导读:本文包含了磷酸化机制论文开题报告文献综述及选题提纲参考文献，主要关键词:自主运动,阿尔茨海默病,APP,PS1转基因小鼠,海马
磷酸化机制论文文献综述
余锋,贾芳芳,徐帅,张宪亮,徐波[1]（2019）在《自主运动抑制tau蛋白过磷酸化改善学习记忆的分子机制》一文中研究指出研究背景:阿尔茨海默病(Alzheimer’s disease,AD)是一种进行性记忆能力损害和认知功能减退的神经退行性疾病。AD的主要病理标志是脑内β-淀粉样蛋白(β-amyloid,Aβ)沉积、神经纤维缠结(neurofibrillarytangles,NFTs)及其导致的神经细胞丢失和脑容量下降。NFTs是AD的重要致病因素,由细胞内微管相关tau蛋白的过度磷酸化而形成。tau蛋白在神经细胞和轴突中大量表达,在脑内物质运输过程中发挥重要作用。在AD脑中,tau蛋白在蛋白激酶的异常调节下过度磷酸化形成NFTs,阻碍了其正常生理功能的发挥,致使其失去催化微管装配和稳定微管结构的功能,扰乱神经递质的合成、释放等和神经细胞间的物质运输,诱导神经细胞的退行性改变,进而损害脑认知和学习记忆能力。在AD脑中,tau蛋白主要在Ser202、Ser396、Ser404以及Thr181、Thr231等位点发生磷酸化。本研究拟选取Ser202和Thr181位点tau蛋白的P-tau水平检测tau蛋白的磷酸化状态。糖原合成激酶-3β(Glycogensynthasekinase-3β,GSK-3β)和细胞周期依赖性蛋白激酶-5(Cyclin-dependent kinase-5,CDK-5)是促使tau蛋白磷酸化的两种重要蛋白激酶,GSK-3β和CDK-5的过度激活或表达是导致tau蛋白过度磷酸化、形成NFTs的重要诱因。蛋白磷酸酶(proteinphosphatases,PPs)可使磷酸化状态的tau蛋白脱磷酸化,其亚型蛋白磷酸酶-1(proteinphosphatases-1,PP1)和蛋白磷酸酶-2A(proteinphosphatases-2A,PP2A)是调节磷酸化状态tau蛋白脱磷酸化反应的重要成员,tau蛋白磷酸酶的减少是tau蛋白异常磷酸化的另一诱因。研究目的:目前,运动干预AD的病理机制还不明确,尤其运动对tau蛋白异常磷酸化的干预研究还很欠缺,仅有部分研究发现运动可通过调节tau蛋白激酶的水平进而抑制tau蛋白的异常磷酸化。而蛋白磷酸酶在运动调节tau蛋白磷酸化过程中发挥着何种调节作用?运动能否通过上调tau蛋白磷酸酶水平而下调tau蛋白的过度磷酸化,进而改善学习记忆能力?值得深入研究。鉴于此,本研究拟通过16周自主运动干预,探讨tau蛋白磷酸化的重要激酶GSK-3β、CDK-5,及tau蛋白脱磷酸化的重要磷酸酶PP1、PP2A在调节APP/PS1转基因小鼠海马tau蛋白过度磷酸化,调节学习记忆过程中的可能机制,以期为运动干预预防或缓解AD的发病提供实验依据。研究方法:从南京大学-南京生物医药研究院实验动物模式研究所选购3月龄C57系APP/PS1转基因雄性小鼠24只(体重19.56±1.48g)与3月龄野生型C57系小鼠24只(体重20.24±1.02g)。按每笼1只单独饲养。小鼠饲料、垫料购自上海斯莱康公司,自由饮水和饮食饲养,垫料定期更换。饲养环境为SPF级。APP/PS1转基因小鼠随机分为运动组(TE)与对照组(TC);C57系野生小鼠亦随机分为运动组(E)与对照组(C)。其中,TE组和E组小鼠从3月龄开始,给予16周的跑轮运动装置,TC组和C组小鼠不施加运动干预,作为相应对照组。实验的第17周开始对实验小鼠进行Morris水迷宫测试,包括5天的定位航行实验和1天的空间探索实验,检测自主跑轮运动对APP/PS1转基因小鼠的空间学习记忆能力的影响。WesternBlot实验检测海马磷酸化tau蛋白(P-tau)水平,RT-PCR实验检测海马tau蛋白及tau蛋白激酶GSK-3β和CDK-5,tau蛋白磷酸酶PP2A和PP1 mRNA表达。研究结果:(1)与TC组相比,TE组小鼠Morris水迷宫游泳潜伏期显着性降低(P<0.05),平台象限的游泳时间百分比显着性增加(P<0.05),穿越原平台位置的次数极显着性增加(P<0.01);(2)与TC组相比,TE组小鼠海马总tau蛋白m RNA表达显着下调(P<0.05),Ser202位点和Thr181位点P-tau蛋白表达均显着性下调(P<0.05);(3)与TC组相比,TE组小鼠海马tau蛋白磷酸化激酶GSK-3β(P<0.01)和CDK-5(P<0.05)m RNA表达显着性下调,tau蛋白磷酸酶PP2A(P<0.01)和PP1(P<0.01)m RNA表达极显着性下调。研究结论:(1)与同月龄野生型小鼠相比较,APP/PS1转基因小鼠的学习记忆能力显着性下降,其海马内tau蛋白激酶m RNA表达水平显着升高,tau蛋白磷酸酶m RNA表达水平显着降低,海马总tau蛋白基因表达水平及Ser202位点和Thr181位点P-tau蛋白的表达水平显着性增加。(2)16周的自主运动能够显着性下调转基因小鼠海马tau蛋白激酶的m RNA表达,上调tau蛋白磷酸酶的m RNA表达,抑制海马总tau蛋白基因表达及Ser202位点和Thr181位点P-tau蛋白的表达水平,同时促进了转基因小鼠学习记忆的改善。故推测:自主运动可能通过抑制转基因小鼠海马tau蛋白激酶的表达、促进tau蛋白磷酸酶的表达,进而抑制海马tau蛋白的过度磷酸化,缓解AD病症,改善其学习记忆能力。(本文来源于《第十一届全国体育科学大会论文摘要汇编》期刊2019-11-01）
皮二旭[2]（2019）在《转录因子的磷酸化修饰对大豆耐盐响应机制的研究》一文中研究指出转录因子的激活通常依赖蛋白质的翻译后修饰来实现,在众多的蛋白质翻译后修饰当中,磷酸化/去除磷酸化是变化最迅速、对环境变化最敏感的类型之一。为应对高盐胁迫,大豆根部通过磷酸化修饰激活GmMYB173转录因子,提升B环含双羟基的类黄酮花青素3-阿拉伯糖苷的积累;通过磷酸化修是抑制GmMYB183转录因子活性,降低B环含单个羟基的芒柄花苷的含量,从而缓解其遭受到的盐胁迫危害。由于B环上含有双羟基的类黄酮清除ROS的能力通常强于含单个羟基的类型,这两类类黄酮物质组成的合理调配可能是大豆应对盐胁迫引起的ROS胁迫所采用的重要策略之一。类黄酮的不同亚类、不同修饰在植物耐盐响应后期清除活性氧化物的过程中可能起正、负调控两种作用,探究类黄酮的合成与修饰机制将为我们全面理解植物抵御ROS次级危害提供依据。(本文来源于《中国生物化学与分子生物学会2019年全国学术会议暨学会成立四十周年论文集》期刊2019-10-24）
巨晓芬,崔双杰,张云玮,徐诗梦,路小婷[3]（2019）在《UPP通路参与铝致N2a细胞tau蛋白异常磷酸化的降解调控机制》一文中研究指出目的探讨泛素蛋白酶体途径(UPP)调控铝所致小鼠神经母细胞瘤细胞(N2a细胞)tau蛋白异常磷酸化中的降解机制。方法取对数生长期的N2a细胞随机分为对照组和MG132组。对照组细胞分别予浓度为0和1 mmol/L氯化铝染毒24 h;MG132组细胞予浓度为5μmol/L的MG132预处理6 h后,分别予浓度为0和1 mmol/L氯化铝染毒24 h。染毒结束后,收集细胞,采用免疫印迹法检测N2a细胞中tau-5、P-tau181、P-tau231、P-tau262、P-tau396、热休克蛋白70(Hsp70)羧基末端结合蛋白(CHIP)和Hsp70水平,采用酶联免疫吸附实验测定泛素水平。结果析因分析结果显示,N2a细胞中tau-5、P-tau231、P-tau262、P-tau396、CHIP、Hsp70、泛素的蛋白相对表达水平在氯化铝染毒和MG132处理的主效应及两者的交互效应上均有统计学意义(P<0.05)。在对照组和MG132组,氯化铝染毒的N2a细胞中tau-5、P-tau231、P-tau262、P-tau396、CHIP、Hsp70、泛素的蛋白相对表达水平均高于无氯化铝染毒的N2a细胞(P<0.05)。无论是否予氯化铝染毒,MG132组N2a细胞中的tau-5、P-tau231、P-tau262、P-tau396、CHIP、Hsp70、泛素的蛋白相对表达水平均高于对照组(P<0.05)。N2a细胞中P-tau181蛋白相对表达水平在氯化铝染毒和MG132处理的主效应及两者的交互效应上均无统计学意义(P>0.05)。结论 UPP参与调控铝所致N2a细胞中tau蛋白异常磷酸化的经蛋白酶体降解过程,主要调控了P-tau231、P-tau262、P-tau396位点;UPP通路中CHIP和Hsp70在该过程中发挥重要作用。(本文来源于《中国职业医学》期刊2019年05期）
巨晓芬,崔双杰,张云玮,徐诗梦,路小婷[4]（2019）在《CHIP调控铝致tau蛋白异常磷酸化的具体机制》一文中研究指出目的探讨CHIP及其不同结构域在叁氯化铝致N2a细胞tau蛋白异常磷酸化中的具体调控机制。方法 (1)选取小鼠神经母细胞瘤细胞(N2a)进行染毒和干预,利用1 mmol·L~(-1)AlCl_3染毒及CHIP不同表达质粒转染,实验分组为:正常对照组,1 mmol·L~(-1)AlCl_3组,空质粒组,CHIP质粒转染组,CHIP质粒转染+1 mmol·L~(-1)AlCl_3组,CHIP shRNA阴性对照组,CHIPshRNA组,CHIPshRNA+1 mmol·L~(-1)AlCl_3组;(2)利用同种细胞系进行1mmol/LAlCl_3染毒及CHIP不同结构域质粒转染,实验分组为:正常对照组,1 mmol·L~(-1)AlCl_3组,空质粒组,CHIP(ΔU-box)质粒转染组,CHIP(ΔU-box)+1 mmol·L~(-1)AlCl_3组,CHIP(ΔTPR)质粒转染组,CHIP(ΔTPR)+1 mmol·L~(-1)AlCl_3组。上述处理结束后,收集细胞并提取细胞蛋白,采用Western blot的方法分别检测tau-5,pThr181,p Thr231,pSer262,pSer 396,CHIP,Hsp70及Ub的蛋白表达水平。同时利用析因设计对实验结果进行分析。结果 (1) CHIP不同表达的结果显示:CHIP过表达及CHIP干扰与AlCl_3染毒在Ub和pThr231,pSer262,pSer 396蛋白表达变化中存在交互作用。与对照组相比,染铝可引起Ub,pThr231,pSer262,pSer 396蛋白表达水平显着增高(P<0.05);CHIP过表达引起Ub蛋白表达水平显着增高(P<0.05),pThr231,pSer262,pSer 396蛋白表达水平均显着降低(P<0.05);CHIP干扰引起Ub蛋白表达显着降低(P<0.05),p Thr231,pSer262,pSer 396表达均有明显升高(P<0.05);CHIP质粒转染+1 mmol·L~(-1)AlCl_3组各指标变化无统计学差异;CHIPshRNA+1 mmol·L~(-1)AlCl_3组导致pThr231,pSer262,pSer 396蛋白表达的升高(P<0.05)。(2) CHIP(U-box)结构域质粒转染结果显示:CHIP(ΔU-box)结构域转染和染铝在Ub的蛋白表达变化中不存在交互作用,而在p Thr231,pSer262,pSer 396蛋白表达变化中存在交互作用。与对照组相比,染铝、CHIP(ΔU-box)质粒转染、CHIP(ΔU-box)+1 mmol·L~(-1)AlCl_3均引起pThr231,pSer262,pSer 396蛋白表达均显着升高(P<0.05);(3) N2a细胞CHIP(TPR)结构域质粒转染结果显示:CHIP(ΔTPR)结构域转染和染铝在Ub的蛋白表达变化中不存在交互作用,而在pThr231,pSer262,pSer 396蛋白表达变化中存在交互作用。与对照组相比,染铝、CHIP(ΔTPR)质粒转染、CHIP(ΔTPR)+1 mmol·L~(-1)AlCl_3组均引起p Thr231,pSer262,p Ser 396蛋白表达水平显着升高(P<0.05)。结论 CHIP参与了铝致N2a细胞tau蛋白异常磷酸化的调控,且主要调控位点是pThr231、pSer262、pSer 396位点。CHIP不同结构域在铝致N2a细胞tau蛋白异常磷酸化的调控过程中各自发挥了重要作用,二者共同存在才能发挥其对tau蛋白的降解作用。(本文来源于《中国毒理学会第九次全国毒理学大会论文集》期刊2019-09-17）
张博涵,董道松,郭欣欣,陶学恕,赵梦楠[5]（2019）在《神经型一氧化氮合酶不同位点磷酸化在大鼠神经病理性疼痛中的作用机制》一文中研究指出目的研究神经型一氧化氮合酶(nNOS)不同位点的磷酸化,在大鼠神经病理性疼痛过程中对疼痛的调节作用。方法选取56只SD大鼠建立坐骨神经分支损伤(SNI)模型,通过von Frey纤毛测量后足疼痛缩足阈值代表大鼠机械痛阈,观察疼痛程度。同时收集腰段脊髓组织,检测其中nNOS Ser~(847)及Ser~(1417)位点磷酸化的表达量,并在鞘内注射相应蛋白激酶的抑制剂,观察磷酸化表达量的变化。结果建立SNI模型后,大鼠机械痛阈值降低(P<0.05)。在疼痛产生过程中,nNOS Ser~(847)及Ser~(1417)位点都发生磷酸化,但表达量最高时间点不同。在鞘内分别给予KN-93及Wortmannin后,与之相应的nNOS Ser~(847)和Ser~(1417)磷酸化明显减少(P<0.05)。结论在大鼠神经病理性疼痛模型中,nNOS Ser~(847)及Ser~(1417)分别被CaMKⅡ、PKB/Akt磷酸化,导致一氧化氮合成量改变,对神经病理性疼痛起到不同的调节作用。(本文来源于《中国医科大学学报》期刊2019年07期）
姚兵,侯斌,李文燕,王志鑫,郭志方[6]（2019）在《四氢紫堇萨明对AD细胞模型Tau蛋白磷酸化的影响及其可能机制研究》一文中研究指出研究四氢紫堇萨明对Aβ_(25-35)诱导的阿尔茨海默病细胞模型Tau蛋白磷酸化的影响及其可能作用机理。以神经细胞PC-12为载体,Aβ_(25-35)诱导48 h建立AD细胞模型,MTS试剂盒检测细胞活力,激光共聚焦显微镜观察细胞核和细胞微管变化情况,Western blot法检测蛋白表达水平。结果显示,四氢紫堇萨明可显着增强模型细胞活力,改善微管形态,降低p-Tau(Ser396)和p-GSK-3β(Tyr216)表达水平,升高p-GSK-3β(Ser9)和p-AKT表达水平(P <0.05);PI3K抑制剂LY294002可部分阻断四氢紫堇萨明对模型细胞的上述改善作用。以上结果表明四氢紫堇萨明可显着改善AD细胞模型Tau蛋白过度磷酸化,从而改善细胞骨架微管形态,增强细胞活力,其机理可能与激活PI3K/Akt信号通路,降低GSK-3β活性,改善蛋白激酶/蛋白磷酸酯酶系统失衡相关。(本文来源于《天然产物研究与开发》期刊2019年07期）
李银杰,许璞,单佳婧,孙伟,纪雪飞[7]（2019）在《Forskolin与链脲佐菌素诱导的tau蛋白过度磷酸化介导的神经元焦亡在阿尔茨海默病中的机制》一文中研究指出目的焦亡是一种程序性的细胞死亡方式,特征为依赖胱天蛋白酶(caspase)1的激活,并伴有促炎因子释放。阿尔茨海默病(AD)病程发展的进程中,Aβ激活细胞焦亡通路为AD的主要病理改变之一。而tau蛋白过度磷酸化作为AD的另一主要病理改变,其对焦亡有何影响目前少有报道。因此,我们提出假设"过度磷酸化tau蛋白通过激活炎症小体-胱天蛋白酶1途径,介导神经元焦亡"。方法分别向大鼠侧脑室注射弗斯可林(forskolin,FSK)和链脲佐菌素(STZ)建立2种大鼠脑内tau蛋白过度磷酸化模型;使用FSK和STZ处理PC12细胞,在体外进一步验证tau蛋白与细胞焦亡之间的关系。并且通过行为学、免疫荧光、MTT比色法、酶联免疫吸附、蛋白活性测试和基因沉默等方法,检测tau蛋白及焦亡相关蛋白的表达水平,考察过度磷酸化的tau蛋白对细胞活性,痴呆模型大鼠空间记忆能力以及焦亡相关蛋白表达水平的影响。结果抑制胱天蛋白酶1或IL-1β/IL-18的活性,不仅可以显着改善FSK和STZ诱导的PC12细胞损伤,还可以改善痴呆模型大鼠的空间认知障碍,降低tau蛋白的表达水平。FSK诱导的痴呆模型大鼠脑内以及FSK和STZ处理的PC12细胞表达焦亡通路相关蛋白NLRP1、胱天蛋白酶1、IL-1β和IL-18水平均显着提高,而GSK-3β抑制剂Li Cl可显着降低胱天蛋白酶1活性,下调焦亡相关蛋白表达水平。结论炎症小体激活介导了PC12和痴呆大鼠脑内tau蛋白过度磷酸化引起神经毒性,而焦亡通路胱天蛋白酶1下游的促炎因子IL-1β和IL-18的释放在放大炎症反应的同时也促进tau蛋白的过度磷酸化。(本文来源于《中国药理学与毒理学杂志》期刊2019年06期）
贺冬[8]（2019）在《RBM47磷酸化在心脏再生中的分子机制》一文中研究指出心脏再生是一个复杂而精密的过程,涉及细胞的增殖、分化与组织形态的重建,RNA结合蛋白(RBP)在这一过程中发挥关键的作用。RBM47是一种RNA结合蛋白,具有调控mRNA可变剪接、碱基编辑和多聚腺苷化的作用,在早期神经发育和肿瘤发展中有显着功能。我们发现RBM47在新生小鼠和成年斑马鱼的心脏损伤中表达上调,且存在二聚体与剪切体的形式。推测RBM47二聚化和剪切体形成与蛋白翻译后修饰有关,我们应用亲和质谱技术鉴定了RBM47的磷酸化位点。其中位于RBM47RNA结合域中的S309位点磷酸化受心脏损伤激活,T314位点磷酸化水平在心脏损伤中被抑制。推测RBM47S309位点磷酸化参与心脏再生过程。我们发现RBM47S309位点的上游磷酸激酶是GRK2,GRK2可能介导RBM47对外界压力的响应,其中RBM47S309与T314位点磷酸化均能被低氧激活(1%O_2),精神压力可能抑制RBM47S309与T314位点磷酸化。综上所述,我们的研究以RBM47磷酸化为切入点,讨论了RBM47磷酸化与二聚体、剪切体之间的关系,探究蛋白激酶调节下RBM47磷酸化在心脏再生中的作用。(本文来源于《华中农业大学》期刊2019-06-01）
巨晓芬[9]（2019）在《CHIP调控AlCl_3致N2a细胞tau蛋白异常磷酸化分子机制》一文中研究指出目的:1.探讨CHIP不同表达状态在叁氯化铝致N2a细胞tau蛋白异常磷酸化位点中的调控机制。2.阐明CHIP不同结构域在CHIP调控叁氯化铝致N2a细胞tau蛋白异常磷酸化中所发挥的具体机制。方法:1.选择小鼠神经母细胞瘤细胞(N2a)作为实验材料,选取对数生长期的细胞进行1mmol/LAlCl_3染毒及CHIP质粒转染,实验分为两部分:一是观察CHIP过表达对染铝细胞tau蛋白的影响,实验分组为:正常对照组,1mmol/L AlCl_3组,空质粒组,CHIP质粒转染组,CHIP质粒转染+1mmol/L AlCl_3组;二是观察CHIP干扰对染铝细胞tau蛋白的影响:正常对照组,1mmol/LAlCl_3组,CHIP shRNA阴性对照组,CHIPshRNA组,CHIPshRNA+1mmol/L AlCl_3组;2.选择细胞系同上,对细胞进行1mmol/L AlCl_3染毒及CHIP不同结构域质粒转染,实验分为两部分:一是观察CHIP(ΔU-box)在CHIP调控铝致tau蛋白异常磷酸化中的作用,实验分组为:正常对照组,1mmol/L AlCl_3组,空质粒组,CHIP(ΔU-box)质粒转染组,CHIP(ΔU-box)+1mmol/L AlCl_3组;二是观察CHIP(ΔTPR)在CHIP调控铝致tau蛋白异常磷酸化中的作用,实验分组为:正常对照组,1mmol/L AlCl_3组,空质粒组,CHIP(ΔTPR)质粒转染组,CHIP(ΔTPR)+1mmol/L AlCl_3组。上述处理结束后,收集细胞并提取总蛋白样品,采用Western blot的方法分别检测tau-5,pThr181,pThr231,pSer262,pSer 396,CHIP,Hsp70及Ub的蛋白表达水平,通过免疫共沉淀的方法检测CHIP与tau-5,pThr181,pThr231,pSer262,pSer 396,Hsp70及Ub的相互作用。结果:1.N2a细胞CHIP过表达1.1免疫印记结果显示:与对照组相比,染铝可引起CHIP,Ub,pThr231,pSer262,pSer 396蛋白表达水平显着增高(P<0.05);CHIP过表达引起CHIP和Ub蛋白表达水平显着增高(P<0.05),pThr231,pSer262,pSer 396蛋白表达水平均显着降低(P<0.05)。经析因分析显示,在N2a细胞中CHIP过表达与AlCl_3染毒在CHIP,Ub和pThr231,pSer262,pSer 396蛋白表达变化中存在交互作用。1.2免疫共沉淀结果显示:利用anti-CHIP进行IP所得免疫沉淀复合物用WB检测到Hsp70,Ub与tau蛋白pThr231,pSer262,pSer 396磷酸化位点,说明CHIP与Hsp70,Ub,tau蛋白及其各磷酸化位点之间存在相互作用。2.N2a细胞CHIP干扰2.1免疫印记结果显示:与对照组相比,染铝可引起CHIP,Ub和pThr231,pSer262,pSer 396蛋白表达水平显着升高(P<0.05);CHIP干扰引起CHIP和Ub蛋白表达显着降低(P<0.05),pThr231,pSer262,pSer 396表达均有明显升高(P<0.05)。经析因分析显示,在N2a细胞中CHIP干扰与AlCl_3染毒在CHIP,Ub和pThr231,pSer262,pSer 396蛋白表达变化中存在交互作用。3.N2a细胞CHIP(U-box)结构域质粒转染3.1免疫印记结果显示:与对照组相比,染铝引起CHIP,Ub和pThr31231,pSer262,pSer 396蛋白表达均显着升高(P<0.05);CHIP(ΔU-box)结构域转染引起pThr231,pSer262,pSer 396蛋白表达水平显着升高(P<0.05)。经析因分析结果显示,CHIP(ΔU-box)结构域转染和染铝在CHIP和Ub的蛋白表达变化中不存在交互作用,而在pThr231,pSer262,pSer 396蛋白表达变化中存在交互作用。3.2免疫共沉淀结果显示:利用anti-Myc进行IP,得到的免疫沉淀复合物用WB在CHIP(ΔU-box)转染组和CHIP(ΔU-box)+1mmol/L AlCl_3组中未检测到Hsp70,Ub以及tau蛋白pThr231,pSer262,pSer 396各磷酸化位点与CHIP之间的相互作用。在各组免疫沉淀复合物中均能检测到Myc-CHIP。4.N2a细胞CHIP(TPR)结构域质粒转染4.1免疫印记结果显示:与对照组相比,染铝引起1mmol/L AlCl_3组CHIP,Ub,pThr231,pSer262,pSer 396蛋白表达水平显着升高(P<0.05);CHIP(ΔTPR)结构域转染引起pThr231,pSer262,pSer 396表达显着升高(P<0.05)。经析因分析结果显示,CHIP(ΔTPR)结构域转染和染铝在CHIP和Ub的蛋白表达变化中不存在交互作用,而在pThr231,pSer262,pSer 396蛋白表达变化中存在交互作用。4.2免疫共沉淀结果显示:利用anti-Myc进行IP所得免疫沉淀复合物用WB检测到Hsp70,Ub与CHIP存在相互作用。在CHIP(ΔTPR)质粒转染组、CHIP(ΔTPR)+1mmol/L AlCl_3组中检测到myc-CHIP;在CHIP(ΔTPR)质粒转染组、CHIP(ΔTPR)+1mmol/L AlCl_3组中未检测到pThr231,pSer262,pSer 396与CHIP之间相互作用。结论:1.CHIP参与了铝致N2a细胞tau蛋白异常磷酸化的调控,且主要调控位点是pThr231、pSer262、pSer 396位点。2.CHIP不同结构域在铝致N2a细胞tau蛋白异常磷酸化的调控过程中各自发挥了重要作用,二者必须共同存在发挥作用,缺一不可。(本文来源于《山西医科大学》期刊2019-06-01）
廖林虹[10]（2019）在《NDR磷酸化YAP S94和YAP S127调节TEAD转录活性的机制研究》一文中研究指出YAP是细胞内连接蛋白和转录共激活因子,主要与转录因子TEAD结合,对靶向基因起促进或增强作用,调节转录活性或中止释放,在器官生长、干细胞更新和细胞分化中起重要作用。Hippo通路是肿瘤抑制通路,核心是MST1/2和LATS1/2激酶,NDR激酶是LATS1/2同源体,有肿瘤抑制功能,Hippo激酶级联能对YAP转录共活化子产生抑制。磷酸化YAP S127使小肠上皮YAP胞质存留,限制其转录共活化子功能,从而抑制人结肠癌细胞增殖。在人类肿瘤中Hippo-YAP通路是大多数呈失调状态。破坏YAP-TEAD相互作用的小分子特异性抑制YAP-TEAD相互作用,发挥抗肿瘤作用,为抗癌药物提供新的研究方向。目的:本课题旨在研究NDR对YAP S94等位点的磷酸化作用和对TEAD转录活性的影响,初步探讨其内在机制。方法:1.对纯化的YAP蛋白和NDR蛋白进行磷酸化反应,质谱测序查找NDR对YAP的磷酸化位点。对转染YAP 5SA的细胞进行免疫共沉淀检测NDR对YAP其他位点的磷酸化作用,萤光素酶管家-报告基因检测TEAD的活性;对YAP S94A、YAP-NDR进行萤光素酶管家-报告基因和MTT检测NDR对YAP的磷酸化作用和TEAD活性。2.对转染YAP S94点突变质粒(YAP S94A、YAP S94D、YAP S94E)、YAP WT、YAP-5SA、、YAP-5SA/S94A、、YAP-5SA/S94D、、YAP-5SA/S94E、、YAPWT和YAP S94D/S127D检测TEAD活性。3.检测NDR2对TEAD/YAP/14-3-3相互作用、TEAD/YAP S94A相互作用的影响。对转染上调NDR2质粒细胞进行Western bolt、RT-PCR和泛素化检测TEAD的表达水平和泛素化。结果:1.质谱分析发现,NDR磷酸化YAP有9个位点,其中YAPS94和S127定位可能性分别为100%和24%。磷酸化抗体检测对已报道的5个位点:S61、S109、S127、S164、S397突变为A(YAP-5SA),发现NDR2对YAP仍存在的磷酸化作用;在此基础上进一步将S94突变为A(YAP-5SA-S94A)则NDR2对YAP的磷酸化作用消失。2.YAP WT和YAP-5SA增强TEAD活性,当YAP S94A和YAP-5SA-S94A减弱TEAD活性。同时转染YAP WT-NDR、YAP S94A和NDR或YAP S94A/YAP 5SA和NDR后TEAD转录活性减弱、细胞增殖能力减弱。转染YAP 5SA、YAP5SA-NDR、YAPWT、YAP-5SA、YAP-5SA/S94E时,TEAD转录活性增强。转染YAP-5SA/S94A、YAP-5SA/S94D细胞的TEAD活性增强;转染YAP-5SA/S94A与YAP-5SA/S94E细胞的TEAD活性增强不明显。TEAD在转染YAP-5SA时比转染YAP WT时的活性更强。转染YAP S94D/S127D能竞争性抑制YAP WT活化的细胞增殖能力。3.在NDR2作用下,YAP与TEAD、14-3-3形成复合体,结合能力增强。上调NDR2后,TEAD的mRNA无明显改变,泛素化水解增强,蛋白水平降低。结论1.除了报道的YAP S127位点,NDR还调控YAP S94位点磷酸化。2.YAP S94位点磷酸化调节YAP与TEAD的结合和TEAD的转录活性。3.NDR2通过磷酸化YAP S94与S127,使YAP与TEAD、14-3-3形成复合体,诱导TEAD泛素化水解。4.YAP S94D能模拟真实的YAP磷酸化状态。5.YAP5SA-S94A降低TEAD的转录活性,减弱SW480细胞增殖能力。YAP 5SA-S94D增强TEAD的转录活性,增强SW480细胞增殖能力。(本文来源于《南方医科大学》期刊2019-05-14）
磷酸化机制论文开题报告
（1）论文研究背景及目的
此处内容要求：
首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景，再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题，并提出你的论文准备的观点或解决方法。
写法范例：
转录因子的激活通常依赖蛋白质的翻译后修饰来实现,在众多的蛋白质翻译后修饰当中,磷酸化/去除磷酸化是变化最迅速、对环境变化最敏感的类型之一。为应对高盐胁迫,大豆根部通过磷酸化修饰激活GmMYB173转录因子,提升B环含双羟基的类黄酮花青素3-阿拉伯糖苷的积累;通过磷酸化修是抑制GmMYB183转录因子活性,降低B环含单个羟基的芒柄花苷的含量,从而缓解其遭受到的盐胁迫危害。由于B环上含有双羟基的类黄酮清除ROS的能力通常强于含单个羟基的类型,这两类类黄酮物质组成的合理调配可能是大豆应对盐胁迫引起的ROS胁迫所采用的重要策略之一。类黄酮的不同亚类、不同修饰在植物耐盐响应后期清除活性氧化物的过程中可能起正、负调控两种作用,探究类黄酮的合成与修饰机制将为我们全面理解植物抵御ROS次级危害提供依据。
（2）本文研究方法
调查法：该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。
观察法：用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。
实验法：通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。
文献研究法：通过调查文献来获得资料，从而全面的、正确的了解掌握研究方法。
实证研究法：依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。
定性分析法：对研究对象进行“质”的方面的研究，这个方法需要计算的数据较少。
定量分析法：通过具体的数字，使人们对研究对象的认识进一步精确化。
跨学科研究法：运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。
功能分析法：这是社会科学用来分析社会现象的一种方法，从某一功能出发研究多个方面的影响。
模拟法：通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。
磷酸化机制论文参考文献
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[7].李银杰,许璞,单佳婧,孙伟,纪雪飞.Forskolin与链脲佐菌素诱导的tau蛋白过度磷酸化介导的神经元焦亡在阿尔茨海默病中的机制[J].中国药理学与毒理学杂志.2019
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[10].廖林虹.NDR磷酸化YAPS94和YAPS127调节TEAD转录活性的机制研究[D].南方医科大学.2019