导读:本文包含了竹节香附素论文开题报告文献综述及选题提纲参考文献，主要关键词:竹节香附素,JAK,STAT3,HEC-1-B细胞
竹节香附素论文文献综述
陈悦群,翟洪波,仝进毅,屈王蕾[1]（2019）在《竹节香附素通过抑制JAK/STAT3信号转导通路抑制人子宫内膜癌HEC-1-B细胞的侵袭转移》一文中研究指出目的:探讨竹节香附素对人子宫内膜癌HEC-1-B细胞的侵袭转移影响,以及JAK/STAT3信号转导通路在此过程中发挥的作用。方法:选取正常贴壁生长的对数期人子宫内膜癌HEC-1-B细胞,分成两组,一组用竹节香附素处理,为观察组;另一组用生理盐水处理,作为对照组。划痕实验比较两组的细胞在不同时间点的迁移情况;Transwell实验比较两组细胞的侵袭能力;CCK-8检测两组细胞的增殖能力;荧光定量PCR和Western blot检测细胞中Janus激酶(JAK)、信号转导子和转录激活子(STAT3)基因的表达情况。结果:48 h后,观察组的迁移距离小于对照组(P<0.05),Transwell实验观察组侵入下方小室的细胞数量低于对照组(P<0.05)。两组细胞在48 h内的细胞增殖结果差异并无统计学意义(P>0.05)。相比较对照组,荧光定量PCR和Western blot的结果均显示观察组的JAK和STAT3基因表达量下降(P<0.05)。结论:竹节香附素可显着抑制人子宫内膜癌HEC-1-B细胞的侵袭和转移能力,其机制可能通过调控JAK/STAT3信号通路而发挥作用。(本文来源于《中国临床药理学与治疗学》期刊2019年04期）
王莎莎,刘鑫,张月,赵凌,李剑男[2]（2018）在《竹节香附素A抗炎作用的研究》一文中研究指出目的在构建核转录因子-κB(NF-κB)通路报告基因模型后,研究竹节香附素A(RDA)抗炎的作用及其作用机制。方法用双荧光素酶报告基因技术,以p NF-kappa B-Luc(p NF-κB-Luc)、pr L-tk质粒转染RAW 264.7细胞,脂多糖(LPS)为激活剂,构建靶向NF-κB通路的报告基因模型,RDA和吡咯烷二硫氨基甲酸酯(PDTC)分别给药验证模型。空白组给予空白培养基,模型组给予含LPS的培养基,对照组给予含PDTC的培养基,实验组给予含RDA的培养基。用Western-blot技术检测RDA对细胞蛋白p65和IκBα表达的影响。结果当LPS浓度为10μg·m L~(-1),转染试剂量为2μL时,成功构建靶向NF-κB通路的报告基因模型。RDA能够降低转染后细胞内p65和IκBα亚基的磷酸化,显着抑制NF-κB信号通路。结论本文构建的模型具有快速、稳定、特异、高通量等特点,可用于抗炎活性成分筛选,确认RDA的抗炎机制与NF-κB通路有关。(本文来源于《中国临床药理学杂志》期刊2018年13期）
孟春芹,滕钰浩,吴存恩,王瑞平[3]（2018）在《竹节香附素A调控mTOR通路对肠癌HCT116细胞自噬及凋亡的影响》一文中研究指出目的探讨竹节香附素A(RA)抑制HCT116细胞的增殖及其相关机制。方法利用四甲基偶氮唑蓝(MTT)检测RA对HCT116细胞的增殖抑制;流式细胞术(FCM)检测RA对细胞凋亡的影响;透射电镜观察RA诱导自噬;Western blot检测凋亡、自噬相关蛋白表达。结果 RA能够明显抑制HCT116细胞的增殖,并呈浓度、时间依赖性。透射电镜观察到双层膜自噬体的存在;FCM显示RA能够诱导HCT116细胞凋亡,且随着浓度的增大凋亡率增加。Western blot检测显示,自噬相关蛋白Beclin-1、微管相关蛋白1轻链3(LC3)表达增高;抑制凋亡蛋白Bcl-2表达减少;而促凋亡蛋白Bax,凋亡相关蛋白Cleaved-caspase-3、Cleaved-聚二磷酸腺苷核糖多聚酶(PARP)表达增加;RAPA靶蛋白(mTOR)信号通路中mTOR蛋白表达增加,磷酸化mTOR(p-mTOR)蛋白表达减少。加入mTOR通路抑制剂雷帕霉素(RAPA)后Beclin-1、LC3蛋白表达增加,凋亡率增加,且Cleaved-caspase-3、Cleaved-PARP表达也增加。结论 RA能够抑制肠癌细胞HCT116的增殖;并能诱导细胞自噬和凋亡,其机制可能是通过调控mTOR信号通路实现。(本文来源于《重庆医学》期刊2018年14期）
王强[4]（2018）在《竹节香附素A治疗破骨细胞相关骨溶解疾病的机制研究》一文中研究指出研究背景随着中国进入老龄化社会,我们骨科面临了许多有明显增长趋势的问题,如骨质疏松、关节置换后金属颗粒物对骨组织的溶解作用、肿瘤骨转移等。有近期研究表明,中国目前高达2.1亿人其骨量低于正常标准,更有甚者,我国50岁以上人群中骨质疏松的发生率高达15.7%。骨质疏松患者体内骨质量下降、骨组织微小结构退化进而脆性增加并波及全身,罹患的病症为胸腰背及全身关节酸痛、疼痛甚至骨折,其生活质量、生存时间被极大地降低,并带来了巨大的经济和社会负担。年龄相关的另一个常见问题是骨关节炎,近20年来,人工关节置换数量呈爆发式增长。人工关节置换数量的增长背后,假体周围骨溶解的问题也不断显现,该问题被称为“颗粒病”。颗粒病是由关节假体金属磨损所产生的碎屑刺激骨组织,经一系列病理生理变化后造成骨组织降解,进而导致假体松动及相应的症状。肿瘤骨转移是原发于骨组织外的恶性肿瘤其细胞经血行传播至骨组织并引起以骨病变及疼痛为主要表现的疾病。随着肿瘤病人的增加、病程的延长,骨转移也相应地增加,而脊柱由于其特性肿瘤转移的发生率最高。除了肢体疼痛,肿瘤转移到脊柱造成骨损害甚至病理性骨折还可能造成脊髓受压而致病人瘫痪。骨转移的原发恶性肿瘤最常见的是乳腺癌,一项研究表明,70%的死于乳腺癌或者前列腺癌的病人发生了骨转移。这些问题的一个共同点,就是破骨细胞的激活。破骨细胞是人体内唯一吸收骨质的细胞,它和成骨细胞维持着骨吸收骨形成平衡以保证骨组织健康。当它们被激活、其数量增加或者功能增强时,即可引起包括骨质疏松症、假体周围骨溶解、肿瘤骨转移、骨关节炎等在内的众多问题。因此,进行破骨细胞相关疾病的研究具有极高的医学和社会经济价值。虽然目前临床上使用的药物有许多,如降钙素、二磷酸盐、雌激素等在治疗这些疾病表现出一定的疗效,但仍存在骨折、骨坏死和肿瘤等多种并发症的报道。因此,我们还需要新的效果更好副作用更少的药物,而这在近年来也成为研究领域的焦点。目前,采用天然植物药提取物开展抑制破骨细胞分化和功能发挥、防治破骨细胞介导的骨溶解相关疾病的研究越来越受关注。我们通过药物筛选试验,一种以往少量用在肿瘤治疗研究的中草药单体竹节香附素A表现出了有效抑制破骨细胞的功能。因此,本研究将进一步探究竹节香附素A抑制破骨细胞的分子生物学机制及乳腺癌骨转移的细胞和分子机制,并通过动物实验确认竹节香附素A在体内预防和治疗破骨细胞相关的叁类包括乳腺癌骨转移的主要疾病中的作用,为临床转化应用提供理论基础。目的研究竹节香附素A影响破骨细胞活性的分子生物学机制;研究竹节香附素A对钛颗粒诱导的骨溶解模型和裸鼠乳腺癌骨转移模型的作用及细胞和分子机制。方法采用6周大C5 7BL/6雌鼠的骨髓腔细胞作为细胞源来培养破骨细胞和成骨细胞。破骨细胞鉴定为TRAP染色、3个核及以上阳性的细胞,成骨细胞分化和功能以ALP染色和茜素红染色来评估;竹节香附素A对细胞的毒性以CCK-8试剂盒测定,并计算半数抑制浓度IC50;qRCR测定破骨细胞、成骨细胞相关基因表达量;竹节香附素A对破骨细胞骨吸收功能的抑制通过牛骨片吸收试验来验证;western blotting研究竹节香附素A抑制破骨细胞和乳腺癌细胞的信号通路。再通过构建小鼠钛颗粒诱导的颅盖骨骨溶解模型,根据组别局部注射竹节香附素A药液或者对照液每天1次,连续14天。小鼠颅盖骨标本,行microCT扫描分析和组织切片检查,以研究竹节香附素A在体内对钛颗粒诱导的破骨细胞骨溶解的抑制;为了进一步验证竹节香附素A在体内对肿瘤骨转移的作用,我们在裸鼠胫骨平台内注射乳腺癌细胞构建乳腺癌骨转移模型。再根据组别腹腔注射竹节香附素A药液或者对照液每天1次,连续28天。最后取裸鼠胫骨标本进行对照研究。结果毒性试验证实在48小时内低于0.781μM浓度、72小时内低于0.391μM、96小时内低于0.098μM的竹节香附素A条件下,BMMs细胞活性没有收到明显抑制。IC50在48小时时为3.73μM、在72小时为2.91μM、在96小时为1.94μM。竹节香附素A对其活性的抑制为浓度梯度依赖。我们将BMMs在MSC和RANKL刺激下培养,并加入不同浓度的竹节香附素A(0.2μM、0.4μM、0.8μM)、或者加入0.4μM竹节香附素A分别培养3、5、7天,结果与对照组相比,药物组破骨细胞数和面积均有不同程度下降;同时,竹节香附素A对破骨细胞分化的抑制表现出浓度时间依赖的特点。RANKL刺激后,空白组破骨细胞相关基因出现了明显的表达上调,而在竹节香附素A组,这些基因的表达有不同程度的下调;同时,竹节香附素A对这些基因的表达表现出浓量和时间依赖性的抑制作用。我们在成骨细胞培养体系内加入不同浓度的竹节香附素A,结果在第7天行ALP染色显示与空白对照组相比,成骨细胞在0.2μ、0.4μM和0.8μM竹节香附素A均无明显抑制;在第21天行茜素红染色显示0.2μM组成骨细胞性矿化较空白对照组增多,其余浓度组无明显差异。成骨细胞特异性基因表达检测显示在第7天空白组和各浓度药物组无明显差异,而在第14天药物组(0.4μM)sparc的表达明显增高。这些结果表明竹节香附素A在体外对成骨细胞分化和功能至少无明显抑制作用。我们在牛骨片上(无菌)培养BMMs,同时加入不同浓度的竹节香附素A,结果空白组牛骨片上骨吸收面积约为43%,而在0.2μM组,骨吸收的区域降低到了约18%,在0.4μM组更减少为约7%,在0.8μM组骨吸收不明显。由此我们可以明确竹节香附素A在体外具有抑制破骨细胞分化和骨吸收功能的作用。在MAPK、NF-κB和SRC/AKT等信号通路上,AKT在RANKL刺激后10min出现磷酸化,而在竹节香附素A药物组中,AKT的磷酸化在10min和30min时受到明显抑制;SRC的表达在RANKL刺激后3天明显上调,而竹节香附素A抑制了这种趋势;JNK、p38、ERK和IκBα的表达空白对照组与药物组无明显差异。进一步地,我们发现对照组SRC在破骨细胞被RANKL刺激3天后明显升高,加入竹节香附素A药物组SRC被明显抑制,而同时加入SC79实验组SRC的抑制趋势被挽救。这些结果表明竹节香附素A可能通过抑制SRC/AKT信号通路来抑制破骨细胞的分化与功能。我们在构建的钛颗粒诱导的小鼠骨溶解模型上注入生理盐水(骨溶解对照组)、不同浓度竹节香附素A药液、同时我们还设立了空白对照(不注射钛颗粒、注射生理盐水),14天后microCT显示与空白对照组相比,对照组小鼠颅盖骨溶解非常明显,而低浓度和高浓度竹节香附素A药物组骨溶解有不同程度的缓解。我们还进一步在micro-CT叁维重建图像上测量了骨量与组织量比(BV/TV)和反应区域(ROI)孔隙率,结果与对照组相比,低浓度和高浓度RA组的BV/TV均有不同程度的升高,而孔隙率有不同程度的降低。同时TRAP染色显示骨溶解对照组小鼠颅骨溶解区骨表面有大量多核破骨细胞聚集,而低浓度和高浓度药物组的破骨细胞却有不同程度的减少。CTSK免疫组化染色也显示了相同的趋势。这些数据提示了竹节香附素A在体内能够抑制破骨细胞分化和骨吸收功能,抑制钛颗粒诱导的骨溶解。MDA-MB-231乳腺癌细胞系的48小时和96小时细胞毒性实验表明,大于6.25μM的竹节香附素A能明显抑制MDA-MB-231细胞系生长,IC50分别为18.01μM和15.77μM,相对于破骨细胞,MDA-MB-231细胞系对竹节香附素A的耐受性更强。EdU(5-乙炔基-2'脱氧尿嘧啶核苷)检测分析表明,经不同浓度的竹节香附素A处理后24小时,MDA-MB-231细胞系的增殖被明显抑制。细胞流式分析显示竹节香附素A能显着增加凋亡细胞比例。细胞体外侵袭实验显示竹节香附素A对MDA-MB-231细胞系侵袭行为的抑制呈浓度依赖性。我们采用另一种乳腺癌细胞系BCAP37进行研究,也得到了类似结果。我们将MDA-MB-231乳腺癌细胞注射入裸鼠胫骨平台,再每天经腹腔注射PBS或竹节香附素A(100μg/kg),28天后行micro-CT和组织学检查发现。结果与竹节香附素A药物组相比,PBS对照组骨小梁骨丢失明显增加;竹节香附素A药物组BV/TV较对照组高而骨小梁间隙较对照组窄;竹节香附素A药物组骨皮质尚完整而对照组骨小梁吸收严重且骨皮质分离。进一步的TUNEL分析显示与对照组相比,药物组乳腺癌细胞的凋亡程度明显增加。这些结果提示竹节香附素A在体内能抑制乳腺癌细胞诱导的骨溶解。最后,将MDA-MB-231细胞在浓度为3μM的竹节香附素A经不同时间的处理后,我们发现AKT的磷酸化和mTOR的表达均不同程度地被下调,提示竹节香附素A对MDA-MB-231细胞生长和侵袭的抑制可能通过AKT/mTOR信号通路发挥作用。结论竹节香附素A在体外可以抑制破骨细胞分化和骨吸收而不抑制成骨细胞的分化和功能、可以抑制MDA-MB-231和BCAP37乳腺癌细胞系的生长和侵袭,在体内可以抑制钛颗粒和MDA-MB-231乳腺癌细胞系引起的骨溶解,由此我们推测竹节香附素A具有治疗破骨细胞相关疾病和乳腺癌骨转移的潜在价值。(本文来源于《浙江大学》期刊2018-05-01）
王宇,姜修博,韩豆,朱志铭,宋长琴[5]（2018）在《竹节香附素A对人结肠癌细胞HCT-116增殖、凋亡、迁移及侵袭活性的影响》一文中研究指出目的研究竹节香附素A(Raddeanin A,RA)对人结肠癌细胞HCT-116增殖、凋亡、迁移及侵袭活性的影响,并初步探讨其作用机制。方法采用不同浓度的RA(0.125~50.0μmol·L~(-1))处理HCT-116细胞24,48 h,四甲基偶氮唑蓝(MTT)法检测细胞的增殖能力。RA(1.0,2.0,4.0μmol·L~(-1))干预后,采用Annexin V/PI双染法检测细胞凋亡率;JC-1染色法检测线粒体膜电位变化;DCFH-DA法检测细胞内活性氧簇(ROS)水平;采用Western Blot法检测细胞中Cleaved caspase-3蛋白表达。选择低于凋亡浓度的RA(0.25,0.5,1.0μmol·L~(-1))作用于HCT-116细胞,采用细胞划痕实验和Transwell穿膜实验观察不同浓度RA对HCT-116细胞迁移的影响;采用铺有Matrigel胶的Transwell实验检测RA对HCT-116细胞侵袭能力的影响;采用RT-PCR法和Western Blot法检测RA对HCT-116细胞中MMP-2、MMP-9 m RNA及蛋白表达的影响。结果 RA干预24,48 h后的IC50值分别为5.967μmol·L~(-1)和4.797μmol·L~(-1),且呈现浓度与时间依赖性。与空白对照组比较,RA1.0,2.0,4.0μmol·L~(-1)浓度组凋亡、坏死的HCT-116细胞明显增多(P<0.05,P<0.01);线粒体膜电位坍塌率分别为70.2%,74.4%和91.6%,差异均有统计学意义(P<0.01);细胞内ROS含量均显着增加(P<0.01),且呈现浓度依赖性;Cleaved caspase-3蛋白的表达水平随RA浓度的增加而显着提高(P<0.01)。RA干预后与空白对照组比较,0.5,1.0μmol·L~(-1)浓度组的细胞愈合率显着降低(P<0.01);RA 0.25,0.5,1.0μmol·L~(-1)浓度组均能显着抑制HCT-116细胞的迁徙能力(P<0.01),均能显着抑制HCT-116细胞体外侵袭能力(P<0.05,P<0.01);RA 0.5,1.0μmol·L~(-1)浓度组MMP-2、MMP-9 m RNA及蛋白相对表达水平均显着降低(P<0.05,P<0.01)。结论 RA既能够有效抑制人结肠癌HCT-116细胞增殖,又能诱导该细胞的凋亡,可能与诱导细胞内ROS产生,导致线粒体膜电位坍塌,激活caspase信号通路有关。低于凋亡浓度的RA(0.25,0.5,1.0μmol·L~(-1))能明显抑制HCT-116细胞的迁移与侵袭活性,可能与通过下调HCT-116细胞MMP-2、MMP-9m RNA及蛋白表达有关。(本文来源于《中药新药与临床药理》期刊2018年02期）
孟春芹[6]（2018）在《竹节香附素A调控PI3K/AKT/mTOR诱导肠癌细胞自噬和凋亡的研究》一文中研究指出研究目的:目前已有多项研究证实中药银莲花的提取物竹节香附素A(RaddeaninA,RA)能够有效地抑制肝癌、卵巢癌、乳腺癌等多种恶性肿瘤细胞株的增殖,且本课题组在前期体外实验中也证实RA能够很好的抑制高、中、低不同分化程度的胃癌细胞的增殖,但未能观察RA的体内抗肿瘤作用。本实验拟研究RA在体内外对肠癌HCT116细胞自噬和凋亡的影响,并进一步讨论其相关机制,为大肠癌更好地治疗提供更多的理论依据。研究方法:体外实验研究方法1通过MTT实验检测不同浓度的RA(2、4、8、16 μM)对HCT116细胞不同作用时间(12 h、24 h、36 h、48 h)的增殖抑制作用。2倒置相差显微镜观察RA对HCT116细胞形态变化的影响。3 透射电镜(Electron Microscope Analysis,TEM)观察 RA 作用于 HCT116 细胞后自噬体的形成情况。4 Hoechst33258 染色及流式细胞术(Flow Cytometry,FCM)观察 RA 对 HCT116 细胞凋亡的影响。5 RealTime-PCR(RT-PCR)检测 RA 对 HCT116 细胞自噬、凋亡及 PI3K/AKT/mTOR通路等相关基因表达的影响。6采用免疫荧光实验检测RA对HCT116细胞自噬相关蛋白LC3表达的影响。7 采用 WesternBlot(WB)实验检测 RA 对 HCT116 自噬、凋亡、PI3K/AKT/mTOR信号通路相关蛋白表达的影响。8应用PI3K抑制剂LY294002阻断PI3K/AKT/mTOR信号通路,分别观察RA对HCT116细胞自噬和凋亡的影响。9分别应用自噬抑制剂羟氯喹(Hydroxychloroquine,HCQ)和自噬激动剂雷帕霉素(Rapamycin,RAPA),观察RA对HCT116细胞自噬和凋亡关系的影响。体内实验研究方法1采用人肠癌HCT116细胞建立荷瘤鼠模型,分为对照组和RA组,隔天一次腹腔注射给药,观察RA对裸鼠皮下移植瘤生长情况的影响。2采用HE(hematoxylin-eosinstaining)染色法观察RA对裸鼠移植瘤组织形态学变化的影响。3透射电镜观察RA对裸鼠移植瘤组织自噬的影响。4 TUNEL(TdT-mediated dUTP Nick-End Labeling)染色法观察 RA 对裸鼠移植瘤细胞凋亡的影响。5Westrn Blot实验、免疫组织化学实验分别检测自噬、凋亡和PI3K/AKT/mTOR信号通路相关蛋白的表达情况。研究结果:体外研究结果1MTT实验显示,同一时间,随着浓度的增大(2、4、8、16μM),RA对HCT116细胞的增殖抑制作用逐渐增加,与对照组相比,差异有统计学意义(P<0.01);同一浓度的RA分别作用于HCT116细胞12 h、24 h、36 h、48 h,抑制率随作用时间的延长而增加,RA对HCT116细胞的增殖抑制作用表现为良好的浓度、时间依赖性。2观察RA作用于HCT116细胞后形态的变化,镜下可见:对照组细胞生长状态良好,细胞间连接紧密,排列规则,细胞形态清晰可见,而经RA处理过的细胞状态较差,数量逐渐减少,细胞形态变圆皱缩,细胞间间隙也逐渐增大,且随着RA浓度的增大,细胞基本失去原有形态,甚至出现漂浮细胞。3透射电镜显示,对照组胞质内未发现自噬体相关结构,而经RA(4 μM)处理过的HCT116细胞在胞质内可见清晰的双层膜自噬体结构。4经不同浓度RA(4、8μM)处理后,Hoechst33258染色观察到HCT116细胞核逐渐出现固缩、碎裂现象;流式细胞术结果显示:与对照组相比,随着RA浓度的增大,早期凋亡和中晚期凋亡细胞数逐渐增多,凋亡呈现量-效关系。5RT-PCR实验结果显示,RA作用于HCT116细胞12h后,自噬相关基因Beclin-1、ATG5、ATG12表达较对照组均增高;促凋亡BAX基因表达上调,而抑凋亡Bcl-2基因表达下调。6免疫荧光实验结果显示,4μM的RA作用于HCT116细胞后,自噬相关蛋白LC3表达较对照组显着增加。7 RA处理HCT116细胞12 h后,Western Blot实验结果发现,自噬相关蛋白Beclin-1、ATG5、ATG12的表达随着RA浓度的增大而增加,LC3 Ⅰ蛋白的表达也随着浓度的增大逐渐向LC3Ⅱ蛋白翻转;凋亡关键性蛋白Cleaved-caspase-3、Cleaved-PARP表达较对照组显着增加,不仅如此,凋亡内源性通路和外源性通路关键蛋白Cleaved-caspase-9、Cleaved-caspase-8 表达也增加。而 PI3K/AKT/mTOR 信号通路相关蛋白 p-PI3K、p-AKT、p-mTOR表达则随着RA浓度的增大而减少。8 RA(4 μM)联合 PI3K 抑制剂 LY294002(10μM)作用于 HCT116 细胞后,Western Blot结果显示自噬蛋白LC3Ⅱ、Beclin-1表达较RA单独作用组增多;流式细胞术(FCM)结果发现RA联合LY294002组细胞凋亡率较RA单独作用组明显增加,差异有统计学意义(P<0.05)。此外,RA 联合 LY294002 组凋亡蛋白 Cleaved-caspase-3、Cleaved-PARP表达也增加。9RA(4μM)联合自噬抑制剂羟氯喹(10μM)后,自噬过程被抑制,自噬蛋白LC3Ⅱ、Beclin-1表达减少,而细胞凋亡率较RA单独作用时也减少,此外,凋亡相关蛋白BAX、Cleaved-caspase-3、Cleaved-PARP表达也减少。RA联合自噬激动剂雷帕霉素(100nM)后,LC3Ⅱ、Beclin-1蛋白表达增加,细胞凋亡率较RA单独作用时增加,凋亡相关蛋白BAX、Cleaved-caspase-3、Cleaved-PARP 表达也增加。体内研究结果1裸鼠移植瘤实验结果显示,与对照组相比,RA治疗组裸鼠皮下移植瘤无论是瘤体积还是瘤重量都显着减小,差异有统计学意义。2 HE染色结果显示RA(4 mg/kg)组肿瘤组织中有大量炎性细胞浸润,可见病理性核分裂,坏死面积超过1/2,而对照组可见少量炎性细胞,坏死面积不足1/4。3组织电镜镜下观察到RA治疗组组织细胞内有双层膜自噬体结构形成。4 TUNEL染色实验发现对照组未发现被染的凋亡细胞,而RA治疗组出现大量被染色的凋亡细胞。5与对照组相比,Western Blot及免疫组化结果提示RA组中自噬蛋白LC3、Beclin-1表达增加;凋亡相关蛋白Cleaved-caspase-3、Cleaved-PARP表达也增加,而caspase-3、PARP表达减少;PI3K/AKT/mTOR通路蛋白p-PI3K、p-AKT、p-mTOR蛋白表达减少。研究结论:1 RA能够有效地抑制肠癌HCT116细胞的增殖,且呈浓度-时间依赖性。2 RA在体外能够诱导肠癌HCT116细胞发生自噬和凋亡,其机制可能是通过调节PI3K/AKT/mTOR通路实现的。3 RA诱导的HCT116细胞自噬能够增加细胞凋亡。4 RA对肠癌HCT116细胞裸鼠皮下移植瘤的生长具有良好的抑制作用。5诱导细胞自噬和凋亡,可能是RA在体内抑制肿瘤细胞增殖的机制。(本文来源于《南京中医药大学》期刊2018-03-21）
李剑男[7]（2018）在《竹节香附素A及其联合用药对人肝癌细胞QGY-7703的作用机制研究》一文中研究指出癌症是人类健康的重大威胁,每年全世界有800万人死于癌症。抗癌药物的研发一直是药学研究的热点内容。传统的化学类抗癌药物副作用多且容易发生癌细胞耐药现象,严重影响了患者的生存质量。从天然产物中所提取的单体类活性成分不仅抗癌活性良好且具有较低的副作用。开发单体类抗癌药物具有十分重要的现实意义。中药两头尖又名竹节香附、草乌喙,为毛茛科植物多被银莲花Anemone raddeana Regel的干燥根茎。两头尖作为药物首次被明朝刘文泰所着《本草品汇精要》记载。竹节香附素A(Raddeanin A,RDA)是两头尖中的主要活性化学成分之一。前期研究表明,RDA具有良好的抗肿瘤活性,对肝癌、卵巢癌、肺癌等均具有良好的抑制作用。但是目前RDA的抗癌作用机制尚未明确。本文研究RDA对人肝癌细胞QGY-7703的作用情况,重点研究了RDA对QGY-7703细胞的迁移侵袭抑制作用和细胞内DNA甲基化的抑制作用及其机制。此外,还研究了RDA和细胞内NF-κB信号通路异常激活的抑制作用的关系。此外,本文还研究了RDA及其与顺铂(DDP)联用抑制QGY-7703细胞的增殖作用情况的影响和对细胞内活性氧(ROS)的影响及对凋亡相关基因表达的影响。第一部分RDA对NF-κB信号通路的抑制作用机制研究我们采用siRNA基因沉默技术和RT-PCR、Western-Blot等技术研究RDA对NF-κB信号通路的抑制作用。采用免疫荧光法研究RDA对NF-κB p65亚基核转运的作用情况。采用双荧光素酶报告基因法验证了RDA对NF-κB信号通路的作用情况。实验结果表明siRNA-homo-1716沉默效果最好。在转染siRNA之后,阳性对照组中NF-κB的基因相对表达量为0.16,而空白组表达量为0.87,RDA组为0.53。在免疫荧光实验当中,RDA组NF-κB p65亚基的核转运过程受到了明显的抑制,染色的细胞数目明显减少。在双荧光素酶报告基因实验中,RDA组的萤火虫荧光素和海肾荧光素的平均比值为2.2268,对照组为1.2363,LPS诱导组为3.9714,空白组为0.8087。以上研究表明RDA能够强烈抑制NF-κB信号通路的异常激活。RDA能够抑制NF-κB蛋白家族中p65蛋白转运到细胞核的过程。双荧光素酶报告基因实验则验证了RDA能够抑制NF-κB信号通路。第二部分竹节香附素A抑制DNA甲基化作用机制研究我们采用CCK-8法测定RDA对QGY-7703的半数抑制浓度。采用亚硫酸氢盐法检测QGY-7703细胞中5-甲基胞嘧啶的含量。采用RT-PCR、Western-Blot等方法研究RDA对QGY-7703细胞DNA甲基化抑制作用具体作用机制。实验结果表明RDA对QGY-7703细胞的IC_(50)为6.20μmol/L。在DNA甲基化实验中,RDA给药后5-甲基胞嘧啶相对含量为9.6%,低于空白组的14.8%,但高于阳性对照组的4.2%。在RT-PCR实验中,RDA组的DNMT1基因的相对表达含量为5.86,空白组为8.03,阳性对照组为2.07。RDA组的DNMT3a基因的相对表达含量为3.4,空白组为4.46,阳性对照组为1.5。RDA组的DNMT3b基因的相对表达含量为5.6,空白组为6.35,阳性对照组为3.1。RDA能够显着降低QGY-7703细胞中5-甲基胞嘧啶含量。其作用机制是RDA抑制了DNA甲基化转移酶DNMT1和DNMT3a活性从而发挥其抑制DNA甲基化作用。第叁部分RDA联合顺铂(DDP)的抗癌机制研究我们采用CCK-8法及SRB法研究RDA及其与顺铂(DDP)联合应用对肝癌细胞QGY-7703的增殖抑制作用情况。采用Transwell小室和Matrimex基质胶研究了RDA对QGY-7703细胞的侵袭和迁移抑制作用。采用V-FITC/PI双染法和PI单染法研究RDA及其与DDP联用对QGY-7703细胞凋亡情况和细胞周期的影响情况。采用分子荧光分光光度法研究RDA及其与DDP联用对细胞内活性氧(Reactive Oxygen Species,ROS)的影响。采用RT-PCR和Western-Blot等技术研究RDA及其与DDP联合用药对QGY-7703细胞中p53、Bax、Bcl-2和Survivin四种与细胞凋亡有关的基因的表达情况的影响。实验结果表明SRB法与CCK-8法两种方法所测得的RDA与DDP对QGY-7703细胞的IC_(50)相关性良好,二者的拟合系数为0.97。RDA与DDP在终浓度分别为5μmol/L和10μmol/L时联用具有良好的协同作用。在细胞迁移实验中,在荧光倒置显微镜下空白组的平均细胞数目为61,RDA组的平均细胞数为43,DDP组的平均细胞数为22,二者联用组的细胞数目为16。在细胞侵袭实验中,空白组的平均细胞数目为67,RDA组的平均细胞数53,DDP组的平均细胞数为21,二者联用组的细胞数目为15。流式细胞术结果表明当RDA单独使用时,处于G1期的细胞占总数的60.6%,S期细胞占总数的30.35%,G2/M期是9.05%。RDA联合DDP用药后G1期为69.12%、S期为18.76%、G2期为12.12%。阳性对照组QGY-7703细胞的凋亡率为14.26%,RDA组的细胞凋亡率为22.51%,而二者联合用药的凋亡率为59.11%。当RDA的浓度1μmol/L时DCF荧光强度为11.763,当浓度为5μmol/L时DCF荧光强度为15.075,浓度为10μmol/L时荧光强度为18.645。当1μmol/L的RDA和5μmol/L的DDP合用DCF荧光强度为19.462,而5μmol/L的RDA和10μmol/L的DDP合用时DCF荧光强度为26.295。当RDA浓度分别为1μmol/L,5μmol/L,10μmol/L时,p53基因的相对表达量为0.91,1.28,1.64,bax基因的相对表达量为0.95,1.62,1.94,Bcl-2基因的相对表达量为2.03,1.68,1.41,survivin基因的相对表达量为2.15,1.53,1.36。当DDP的浓度为10μmol/L时,以上四种基因的相对表达量分别为1.93,2.19,1.19,1.21。联合用药组(5μmol/L的RDA和10μmol/L的DDP合用)以上四种基因相对表达量为1.75,2.01,1.29,1.26以上。研究表明,RDA与DDP联合应用对QGY-7703细胞的增殖具有抑制作用。二者合用能够有效抑制QGY-7703细胞的侵袭迁移作用且作用效果强于二者单独使用。二者合用还可以加速诱导QGY-7703细胞凋亡。RDA与DDP合用可使QGY-7703的细胞周期阻滞于G1期,明显提高细胞的凋亡率。此外,二者合用还会使QGY-7703细胞活性氧的含量显着上升,从而加速细胞的死亡。RDA与DDP联用后显着上调p53、bax基因的表达,下调Bcl-2、survivin基因的表达。通过Western-Blot实验,证明RDA与DDP合用可以有效抑制凋亡相关蛋白的表达。(本文来源于《长春中医药大学》期刊2018-03-01）
孟春芹,王瑞平[8]（2017）在《竹节香附素A对肠癌HT29细胞凋亡及周期的影响》一文中研究指出目的观察竹节香附素A(RA)对人结肠癌HT29细胞凋亡及周期的影响,并探讨其相关机制。方法 1、2、4、8、16μmol/L的RA分别作用细胞12、24、48 h,四甲基偶氮唑蓝(MTT)实验检测RA对HT29细胞的增殖抑制作用,计算半数抑制浓度IC50;荧光显微镜下观察Hoechst33258染色,RA对细胞凋亡形态学的影响;流式细胞术(FCM)检测RA对HT29细胞凋亡及细胞周期的影响;蛋白质印迹法(Westernblot,WB)检测Cleaved-caspase-3、Cleaved-PARP、Cyclin B、CDK1等蛋白的表达情况。结果竹节香附素A能够抑制HT29细胞的增殖,并与浓度、时间呈正相关(P<0.05),12、24、48 h IC50分别为为(9.31±0.63)μmol/L,(4.88±1.02)μmol/L,(3.60±0.89)μmol/L。Hochest33258染色发现细胞出现核固缩、核碎裂;流式细胞术显示:随着给药浓度的增大凋亡率逐渐增加(P<0.05);WB结果显示Cleaved-caspase-3、Cleaved-PARP蛋白表达增加。竹节香附素A作用于HT29细胞后,与对照组相比,G2/M期细胞比例逐渐增高;且Cyclin B、CDK1蛋白表达随着给药浓度的增大而减少。信号通路PI3K/AKT中PI3K、AKT蛋白表达上调,p-PI3K、p-AKT表达下调。结论 RA能够抑制肠癌HT29细胞的增殖,其机制可能是通过调控PI3K/AKT信号通路诱导细胞凋亡和阻滞细胞周期实现的。(本文来源于《实用医学杂志》期刊2017年23期）
滕钰浩[9]（2016）在《基于自噬、凋亡的竹节香附素A抗胃癌机制研究》一文中研究指出研究目的：竹节香附素A (Raddeanin A, RA),是中药银莲花的一种叁萜类提取物。本课题组前期体外实验研究发现：RA对多株胃癌细胞具有诱导凋亡和抑制侵袭的作用,而其中的作用机制尚不能完全明确。此外在理论研究中我们发现,自噬也可能是抗肿瘤机制之一,因而本课题组拟研究其对胃癌细胞自噬的影响及其机制,进一步探讨RA诱导的自噬和凋亡的相互关系。研究方法：1采用MTT法,观察RA对叁株不同分化程度的胃癌细胞(SGC-7901,SNU-1, HGC-27)的增殖抑制作用。2采用流式细胞术(Flow cytometry, FCM)和Hoechst 33258染色实验,观察RA对胃癌细胞凋亡比例和染色质形态的影响。3采用透射电镜,观察RA诱导胃癌细胞自噬体形成。4采用Western blotting实验,观察RA对凋亡、自噬以及p38 MAPK通路蛋白表达的影响。5采用公认地自噬抑制剂羟氯喹和自噬激动剂雷帕霉素,分别调控自噬后,再次观察对RA诱导的胃癌细胞凋亡、以及自噬的影响。研究结果：1 MTT实验提示,RA能高效地抑制叁株胃癌细胞增殖,并呈现良好地剂量依赖性。2 FCM和Hoechst 33258染色实验结果证实了：RA能诱导叁株胃癌细胞凋亡。而且,FCM结果提示RA诱导的细胞凋亡,呈现良好地量效关系。3透射电镜发现,中剂量的RA能诱导胃癌细胞形成自噬体。4 Western blotting实验从蛋白层面提示了,RA能剂量依赖性地促进胃癌细胞凋亡、自噬,并能够剂量依赖的激动p38 MAPK信号通路,进一步地抑制mTOR信号通路。5羟氯喹(Hydroxychloroquine,HCQ)、雷帕霉素(Rapamycin, Rap)能够在胃癌细胞中起到自噬调节剂的作用。接着我们在FCM检测中发现,HCQ和Rap本身并不能影响细胞凋亡状态。有趣的是,HCQ能抑制细胞自噬,同时增强RA诱导的细胞凋亡作用。Western blotting实验,从蛋白层面也佐证了这些改变。我们认为,抑制自噬可以增强RA诱导胃癌细胞凋亡的药理作用。研究结论：1 RA可能通过活化P38 MAPK信号通路,提高BAX/BCL-2比例,诱导叁株不同分化程度(中分化(SGC-7901)、低分化(SNU-1)、未分化(HGC-27))的胃癌细胞发生凋亡。2 RA可能通过活化P38 MAPK信号通路,抑制mTOR通路活化,诱导叁株胃癌细胞发生自噬。3 RA诱导的胃癌细胞的自噬,拮抗了RA诱导的细胞凋亡。(本文来源于《南京中医药大学》期刊2016-04-10）
滕钰浩,刘沈林,邹玺,吴坚,周锦勇[10]（2015）在《竹节香附素A对胃癌SGC-7901细胞凋亡、自噬的影响》一文中研究指出目的探讨竹节香附素A(RA)对胃癌SGC-7901细胞的影响及其分子机制。方法 MTT观察RA对胃癌细胞SGC-7901生长抑制;流式细胞术检测RA对细胞凋亡的影响;透射电镜观察RA诱导自噬;Western blot检测凋亡、自噬相关蛋白表达。结果 RA能显着抑制SGC-7901细胞生长;RA能诱导SGC-7901细胞凋亡和自噬;Western blot检测发现,随着给药剂量增加,LC3-I逐渐向LC3-II翻转,PARP及bcl-2表达递减,bax、p-p38表达递增。结论 RA能有效抑制SGC-7901细胞生长,其机制可能是诱导细胞凋亡和自噬,RA诱导凋亡及自噬可能是通过激活MAPK通路实现的。(本文来源于《中药新药与临床药理》期刊2015年06期）
竹节香附素论文开题报告
（1）论文研究背景及目的
此处内容要求：
首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景，再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题，并提出你的论文准备的观点或解决方法。
写法范例：
目的在构建核转录因子-κB(NF-κB)通路报告基因模型后,研究竹节香附素A(RDA)抗炎的作用及其作用机制。方法用双荧光素酶报告基因技术,以p NF-kappa B-Luc(p NF-κB-Luc)、pr L-tk质粒转染RAW 264.7细胞,脂多糖(LPS)为激活剂,构建靶向NF-κB通路的报告基因模型,RDA和吡咯烷二硫氨基甲酸酯(PDTC)分别给药验证模型。空白组给予空白培养基,模型组给予含LPS的培养基,对照组给予含PDTC的培养基,实验组给予含RDA的培养基。用Western-blot技术检测RDA对细胞蛋白p65和IκBα表达的影响。结果当LPS浓度为10μg·m L~(-1),转染试剂量为2μL时,成功构建靶向NF-κB通路的报告基因模型。RDA能够降低转染后细胞内p65和IκBα亚基的磷酸化,显着抑制NF-κB信号通路。结论本文构建的模型具有快速、稳定、特异、高通量等特点,可用于抗炎活性成分筛选,确认RDA的抗炎机制与NF-κB通路有关。
（2）本文研究方法
调查法：该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。
观察法：用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。
实验法：通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。
文献研究法：通过调查文献来获得资料，从而全面的、正确的了解掌握研究方法。
实证研究法：依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。
定性分析法：对研究对象进行“质”的方面的研究，这个方法需要计算的数据较少。
定量分析法：通过具体的数字，使人们对研究对象的认识进一步精确化。
跨学科研究法：运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。
功能分析法：这是社会科学用来分析社会现象的一种方法，从某一功能出发研究多个方面的影响。
模拟法：通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。
竹节香附素论文参考文献
[1].陈悦群,翟洪波,仝进毅,屈王蕾.竹节香附素通过抑制JAK/STAT3信号转导通路抑制人子宫内膜癌HEC-1-B细胞的侵袭转移[J].中国临床药理学与治疗学.2019
[2].王莎莎,刘鑫,张月,赵凌,李剑男.竹节香附素A抗炎作用的研究[J].中国临床药理学杂志.2018
[3].孟春芹,滕钰浩,吴存恩,王瑞平.竹节香附素A调控mTOR通路对肠癌HCT116细胞自噬及凋亡的影响[J].重庆医学.2018
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[5].王宇,姜修博,韩豆,朱志铭,宋长琴.竹节香附素A对人结肠癌细胞HCT-116增殖、凋亡、迁移及侵袭活性的影响[J].中药新药与临床药理.2018
[6].孟春芹.竹节香附素A调控PI3K/AKT/mTOR诱导肠癌细胞自噬和凋亡的研究[D].南京中医药大学.2018
[7].李剑男.竹节香附素A及其联合用药对人肝癌细胞QGY-7703的作用机制研究[D].长春中医药大学.2018
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[10].滕钰浩,刘沈林,邹玺,吴坚,周锦勇.竹节香附素A对胃癌SGC-7901细胞凋亡、自噬的影响[J].中药新药与临床药理.2015