赵爱华1张红华2（1广东省佛山市同济医院妇产科528000；2广东省佛山市妇幼保健院妇产科528000）
【中图分类号】R714.22【文献标识码】A【文章编号】1672-5085（2013）16-0113-02
【摘要】目的探讨HOXA-10、雌、孕激素受体在难确诊输卵管异位妊娠诊断中的意义。方法应用免疫组化SP法测定30例正常输卵管组织,30例输卵管异位妊娠输卵管组织HOXA-10、PR、ER的表达。结果HOXA-10在异位妊娠输卵管黏膜上皮中表达最高,在正常增生期和分泌期输卵管黏膜上皮中表达明显下降(P<0.05);输卵管异位妊娠组织雌激素受体表达显著高于孕激素受体表达(P<0.001),与正常输卵管组织相比,输卵管异位妊娠组织雌激素受体表达极显著性增高(P<0.001),但孕激素受体表达无差异(P>0.05)。结论HOXA-10在输卵管黏膜上皮中表达增强，输卵管异位妊娠的发生与局部组织细胞雌激素受体的过度表达有关,雌激素受体的检测有助于难确诊的输卵管异位妊娠的诊断。
【关键词】基因ERPR输卵管异位妊娠
异位妊娠是目前妇产科最常见的急腹症，其中输卵管异位妊娠占95%以上，发病率逐年上升,且越来越年轻化。在早期诊断和治疗过程中，缺乏一种快速、有效、简便、经济的检查方法，尤其在基层医院往往造成误诊和病情延误，形成腹腔大出血，危及患者生命。异位妊娠与女性体内雌激素和孕激素水平有关，同时又与它们的局部应答元件(Responseelement)-雌激素受体(Estrogenreceptor,ER)和孕激素受体(Progesteronereceptor,PR)水平有着密切的关系。本研究采用免疫组化方法研究正常输卵管和异位妊娠输卵管黏膜上皮中HOXA-10和ER、PR的表达,探讨HOXA-10在输卵管妊娠中的作用,以及ER、PR水平在难确诊输卵管异位妊娠诊断中的意义,为难确诊的输卵管异位妊娠的诊断及治疗提供新思路。
1资料与方法
1.1研究对象选取2011年2月至12月两院住院行手术治疗的输卵管妊娠患者30例为实验组。要求无盆腔炎、盆腔手术史及未使用宫内节育器，患者停经<49天，术前未使用甲氨喋呤治疗，且术后病理回报均为输卵管壶腹部妊娠。正常输卵管30例为对照组，取自病理科的输卵管组织蜡块。收集平素月经规律，有正常生育功能，因子宫肌瘤、卵巢囊肿(非功能性卵巢瘤)行手术切除的标本(取壶腹部)，组织学检查输卵管未见异常，通过子宫内膜病理结合月经史，确定月经周期，所取输卵管均处于分泌期。患者术前均未服用过激素类药物及放、化疗治疗。各组患者的停经天数及年龄均无统计学差异。
1.2方法
取材部位为输卵管峡部或壶腹部,标本用10%中性福尔马林固定,采用S-P免疫组化染色方法,操作步骤按试剂说明书进行:石蜡切片常规脱蜡至水,0.3%H2O2室温10min,以消除内源性过氧化物酶活性,PBS(pH7.8)高温高压抗原修复HOXA-10,柠檬酸盐缓冲液(pH6.0)高温高压抗原修复ER和PR,羊血清封闭液室温10min,加一抗(兔抗人HOXA11多克隆抗体,武汉博士德生物工程有限公司,1B50稀释;小鼠抗人ER、PR单克隆抗体工作液,北京中杉金桥生物技术有限公司),4e冰箱过夜,加二抗后,滴加辣根酶标记链霉卵白素工作液,DAB显色、苏木素复染、脱水、透明、封片。用PBS代替一抗作空白对照。
1.3结果判断
HOXA-10以细胞浆出现棕黄色颗粒为阳性;ER、PR以细胞核出现棕黄色颗粒为阳性。根据阳性细胞占同类细胞的百分比分和染色强度的乘积评分:阳性细胞百分比<10%为0分,占10%～25%为1分,占26%～50%为2分,>50%为3分;染色强度为淡黄色为1分,棕黄色为3分,介于两者之间为2分。将二者评分之乘积作为该切片的最终评分,将0分定为阴性(-),1～3分定为弱阳性(+),4～6分定为阳性(++),7～9定为强阳性(+++)。
1.4统计学方法
采用SPSS13.0统计软件进行数据分析和统计学处理,免疫组织化学结果采用Kruskal-WallisTest进行分析,P<0.05表示差异具有统计学意义。
2结果
2.1HOXA-10蛋白的表达主要表达于输卵管黏膜上皮，黏膜间质细胞和输卵管平滑肌也可见少量表达。在异位妊娠输卵管中,HOXA-10的强阳性(+++)表达率最高,在增生期输卵管中明显表达率下降,而在分泌期输卵管中HOXA-10的表达率下降为0(表1);将(++～+++)组合并,经统计学处理可见差异具有显著性意义(表2)。
表1HOXA-10免疫组化染色结果
3讨论
新近研究发现HOXA-10基因在妊娠输卵管中的表达明显增加，提示HOXA-10基因表达增加或表达异常，在输卵管异位妊娠过程中起一定作用[1,2]。目前研究多限于HOXA-10基因在正常宫内妊娠的表达及作用，有关HOXA-10基因在输卵管妊娠异位着床中的表达及意义，国内报道较少。研究推测，HOXA-10基因蛋白表达水平升高，可能是因异位着床前，输卵管的一种异常组织的表达或是受异常胚泡植入的驱动，具体机制有待进一步研究。
作者用免疫组化的方法观察了正常输卵管中ER、PR的表达,结果显示,ER、PR在增生期和分泌期输卵管黏膜上皮中的表达较强。[3]众所周知,ER、PR在子宫内膜腺上皮中的表达呈周期性变化,表现为增生期表达较高,分泌期表达较低,尤其PR,在分泌中期,子宫内膜腺上皮PR表达迅速降低,甚至消失[4]。分泌中期是子宫着床窗开放时期,分泌中期PR在子宫内膜腺上皮的表达下降与子宫内膜形态分化、功能改变密切相关,是子宫容受性建立的前提之一[5,6]。输卵管与子宫皆起源于苗勒氏管,二者着床机制应该有相同之处。本研究发现,ER、PR,尤其PR在正常分泌期输卵管中的表达较强,未呈下降趋势,与分泌期子宫内膜中ER和PR表达水平的变化恰好相反;而在异位妊娠输卵管中ER、PR的表达则显著降低,与分泌中期子宫内膜腺上皮ER、PR表达水平的变化相似,提示ER、PR表达水平的下调在输卵管妊娠中起着重要的作用。
ER、PR都是可溶性糖蛋白,分别能特异性识别雌、孕激素及其衍生物。雌、孕激素进入靶细胞后与靶细胞内的ER、PR以非共价键结合形成复合体,然后与相应靶基因上的顺式应答元件相互作用,在转录水平上调节靶基因的表达,从而实现其重要的生物学效应[7,8]。正常机体内这种调节达到一种动态平衡,靶细胞内ER、PR的表达发生病理性改变可打破这种平衡,导致靶细胞本身或靶细胞作用区域发生病理变化。输卵管异位妊娠是常见的病理妊娠,输卵管一旦破裂可引发内出血而危及生命。本研究发现输卵管异位妊娠时ER阳性率显著高于正常输卵管组织(P<0.001),而PR表达与正常输卵管组织相比无显著性差异(P>0.05),提示输卵管异位妊娠时输卵管粘膜对雌激素反应性明显增强,从而造成局部高雌状态,而局部高雌状态可引起输卵管平滑肌过度收缩,破坏正常输卵管平滑肌运动和纤毛协同作用,影响受精卵的运行。本研究还表明ER水平的检测有助于诊断难确诊的输卵管异位妊娠。在本次研究中，患者病例数较少，随访时间较短，及影响妊娠结果因素较多，今后应行更大样本的观察和随访。
参考文献
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