文中研究指出目的分析人类免疫缺陷病毒(HIV)感染长期不进展者心理状况,并统计心理状况的影响因素及主次关系。方法使用抑郁自评量表(SDS)评估HIV感染长期不进展者抑郁水平,同时使用单因素方差分析及多元逐步线性回归对SDS评分的影响因素进行分析。结果 SDS评分结果显示无抑郁症状23例(21.7%),轻度抑郁42例(39.6%),中度抑郁29例(27.3%),重度抑郁15例(11.4%)。平均SDS分数为(60.75±10.34)分。回归分析显示年龄、性别、锻炼情况、婚姻状况、接受心理治疗、睡眠状况可影响SDS分数。其中SDS评分与年龄、性别(男)因素呈正相关(P<0.05),与心理治疗、睡眠、锻炼、婚姻状况因素呈负相关(P<0.05)。结论 HIV感染长期不进展者普遍伴发抑郁症状,在治疗中应特别重视大龄、男性、无配偶患者抑郁症状的防治,医务工作者应督促患者加强锻炼,接受心理疏导,改善睡眠以促进HIV感染长期不进展者的心理健康水平。(本文来源于《检验医学与临床》期刊2017年03期)
谭琳琳,陈懿,李骏[6](2016)在《梧州市HIV感染长期不进展病例流行病学分析》一文中研究指出目的对梧州市的HIV感染长期不进展病例进行流行病学描述性分析,以了解HIV感染长期不进展病例的流行病学分布特点。方法从艾滋病综合防治信息系统中筛选出感染时间至少5年以上、现住址为梧州市的HIV感染存活病例、并且从未接受过抗逆转录病毒治疗、CD4检测结果从未低于410 cells/μL的病例,进行年龄、性别、感染途径、接受随访及CD4检测等情况的流行病学描述性分析。结果根据以上述条件筛选,在2 956例存活的感染者及病人中共筛选出72例HIV感染长期不进展病例,占2.44%(72/2 956)。其中男性57例,女性15例。30~49岁年龄段的54例,占该年龄段存活病例的3.10%(54/1 743)。经注射吸毒途径感染的38例,占该途径感染的存活病例5.03%(38/755)。有工作的41例,占有工作的存活病例1.88%(41/2 181)。除诊断年限为10年组的病例接受随访的次数平均不足每年1次外,其余诊断年限组的病例每年接受1次以上的随访;所有的病例每年或每两年接受一次CD4检测。结论根据本次分析结果,应该加强规范化的随访干预,提供更多的健康教育宣传,对特征人群采用更行之有效的干预措施,使其更加关心自身的健康,积极面对社会,更好的保护和促进身体免疫功能。(本文来源于《中国热带医学》期刊2016年11期)
郭敏[7](2016)在《云南HIV感染长期不进展者中和抗体活性及不进展影响因素研究》一文中研究指出目的:通过生物-心理-社会医学模式,研究云南省HIV感染病程长期不进展者的社会学、心理学和中和抗体活性的特点,分析HIV感染长期不进展的影响因素,为艾滋病疫苗研究及延长HIV感染者生存时间和提高生命质量提供理论依据。方法:采用1:1匹配的病例对照研究和HIV-1假病毒的中和实验方法,选择云南省HIV感染病程长期不进展(≥10年)、能面对面随访、且自愿参与研究的全部HIV感染者为研究对象。以病程长期不进展的HIV感染者为病例组,病程进展的HIV感染者为对照组。从中国疾病预防控制信息系统下载病例资料,并对感染者进行面对面定性访谈和使用SCL-90量表评估心理健康状况。同时在取得知情同意后,抽取研究对象10ml静脉血进行CD4+T检测和HIV-1假病毒的中和实验。通过病例对照研究、心理健康状况评估、中和实验等从行为学、心理学和分子流行病学等方面探讨长期不进展的影响因素。使用Epidata3.1建立数据库,并使用SPSS19.0进行数据处理和统计分析。结果:1.一般特征1.1本研究共收集样本240例,病例组120例,其中男性占90.00%(108/120);女性占10.00%(12/120),男女比例为9:1;平均年龄(39.37±4.21)岁;未婚者居多,占59.17%(71/120);初中文化程度最多,占49.17%(59/120);农民是主要的职业,占50.00%(60/120);91.67%(110/120)的样本是汉族;地区分布德宏州最多,占26.67%(32/120);样本主要来源于强制戒毒人员检测,占45.00%(54/120)。对照组120例,其中男性占84.17%(101/120);女性占15.83%(19/120),男女比例为5:1;平均年龄(39.98±4.61)岁;己婚有配偶者居多,占46.67%(56/120);初中文化程度最多,占 57.50%(69/120);农民是主要的职业,占 45.83%(55/120);81.67%(98/120)的样本是汉族;地区分布德宏州最多,占30.00%(36/120)。病例组和对照组基本资料具有良好的均衡性(P>0.05)。1.2.性行为与安全套使用情况病例组过去3个月性行为发生率为52.50%(63/120),过去3个月每次性行为都使用安全套率为95.23(60/63);对照组过去3个月性行为发生率为73.33%(88/120),过去3个月每次性行为都使用安全套率为98.86%(89/88)。病例组与对照组性行为发生率有统计学差异(x2=12.982,P=0.002)。1.3注射吸毒与美沙酮维持治疗情况病例组过去3个月注射吸毒发生率为32.50%(39/120),对照组过去3个月注射吸毒行为发生率为40.00%(48/120),差异无显着的统计学意义(P>0.05);病例组和对照组均未发生共用注射器吸毒的行为;病例组接受社区美沙酮维持治疗率为87.5%(105/120),对照组为1.67%(2/120),差异有显着的统计学意义(x2=178.916,P<0.01)。1.4单因素分析行乘列表X2检验显示,感染途径(x2=12.963,P=0.025)、首次CD4+T淋巴细胞计数(x2=169.133,P<0.001)、当前配偶/固定性伴感染情况(x2=14.744,P=0.005)、过去3个月发生性行为(x2=12.982,P=0.002)、社区美沙酮维持治疗(x2=178.916,P<0.001)这5个因素与HIV感染病程长期不进展相关(P<0.05)。1.5条件Logistic分析分析结果显示,注射吸毒感染(OR=0.152,95%CI:0.020~0.381)、首次CD4+T淋巴细胞计数<350个/mm3(OR=0.007,95%CI:0.000~0.099)、未接受社区美沙酮维持治疗(OR=0.002,95%CI:0.000~0.020)这叁个因素是HIV感染者病程进展的促进因素(OR<1)。2.心理学特征2.1病例组、对照组和全国成人常模SCL-90评分比较进行多个独立样本比较的方差分析,方差齐(P>0.05)。结果显示,病例组、对照组和全国成人常模在总分(F=13.098,P<0.01)、总均分(F=10.407,P=0.001)以及躯体化(F=9.302,P=0.006)、强迫症状(F=5.137,P=0.033)、人际关系敏感(F=11.083,P<0.01)、抑郁(F=8.761,P=0.009)、焦虑(F=9.450,P=0.021)、敌对(F=6.103,P=0.030)、恐怖(F=10.452,P=0.002)、偏执(F=6.446,P=0.043)、精神病性(F=12.303,P<0.01)、附加因子(F=5.322,P=0.029)这10个因子得分差异均有统计学意义(P<0.05),可认为病例组、对照组和全国成人常模心理健康状况总的有差异。2.2病例组、对照组和全国成人常模SCL-90评分两两比较LSD-t检验的两两比较显示,病例组和对照组在总分、总均分、以及躯体化、强迫症状、人际关系敏感、抑郁、焦虑、敌对、恐怖、偏执、精神病性、附加因子这10个因子得分均高于全国成人常模,差异有统计学意义(P<0.05),可见HIV感染者与全国成人常模比较存在比较严重的心理问题。同时,病例组在总分、总均分以及躯体化、人际关系敏感、抑郁、焦虑、恐怖、精神病性这6个因子的评分低于对照组,差异有统计学意义(P<0.05),说明HIV感染长期不进展者与典型进展者比较心理问题相对较轻。3.中和抗体作用3.1长期不进展者组对假病毒CNE5、CNE11、CNE15、JRFL、SF162的IC50分别为:490.07±898.369,493.27±1362.026,440.9±1803.604,315.75±962.3,839.5±679.975;进展者组对假病毒 CNE5、CNE11、CNE15、JRFL、SF162 的 IC50分别为 40.15±82.919,162.42±342.806,223.91±374.784,185.92±537.171,305.2±386.507。3.2比较长期不进展感染者和进展者对五种不同假病毒的中和作用,长期不进展者对假病毒CNE5、CNE11、CNE15、SF162的IC50高于进展者,差异有统计学意义(P<0.05)3.3按IC50值将中和作用分为极强中和作用(IC50>540)、强中和作用(IC50181~540)、中等中和作用(IC5061~180)、弱中和作用(IC5021~60)以及无中和作用(IC50≤20)。长期不进展者组对假病毒CNE5、CNE11、CNE15、JRFL、SF162具有强和极强中和作用的人数分别为45人、44人、37人、37人、107人;进展者组对假病毒CNE5、CNE11、CNE15、JRFL、SF162具有强和极强中和作用的人数分别为3人、16人、39人、20人、73人。对比两组人数,对于假病毒CNE5、CNE11、JRFL、SF162,长期不进展者组具有强和极强中和作用的人数多于进展者,差异有统计学意义(P<0.05)。3.4 长期不进展者组中有,编号为89、83、54、46、94、103、71、61、62、78、88的11份样本对五种假病毒中的叁种以上假病毒均有极强的中和活性。结论:云南省HIV感染者病程长期不进展受多种因素影响,引入“生物-心理-社会”医学模式。1.社会因素:注射吸毒感染但未接受社区美沙酮维持治疗是HIV感染者病程进展的促进因素。2.心理因素:与成人常模比较,HIV感染病程长期不进展者和典型进展者都存在比较严重的心理健康问题;HIV感染病程长期不进展者心理健康状况优于典型进展者,主要表现在躯体化、人际关系敏感、抑郁、焦虑、恐怖、精神病性这6个方面。3.生物因素:3.1 首次CD4+T淋巴细胞计数高是疾病不进展的保护因素。3.2 HIV感染病程长期不进展者中和抗体的中和能力和应答宽度均强于进展者,中和抗体的作用可能是病情长期不进展的重要保护因素。HIV感染病程长期不进展者组中有部分样本对多种假病毒均有极强的中和活性,提示可能存在广谱中和抗体。(本文来源于《昆明医科大学》期刊2016-11-01)
梁眉[8](2016)在《关于人类免疫缺陷病毒感染者中病情长期不进展者所占比例及其影响因素分析》一文中研究指出目的观察人类免疫缺陷病毒(HIV)感染者中病情长期不进展者所占比例及其影响因素分析。方法对该县2001年9月‐2015年5月筛查发现的313例HIV感染者进行回顾性分析。结果 313例HIV感染者患者中,病情长期不进展与一般进展患者性别、健康程度比较差异无统计学意义(P>0.05),病情长期不进展与一般进展患者年龄、受教育程度和感染方式比较差异有统计学意义(P<0.05);一般进展者与病情长期不进展者自然杀伤细胞(NK)、自然杀伤T细胞(NKT)计数情况比较差异有统计学意义(P<0.05)。结论 HIV感染者中出现病情长期不进展的比例与年龄段、生活习惯、健康程度、受教育程度、NK细胞水平和NKT细胞水平等因素有关联,需要进行更深层次的研究。(本文来源于《中国医学工程》期刊2016年06期)
郭敏,陈敏,史宣玲,贾曼红,戴洁[9](2015)在《云南省长期不进展HIV感染者病毒载量和CD4~+T淋巴细胞计数与中和抗体活性相关性分析》一文中研究指出目的分析云南省长期不进展HIV感染者CD4+T淋巴细胞计数和病毒载量与中和抗体活性的相关性。方法选择云南省病程长期不进展(≥10年)的全部HIV感染者为研究对象,取得知情同意后,抽取10m L静脉血进行病毒载量测定、CD4+T淋巴细胞计数检测和HIV-1假病毒的中和实验。使用Excel建立数据库,并使用SPSS19.0进行数据处理和统计分析。结果长期不进展者血清对假病毒SF162,JRLF,CNE5,CNE11,CNE15均有一定的抑制作用;长期不进展者血清对假病毒CNE5的中和抑制率与病毒载量呈正相关(r=0.249,P=0.01);同时对假病毒JRLF(r=-0.211,P=0.021),CNE5(r=-0.281,P=0.002),CNE11(r=-0.191,P=0.036),CNE15(r=-0.202,P=0.027)的中和抑制率与最近一次CD4~+T淋巴细胞计数呈负相关。结论云南省长期不进展HIV感染者血清对不同传播途径感染的病毒具有广谱中和活性;中和抗体活性与病毒载量呈正相关,与CD4+T淋巴细胞计数呈负相关。(本文来源于《中国皮肤性病学杂志》期刊2015年12期)
薛秀娟,王哲[10](2015)在《艾滋病长期不进展人群宿主遗传学研究进展和启示》一文中研究指出人类感染人类免疫缺陷病毒(human immunodeficiency virus,HIV)后,在未进行抗病毒治疗的情况下,小部分感染个体会呈现对病毒持续控制或疾病不发生进展的现象。在过去的20多年,一系列的概念被用来分类和定义这些感染者。这一类患者被定义为长期不进展者(long-term non-progressors,LTNP),主要是针对一类感染HIV后不进行抗病毒治疗而长期无临床(本文来源于《河南医学研究》期刊2015年11期)
长期不进展论文开题报告
(1)论文研究背景及目的
此处内容要求:
首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景,再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题,并提出你的论文准备的观点或解决方法。
写法范例:
背景及目的HIV-1感染长期不进展者(Long term non-progressors,LTNPs)是能天然控制HIV、维持宿主良好免疫的一类特殊人群,其机制与病毒、宿主遗传特征、免疫应答等多种因素有关,但天然免疫激活水平与长期不进展的关系尚未明确。本研究基于全转录组测序展示HIV-1感染长期不进展者和典型进展者的mRNA和非编码RNA表达谱,通过功能富集分析和ceRNA调控网络分析,从全转录水平分析mRNA和编码RNA在HIV-1感染长期不进展中的作用,并基于测序结果,在人群水平深入探讨关键天然免疫信号通路的激活水平与HIV-1感染长期不进展的关系。方法1.转录组测序及差异表达分析:选取3例HIV-1感染长期不进展者和3例典型进展者,采集静脉血,分离PBMC并提取总RNA,构建cDNA文库并进行高通量测序。经过数据过滤和注释,获得mRNA、lncRNA、small RNA和circRNA的表达量并进行差异表达分析。2.功能富集分析:对差异表达的mRNA进行PPI互作网络分析、GO功能富集分析和KEGG通路富集分析。对差异表达lncRNA、small RNA和circRNA进行靶基因预测,对靶基因进行GO功能富集分析和KEGG通路富集分析。3.ceRNA网络构建:根据靶基因预测结果,对具有靶向关系的差异lncRNA、miRNA、mRNA进行共表达分析,表达量呈负相关的miRNA-mRNA对、miRNA-lncRNA对,经过超几何分布检验筛选lncRNA-miRNAmRNA互作关系,构建lncRNA-miRNA-mRNA互作网络。以同样的方法构建circRNA-miRNA-mRNA互作网络。4.NOD样受体信号通路激活水平检测:招募HIV-1感染长期不进展者(LTNPs组)、典型进展者(TPs组)、抗病毒治疗患者(ART组)和健康对照者(HC组),采集静脉血,分离PBMC。使用PCR检测NOD样受体信号通路中NLRP3、IL-1β和caspase-1的mRNA表达水平,采用流式细胞术检测各组人群caspase-1即细胞焦亡发生水平,ELISA检测血浆中caspase-1、IL-1β含量。5.胞内DNA识别信号通路激活水平检测:PCR检测NOD样受体信号通路cGAS、IFI16等因子的mRNA表达,Western Blot检测IFI16、STING蛋白表达水平。结果1.差异表达mRNA及其功能:与典型进展者相比,长期不进展者中差异表达的mRNA有543个,其中上调的mRNA 205个,下调338个。GO富集显示差异表达mRNA主要富集在胞内过程、细胞组分、催化活性等二级GO条目。KEGG富集分析显示,差异表达mRNA主要富集在胞内DNA识别通路、NOD样受体信号通路和TNF信号通路等天然免疫相关信号通路。2.差异表达lncRNA及功能:共发现1297个差异表达lncRNA,长期不进展者中上调的lncRNA 1108个,下调的lncRNA 189个,其中负调控宿主抗病毒应答的lncRNA-NRAV在LTNP组表达下调。3.差异表达small RNA、circRNA及其功能:两组间差异表达的small RNA有45个,已有功能报道的miRNA有8个。两组间差异表达的circRNA155个,均为本次研究新预测的circRNA,其中circRNA 090的来源基因为NLRP3。4.lncRNA-miRNA-mRNA互作网络包含14个miRNA、16个lncRNA和64个mRNA构成的100对互作关系,circRNA-miRNA-mRNA包含17个miRNA、34个circRNA和71个mRNA构成的142对互作关系。T细胞专向分化相关的转录因子TCF7均处于以上两个互作网络中。5.NOD样受体信号通路激活水平:LTNPs组、TPs组、ART组和HC组四组人群NOD信号通路中NLRP3的mRNA表达量分别为4.14±3.76、1.90±1.57、2.60±2.73、1.33±1.23,差异具有统计学意义(F=3.202,P=0.030),LTNPs组表达量高于TPs组(t=2.542,P=0.015)。在NLRP3诱导的细胞焦亡发生水平方面,四组人群外周血PBMC发生焦亡的水平均较低,caspase-1阳性细胞比例差异无统计学意义(F=0.529,P=0.672)。同样,血浆的caspase-1含量也未在各组发现统计学差异(F=0.852,P=0.475)。在通路下游炎症因子方面,四组人群IL-1β的mRNA表达量和蛋白表达量差异均无统计学意义(P>0.05)。6.胞内DNA识别信号通路激活水平:四组人群胞内DNA识别信号通路中,模式识别受体cGAS和IFI16的mRNA表达水平在各组间的差异均有统计学意义(P<0.01),并且LTNPs组均低于TPs组(P<0.01);通路关键中间因子STING和TBK1的mRNA表达水平呈现同样的趋势,LTNPs组均低于低于TPs组(P=0.024);进一步在蛋白水平发现,LTNPs组和TPs组IFI16蛋白相对表达量分别为0.19±0.08、0.54±0.19,LTNPs组低于TPs组,差异有统计学意义(t=2.908,P=0.044);而STING在LTNPs组和TPs组的蛋白相对表达也存在显着差异(t=3.015,P=0.039),平均值分别为1.85±0.73、3.37±0.47,LTNP组低于TP组。结论1.HIV感染长期不进展人群和典型进展人群的mRNA、lncRNA、miRNA和circRNA表达谱存在较大的差异,富集到多条天然免疫通路可能与HIV长期不进展相关,而非编码RNA可能通过ceRNA机制调控天然免疫通路中关键因子mRNA的表达。2.在HIV感染长期不进展者人群中,未发现NOD样受体信号通路的激活,但胞内DNA识别信号通路的cGAS/IFI16-STING的激活水平明显被抑制,这可能是该人群的疾病不进展的原因之一。
(2)本文研究方法
调查法:该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。
观察法:用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。
实验法:通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。
文献研究法:通过调查文献来获得资料,从而全面的、正确的了解掌握研究方法。
实证研究法:依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。
定性分析法:对研究对象进行“质”的方面的研究,这个方法需要计算的数据较少。
定量分析法:通过具体的数字,使人们对研究对象的认识进一步精确化。
跨学科研究法:运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。
功能分析法:这是社会科学用来分析社会现象的一种方法,从某一功能出发研究多个方面的影响。
模拟法:通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。
长期不进展论文参考文献
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标签:人类免疫缺陷病毒-1; 长期不进展者; 基因型; 中和活性抗体;