导读:本文包含了细胞外钙论文开题报告文献综述及选题提纲参考文献，主要关键词:Ca2+,细胞外钙受体,生理功能
细胞外钙论文文献综述
谷家茂,李漾漾,王峰,齐明芳,李天来[1]（2019）在《细胞外钙受体(CAS)调控植物光合作用及逆境响应的研究进展》一文中研究指出细胞外钙受体(Calcium-sensingreceptor,CAS)是一种定位在类囊体膜上的特异性蛋白,通过感知胞外Ca2+浓度的变化调控胞内Ca2+响应,进而影响下游一系列信号活动,使植物体对外界环境作出反应。综述了植物CAS发现历程、结构、定位以及影响植物的气孔开闭、参与光合作用,调控逆境响应等方面研究进展,以期为深入研究植物中CAS调控逆境响应的生物学功能提供参考。(本文来源于《园艺学报》期刊2019年09期）
肖瑞[2]（2017）在《野百合碱通过细胞外钙敏感受体引起肺动脉内皮损伤进而导致肺动脉高压》一文中研究指出肺动脉高压(Pulmonary hypertension,PH)是一种病因复杂、发病机制不清楚的渐进性疾病,也是仅次于高血压和冠心病的第叁位心血管疾病。该疾病恶性程度非常高,约75%的患者在诊断后5年内死亡,症状出现后的平均生存期为1.9年,又被称为心血管中的“癌症”。然而因为其病因和发病机制多样性,病人的临床表现、组织学特征、严重程度、对治疗的反应以及预后都存在很大差异。因此需要开展广泛而深入的研究来攻克该疾病,研究过程中的一个重要环节是肺动脉高压动物模型的建立,该模型的建立有多种方法,包括慢性缺氧(Chonric hypoxia,CH)诱导肺动脉高压模型、野百合碱(Monocrotaline,MCT)诱导肺动脉高压模型、野百合碱(MCT)加肺切除诱导肺动脉高压模型、Sugen5416加慢性缺氧(CH)诱导肺动脉高压模型等。其中MCT模型因为具有操作简单(单次皮下或腹腔注射)、时间短(2周就能形成肺动脉高压)、稳定性好、成本低等特点,使其成为最被广泛运用的肺动脉高压模型之一。但是该模型的分子机制却一直不清楚。野百合碱(Monocrotaline.,MCT)是主要存在于豆科猪屎豆属植物中的11元大环生物碱。其被摄入体内到达肝脏后,在肝脏细胞色素P450的催化作用下代谢成为活性形式:脱氢野百合碱(Monocrotaline pyrrole,MCTP)。通过回顾前期关于MCT的研究发现,其代谢物MCTP与蛋白质、DNA等亲核大分子物质的结合被认为是MCT毒性的重要机制。在细胞中,MCTP主要是与蛋白质的巯基结合,包括肌动蛋白、半乳凝素、蛋白二硫键异构酶、细胞骨架肌凝蛋白、ERp57等,研究表明MCTP对蛋白蛋白中的Cys-Xaa-Xaa-Cys(CXXC)这一特定短肽序列有高度亲和性,被结合的蛋白多含有这一短肽序列,另外有研究发现除半胱氨酸外MCTP还能够与组氨酸、色氨酸形成共价键而结合,如网钙结合蛋白1,3和线粒体ATP合成酶[1-4]。而近几年越来越多文献报道细胞外钙敏感受体(Ectracellular calcium-sensing receptor,CaSR)在肺动脉高压疾病的发生发展中发挥着重要作用[5-7],而通过对CaSR的结构分析发现,CaSR细胞外域(Extracellular domain,ECD)含有19个半胱氨酸、13个组氨酸、10个色氨酸以及3个CXXC短肽序列。综上所述,CaSR的结构特点可能使其成为MCT作用的重要靶点。因此本研究旨在以CaSR作为切入点,对MCT诱导肺动脉高压动物模型的分子机制进行探究,以期为肺动脉高压的机制研究提供更多线索,也为肺动脉高压的治疗提供潜在的靶点。实验目的野百合碱(Monocrotaline,MCT)现在被广泛用来建立肺动脉高压的动物模型,然而其引起肺动脉高压的分子机制一直不清楚。本课题研究旨在揭示野百合碱是否通过作用于细胞外钙敏感受体(Extracellular calcium-sensing receptor,CaSR)引起肺动脉内皮损伤,进而导致肺动脉高压。实验方法1.表达并纯化重组CaSR胞外段蛋白;利用WaterLOGSY(Water-ligandobserved via gradient spectroscopy)技术与 STD-NMR(Saturation transfer difference-nuclear magnetic resonance)技术检测CaSR胞外段蛋白与MCT的相互作用情况。2.用FITC标记MCT,利用激光共聚焦显微镜观察肺动脉内皮细胞上MCT的分布情况和CaSR蛋白的分布情况。3.用Fura-2/AM探针检测肺动脉内皮细胞中钙离子变化,观察MCT对PAEC中CaSR活性的影响。4.用CCK-8试剂盒检测PAEC的存活率,Western Blot检测PAEC中cleaved caspase 3的表达水平。5.构建CFP-CaSR质粒和YFP-CaSR质粒,用FRET技术检测蛋白间的相互作用。6.皮下注射MCT建立肺动脉高压模型,检测模型动物的肺动脉压力值、体循环压力值及心输出量,将模型动物肺组织石蜡包埋、切片、HE染色后,统计其血管壁厚。实验结果1.WaterLOGSY技术与STD-NMR技术检测到CaSR胞外段蛋白与MCT有结合。2.FITC-MCT孵育PAEC后在激光共聚焦显微镜下观察,细胞膜上的荧光强度明显高于胞浆中荧光强度,且与CaSR存在共定位。3.MCT引起PAEC细胞内钙离子浓度显着升高。而加入CaSR特异性抑制剂Calhex231或将CaSR下调后,MCT引起的细胞内钙离子浓度升高明显被抑制。4.MCT导致PAEC存活率显着降低。而加入CaSR特异性抑制剂Calhex231或将CaSR下调后,MCT引起的PAEC存活率降低被逆转。MCT导致PAEC中cleaved caspase 3表达显着升高。而加入CaSR特异性抑制剂Calhex231或将CaSR下调后,MCT引起的PAEC cleaved caspase 3表达升高被抑制。5.构建CFP-CaSR和YFP-CaSR质粒,共转染至PAEC中,再加MCT刺激,从CFP-CaSR转移至YFP-CaSR的能量显着增强。6.单次皮下注射MCT两周后,大鼠肺动脉压力、肺血管阻力、右心肥厚指数及血管壁厚这四个指标均明显升高;而在下调CaSR或敲除CaSR后,与MCT组相比,以上四个指标均显着下降。实验结论MCT能够与CaSR结合,并引起CaSR聚合,从而激活CaSR。CaSR激活引起肺动脉内皮细胞胞浆钙离子浓度升高,导致肺动脉内皮细胞发生凋亡,进而引起肺动脉内皮损伤,最终导致肺动脉高压。(本文来源于《华中科技大学》期刊2017-05-01）
曾宪琴[3]（2017）在《缺氧诱导丝裂原因子作为细胞外钙敏感受体的非经典配体在慢性缺氧性肺动脉高压中的作用和机制》一文中研究指出目的:研究缺氧诱导丝裂原因子(hypoxia induced mitogenic factor,HIMF)作为细胞外钙敏感受体的(extracellular calcium-sensing receptor,CaSR)的非经典配体在慢性缺氧诱导的肺动脉平滑肌细胞(pulmonary artery smooth muscle cells,PASMCs)的增殖和肺动脉高压中的作用和机制。方法:(1)通过免疫沉淀技术筛选出在慢性缺氧性肺动脉高压中和HIMF相互作用的G蛋白偶联受体;(2)原代培养PASMCs;(3)免疫共沉淀技术和免疫荧光技术检测HIMF和CaSR的相互作用和共定位情况;(4)酵母双杂交技术筛选出和HIMF主要作用的CaSR氨基酸位点;(5)用不同的细胞外钙离子浓度([Ca2+]o)处理PASMCs后用钙离子荧光探针Fura-2/AM和钙离子荧光成像系统检测胞浆内钙离子浓度([Ca2+]i);(6)PASMCs转染CaSR shRNA和CaSR突变质粒(突变CaSR和HIMF特异性结合的四个氨基酸位点的质粒)下调和突变CaSR的表达,PASMCs转染HIMF shRNA和HIMF过表达质粒下调和上调HIMF的表达;(7)合成特异性的穿膜肽竞争HIMF和CaSR的结合位点,阻止HIMF和CaSR的结合;(8)用CCK8试剂盒检测PASMCs增殖的情况;(9)Calhex231和特异性穿膜肽注射SD大鼠和慢病毒感染SD大鼠;(10)western和ELLISA检测慢病毒效应;(11)power lab检测肺动脉压、体循环压和心输出量;(12)western检测HIMF和CaSR的结合是否影响CaSR二聚体的形成;(13)通过钙成像技术检测抑制HIMF和CaSR相互作用的特异性多肽在正常的条件下是否对CaSR的正常功能有影响。结果:(1)免疫共沉淀技术筛选出在缺氧性肺动脉高压中HIMF是通过CaSR这个G蛋白偶联受体起的作用;(2)免疫共沉淀技术和免疫荧光技术检测HIMF和CaSR在原代培养的PASMCs和缺氧后SD大鼠的肺动脉中(PA)可以相互结合且存在共定位;(3)酵母双杂交技术筛选出和HIMF主要作用的CaSR氨基酸位点是位于CaSR胞内段885-888aa这4个氨基酸;(4)慢性缺氧可以导致CaSR敏感性增加和PASMCs的增殖,这个效应台能被CaSR的特异性抑制剂Calhex231、CaSR shRNA、CaSR mutation、特异性穿膜肽和HIMF shRNA抑制;(5)常氧情况下过表达HIMF可以导致CaSR敏感性增加和PASMCs的增殖,这个效应能被CaSR的特异性抑制剂Calhex231和CaSR shRNA抑制;(6)将包装CaSR和HIMF干扰的特异性质粒、CaSR突变质粒和HIMF过表达质粒的慢病毒气道注入SD大鼠72小时候后开始造动物模型,活体实验中,慢性缺氧可以引起SD大鼠肺动脉压力、肺循环阻力、右心肥厚指数和肺动脉中层平滑肌厚度的增加,这个效应能被CaSR的特异性抑制剂Calhex231、CaSR shRNA、CaSR突变、HIMF shRNA和特异性穿膜肽抑制;(7)常氧情况下过表达HIMF可以导致SD大鼠肺动脉压力、肺循环阻力、右心肥厚指数和肺动脉中层平滑肌厚度的增加,这个效应也能被CaSR的特异性抑制剂Calhex231和CaSR shRNA抑制;(8)ELISA检测HIMF shRNA慢病毒干扰了 HIMF的表达和HIMF过表达慢病毒使常氧时HIMF基因的表达增加,western检测转染CaSR shRNA时CaSR表达减少和转染CaSR突变质粒时CaSR表达增加;(9)HIMF和CaSR的结合通过影响CaSR的二聚体的形成而使得CaSR敏感性增高;(10)在正常的条件下,特异性穿膜肽只是阻碍CaSR和HIMF相互作用,并不影响CaSR其本身的生理功能。结论:慢性缺氧诱导HIMF表达的增加后使得HIMF和CaSR结合增加,这促进了 CaSR二聚体形成的增加,进而增强PASMCs上CaSR的敏感性,使其更容易被[Ca2+]o激活,[Ca2+]o内流导致[Ca2+]i的增加和PASMCs的增殖而引起肺动脉高压。(本文来源于《华中科技大学》期刊2017-05-01）
顾京红,滕银成,黄亚绢,徐钦洋,马莉[4]（2014）在《重度子痫前期血管平滑肌细胞外钙离子内聚作用的研究》一文中研究指出目的:探讨钙离子在子痫前期(PE)血管平滑肌细胞功能异常中作用的分子机制。方法:检测并比较129例重度PE孕妇(重度PE组)中早发、晚发型孕期及产后的血压及血钙水平,并分析两者的相关性;同时检测120例正常妊娠孕妇(正常对照组)孕期及产后1月血钙水平,比较重度PE组与正常对照组血钙水平的差异。体外建立内皮细胞与平滑肌细胞共培养体系,试验分为正常孕妇血清处理组(A组)、PE血清处理组(B组)、共培养平滑肌细胞内钙离子释放通道阻断后PE血清处理组(C组),C组为叁磷酸肌醇受体-Ⅰ小干扰RNA(IP3R-ⅠsiRNA)沉默平滑肌细胞IP3R表达,斯里兰卡肉桂碱(终浓度10μmol/L)阻断兰诺定受体(RyRs)通路诱发的钙离子释放。观察3组共培养平滑肌细胞内钙离子浓度变化。结果:1早发、晚发重度PE产前血钙水平明显低于正常对照组孕中期、孕晚期及产后1月水平(P<0.05),早发、晚发重度PE产后1月血钙水平与正常对照组产后1月比较,差异无统计学意义(P>0.05);早发重度PE收缩压高于晚发重度PE(P<0.05)。2晚发重度PE和重度PE患者血钙水平与收缩压呈负相关(P<0.05),与舒张压无相关性(P>0.05)。3B组与C组钙离子浓度明显高于A组(P<0.05)。结论:重度PE血钙水平明显低于正常妊娠,产后迅速恢复正常;钙离子与PE血管痉挛性收缩的病理过程有关,PE血管平滑肌细胞外钙离子内流可能是导致低血钙及平滑肌细胞痉挛性收缩的重要原因,在PE的病理过程中起重要作用。(本文来源于《实用妇产科杂志》期刊2014年12期）
王静,钟华,赵慧,王腊梅,庞丽娟[5]（2014）在《STIM2、TRPC3在人脐静脉内皮细胞外钙敏感受体介导的钙内流和NO生成中的作用》一文中研究指出目的:研究Ca2+感受蛋白基质相互作用分子2(STIM2)及瞬时型感受器电位3(TRPC3)在人脐静脉内皮细胞(HUVEC)细胞外钙敏感受体(CaR)介导钙内流和NO生成中的作用。方法:1免疫荧光技术检测HUVEC中STIM2和TRPC3的蛋白表达。2利用转染技术将构建的STIM2干扰质粒(STIM2shRNA)和TRPC3干扰质粒(TRPC3shRNA)分别转染入HUVEC,实时定量RT-PCR和Western blot检测STIM2shRNA、TRPC3shRNA转染后的抑制效率。3取2~5代细胞随机分组:实验组(即精胺+Ca2++shSTIM2-002组和精胺+Ca2++shTRPC3-004组),其余两组分别为对照组(Control组,即精胺+Ca2+组),空质粒组(Vehicle组,即精胺+Ca2++Vehicle组),分别将上述4组细胞与CaR激动剂孵育,各组用荧光探针Fura-2/AM、DAF-FM负载方法同步测定[Ca2+]i和NO生成的变化。结果:1免疫荧光技术检测显示STIM2和TRPC3两者均表达于HUVEC胞浆。2实时定量RT-PCR及Western blot检测结果显示:与Control组相比,shSTIM2-002和shTRPC3-004干扰后,STIM2和TRPC3mRNA的表达均明显降低(抑制率分别为88.2%和74.0%,P<0.05);STIM2和TRPC3蛋白的表达亦明显降低(抑制率分别为79.9%和71.8%)(P<0.05)。3[Ca2+]i△ratio值和NO净荧光强度值的测定结果显示:与精胺+Ca2+组的[Ca2+]i、NO净荧光强度值相比,精胺+Ca2++ShSTIM2-002组、精胺+Ca2++ShTRPC3-004组及精胺+Ca2++Vehicle组均无显着差异(均P>0.05)。结论:STIM2和TRPC3均未单独参与CaR介导的Ca2+内流和NO的生成过程。(本文来源于《中国应用生理学杂志》期刊2014年04期）
郑茂钟[6]（2013）在《细胞外钙对百合花粉萌发和花粉管生长的调节作用》一文中研究指出采用离体花粉培养技术,研究了不同浓度的细胞外钙对百合花粉萌发和花粉管生长的影响。结果表明:在0.01%Ca2+浓度下花粉萌发和花粉管生长速率最快,高于或低于这个浓度,花粉管生长速率和萌发速率都显着被抑制。将快速生长的花粉管,转入Ca2+浓度为0.3%的培养基中,花粉管的生长在几秒种内就被抑制。长时间0.3%Ca2+浓度培养导致花粉管呈波浪形状。这种改变是不可逆的,当用pectinase处理或降低培养基中的钙浓度时,花粉管破裂。这些结果说明钙作为花粉管生长调节信号,对花粉管的生长具有直接作用和间接作用。(本文来源于《武夷学院学报》期刊2013年05期）
唐浩英,王璟,卢敏[7]（2013）在《细胞外钙离子内流上调原发性开角型青光眼患者小梁网细胞Copine1表达的研究》一文中研究指出目的探讨原发性开角型青光眼患者(primary open-angle glaucoma,POAG)小梁网细胞外钙离子内流对膜蛋白copine1表达的影响。方法原代培养POAG患者小梁网细胞,应用荧光显微镜和流式细胞仪检测细胞内钙离子浓度,所用钙离子荧光探针为Fluo 3-AM;;应用钙离子运载剂A23187增加细胞内钙离子浓度;;应用Real-time PCR检测小梁网细胞内钙离子浓度增加前后copine1在转录水平的表达。结果经免疫组织化学鉴定培养的细胞为小梁网细胞。荧光显微镜下观察与流式细胞仪定量结果均显示,应用钙离子运载剂A23187增加了POAG患者小梁网细胞内的钙离子浓度。Real-time PCR检测证实A23187的应用使copine1 mRNA在小梁网细胞中表达增加了(1.8±0.3)倍。结论 POAG患者小梁网细胞内钙离子浓度增高可引起copine1在转录水平表达的上调,copine1在小梁网细胞中的功能研究将会增加对POAG病理学机制的理解,有助于新药物靶点的开发。(本文来源于《眼科新进展》期刊2013年08期）
张继伟[8]（2013）在《细胞外钙敏感受体在缺氧性肺血管收缩中的作用和机制》一文中研究指出第一部分细胞外钙敏感受体在缺氧诱导肺动脉平滑肌细胞胞浆钙浓度增加中的作用和机制目的：研究细胞外钙敏感受体(extracellular calcium-sensing receptor, CaSR)在缺氧诱导肺动脉平滑肌细胞胞浆内钙离子浓度([Ca2+]i)增加中的作用及机制。方法：原代培养SD大鼠肺动脉平滑肌细胞(pulmonary artery smooth muscle cells, PASMCs);免疫组织化学染色和western blot检测PASMCs上CaSR的表达情况；用不同浓度的细胞外Ca2+处理PASMCs检测CaSR功能；用钙离子荧光探针Fura-2/AM和荧光成像系统检测[Ca2+]i;用H2-DCFDA和mito-RoGFP检测细胞内活性氧(reactive oxygen species, ROS)生成；shRNA基因技术干扰CaSR、STIM1和RyR3的表达,并用western blot检测干扰效率。结果：(1)免疫组织化学染色和western blot均检测到PASMCs细胞膜和胞浆CaSR表达,western blot结果显示细胞膜和胞浆中CaSR的分子量分别为55-72kD和170kD左右。(2)用4、6、7.5mM细胞外Ca2+处理PASMCs,可诱导ERKl/2磷酸化水平逐渐增强,同时6mM和7.5mM细胞外Ca2+又可以引起[Ca2+]i显着增高,而此效应可被CaSR特异性阻滞剂Calhex231所抑制。(3)缺氧可诱导PASMCs ROS产生增加,用外源性H202校正并模拟,缺氧诱导ROS产生相当于15.6μM H2O2诱导ROS的产生。(4)缺氧以及15.6μM H2O2均能引起PASMCs [Ca24]i升高,同时Calhex231和shRNA-CaSR能抑制缺氧以及15.6μM H2O2引起的[Ca2+]i升高。(5)线粒体DNA剔除不仅抑制缺氧引起的ROS生成增多,也抑制缺氧引起的[Ca2+]i增加,这种效应能被外源性15.6μM H2O2所逆转,Calhex231和shRNA-CaSR又能够阻止H202对上述反应的逆转作用。同时PEG-catalase预处理PASMCs能够抑制缺氧引起的[Ca2+]i增加,而PEG-SOD预处理则无此作用。(5)100μM ryanodine抑制RyR功能,可以减弱缺氧和15.6μM H2O2引起的[Ca2+]i升高,但是IP3R的抑制剂20μM XeC却无此作用；若同时应用PKA抑制剂H-89,则100μM ryanodine不再抑制缺氧和H202引起的[Ca2+]i增加,20μM XeC却可以抑制此反应。储库操纵性钙离子进入(store-operated Ca2+entry, SOCE)抑制剂50μM SKF96365可显着抑制缺氧和15.6μM H2O2引起的[Ca2+]i升高。此外,STIM1和RyR3基因敲除也可减弱缺氧和H202引起的[Ca2+]i升高。结论：缺氧刺激引起PASMCs线粒体源性H202产生增加,增加的H202可以使CaSR敏感性增强,从而被细胞外Ca2+激活,进而引起RyR敏感性钙通道开放,钙库Ca2+释放,并激活SOCE,通过STIM1介导细胞外Ca2+内流,共同造成[Ca2+]i升高。第二部分细胞外钙敏感受体在离体和在体缺氧性肺血管收缩中的作用目的：探讨CaSR在离体和在体缺氧性肺血管收缩(hypoxic pulmonary vasoconstriction, HPV)中的关键作用。方法：慢病毒感染SD大鼠,下调CaSR蛋白表达；Power lab四导仪监测离体肺动脉张力及大鼠在不同条件下肺动脉压和心输出量。结果：(1)将慢病毒包装的CaSR特异性干扰质粒,从SD大鼠尾静脉注射72小时后,western blot检测CaSR蛋白表达水平明显下降。(2)离体实验中,缺氧和15.6μM H2O2均能引起肺血管张力增加,同时Calhex231能抑制缺氧以及15.6μM H2O2引起肺血管张力增加。此外,shRNA-CaSR可以抑制缺氧引起的肺血管张力增加。(3)在体实验中,缺氧可以引起SD大鼠肺动脉压力明显增加,同时Calhex231和shRNA-CaSR能抑制缺氧刺激引起的肺动脉压力增加。结论：CaSR介导缺氧诱导肺动脉平滑肌细胞[Ca2+]i的升高,最终导致缺氧性肺血管收缩和肺动脉高压。(本文来源于《华中科技大学》期刊2013-05-01）
钟华,龚艳,吴玲玲,赵慧,王静[9]（2013）在《小凹蛋白-1下调人脐静脉内皮细胞外钙敏感受体介导的钙内流的作用机制》一文中研究指出目的:研究小凹蛋白-1(Cav-1)对人脐静脉内皮细胞(HUVECs)细胞外钙敏感受体(CaR)介导钙内流的作用机制。方法:取2～3代HUVECs,采用细胞膜穴样凹陷(caveolae)结构破坏剂非律平(filipin)和甲基-β-环糊精(MβCD)及Cav-1基因沉默,配合CaR激动剂精胺(spermine)和负性变构调节剂Calhex 231。Fura-2/AM负载检测细胞内Ca2+浓度([Ca2+]i)。Western blotting检测HUVECs中Cav-1以及CaR蛋白表达,免疫共沉淀技术检测Cav-1和CaR相互作用。用蔗糖密度梯度离心的方法提取并鉴定caveolae,Western blotting检测caveolae的标志蛋白Cav-1和浮舰蛋白1(flotillin-1)及CaR表达。同时检测胞膜、胞浆和高尔基体标志蛋白:转铁蛋白受体(TfR)、β-肌动蛋白(β-actin)和β-外被体蛋白(β-COP)。检测富含Cav-1膜(CEM)区、非caveolae I区(NCF I)和II区(NCF II)的Cav-1和CaR表达。结果:(1)细胞外液为含钙液时,Calhex 231完全阻断精胺刺激引起的[Ca2+]i升高(P<0.05),MβCD可加强精胺升高[Ca2+]i的作用(P<0.05)。不同浓度MβCD处理后各组Cav-1和CaR相互作用的差异无统计学意义(P>0.05);(2)免疫共沉淀结果显示,各组Cav-1和CaR蛋白表达的差异无统计学意义(P>0.05);(3)与control组比较,spermine+Ca2+组、filipin+spermine+Ca2+组和MβCD+spermine+Ca2+组CEM区的Cav-1和CaR蛋白表达均降低(P<0.05),NCF I区的Cav-1和CaR蛋白表达增加(P<0.05),NCF II区Cav-1蛋白表达增加(P<0.05),而CaR蛋白表达的差异无统计学意义(P>0.05)。结论:在HUVECs中,Cav-1和CaR共定位于同一caveolae区,同时Cav-1对CaR介导的Ca2+内流有下调作用,其机制可能与Cav-1抑制CaR膜定位、促使其向非caveolae区转位及减弱其对激动剂的反应性有关。(本文来源于《中国病理生理杂志》期刊2013年04期）
王业美,李松涛,李颖[10]（2013）在《细胞外钙对HepG2细胞内钙浓度的影响》一文中研究指出目的研究不同浓度细胞外钙对HepG2细胞内钙的影响并初步阐明细胞内钙变化的机制。方法给予不同浓度钙培养液作用24h后,用Fluo-3/AM染色剂对HepG2细胞进行染色,应用流式细胞仪检测其细胞内钙浓度的变化;利用阻断剂对钙通道进行阻断,寻找细胞内钙变化的原因;应用siRNA干扰对找寻到的钙通道进行沉默,进一步确认引起钙变化的钙通道。结果细胞内钙浓度随细胞外钙浓度的升高而升高,当细胞外钙浓度为2.75mmol/L时,细胞内钙钙荧光强度值达到最大为(123.25±12.95);钙池操纵的钙通道(SOC)阻断剂—La3+可显着抑制外钙引起的内钙升高(P﹤0.01);应用siRNA沉默TRPC1通道后可显着抑制外钙引起的内钙变化。结论随细胞外钙浓度升高,肝细胞内钙浓度显着增高;TRPC1参与的钙池操纵的钙通道可能是引起细胞内钙离子升高的主要通道。(本文来源于《现代预防医学》期刊2013年12期）
细胞外钙论文开题报告
（1）论文研究背景及目的
此处内容要求：
首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景，再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题，并提出你的论文准备的观点或解决方法。
写法范例：
肺动脉高压(Pulmonary hypertension,PH)是一种病因复杂、发病机制不清楚的渐进性疾病,也是仅次于高血压和冠心病的第叁位心血管疾病。该疾病恶性程度非常高,约75%的患者在诊断后5年内死亡,症状出现后的平均生存期为1.9年,又被称为心血管中的“癌症”。然而因为其病因和发病机制多样性,病人的临床表现、组织学特征、严重程度、对治疗的反应以及预后都存在很大差异。因此需要开展广泛而深入的研究来攻克该疾病,研究过程中的一个重要环节是肺动脉高压动物模型的建立,该模型的建立有多种方法,包括慢性缺氧(Chonric hypoxia,CH)诱导肺动脉高压模型、野百合碱(Monocrotaline,MCT)诱导肺动脉高压模型、野百合碱(MCT)加肺切除诱导肺动脉高压模型、Sugen5416加慢性缺氧(CH)诱导肺动脉高压模型等。其中MCT模型因为具有操作简单(单次皮下或腹腔注射)、时间短(2周就能形成肺动脉高压)、稳定性好、成本低等特点,使其成为最被广泛运用的肺动脉高压模型之一。但是该模型的分子机制却一直不清楚。野百合碱(Monocrotaline.,MCT)是主要存在于豆科猪屎豆属植物中的11元大环生物碱。其被摄入体内到达肝脏后,在肝脏细胞色素P450的催化作用下代谢成为活性形式:脱氢野百合碱(Monocrotaline pyrrole,MCTP)。通过回顾前期关于MCT的研究发现,其代谢物MCTP与蛋白质、DNA等亲核大分子物质的结合被认为是MCT毒性的重要机制。在细胞中,MCTP主要是与蛋白质的巯基结合,包括肌动蛋白、半乳凝素、蛋白二硫键异构酶、细胞骨架肌凝蛋白、ERp57等,研究表明MCTP对蛋白蛋白中的Cys-Xaa-Xaa-Cys(CXXC)这一特定短肽序列有高度亲和性,被结合的蛋白多含有这一短肽序列,另外有研究发现除半胱氨酸外MCTP还能够与组氨酸、色氨酸形成共价键而结合,如网钙结合蛋白1,3和线粒体ATP合成酶[1-4]。而近几年越来越多文献报道细胞外钙敏感受体(Ectracellular calcium-sensing receptor,CaSR)在肺动脉高压疾病的发生发展中发挥着重要作用[5-7],而通过对CaSR的结构分析发现,CaSR细胞外域(Extracellular domain,ECD)含有19个半胱氨酸、13个组氨酸、10个色氨酸以及3个CXXC短肽序列。综上所述,CaSR的结构特点可能使其成为MCT作用的重要靶点。因此本研究旨在以CaSR作为切入点,对MCT诱导肺动脉高压动物模型的分子机制进行探究,以期为肺动脉高压的机制研究提供更多线索,也为肺动脉高压的治疗提供潜在的靶点。实验目的野百合碱(Monocrotaline,MCT)现在被广泛用来建立肺动脉高压的动物模型,然而其引起肺动脉高压的分子机制一直不清楚。本课题研究旨在揭示野百合碱是否通过作用于细胞外钙敏感受体(Extracellular calcium-sensing receptor,CaSR)引起肺动脉内皮损伤,进而导致肺动脉高压。实验方法1.表达并纯化重组CaSR胞外段蛋白;利用WaterLOGSY(Water-ligandobserved via gradient spectroscopy)技术与 STD-NMR(Saturation transfer difference-nuclear magnetic resonance)技术检测CaSR胞外段蛋白与MCT的相互作用情况。2.用FITC标记MCT,利用激光共聚焦显微镜观察肺动脉内皮细胞上MCT的分布情况和CaSR蛋白的分布情况。3.用Fura-2/AM探针检测肺动脉内皮细胞中钙离子变化,观察MCT对PAEC中CaSR活性的影响。4.用CCK-8试剂盒检测PAEC的存活率,Western Blot检测PAEC中cleaved caspase 3的表达水平。5.构建CFP-CaSR质粒和YFP-CaSR质粒,用FRET技术检测蛋白间的相互作用。6.皮下注射MCT建立肺动脉高压模型,检测模型动物的肺动脉压力值、体循环压力值及心输出量,将模型动物肺组织石蜡包埋、切片、HE染色后,统计其血管壁厚。实验结果1.WaterLOGSY技术与STD-NMR技术检测到CaSR胞外段蛋白与MCT有结合。2.FITC-MCT孵育PAEC后在激光共聚焦显微镜下观察,细胞膜上的荧光强度明显高于胞浆中荧光强度,且与CaSR存在共定位。3.MCT引起PAEC细胞内钙离子浓度显着升高。而加入CaSR特异性抑制剂Calhex231或将CaSR下调后,MCT引起的细胞内钙离子浓度升高明显被抑制。4.MCT导致PAEC存活率显着降低。而加入CaSR特异性抑制剂Calhex231或将CaSR下调后,MCT引起的PAEC存活率降低被逆转。MCT导致PAEC中cleaved caspase 3表达显着升高。而加入CaSR特异性抑制剂Calhex231或将CaSR下调后,MCT引起的PAEC cleaved caspase 3表达升高被抑制。5.构建CFP-CaSR和YFP-CaSR质粒,共转染至PAEC中,再加MCT刺激,从CFP-CaSR转移至YFP-CaSR的能量显着增强。6.单次皮下注射MCT两周后,大鼠肺动脉压力、肺血管阻力、右心肥厚指数及血管壁厚这四个指标均明显升高;而在下调CaSR或敲除CaSR后,与MCT组相比,以上四个指标均显着下降。实验结论MCT能够与CaSR结合,并引起CaSR聚合,从而激活CaSR。CaSR激活引起肺动脉内皮细胞胞浆钙离子浓度升高,导致肺动脉内皮细胞发生凋亡,进而引起肺动脉内皮损伤,最终导致肺动脉高压。
（2）本文研究方法
调查法：该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。
观察法：用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。
实验法：通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。
文献研究法：通过调查文献来获得资料，从而全面的、正确的了解掌握研究方法。
实证研究法：依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。
定性分析法：对研究对象进行“质”的方面的研究，这个方法需要计算的数据较少。
定量分析法：通过具体的数字，使人们对研究对象的认识进一步精确化。
跨学科研究法：运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。
功能分析法：这是社会科学用来分析社会现象的一种方法，从某一功能出发研究多个方面的影响。
模拟法：通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。
细胞外钙论文参考文献
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