导读:本文包含了突变型人白细胞介素论文开题报告文献综述及选题提纲参考文献，主要关键词:人IL-13,原核表达,活性分析
突变型人白细胞介素论文文献综述
姜晓峰,郭晓英,万丽平[1]（2006）在《野生型及突变型人白细胞介素13的原核表达及活性分析》一文中研究指出目的:在大肠杆菌中表达野生型和突变型重组人IL13,经纯化复性获得具有有活性的蛋白。方法:用PCR扩增IL13基因片段,用定点突变PCR获得其突变体(IL13’)基因。将IL13和IL13’基因分别克隆至原核表达载体pET30a(+)中,构建重组体pET30a(+)IL13和pET30a(+)IL13’,分别命名为pETIL13和pETIL13’。以重组体转化E.coliBL21(DE3)在IPTG诱导下进行表达。表达产物用NiNTA层析柱进行纯化。纯化产物用氧化还原谷胱甘肽系统透析复性后,检测其生物学活性。结果:在E.coliBL21(DE3)中表达了IL13/IL13’His6融合蛋白。经SDSPAGE显示,融合蛋白的Mr约17000,经Westernblot证实为人IL13。表达的融合蛋白以包涵体的形式存在,纯化后得到较高纯度的重组蛋白。复性后的包涵体检测具有生物学活性。结论:成功地获得具有生物学活性的野生型和突变型人IL13重组蛋白,为下一步研究奠定了基础。(本文来源于《细胞与分子免疫学杂志》期刊2006年05期）
李云华,王公金[2]（2005）在《Ser-125突变型人白细胞介素-2在家兔乳腺中的瞬时表达》一文中研究指出将Ser-125突变型人白细胞介素-2(Ser-125 hIL-2)cDNA与山羊β-乳球蛋白(BLG)基因的上游调控序列融合,构建了pBLG-Ser-125 hIL-2乳腺定位表达载体。试验取6只家兔,将表达载体经乳腺导管注入妊娠后期家兔乳腺内,进行瞬时表达。分别于家兔分娩后1~10 d采奶,用ELISA方法检测乳汁中Ser-125 hIL-2含量。结果显示:注射空白对照和pIL-2质粒的2只家兔均未表达;2只直接注射表达载体的家兔中1只有表达,含量为0.06~0.53μg/L,1只未表达;2只注射用脂质体包裹的表达载体的家兔均获表达,含量为0.18~2.36μg/L。本试验结果证实将乳腺作为评估和筛选乳腺定位表达载体的可行性。(本文来源于《江苏农业学报》期刊2005年04期）
左爱军,梁东春,刘新宇,郭刚,张镜宇[3]（2005）在《突变型人白细胞介素-2基因在大肠杆菌中的表达》一文中研究指出目的:建立突变型人白细胞介素-2(rhIL-2)基因大肠杆菌表达系统,为rhIL-2的生产及临床应用奠定基础。方法:自人胎盘组织中提取总RNA,逆转录PCR(RT-PCR)扩增突变型人IL-2基因cDNA,通过对下游引物的设计将编码125位半胱氨酸(C125)的密码子TGT更改为编码丝氨酸的密码子TCT。构建表达型重组质粒pBV-IL-2熏温度诱导表达,表达产物行SDS-聚丙烯酰氨凝胶电泳(SDS-PAGE)及WesternBlot鉴定。结果:DNA序列分析证实,重组质粒pBV-IL-2含有突变型人IL-2编码序列及正确的开放读码框架。SDS-PAGE显示,诱导表达碎菌后的沉淀中有分子质量大小约为16.5ku的外源蛋白产生,经Western印迹(WesternBlot)证明为rhIL-2。结论:成功构建了突变型人白细胞介素-2大肠杆菌表达系统,表达产物主要以包涵体的形式存在于碎菌后的沉淀中。(本文来源于《天津医药》期刊2005年11期）
李云华,王公金[4]（2005）在《Ser-125突变型人白细胞介素-2在山羊乳腺中的瞬时表达》一文中研究指出用定点突变法得到Ser125突变型人白细胞介素2(Ser125hIL2)cDNA,然后与山羊β乳球蛋白(BLG)基因的上游调控序列融合,构建了pBLG—Ser125hIL2乳腺定位表达载体。表达载体经脂质体包裹后,经乳腺导管注入妊娠后期山羊乳腺内,进行瞬时表达。分别于山羊分娩后1～10d采奶,ELISA方法检测乳汁中Ser125hIL2含量。山羊乳汁中的含量为0.83～6.45μg/L。(本文来源于《药物生物技术》期刊2005年03期）
李云华[5]（2005）在《Ser-125突变型人白细胞介素-2在家兔和山羊乳腺中的瞬时表达》一文中研究指出人白细胞介素-2(HuIL-2)主要是由激活的T淋巴细胞产生的一种淋巴因子,在机体免疫应答中起重要作用,能诱导T淋巴细胞增殖(从G_0期到S期)和分化,并且具有刺激T辅助细胞和自然杀伤细胞分泌细胞因子等功能,因而具有广泛的生物学活性,在临床上具有抗肿瘤、抗感染及增强机体免疫功能等作用。天然IL-2由133个氨基酸残基组成,在58、105和125位各有一个半胱氨酸(Cys),其中58位和105位形成二硫键是IL-2生物活性所必需,125位半胱氨酸的存在易形成错配或二聚体,使IL-2活性丧失,因此将125位半胱氨酸突变为丝氨酸可以消除形成错配或二聚体的分子基础,便于纯化。 动物乳腺生物反应器以其生产成本低、产量高且表达产物接近天然产物而日益受到人们重视。但建立乳腺生物反应器是一项周期长、耗资大的工作,而且外源基因的随机表达也给这项工作带来很大麻烦,因此在建立大型转基因动物个体之前,先用小动物鉴定所构建载体的可行性十分必要。 本研究用PCR定点突变法将天然人白细胞介素-2的125位半胱氨酸突变为丝氨酸,得到Ser-125突变型人白细胞介素-2(Ser-125 HuIL-2)cDNA,并从山羊新鲜血液中扩增到867bp的β-乳球蛋白(BLG)基因的上游调控序列,然后将Ser-125突变型人白细胞介素-2 cDNA与山羊β-乳球蛋白(BLG)基因的上游调控序列融合,构建了pBLG—Ser-125HuIL-2乳腺定位表达载体。表达载体经纯化后用脂质体包裹,经乳腺导管注入妊娠后期的家兔和山羊乳腺内,进行瞬时表达。分别于家兔和山羊分娩后1～10d采奶,用ELISA方法检测乳汁中Ser-125HuIL-2含量。家兔共做了6只,其中1只作为空白对照,1只注射脂质体包裹的pIL-2质粒,2只注射表达载体,2只注射脂质体包裹的表达载体,结果注射空白对照和pIL-2质粒的2只家兔均未表达;2只直接注射表达载体的家兔1只有表达,含量为0.06～0.53μg/L,1只未表达,表达成功率50%(1/2);(本文来源于《南京师范大学》期刊2005-06-30）
刘堰,苏畅,胡应和,欧阳克清,蔡绍皙[6]（2005）在《巴斯德毕赤酵母表达的突变型人白细胞介素-2的发酵条件与纯化研究》一文中研究指出在以前的研究中,通过蛋白质工程技术获得了叁突变体白细胞介素_2基因(编码12 5位半胱氨酸→丙氨酸;18位亮氨酸→蛋氨酸;19位亮氨酸→丝氨酸) ,并在毕赤酵母中加以表达。进一步优化表达条件,其最适诱导条件:80 %以上的通气,诱导2d ,初始pH6 0 ,甲醇终浓度为1 0 %。在上述条件下表达量占菌体总蛋白的30 %以上,大约2 0 0mg L。建立了一套从毕赤酵母表达上清中分离纯化分泌型表达蛋白IL_2的方法,经离心,超滤浓缩,强阳离子交换S柱和分子筛层析得到纯化的突变型和野生型IL_2 ;其得率为2 7% ,纯度达电泳纯并且HPLC检测只有一个峰。纯化的突变蛋白对CTLL_2细胞具有刺激性;与野生型IL_2相比,在各种温度条件下储存的突变蛋白保留有更高的活性;突变型IL_2的活力是野生型的4～5倍,具有更高的利用价值。(本文来源于《生物工程学报》期刊2005年03期）
刘堰,胡应和,欧阳克清,蔡绍皙[7]（2003）在《突变型人白细胞介素-2基因在巴斯德毕赤酵母中的表达》一文中研究指出为了提高人重组白细胞介素 2的稳定性和活性以及减少毒副作用 ,有必要定向改造rhIL 2的分子结构 .用PCR法从白细胞介素 2 (IL 2 )cDNA全序列中扩增成熟的肽基因片段 ,并利用定点突变技术将人重组白细胞介素 2第 12 5位游离的半胱氨酸编码序列突变为丙氨酸序列 .编码 18位亮氨酸的序列突变为蛋氨酸序列 ;编码 19位亮氨酸的序列突变为丝氨酸序列 .突变型人白细胞介素 2 (MvIL 2 )基因与表达载体pPIC9K重组 ,酶切线性化后用Invitrogen转化毕赤酵母试剂盒导入酵母细胞进行整合 ,经筛选得到一高表达白介素 2的克隆 .SDS PAGE显示 ,表达量约占总量的4 5 7% .经Western印迹验证 ,重组人白介素 2有免疫活性 ;与野生型IL 2相比 ,所获得的突变型IL 2纯品的比活性为 4 0× 10 7IU mg蛋白 ,比天然型IL 2高 4～ 5倍(本文来源于《中国生物化学与分子生物学报》期刊2003年05期）
郭芝刚[8]（2003）在《突变型白细胞介素-2的表达、纯化及生物学活性测定》一文中研究指出白细胞介素－2（IL-2）最初曾为称为T细胞生长因子，并能促使各种造血细胞增殖和分化。临床研究表明其关键作用可作为T淋巴细胞激活的增殖信号，因而将IL-2用于治疗艾滋病。基于其能刺激具有细胞毒的，抗肿瘤细胞的能力，IL-2还用于各种癌症的治疗。目前人IL-2已经完全用基因工程的方法生产，而且基因工程IL-2与天然IL-2的功能和临床效果基本一致。目的：近年来，虽然基因工程IL-2应用于肝炎及某些癌症的治疗已取得令人属目的成果，但大计量，长时间用药对病人仍然存在一定的副作用，如发热、寒战、恶心、呕吐、头晕、乏力和毛细血管渗漏综合症等，所以，为了提高人重组白细胞介素－2的稳定性和活性以及减少毒副作用，有必要定向改造rhIL－2的分子结构，并在毕赤酵母中高效表达hIL-2cDNA，获得hIL-2蛋白，拟对野生型hIL-2进行结构改造以获得新的突变体，同时进行活性测定，以便深入了解hIL-2的结构与功能的关系。方法：用PCR法从白细胞介素-2cDNA全序列中扩增成熟的肽基因片段，并利用定点突变技术将人重组白细胞介素－2第125位游离的半胱氨酸编码序列突变为丙氨酸序列；编码18位亮氨酸的序列突变为蛋氨酸序列；编码19位亮氨酸的序列突变为丝氨酸序列，经限制酶片段分析与DNA序列分析证明后，获得突变体MvhIL-2。IL-2基因片段与酵母中间载体pPIC9K融合后，转化到大肠杆菌TOP10F',扩增质粒，获得大量pPIC9K-MvhIL-2DNA后，再转化毕赤酵母，并在摇瓶和发酵罐上对IL-2-C125A/L18M/L19S进行了表达。然后，利用离子交换层析的方法纯化了MvhIL-2蛋白，利用IL-2依赖细胞株CTLL－2细胞对纯化的突变蛋白（IL-2-C125A/L18M/L19S）和野生型IL-2（同样方法获得的）进行测活。结果：本实验成功地构建IL-2突变体，并在毕赤酵母中得到表达。将pPIC9K-MvhIL-2DNA用酶切后，转入真核表达系统－毕赤酵母得到的转化子经摇瓶和发酵罐发酵，上清液用15％SDS-PAGE检测表明有IL-2突变体的表达；经Western-blot和ELISA检测有免疫活性。经超滤浓缩，强阴离子交换Q柱层析得到纯化的突变型人IL-2。纯化的突变蛋白对CTLL-2细胞有刺激性；与野生型IL-2相比，在各种温度条件下储存的突变蛋白保留有更高的活性；pPIC9KMvhIL-2整合到毕赤酵母中表达量占菌体总蛋白的30％以上，高表达得到的IL-2具有高活性。结论人IL-2cDNA可通过PCR技术进行定点突变，所获得的突变型MvhIL-2活性比天然型MvhIL-2高4－5倍。所以IL-2突变体（IL-2-C125A/L18M/L18S）较野<WP=5>生型的IL-2具有更高的稳定性和活性。(本文来源于《重庆大学》期刊2003-04-20）
彭颖,吕建新[9]（2002）在《突变型人白细胞介素18cDNA的克隆》一文中研究指出目的 :获得人白细胞介素 18cDNA。方法 :从 1名健康献血者的外周血单个核细胞 (PBMC)中提取总RNA ,通过PT -PCR扩增出人白介素 18(hIL - 18)的cDNA ,与PUCmT载体连接 ,构成重组质粒 ,进行测序及同源性分析。结果 :已获得hIL - 18的编码序列 ,且与Ushio等报道的序列相比存在 3处有意义突变。结论 :克隆了突变型hIL - 18cDNA。(本文来源于《中国病理生理杂志》期刊2002年05期）
祁小平,钱军华[10]（1999）在《重组Ser-125突变型人白细胞介素-2的构建 表达和纯化》一文中研究指出用PCR定点突变方法将天然人白细胞介素-2分子125位上的半胱氨酸突变为丝氨酸，并在大肠杆菌中表达。由于消除了变性时产生错配和二聚体的分子基础．从而方便了纯化，明显提高了比活性和纯度。(本文来源于《镇江医学院学报》期刊1999年03期）
突变型人白细胞介素论文开题报告
（1）论文研究背景及目的
此处内容要求：
首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景，再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题，并提出你的论文准备的观点或解决方法。
写法范例：
将Ser-125突变型人白细胞介素-2(Ser-125 hIL-2)cDNA与山羊β-乳球蛋白(BLG)基因的上游调控序列融合,构建了pBLG-Ser-125 hIL-2乳腺定位表达载体。试验取6只家兔,将表达载体经乳腺导管注入妊娠后期家兔乳腺内,进行瞬时表达。分别于家兔分娩后1~10 d采奶,用ELISA方法检测乳汁中Ser-125 hIL-2含量。结果显示:注射空白对照和pIL-2质粒的2只家兔均未表达;2只直接注射表达载体的家兔中1只有表达,含量为0.06~0.53μg/L,1只未表达;2只注射用脂质体包裹的表达载体的家兔均获表达,含量为0.18~2.36μg/L。本试验结果证实将乳腺作为评估和筛选乳腺定位表达载体的可行性。
（2）本文研究方法
调查法：该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。
观察法：用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。
实验法：通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。
文献研究法：通过调查文献来获得资料，从而全面的、正确的了解掌握研究方法。
实证研究法：依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。
定性分析法：对研究对象进行“质”的方面的研究，这个方法需要计算的数据较少。
定量分析法：通过具体的数字，使人们对研究对象的认识进一步精确化。
跨学科研究法：运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。
功能分析法：这是社会科学用来分析社会现象的一种方法，从某一功能出发研究多个方面的影响。
模拟法：通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。
突变型人白细胞介素论文参考文献
[1].姜晓峰,郭晓英,万丽平.野生型及突变型人白细胞介素13的原核表达及活性分析[J].细胞与分子免疫学杂志.2006
[2].李云华,王公金.Ser-125突变型人白细胞介素-2在家兔乳腺中的瞬时表达[J].江苏农业学报.2005
[3].左爱军,梁东春,刘新宇,郭刚,张镜宇.突变型人白细胞介素-2基因在大肠杆菌中的表达[J].天津医药.2005
[4].李云华,王公金.Ser-125突变型人白细胞介素-2在山羊乳腺中的瞬时表达[J].药物生物技术.2005
[5].李云华.Ser-125突变型人白细胞介素-2在家兔和山羊乳腺中的瞬时表达[D].南京师范大学.2005
[6].刘堰,苏畅,胡应和,欧阳克清,蔡绍皙.巴斯德毕赤酵母表达的突变型人白细胞介素-2的发酵条件与纯化研究[J].生物工程学报.2005
[7].刘堰,胡应和,欧阳克清,蔡绍皙.突变型人白细胞介素-2基因在巴斯德毕赤酵母中的表达[J].中国生物化学与分子生物学报.2003
[8].郭芝刚.突变型白细胞介素-2的表达、纯化及生物学活性测定[D].重庆大学.2003
[9].彭颖,吕建新.突变型人白细胞介素18cDNA的克隆[J].中国病理生理杂志.2002
[10].祁小平,钱军华.重组Ser-125突变型人白细胞介素-2的构建 表达和纯化[J].镇江医学院学报.1999