杨慈海谭忠军（湖北省荆门市食品药品监督检验所湖北荆门448124）
【摘要】目的建立大败毒胶囊中橙皮苷含量的高效液相色谱法。方法采用AgelaVenusilMPC18色谱柱（250mm×4.6mm,5μm），以甲醇-醋酸溶液（每1000mL水中含冰醋酸25mL）（35:65）为流动相，流速为1.0mL/min，检测波长为284nm，柱温30℃。结果橙皮苷进样量在0.0352～1.1264μg（r=0.9999）范围内与峰面积积分值具有良好线性关系，平均加样回收率为98.18%,RSD为0.99%（n=9）。结论该法简便、灵敏、准确可靠，可用于该药的含量测定。
【关键词】高效液相色谱法大败毒胶囊橙皮苷含量
【中图分类号】R927.2【文献标识码】B【文章编号】2095-1752（2013）32-0343-02
大败毒胶囊为《卫生部药品标准中药成方制剂》第十二册收载的品[1]，由大黄、蒲公英、赤芍、陈皮、黄柏等17味中药组成，具有清血败毒、消肿止痛等功效。用于治疗脏腑毒热、血液不清引起的梅毒、血淋、白浊、尿道刺痛、大便秘结、疥疮等症。原标准中无含量测定方法，方中陈皮为主要药味之,其有效成分为橙皮苷，为能有效地控制该药品质量，本试验采用HPLC法测定橙皮苷的含量，效果较好。
1仪器与试药
DIONEXUltiMate3000pump，DIONEXUltiMate3000DiodeArrayDetector液相色谱仪；橙皮苷对照品（中国药品生物制品检定所，批号为110721-200613，供含量测定用，含量100%）；大败毒胶囊（批号121003、130301、130603，内蒙古通辽制药股份有限公司生产）；水为纯化水；甲醇为色谱纯；其他试剂均为分析纯。
2方法与结果
2.1色谱条件
色谱柱：AgelaVenusilMPC18柱（250mm×4.6mm,5μm）；流动相：甲醇-醋酸溶液（每1000mL水中含冰醋酸25mL）（35:65）；检测波长：284nm；流速：1.0mL/min；柱温：30℃；进样量10μL。理论板数按橙皮苷峰计算应不低于3000。
2.2溶液的制备
精密称取橙皮苷对照品17.6mg，置100mL棕色量瓶中，加甲醇适量，超声使溶解，放冷，加甲醇稀释至刻度，摇匀，作对照品贮备液。精密量取储备液10mL，置50mL容量瓶用甲醇稀释至刻度，摇匀，即得每1mL含0.0176mg对照品溶液。取平均装量样品（批号121003）适量，研细，取约1.0g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入甲醇50mL，称定重量，加热回流1h，放冷，再称定重量，用甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液作为供试品溶液。按处方制备工艺制得不含陈皮的阴性样品，按供试品溶液制备方法制成阴性对照品溶液。
2.3方法学考察
专属性试验：分别精密吸取2.2项下3种溶液各10μL，按上述色谱条件进样，记录色谱图，见图1。可见，在对照品溶液色谱主峰处，供试品溶液具有相同保留时间的色谱峰，阴性对照品溶液则无此峰，说明样品中其他成分对橙皮苷的测定无干扰。
A.橙皮苷对照品；B.阴性对照溶液；C.样品1.橙皮苷
图1大败毒胶囊的HPLC图谱
线性关系考察：精密量取对照品溶液（0.0176mg/mL）2、4、8、16、32、64μL，注入高效液相色谱仪，测定峰面积积分值，以进样量为横坐标，以峰面积积分值为纵坐标，绘制标准曲线，得回归曲线方程Y=2.1121X-0.2801，r=0.9999。结果表明橙苷在0.0352～1.1264μg范围内，与峰面积积分值呈良好的线性关系。
精密度试验：精密吸取对照品溶液10μL，连续进样6次，记录色谱图，结果橙皮苷峰面积的RSD为0.65%（n=6），表明仪器精密度良好。
稳定性试验：取同一批供试品溶液，避光放置，分别在0、2、4、6、8、10、16、20、24h时测定。结果橙皮苷峰面积的RSD为0.99%（n=9），表明供试品溶液在避光条件下24h内稳定。
重复性试验：按拟订的含量测定方法，取同一批样品6份，依法测定。结果橙皮苷含量的RSD为1.72%（n=6），表明方法重现性良好。
加样回收试验：取已知含量（1.77mg/g，批号121003）的样品适量，精密称定，每3份为1组，分别用置具塞锥形瓶中，共9份，每组分别精密加入橙皮苷对照储备溶液4.0mL，4.0mL，4.0mL，5.0mL，5.0mL，5.0mL，6.0mL，6.0mL，6.0mL，按供试品溶液制备方法制备溶液并测定含量，计算回收率，平均回收率为98.18%，RSD为0.99%。
2.4样品含量测定按拟订的含量测定方法测定3批样品，以外标法计算含量。结果批号为121003、130301、130603的大败毒胶囊中橙皮苷的含量分别为0.88mg/粒，0.82mg/粒，0.78mg/粒（n=3）。
3讨论
大败毒胶囊是《卫生部药品标准中药成方制剂》第十二册收载的品，标准中只有大黄和黄柏的薄层定性鉴别，没有含量测定，为提高标准，定量控制制剂质量，笔者参阅中国药典[2]及相关资料[3]，选取陈皮中橙皮苷作为指标，采用高效液相色谱法测定制剂中橙皮苷含量，结果较好，并能达到良好的分离效果适宜的保留时间。
参考文献
[1]卫生部药品标准中药成方制剂第十二册WS3-B-2280-97.
[2]国家药典委员会.中华人民共和国药典（一部）[M].北京:中国医药科技出版社,2010:176.
[3]史大军，袁才琼，邱海蕴.高效液相色谱法测定小儿吐泻宁中橙皮苷含量[J].中国药业,2011,20(12):36-37.