导读:本文包含了剪切异构体论文开题报告文献综述及选题提纲参考文献，主要关键词:胎盘生长因子基因,新吉细毛羊,小尾寒羊,基因表达
剪切异构体论文文献综述
张立春,李梦姝,柳俭强,云巾宴,曹阳[1]（2019）在《绵羊胎盘生长因子基因可变剪切异构体克隆与表达分析》一文中研究指出为克隆绵羊胎盘生长因子(Placental growth factor,PGF)基因,并分析该基因在绵羊组织器官中的表达模式,本研究首先利用RT-PCR(Reverse Transcript Polymerase Chain Reaction,RT-PCR)方法从小尾寒羊与新吉细毛羊皮肤组织克隆出PGF基因mRNA片段,随后利用可变剪切(alternative splicing,AS)鉴别引物和qRT-PCR(Quantity reverse transcript polymerase chain reaction,qRT-PCR)方法对不同组织器官PGF基因AS及其表达模式进行分析.以两个品种绵羊皮肤组织cDNA为模板,RT-PCR扩增显示存在2条特异性扩增片段,克隆测序结果发现片段长度依次为1339bp和1276bp,分析发现1276bp片段是由于主转录本第7外显子缺失产生,为编码羧基末端缺失21个氨基酸的PGF蛋白突变体.该突变体并未引起血小板源生长因子(Platelet derived growth factor,PDGF)结构域改变,可能通过改变PDGF结构域下游单位酶切位点来影响PGF分子的成熟.PGF基因AS检测及qRT-PCR结果发现小尾寒羊与新吉细毛羊不同组织器官PGF基因可变剪切突变体组织分布及其表达模式存在明显差异.本研究证明绵羊皮肤组织中表达PGF基因且存在AS现象,为进一步研究PGF基因在绵羊毛囊发育及毛用性状形成中的作用奠定了基础.(本文来源于《聊城大学学报(自然科学版)》期刊2019年06期）
刘岸龙[2]（2019）在《基于μ阿片类受体（OPRM1）及其剪切异构体研究电针和多甲氧基黄酮镇痛机制》一文中研究指出背景/目的近几十年来,大量临床调查和实验研究都论证了电针和中药广泛地应用于各种损伤和疾病引起的疼痛的治疗。有大量的研究结果显示,电针可以产生内源性的阿片肽,某些炎症虽然参与了电针镇痛,但是认为外周和中枢阿片受体是其发挥作用的主要靶点,并且以吗啡为代表的μ阿片类药物可引起大脑不同区域μ阿片类受体及其剪切异构体的改变。本实验采用了野生型C57BL/6小鼠(WT)及同品系μ阿片类受体基因敲除小鼠(mE7b),专注于研究中枢神经系统特定区域的μ阿片类受体及其剪切异构体,尝试寻找电针及中药与OPRM1的联系,旨在探索电针和中药镇痛的效力和机制。方法电针治疗疼痛的方案很多,通过对此类文献的统计分析,确定选穴以及具体的实验操作细节,比如不锈钢针的规格、电针仪的频率、针刺的深度、电流的强度及刺激的时间等等;同时,传统中药材中具有镇痛效应的很多,包括元胡(延胡索)、白芷、蟾酥等等,根据作用机制的不同,本研究选取了主要作用于μ阿片类受体的多甲氧基黄酮类(提取于柑橘属的药材)药物来进行实验。首先,我们建立了小鼠的疼痛模型,在模型建立成功后,予以电针刺激及药物治疗,检测其疼痛行为学的改变,记录并分析数据,观察同样条件下WT和mE7b小鼠之间的差异;其次,通过qPCR观察电针及药物对于小鼠不同脑部区域μ阿片类受体基因的mRNA表达的影响;在确定了电针及药物是通过阿片类受体发挥作用后,对WT小鼠进行局部(外周)或脑室(中枢)注射β-FNA,一种μ阿片类受体拮抗剂,随后再予以电针刺激和药物治疗,比较外周和中枢使用β-FNA的行为学差异,探索电针和中药镇痛的主要靶点;最后再通过Western Blot和免疫组化技术分析应用电针和中药治疗后疼痛的下游分子指标ERK1/2和c-Fos的变化。结果1.电针和多甲氧基黄酮可以改善福尔马林诱导的急性疼痛,尤其是第二相痛,同时也可改善CFA诱导的疼痛模型鼠在24h内对热刺激和机械刺激的反应;2.在脑室注射了β-FNA后,电针的镇痛效果显着降低,而局部注射β-FNA则影响不大,仅在4h这个时间点镇痛效果出现降低;与此不同的是,脑室注射β-FNA可显着降低多甲氧基黄酮的镇痛效果,而局部注射β-FNA则对多甲氧基黄酮的镇痛效果完全无影响;3.电针和多甲氧基黄酮可调控疼痛相关脑区OPRM1的表达,尤其是电针更显着;4.CFA诱导的疼痛模型鼠脑部区域p-ERK的表达显着上调,电针治疗可以使WT小鼠ERK的磷酸化水平降低,接近正常水平;对于mE7b小鼠,电针降低了THA区域的磷酸化水平而对RVM区域无影响;与此同时,CFA诱导的疼痛模型鼠脑部区域c-Fos的表达也显着上升,在WT小鼠,电针治疗可降低这一效果,除了THA区域,而对于mE7b小鼠,电针仅可降低RVM区域c-Fos的表达;5.与电针不同,多甲氧基黄酮虽能降低WT小鼠ERK的磷酸化水平,但是并不能降低mE7b小鼠ERK的磷酸化水平;与此同时,多甲氧基黄酮也不能降低mE7b小鼠脑部区域c-Fos的表达。结论1.电针和多甲氧基黄酮均可降低福尔马林诱导的二相痛和CFA诱导的持续性疼痛,而在μ-opioid受体基因敲除后,镇痛作用都有所下降,在多甲氧基黄酮治疗组这一效应更明显;2.电针主要通过中枢μ阿片类受体发挥作用而多甲氧基黄酮则完全通过中枢μ阿片类受体发挥作用;3.已知电针可以通过产生内源性阿片肽发挥作用,我们的结果表明,电针对于OPRM1基因及其剪切异构体mRNA表达水平的调节也参与了电针的镇痛过程,而多甲氧基黄酮则是作为一种阿片类药物发挥镇痛作用,对OPRM1并无影响;4.ERK的磷酸化水平和c-Fos的表达水平在CFA诱导的疼痛模型鼠的脑部区域中显着上调,说明这两个指标的上调能代表小鼠处于疼痛状态,而电针和多甲氧基黄酮对于p-ERK和c-Fos的下调可出现在大多数WT小鼠的脑部区域,而对于mE7b小鼠则无此效果,说明电针和多甲氧基黄酮可通过降低ERK的磷酸化水平和c-Fos的表达水平来发挥镇痛作用,这一过程需要μ-opioid的参与。(本文来源于《南京中医药大学》期刊2019-03-15）
刘显成[3]（2017）在《一个组成型表达的草鱼ADAR1基因剪切异构体ADAR1a的鉴定与特征》一文中研究指出作为ADAR家族中的一员,ADAR1(adenosine deaminase acting on RNA)能够将双链RNA的腺嘌呤(A)置换为次黄嘌呤(I)。在哺乳动物中,ADAR1拥有很多剪切异构体,包括研究较为普遍的能被干扰素诱导表达的150kD大小的剪切异构体ADAR1-p150和组成型表达的110kD大小的剪切异构体ADAR1-p110。ADAR1这种结构的多样性可能反应了其不同剪切异构体之间功能的多样及差异。ADAR1不同剪切异构体也被发现存在于鱼类之中。在我们之前的研究中,我们已经在草鱼中克隆得到了ADAR1两种不同剪切异构体Ci ADAR1和CiADAR1-like,它们都可以被干扰素诱导表达。在本文中,我们鉴定了一个新的草鱼ADAR1基因剪切异构体ADAR1a。ADAR1a基因包含15个外显子和14个内含子,它的全长cDNA序列包括359 bp的5'UTR,229 bp的3'UTR和一个2592 bp的最大ORF,编码983个氨基酸的多肽。ADAR1a蛋白具有1个Z-DNA结合域,3个dsRNA结合域和一个高度保守的水解脱氨酶激酶活性区。在草鱼CIK细胞中,通过western blot分析,草鱼ADAR1a蛋白表现出组成型表达特性并不受poly(I:C)刺激影响。在正常状况下,草鱼肾细胞中ADAR1a蛋白主要分布在细胞核,而通过poly(I:C)刺激,随着时间推移,ADAR1a蛋白由细胞核转移至细胞质,其具体分子机制尚不清楚。为了进一步研究草鱼ADAR1a基因的转录调控机制,通过5'full Race技术,我们确定了草鱼ADAR1a的转录起始位点,位于ADAR1基因的第二个外显子上。然后我们克隆了其包含部分5'UTR及其上游序列在内共1303 bp作为ADAR1a基因的启动子,通过软件分析,其中包含4个干扰素调节因子元件。通过构建草鱼IRF1、IRF3的真核表达载体pcDNA3.1-IRF1和pcDNA3.1-IRF3与pGL3-Ci ADAR1a启动子报告载体共转入草鱼肾细胞。双荧光素酶活性分析结果显示在草鱼肾细胞中无论是草鱼IRF1、IRF3蛋白还是Poly I:C都不能影响草鱼ADAR1a蛋白的表达。通过其分子与表达机制,细胞内亚定位结果及其转录调控机制,我们推测草鱼ADAR1a与哺乳动物ADAR1蛋白剪切异构体ADAR1-p110具有高度同源性。随后,通过序列比对推测其核输出信号(NES)序列,并构建pEGFP-C1-ADAR1a,pEGFP-C1-ADAR1N,pEGFP-C1-ADAR1NΔNES表达载体,瞬时转染进CIK细胞,通过荧光显微镜观察,发现转染pEGFP-C1-ADAR1a质粒的细胞荧光集中于细胞核,转染pEGFP-C1-ADAR1N(ADAR1 N端区域,1-505aa)质粒的细胞在细胞质与细胞核都有荧光,而转染pEGFP-C1-ADAR1NΔNES载体的细胞荧光主要在细胞核,证实了草鱼ADAR1 N端区域拥有一段NES序列。以上所有结果都表明,草鱼ADAR1a是一个组成型表达的ADAR1基因剪切异构体。(本文来源于《南昌大学》期刊2017-05-25）
沈欢欢[4]（2016）在《比格犬ERβ及其剪切异构体ERβ_(419)、ERβ_(431)作用机理的初步研究》一文中研究指出雌激素通过细胞内特定雌激素受体(ERS)介导的信号通路来调节机体生殖生理活动。被介导的信号通路分为两种不同类型,通常被称为基因组和非基因组通路。基于此,本研究以比格犬ERβ以及课题组前期成功得到的2个剪切异构体ERβ419、ERβ431为基础,初步探究比格犬ERβ、ERβ419、ERβ431与雌激素的作用机理:(1)对比格犬雌激素β受体及其剪切异构体ERβ419、ERβ431进行慢病毒表达载体的构建以及包装:以重组质粒pEGFG-N1-ERβ、pEGFG-N1-ERβ419、pEGFG-N1-ERβ431为模板,扩增出全长ERβ、ERβ419、ERβ431基因序列;目的片段经胶回收纯化,克隆至LV5以及Lenti-OE-Flag载体;然后使用HEK-293T包装细胞系,包装以上叁种重组质粒,获得慢病毒颗粒。(2)获得目的蛋白稳定表达的细胞系:将收集到的病毒颗粒感染细胞系293 T细胞后,使用经处理后终浓度为1.0μg/mL的puromycin连续作用2周,最后筛选出稳定表达目的蛋白的叁种细胞系;提取叁种细胞系的总蛋白,用WB法分别检测ERβ、ERβ419、β431在蛋白水平的表达情况。(3)目标蛋白的亚细胞定位:用PKH26对细胞膜进行染色,同时用Hoechst33258染料对细胞核进行染色,置于激光共聚焦显微镜下观察。(4)ERβ、ERβ419、ER431表达载体的转录活性测定:将细胞分为6组,空白对照组(正常含有培养液的293T细胞),LV5-ERβ组(稳定表达ERβ的293T细胞),LV5-NC组(感染慢病毒LV5空载体的293T细胞),Lenti-OE-Flag-ERβ431组(稳定表达ERβ431的293T细胞),Lenti-OE-Flag-ERβ419组(稳定表达ERβ419的293T细胞),Lenti-OE-Flag-ERβ419-NC组(感染慢病毒Lenti-OE-Flag空载体的293T细胞)。其中每组组内又分为2组,每组细胞瞬时转染构建的重组质粒ERE-LUC和RLUC,每组中的其中一组加入终浓度为10μmoL/L的E2,而另一组内加入等量无水乙醇。分别检测每组加入刺激后的荧光素酶活性。实验结果:(1)成功地将扩增出的全长ERβ、ERβ419、ERβ431基因片段克隆至LV5以及Lenti-OE-Flag载体,构成重组慢病毒质粒LV5-ERβ、Lenti-OE-Flag-ERβ419、Lenti-OE-Flag-ERβ431;成功获得了携带以上叁种目的基因的慢病毒(2)慢病毒颗粒感染HEK293T细胞后,用puromycin成功筛选获得了稳定表达ERβ、ERβ419、ERβ431蛋白的细胞系。(3)经过PKH26和Hoechst33258染色的细胞在激光共聚焦显微镜下观察,细胞膜被染成红色,细胞核被染成蓝色,此时携带绿色荧光的目的蛋白的定位情况:ERβ、ERβ419主要位于细胞核和胞浆,ERβ431主要位于胞浆。(4)成功地将雌激素反应元件ERE克隆到荧光素酶报告载体pGL3-Vector启动子上;设计引物扩增出的hRluc-neo基因成功克隆到pGL3-Basic载体;相对于加入无水乙醇组,加入雌激素组的比格犬ERβ转录活性明显升高(P<0.01),而ERβ419和ERβ431转录活性变化不大(P>0.05)。结论:比格犬ERβ、ERβ419主要位于细胞核和胞浆,而ERβ431主要位于细胞浆,可能是由于ERβ431的缺失部分包含了NSL区域,使得其不能转运到细胞核;成功建立了比格犬ERβ的转录激活系统,而ERβ419和ERβ431的LBD区域都有部分的缺失,使得其不能与雌激素结合,继而转录活性无法被激活。(本文来源于《黑龙江八一农垦大学》期刊2016-06-01）
徐林[5]（2016）在《稻瘟病菌MoSom1剪切异构体、PKA磷酸化位点及含LisH模体蛋白编码基因的功能分析》一文中研究指出稻瘟病是世界水稻产区最重要的病害之一,而稻瘟病菌是研究植物与病原互作的模式病原真菌。了解稻瘟病菌的致病分子机理对杀菌剂的研发和病害的有效防控具有重要意义。本实验室先前的研究发现,稻瘟病菌转录调控因子MoSoml作用于cAMP-PKA信号途径下游,调控稻瘟病菌的形态分化和致病过程。本文对稻瘟病菌MoSom1剪切异构体、PKA磷酸化位点及含LisH模体蛋白编码基因的功能进行了较为系统的研究,取得以下结果：1.稻瘟病菌MoSom1不同剪切异构体具有相同的生物学功能。用MoSOM1的6种不同剪切方式序列回补Δmosom1突变体的结果显示,不同剪切方式回补转化子的生长、产孢和致病性均能恢复到野生型水平,可见,MoSOM1的不同剪切方式不影响其正常的生物学功能。2.稻瘟病菌MoSom1的S227氨基酸残基是一个关键的PKA磷酸化位点。生物信息学分析显示,稻瘟病菌MoSom1中含8个预测的PKA磷酸化S/T残基,分别为T151、S188、S227、S228、S512、T603、T629和S642。对这些残基的缺失突变结果显示,只有MoSOM1ΔS227,228缺失突变体表型和致病性不能恢复到野生型。进一步对S227和S228的替换(A or E)突变结果显示,MoSOM1S227E、MoSOM1S228A和MoSOM1S228E的表型与野生菌株一致,而MoSOM1S227A的表型和致病性不能恢复。上述结果证实,稻瘟病菌MoSoml的S227残基是一个关键的PKA磷酸化位点。3.稻瘟病菌中编码含LisH模体蛋白基因的功能分析。稻瘟病菌MoSoml含一个保守的LisH模体。生物信息学分析发现,在稻瘟病菌基因组中总共有7个含LisH模体蛋白的编码基因,除已报道的MGG_04708 (MoSOMl)和MGG_03198 (TIGI)外,其余的MGG_01665、MGG_06742、 MGG_00753、MGG_04137和MGG_09369还未见有研究报道,为探索这些基因的生物学功能,我们展开了对上述5个基因的敲除工作。目前已分别获得MGG_01665、MGG_00753和MGG 04137基因的敲除突变体,ΔMGG_01665和ΔMGG_04137突变体的表型(包括生长、形态分化和致病力)与野生型菌株相似,而ΔMGG_00753突变体对寄主的致病力有一定下降。经过二十多次对MGG 06742和MGG 09369基因敲除的原生质体转化实验,分别获得五百多个和两百多个转化子,但未能鉴定到这两个基因的敲除突变体,因此,初步判断它们可能是稻瘟病菌生存不可缺少的基因。4.稻瘟病菌MoSoml互作蛋白的初步筛选。利用亲和纯化的方法获得可能与MoSoml互作的混合蛋白样品,LC/MS分析结果显示候选互作蛋白有1101个,根据功能可将其归为23个不同类别,其中与信号转导途径相关的有37个。进一步分析显示,这37个候选蛋白中包含MAPK信号途径中的组件如Pmk1 (MGG_09565)、Mkk2 (MGG_06482)、Ras1 (MGG_06154)等。后续有待用酵母双杂交(Y2H)实验进一步验证这些候选蛋白是否能在体外条件下与MoSoml互作,进而探究稻瘟病菌cAMP-PKA途径和MAPK途径下游的cross talk。(本文来源于《浙江大学》期刊2016-03-01）
甘艺,赵彦斌,陈福军,孙兆增,胡仲明[6]（2014）在《比格犬ERβ剪切异构体ERβ419沉默表达载体的构建及筛选》一文中研究指出目的构建最有效的慢病毒介导RNAi干扰序列,未来将应用于比格犬ERβ419的未知生物学功能的探索。方法模拟比格犬ERβ419靶细胞筛选针对目的基因mRNA设计的最佳干扰序列实验,通过qRT-PCR和Western Blot技术筛选最佳沉默表达载体序列。结果qRT-PCR结果显示,ERβ419-shRNA1(P<0.01)和ERβ419-shRNA3(P<0.01)的差异表达极显着,Western Blot结果与qRT-PCR结果一致,ERβ419-shRNA3的干扰效果最佳。结论 ERβ419-shRNA3最有效地抑制了目的基因的表达,未来将应用于探索比格犬ERβ419未知生物学功能对比格犬生殖系统影响的研究,并进而预防和治疗比格犬繁殖机能障碍性疾病。(本文来源于《中国比较医学杂志》期刊2014年11期）
甘艺,赵彦斌,陈福军,孙兆增,曾林[7]（2014）在《比格犬ERβ剪切异构体ERβ419沉默表达载体的构建及筛选》一文中研究指出比格犬因广泛应用于医疗科研,其种群内发生的不发情、发情不孕、停发情及窝产仔数减少等情况已成为新的研究热点。通常认为,雌激素正负反馈调节与其对应受体协同调控哺乳动物的繁殖机能。如今发现,不同物种的雌激素受体有多种剪切异构体,并在多种组织中发挥着不同的生理机制。但目前尚无文献报道比格犬雌激素受体剪切异构体的生物学功能,本研究前期获得ERβ419 cDNA序(本文来源于《全国动物生理生化第七届全国代表大会暨第十叁次学术交流会论文摘要汇编》期刊2014-07-28）
甘艺[8]（2014）在《比格犬ERβ剪切异构体蛋白定位及其RNAi慢病毒载体的构建及筛选》一文中研究指出比格犬广泛应用于国家二类以上新药研发，但比格犬在繁殖方面出现了不发情、发情不孕、休情期长、窝产仔数减少等现象，为了探讨该犬繁殖性能降低的机理，本研究对ERβ剪切异构体的蛋白定位及其生物学功能进行研究。通过构建ERβ剪切异构体重组真核表达载体，瞬时转染HEK293T细胞，检测目的蛋白在体外细胞表达及定位情况；建立稳定表达ERβ剪切异构体细胞系；构建针对目的基因慢病毒介导RNA干涉表达载体，利用荧光定量PCR方法和Western Blot方法在mRNA水平和蛋白水平上检测对目的基因干涉效果。结果表明：成功构建比格犬ERβ剪切异构体MYC标签重组真核表达载体，WB结果显示，ERβ1293编码430aa，蛋白量大小为48kDa；ERβ1257编码419aa，蛋白量大小为47kDa；体外细胞蛋白定位结果表明，ERβ1293主要定位于细胞质，而ERβ1257均主要定位于细胞核；成功构建稳定表达ERβ1293和ERβ1257细胞株，WB结果表明目的基因得到高效的表达；分别针对两条ERβ剪切异构mRNA，各构建叁条shRNA序列及一条shNC，并合成于慢病毒载体。qRT-PCR方法从mRNA水平检测干涉效果与WB方法从蛋白水平上检测结果相一致：ERβ1293-shRNA1（p<0.01）和ERβ1293-shRNA3（p<0.01）差异极显着，ERβ1257-shRNA1（p<0.01）、ERβ1257-shRNA3（p<0.01）差异极显着，ERβ1293-shRNA3和ERβ1257-shRNA3的干涉效果最优。实验结论：比格犬ERβ1293和ERβ1257MYC标签重组真核表达载体体外细胞转染蛋白量检测分别为48kDa和47kDa；蛋白定位分别定位于细胞质和细胞核；成功筛选出两条目的基因的有效shRNA序列，进而更深入地探索比格犬ERβ1293和ERβ1257的生物学功能。(本文来源于《黑龙江八一农垦大学》期刊2014-06-01）
魏君[9]（2014）在《人脑胶质瘤中RNA编辑酶ADAR2及其剪切异构体、同源盒基因HOXB1、HOXC6的表达及意义》一文中研究指出神经胶质瘤也叫做胶质细胞瘤，简称胶质瘤（glioma），起源于神经外胚层，是颅内最常见的原发性恶性肿瘤。根据2007年《WHO中枢神经系统肿瘤分类》和《中国中枢神经系统胶质瘤诊断和治疗指南（2012版）》，常见的胶质瘤类型有：低级别星形细胞瘤（low-grade astrocytomas，LGA）、间变型星形细胞瘤（anaplastic astrocytomas，AA）、少枝胶质细胞瘤（Oligodendroglioma，OG）和多形性胶质母细胞瘤（glioblastomas multiforme，GBM）等。关于胶质瘤的疗效，文献报道：即使在医疗技术日益发展的今天，采取“手术+系统化疗+放疗（或放射外科治疗）”，胶质瘤患者平均生存时间也仅为12-18个月。因此，延长患者生存时间和提高患者生存质量，是神经外科一个亟待解决的难题。胶质瘤化疗的基础研究，是目前国际上最受重视的研究领域之一，而生物治疗是化疗的一个重要方面。目前，生物治疗已日益成为胶质瘤研究的一个热点。胶质瘤生物治疗的目标主要是抑制胶质瘤中DNA的复制和RNA的合成。RNA的合成过程包括转录过程和转录后的加工与修饰过程（如：RNA编辑、RNA剪接等）。HOX基因（homeobox genes，HOX genes）是转录过程的主控基因之一。HOX基因参与了人类多种肿瘤的形成和发展。关于HOX基因在胶质瘤的形成和发展过程中相关作用的研究也日益受到重视，但HOX基因家族中的39种基因与胶质瘤之间的关系尚未完全明确。RNA编辑过程是产生DNA的遗传信息在蛋白水平和基因水平表达不同的根源。因此，近10多年来，国内外学者一直重视RNA编辑与多种肿瘤的关系的研究。RNA的编辑过程主要是受RNA编辑酶（adenosine deaminase acting onRNA，ADAR）调控。在人脑中的ADAR主要是ADAR1、ADAR2和ADAR3叁种；其中，在胶质瘤中起主要作用的是ADAR2。依据目前的文献，胶质瘤中ADAR2的表达水平与胶质瘤发生、发展的关系尚不明确。因此，进一步探讨HOX基因家族中新的与胶质瘤相关的基因种类及探讨ADAR2在胶质瘤发生、发展中的作用机理，有助于为胶质瘤患者的生物治疗提供新的理论依据。本实验第一部分的内容是研究ADAR2mRNA在正常人脑星形细胞株、人胶质瘤细胞株和胶质瘤尤其是胶质母细胞瘤组织标本中表达的水平和形式，并与患者的临床特征进行比对。目的是观察RNA编辑过程中，ADAR2mRNA异常表达的机制以及与胶质母细胞瘤的瘤周水肿和侵袭性的关系。在实验方法上，采用实时荧光定量逆转录PCR和逆转录PCR技术对ADAR2mRNA在正常人脑星形细胞株NHA、人脑星形细胞瘤细胞株SHG44、人脑胶质母细胞瘤细胞株U251和BT325以及胶质母细胞瘤组织标本中的表达进行了检测；对其中发现的ADAR2剪切异构体进行分析；对胶质母细胞瘤患者的肿瘤磁共振成像的影像进行分析，探索了ADAR2mRNA与肿瘤的瘤周水肿和肿瘤侵袭性的关系，并统计胶质母细胞瘤患者的生存时间。实验所得结果如下：（1）ADAR2mRNA在正常人脑星形细胞株NHA、人脑星形细胞瘤细胞株SHG44、人脑胶质母细胞瘤细胞株U251和BT325中均有表达，在U251中表达相对较高，在SHG44中表达相对较低，组间比较ADAR2mRNA的表达差异无显着性；ADAR2mRNA在人脑神经胶质瘤组织标本中的表达和在正常脑白质组织中的表达差异无显着性；（2）RT-PCR方法对ADAR2mRNA进行扩增时发现，人脑胶质母细胞瘤细胞株U251和BT325中，出现了选择性剪切所产生的异构体。分析显示该异构体位置为插入在第28个核苷酸的编码区之后，长度为47个核苷酸碱基（bp）；（3）分析ADAR2剪切异构体的表达与胶质母细胞瘤患者瘤周水肿程度、肿瘤侵袭性以及患者生存周期的关系，ADAR2剪切异构体阳性组患者的瘤周水肿程度、肿瘤的侵袭性均显着高于ADAR2剪切异构体阴性组患者，而ADAR2剪切异构体阳性组患者的生存期显着低于ADAR2剪切异构体阴性组患者。第二部分的内容是研究HOXA、B、C、D族中的HOXA10、HOXB1、HOXC6和HOXD13mRNA在胶质瘤细胞株和正常星形细胞、不同恶性程度胶质瘤标本和正常脑组织中的表达。目的是观察这4种HOX基因与胶质瘤发生机制和恶性程度的关系。在实验方法上，采用实时荧光定量逆转录PCR分析了HOXA10、HOXB1和HOXD13在细胞株HA1800、U87和U251的表达，采用逆转录PCR和图像分析技术分析了4个同源盒基因mRNA在正常脑组织额叶、正常脑组织顶叶、胶质增生、瘤周组织和不同级别胶质瘤的表达。实验结果如下：（1）HOXA10mRNA在胶质瘤细胞株U87和U251中有高表达，与正常人星形细胞相比较，差异有显着性（P<0.01）；在胶质瘤组织中有高表达，与正常顶叶脑组织、正常额叶脑组织和胶质增生组织比较，差异有显着性（P<0.05）；在低级别胶质瘤中的表达和在高级别胶质瘤中的表达，差异无显着性（P>0.05）；（2）HOXB1基因在胶质瘤细胞株U87和U251中有高表达，与正常人星形细胞相比较，差异有显着性（P<0.01）；在胶质瘤组织中有高表达，与正常顶叶脑组织、正常额叶脑组织和胶质增生组织相比较，差异有显着性（P<0.05）；在低级别胶质瘤中的表达和在高级别胶质瘤中的表达，差异无显着性（P>0.05）；（3）HOXC6基因在胶质瘤组织中有高表达，与正常顶叶脑组织和胶质增生组织比较，差异有显着性（P<0.05）；与额叶正常脑组织的表达比较，差异无显着性（P>0.05）；在成人低级别胶质瘤中和在高级别胶质瘤中有高表达，但在低级别胶质瘤中的表达和在高级别胶质瘤中的表达，差异无显着性（P>0.05）；（4）HOXD13基因在胶质瘤细胞株U87和U251中有高表达，与正常人星形细胞相比较，差异有显着性（P<0.01）；在胶质瘤组织中没有明显高表达，与正常顶叶脑组织、正常额叶脑组织和胶质增生组织比较，差异无显着性（P>0.05）；在低级别胶质瘤中的表达和在高级别胶质瘤中的表达，差异无显着性（P>0.05）。综合两部分实验结果，实验结论如下：（1）在胶质瘤细胞和组织中，ADAR2在前体mRNA自身编辑过程中产生一种长度为47个碱基的剪切异构体（ASV）；这种ASV可能与胶质瘤的恶性程度相关，并可能成为胶质瘤个体化治疗的新靶点。（2）HOXB1基因可能是新的、与胶质瘤发生、发展相关的HOX基因。(本文来源于《吉林大学》期刊2014-04-01）
严翔,曹玉华,刘一,曾林,隋丽华[10]（2013）在《Mamu-B* 007:03及其剪切异构体Mamu-B* 007:03-sv1基因的表达与细胞内定位》一文中研究指出目的 Mamu-B*007:03-sv1是中国恒河猴主要组织相容性复合体(major histocompatibility complex,MHC)I类分子的一种剪切异构体,其α3结构域缺失。本实验初步获得其在细胞内的表达和定位信息,并与全长的Mamu-B*007:03基因的表达情况进行比较。方法分别构建Mamu-B*007:03-sv1-myc-pEGFPN3和Mamu-B*007:03-myc-pEGFPN3的真核表达载体,并将这两种重组质粒分别转染293T细胞。利用Western-blot免疫印迹实验检测这两种基因在细胞内的表达情况,并利用激光共聚焦显微镜技术分别分析这两种基因在细胞内的表达定位。结果 Mamu-B*007:03-sv1和Mamu-B*007:03基因均能在293T细胞内正常表达。Mamu-B*007:03-sv1发生了糖基化的修饰,Mamu-B*007:03基因在细胞膜上表达,Mamu-B*007:03-sv1基因在细胞内表达。结论 Mamu-B*007:03-sv1基因的α3结构域缺失,其细胞内的表达和定位与全长Mamu-B*007:03基因有明显差异,其功能有待于进一步探索。(本文来源于《中国比较医学杂志》期刊2013年12期）
剪切异构体论文开题报告
（1）论文研究背景及目的
此处内容要求：
首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景，再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题，并提出你的论文准备的观点或解决方法。
写法范例：
背景/目的近几十年来,大量临床调查和实验研究都论证了电针和中药广泛地应用于各种损伤和疾病引起的疼痛的治疗。有大量的研究结果显示,电针可以产生内源性的阿片肽,某些炎症虽然参与了电针镇痛,但是认为外周和中枢阿片受体是其发挥作用的主要靶点,并且以吗啡为代表的μ阿片类药物可引起大脑不同区域μ阿片类受体及其剪切异构体的改变。本实验采用了野生型C57BL/6小鼠(WT)及同品系μ阿片类受体基因敲除小鼠(mE7b),专注于研究中枢神经系统特定区域的μ阿片类受体及其剪切异构体,尝试寻找电针及中药与OPRM1的联系,旨在探索电针和中药镇痛的效力和机制。方法电针治疗疼痛的方案很多,通过对此类文献的统计分析,确定选穴以及具体的实验操作细节,比如不锈钢针的规格、电针仪的频率、针刺的深度、电流的强度及刺激的时间等等;同时,传统中药材中具有镇痛效应的很多,包括元胡(延胡索)、白芷、蟾酥等等,根据作用机制的不同,本研究选取了主要作用于μ阿片类受体的多甲氧基黄酮类(提取于柑橘属的药材)药物来进行实验。首先,我们建立了小鼠的疼痛模型,在模型建立成功后,予以电针刺激及药物治疗,检测其疼痛行为学的改变,记录并分析数据,观察同样条件下WT和mE7b小鼠之间的差异;其次,通过qPCR观察电针及药物对于小鼠不同脑部区域μ阿片类受体基因的mRNA表达的影响;在确定了电针及药物是通过阿片类受体发挥作用后,对WT小鼠进行局部(外周)或脑室(中枢)注射β-FNA,一种μ阿片类受体拮抗剂,随后再予以电针刺激和药物治疗,比较外周和中枢使用β-FNA的行为学差异,探索电针和中药镇痛的主要靶点;最后再通过Western Blot和免疫组化技术分析应用电针和中药治疗后疼痛的下游分子指标ERK1/2和c-Fos的变化。结果1.电针和多甲氧基黄酮可以改善福尔马林诱导的急性疼痛,尤其是第二相痛,同时也可改善CFA诱导的疼痛模型鼠在24h内对热刺激和机械刺激的反应;2.在脑室注射了β-FNA后,电针的镇痛效果显着降低,而局部注射β-FNA则影响不大,仅在4h这个时间点镇痛效果出现降低;与此不同的是,脑室注射β-FNA可显着降低多甲氧基黄酮的镇痛效果,而局部注射β-FNA则对多甲氧基黄酮的镇痛效果完全无影响;3.电针和多甲氧基黄酮可调控疼痛相关脑区OPRM1的表达,尤其是电针更显着;4.CFA诱导的疼痛模型鼠脑部区域p-ERK的表达显着上调,电针治疗可以使WT小鼠ERK的磷酸化水平降低,接近正常水平;对于mE7b小鼠,电针降低了THA区域的磷酸化水平而对RVM区域无影响;与此同时,CFA诱导的疼痛模型鼠脑部区域c-Fos的表达也显着上升,在WT小鼠,电针治疗可降低这一效果,除了THA区域,而对于mE7b小鼠,电针仅可降低RVM区域c-Fos的表达;5.与电针不同,多甲氧基黄酮虽能降低WT小鼠ERK的磷酸化水平,但是并不能降低mE7b小鼠ERK的磷酸化水平;与此同时,多甲氧基黄酮也不能降低mE7b小鼠脑部区域c-Fos的表达。结论1.电针和多甲氧基黄酮均可降低福尔马林诱导的二相痛和CFA诱导的持续性疼痛,而在μ-opioid受体基因敲除后,镇痛作用都有所下降,在多甲氧基黄酮治疗组这一效应更明显;2.电针主要通过中枢μ阿片类受体发挥作用而多甲氧基黄酮则完全通过中枢μ阿片类受体发挥作用;3.已知电针可以通过产生内源性阿片肽发挥作用,我们的结果表明,电针对于OPRM1基因及其剪切异构体mRNA表达水平的调节也参与了电针的镇痛过程,而多甲氧基黄酮则是作为一种阿片类药物发挥镇痛作用,对OPRM1并无影响;4.ERK的磷酸化水平和c-Fos的表达水平在CFA诱导的疼痛模型鼠的脑部区域中显着上调,说明这两个指标的上调能代表小鼠处于疼痛状态,而电针和多甲氧基黄酮对于p-ERK和c-Fos的下调可出现在大多数WT小鼠的脑部区域,而对于mE7b小鼠则无此效果,说明电针和多甲氧基黄酮可通过降低ERK的磷酸化水平和c-Fos的表达水平来发挥镇痛作用,这一过程需要μ-opioid的参与。
（2）本文研究方法
调查法：该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。
观察法：用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。
实验法：通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。
文献研究法：通过调查文献来获得资料，从而全面的、正确的了解掌握研究方法。
实证研究法：依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。
定性分析法：对研究对象进行“质”的方面的研究，这个方法需要计算的数据较少。
定量分析法：通过具体的数字，使人们对研究对象的认识进一步精确化。
跨学科研究法：运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。
功能分析法：这是社会科学用来分析社会现象的一种方法，从某一功能出发研究多个方面的影响。
模拟法：通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。
剪切异构体论文参考文献
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[2].刘岸龙.基于μ阿片类受体（OPRM1）及其剪切异构体研究电针和多甲氧基黄酮镇痛机制[D].南京中医药大学.2019
[3].刘显成.一个组成型表达的草鱼ADAR1基因剪切异构体ADAR1a的鉴定与特征[D].南昌大学.2017
[4].沈欢欢.比格犬ERβ及其剪切异构体ERβ_(419)、ERβ_(431)作用机理的初步研究[D].黑龙江八一农垦大学.2016
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[9].魏君.人脑胶质瘤中RNA编辑酶ADAR2及其剪切异构体、同源盒基因HOXB1、HOXC6的表达及意义[D].吉林大学.2014
[10].严翔,曹玉华,刘一,曾林,隋丽华.Mamu-B*007:03及其剪切异构体Mamu-B*007:03-sv1基因的表达与细胞内定位[J].中国比较医学杂志.2013