本文主要研究内容
作者徐建林（2019）在《我国羊巴贝斯虫AMA1和RON2蛋白基因结构分析及检测方法的建立》一文中研究指出：巴贝斯虫感染人和动物引起巴贝斯虫病,其主要通过硬蜱传播。患病动物主要表现发热、贫血、黄疸和血红蛋白尿等症状,甚至会导致器官衰竭引起死亡。该病呈全国性流行,对我国养殖业造成巨大的经济损失。本研究以在我国广泛分布的两种羊巴贝斯虫为研究对象,通过PCR扩增,获得两种6株羊巴贝斯虫“运动连接环”(Moving Junction,MJ)主要组件蛋白AMA1和RON2的基因全长序列,分析其结构特征;并以其为靶标分子,研究我国羊巴贝斯虫的分类地位;最后以AMA1为靶基因或抗原,建立检测两种羊巴贝斯虫的分子生物学和血清学诊断方法。为开展我国羊巴贝斯虫病的流行病学调查提供了检测技术,同时为深入研究我国羊巴贝斯虫的分类关系和MJ对巴贝斯虫入侵宿主细胞的作用提供基础数据。主要研究内容和结果如下:1.从我国6株羊巴贝斯虫基因组DNA和cDNA中成功扩增获得RON2和AMA1基因全长序列。生物信息学分析结果显示,羊巴贝斯虫RON2和AMA1基因均没有内含子。RON2编码的蛋白有一个信号肽和三个跨膜结构域;羊巴贝斯虫AMA1与其他顶复门原虫一样,是典型I型跨膜蛋白,由3个区域组成:胞外区、跨膜区和胞质区。两个基因核苷酸序列和氨基酸序列比对及MP系统发生树构建结果显示:我国羊巴贝斯虫有两个种——巴贝斯虫未定种和莫氏巴贝斯虫。莫氏巴贝斯虫又被分为两小枝Bm——LT/BmTZ和BmNX/BmHB。2.在巴贝斯虫未定种和莫氏巴贝斯虫AMA1基因序列的保守区、种间高变区分别设计两个种的通用引物和种间特异引物,通过反应条件的筛选,建立可同时鉴别检测两种羊巴贝斯虫的套式-多重PCR方法。在优化好的反应条件下,在PCR仪中一步法两个过程扩增,可得到两个种大小不同的目的片段,该方法最低可检测到5 pg/μL的羊巴贝斯虫基因组DNA。且与尤氏泰勒虫、吕氏泰勒虫、绵羊无浆体、边缘无浆体、双芽巴贝斯虫、牛巴贝斯虫、大巴贝斯虫、环形泰勒虫和中华泰勒虫的基因组均无交叉反应。应用建立的套式-多重PCR方法对采自甘肃武威的232份绵羊血液样本进行检测。结果显示,羊巴贝斯虫未定种的阳性率为1.72%,莫氏巴贝斯虫的阳性率为6.03%。3.分别从羊巴贝斯虫未定种新疆株和莫氏巴贝斯虫临潭株cDNA中成功扩增AMA1截短目的基因片段,构建原核表达载体pET-XJ-AMA1和pET-LT-AMA1,转化、诱导表达、纯化和鉴定该重组蛋白,并进行反应原性分析。ELISA试验结果表明rBspAMA1和rBmAMA1都具有良好的反应性,两个蛋白均能与感染我国羊的两个种的6株巴贝斯虫阳性血清反应,而与吕氏泰勒虫、尤氏泰勒虫及绵羊无浆体阳性血清均不反应。因此选择rBspAMA1为靶标抗原,建立羊巴贝斯虫的通用间接ELISA方法。对实验室感染羊巴贝斯虫后收集的血清进行抗体动态检测,7天均可以检测到特异性抗体的产生。羊巴贝斯虫未定感染后28～42天抗体达到最高水平,然后开始逐渐下降,到170天时基本降到感染前水平;莫氏巴贝斯虫感染后12～28天抗体达到最高水平,然后逐渐下降,到230天时基本降到感染前水平。对采自甘肃省古浪、天祝、凉州和景泰的554份羊血清样品进行检测,抗体平均阳性率为51.98%。
Abstract
ba bei si chong gan ran ren he dong wu yin qi ba bei si chong bing ,ji zhu yao tong guo ying pi chuan bo 。huan bing dong wu zhu yao biao xian fa re 、pin xie 、huang da he xie gong dan bai niao deng zheng zhuang ,shen zhi hui dao zhi qi guan cui jie yin qi si wang 。gai bing cheng quan guo xing liu hang ,dui wo guo yang shi ye zao cheng ju da de jing ji sun shi 。ben yan jiu yi zai wo guo an fan fen bu de liang chong yang ba bei si chong wei yan jiu dui xiang ,tong guo PCRkuo zeng ,huo de liang chong 6zhu yang ba bei si chong “yun dong lian jie huan ”(Moving Junction,MJ)zhu yao zu jian dan bai AMA1he RON2de ji yin quan chang xu lie ,fen xi ji jie gou te zheng ;bing yi ji wei ba biao fen zi ,yan jiu wo guo yang ba bei si chong de fen lei de wei ;zui hou yi AMA1wei ba ji yin huo kang yuan ,jian li jian ce liang chong yang ba bei si chong de fen zi sheng wu xue he xie qing xue zhen duan fang fa 。wei kai zhan wo guo yang ba bei si chong bing de liu hang bing xue diao cha di gong le jian ce ji shu ,tong shi wei shen ru yan jiu wo guo yang ba bei si chong de fen lei guan ji he MJdui ba bei si chong ru qin su zhu xi bao de zuo yong di gong ji chu shu ju 。zhu yao yan jiu nei rong he jie guo ru xia :1.cong wo guo 6zhu yang ba bei si chong ji yin zu DNAhe cDNAzhong cheng gong kuo zeng huo de RON2he AMA1ji yin quan chang xu lie 。sheng wu xin xi xue fen xi jie guo xian shi ,yang ba bei si chong RON2he AMA1ji yin jun mei you nei han zi 。RON2bian ma de dan bai you yi ge xin hao tai he san ge kua mo jie gou yu ;yang ba bei si chong AMA1yu ji ta ding fu men yuan chong yi yang ,shi dian xing Ixing kua mo dan bai ,you 3ge ou yu zu cheng :bao wai ou 、kua mo ou he bao zhi ou 。liang ge ji yin he gan suan xu lie he an ji suan xu lie bi dui ji MPji tong fa sheng shu gou jian jie guo xian shi :wo guo yang ba bei si chong you liang ge chong ——ba bei si chong wei ding chong he mo shi ba bei si chong 。mo shi ba bei si chong you bei fen wei liang xiao zhi Bm——LT/BmTZhe BmNX/BmHB。2.zai ba bei si chong wei ding chong he mo shi ba bei si chong AMA1ji yin xu lie de bao shou ou 、chong jian gao bian ou fen bie she ji liang ge chong de tong yong yin wu he chong jian te yi yin wu ,tong guo fan ying tiao jian de shai shua ,jian li ke tong shi jian bie jian ce liang chong yang ba bei si chong de tao shi -duo chong PCRfang fa 。zai you hua hao de fan ying tiao jian xia ,zai PCRyi zhong yi bu fa liang ge guo cheng kuo zeng ,ke de dao liang ge chong da xiao bu tong de mu de pian duan ,gai fang fa zui di ke jian ce dao 5 pg/μLde yang ba bei si chong ji yin zu DNA。ju yu you shi tai le chong 、lv shi tai le chong 、mian yang mo jiang ti 、bian yuan mo jiang ti 、shuang ya ba bei si chong 、niu ba bei si chong 、da ba bei si chong 、huan xing tai le chong he zhong hua tai le chong de ji yin zu jun mo jiao cha fan ying 。ying yong jian li de tao shi -duo chong PCRfang fa dui cai zi gan su wu wei de 232fen mian yang xie ye yang ben jin hang jian ce 。jie guo xian shi ,yang ba bei si chong wei ding chong de yang xing lv wei 1.72%,mo shi ba bei si chong de yang xing lv wei 6.03%。3.fen bie cong yang ba bei si chong wei ding chong xin jiang zhu he mo shi ba bei si chong lin tan zhu cDNAzhong cheng gong kuo zeng AMA1jie duan mu de ji yin pian duan ,gou jian yuan he biao da zai ti pET-XJ-AMA1he pET-LT-AMA1,zhuai hua 、you dao biao da 、chun hua he jian ding gai chong zu dan bai ,bing jin hang fan ying yuan xing fen xi 。ELISAshi yan jie guo biao ming rBspAMA1he rBmAMA1dou ju you liang hao de fan ying xing ,liang ge dan bai jun neng yu gan ran wo guo yang de liang ge chong de 6zhu ba bei si chong yang xing xie qing fan ying ,er yu lv shi tai le chong 、you shi tai le chong ji mian yang mo jiang ti yang xing xie qing jun bu fan ying 。yin ci shua ze rBspAMA1wei ba biao kang yuan ,jian li yang ba bei si chong de tong yong jian jie ELISAfang fa 。dui shi yan shi gan ran yang ba bei si chong hou shou ji de xie qing jin hang kang ti dong tai jian ce ,7tian jun ke yi jian ce dao te yi xing kang ti de chan sheng 。yang ba bei si chong wei ding gan ran hou 28～42tian kang ti da dao zui gao shui ping ,ran hou kai shi zhu jian xia jiang ,dao 170tian shi ji ben jiang dao gan ran qian shui ping ;mo shi ba bei si chong gan ran hou 12～28tian kang ti da dao zui gao shui ping ,ran hou zhu jian xia jiang ,dao 230tian shi ji ben jiang dao gan ran qian shui ping 。dui cai zi gan su sheng gu lang 、tian zhu 、liang zhou he jing tai de 554fen yang xie qing yang pin jin hang jian ce ,kang ti ping jun yang xing lv wei 51.98%。
论文参考文献
论文详细介绍
论文作者分别是来自中国农业科学院的徐建林，发表于刊物中国农业科学院2019-07-05论文，是一篇关于羊巴贝斯虫论文,套式多重论文,中国农业科学院2019-07-05论文的文章。本文可供学术参考使用，各位学者可以免费参考阅读下载，文章观点不代表本站观点，资料来自中国农业科学院2019-07-05论文网站，若本站收录的文献无意侵犯了您的著作版权，请联系我们删除。
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