导读:本文包含了胞外段蛋白论文开题报告文献综述及选题提纲参考文献，主要关键词:P2X7R,重组蛋白,克隆,融合表达
胞外段蛋白论文文献综述
贾丽娜,彭效祥,李明萱,罗淑萍,张云芳[1]（2019）在《P2X7受体胞外段蛋白的克隆、表达、纯化及鉴定》一文中研究指出目的:克隆嘌呤能离子通道型受体7(P2X7R)胞外段编码序列,体外表达和鉴定重组P2X7R胞外段蛋白。方法:采用德泰生物密码子优化软件MaxCodon~(TM)Optimization Program (V13),对P2X7R胞外段蛋白氨基酸编码序列进行优化并设计PCR扩增引物。采用重迭PCR扩增目标基因,通过限制性酶切位点NdeⅠ和HindⅢ,将P2X7R胞外段编码序列定向插入原核表达载体pET30a(+),构建pET30a-P2X7R重组表达质粒,转化至大肠埃希菌(E.coli)BL21(DE3+)表达菌种中,进行融合表达,诱导剂异丙基-β-D硫代半乳糖苷(IPTG)诱导重组蛋白表达。重组蛋白含6×His纯化标签,亲和层析(Ni-IDA树脂)纯化后,SDS-PAGE凝胶电泳和Western blot鉴定纯化产物。结果:PCR扩增的P2X7R胞外段蛋白编码序列长度为885 bp,成功构建重组pET30a-P2X7R质粒,并转化至E.coli BL21(DE3+)菌株中。融合型表达的重组蛋白分子量约为34 kD,可被抗His标签单克隆抗体特异性识别。结论:成功克隆P2X7R胞外段蛋白编码序列、诱导表达并纯化了重组P2X7R胞外段蛋白,为今后制备抗人P2X7R胞外段蛋白的单克隆抗体奠定了坚实的基础。(本文来源于《中国免疫学杂志》期刊2019年19期）
林燕,李玉品,虎崇康,曾令超,梁世倩[2]（2018）在《小鼠可溶性信号调节蛋白α(SIRPα)胞外段蛋白增强巨噬细胞对L1210白血病细胞的吞噬能力》一文中研究指出目的克隆小鼠信号调节蛋白α(SIRPα)胞外段基因(mSIRPα)并构建其原核表达载体,实现蛋白的可溶性表达后,研究mSIRPα~(ext)在肿瘤免疫调节中的作用。方法利用小鼠淋巴结来源的cDNA扩增mSIRPαext基因,并进一步构建pET32a-SIRPα~(ext)原核表达载体。在实现含有硫氧还蛋白(Trx)标签的重组Trx-mSIRPα~(ext)融合蛋白可溶性表达后,培养小鼠骨髓来源单核细胞并诱导其向巨噬细胞分化,接着将巨噬细胞与羟基荧光素二醋酸盐琥珀酰亚胺脂(CFSE)标记的L1210白血病细胞共培养,在共培养体系中添加Trx-mSIRPα~(ext)蛋白及Trx对照蛋白,通过免疫荧光细胞化学染色和共聚焦显微镜观察重组蛋白在巨噬细胞吞噬肿瘤细胞中的作用。结果获得纯化的可溶性Trx-mSIRPα~(ext)蛋白,利用体外吞噬实验证明该蛋白可增强巨噬细胞对小鼠L1210白血病细胞的吞噬作用。结论原核表达的Trx-mSIRPα~(ext)蛋白可有效提高巨噬细胞对白血病细胞的吞噬作用,从而发挥抗肿瘤免疫治疗效果。(本文来源于《细胞与分子免疫学杂志》期刊2018年12期）
陈艳平[3]（2017）在《人PD-L1胞外段蛋白的诱导表达及分离纯化》一文中研究指出目的人体内PD-1和它的配体PD-L1是T细胞活化过程中一对重要的负性共刺激分子,在诱导T细胞无能和免疫耐受维持方面起着非常重要的作用,并与肿瘤免疫耐受和逃逸相关,PD-L1作为肿瘤免疫治疗的靶点具有重要的理论意义和应用价值,本研究主要是对人PD-L1胞外段蛋白进行体外诱导表达,并将表达的蛋白样品进行分离纯化。结论成功地克隆出人PD-L1胞外区蛋白在大肠杆菌中获得高表达,为噬菌体展示肽库筛选拮抗肽的研究提供了充分的条件。(本文来源于《饮食科学》期刊2017年22期）
谢秋玲,陶悦,张小秦,莫茜,金燕梁[4]（2016）在《人Cosmc胞外段蛋白在昆虫细胞Sf-9中的表达与纯化研究》一文中研究指出目的:利用昆虫细胞Bac-to-Bac杆状病毒表达系统表达人Cosmc胞外段蛋白,为体外研究Cosmc蛋白的结构和功能奠定基础,同时也为O-连接糖基化及相关疾病的研究提供思路。方法:采用Bac-to-Bac系统,构建重组转移质粒p FastBac1-Cosmc extracellular domain(p Fast Bac1-Cosmc ED),转化到含穿梭载体Bacmid的感受态细胞DH10Bac中,通过蓝白斑筛选和PCR鉴定,获得重组转座子r Bacmid-Cosmc ED。在脂质体介导下,重组病毒感染Sf-9无血清细胞,在Sf-9中表达Cosmc胞外段蛋白,由于Cosmc N端加有昆虫细胞信号肽HBM(Honey Bee Melittin)且不含有跨膜段,所以Cosmc胞外段蛋白表达后分泌到培养基上清中,通过SDS-PAGE和Western blot对表达产物进行检测,并通过Ni-NTA亲和层析柱对其进行纯化分析。结果:SDS-PAGE和Western blot分析显示得到一条分子量约为33 k D的特异性条带,与目的蛋白大小相符,质谱结果进一步证明所得蛋白为Cosmc胞外段蛋白。结论:Sf-9细胞中可成功表达Cosmc胞外段蛋白,为进一步研究Cosmc的结构和功能奠定基础。(本文来源于《中国免疫学杂志》期刊2016年10期）
严学倩[5]（2011）在《CD47分子胞外段蛋白的表达及其对Jurkat细胞的作用研究》一文中研究指出恶性肿瘤发生过程中会产生一系列的细胞学和遗传学突变,导致癌基因的激活,抑癌基因的失活。大部分的恶性肿瘤细胞都拥有一些共同的特征,包括很强的增殖活性,组织侵袭性和转移,细胞生长信号通路的失调,持续的血管发生,抑制各种细胞死亡通路等等。近来研究表明,肿瘤细胞能够通过一些特殊的机制逃避免疫系统的清除作用。CD47作为抗吞噬作用的信号分子,在肿瘤的免疫监视中发挥着重要作用,肿瘤细胞可以通过上调CD47的表达抑制吞噬作用。在对于白血病的研究中发现,许多类型白血病细胞及白血病干细胞的CD47表达都高于正常水平。CD47与巨噬细胞上受体信号调节蛋白α(SIRPα)的相互作用传递抑制信号,阻止肿瘤细胞被吞噬细胞清除。而采用抗CD47单克隆抗体阻断这一信号通路后,能够促进巨噬细胞对肿瘤细胞的清除作用,具有治疗意义。目前已在急性髄系白血病,非霍奇金淋巴瘤,急性淋巴细胞白血病中得到了验证,而CD47-SIRPα信号通路作用的深入分子机制还有待进一步研究。肿瘤细胞上的高表达的CD47需要与巨噬细胞上受体SIRPα相结合才能发挥作用,我们通过原核表达系统获得包含结合位点的可溶性CD47胞外段蛋白,发挥“占位”作用,与肿瘤细胞表面的CD47竞争结合SIRPα,从而阻断CD47-SIRPα信号通路,促进巨噬细胞对肿瘤细胞的清除作用。与CD47单克隆抗体有异曲同工之处。我们希望通过这一方法进一步研究CD47在白血病治疗中作用的深入分子机制,对于白血病及其他恶性肿瘤的靶向治疗具有重要意义。为此我们进行了如下工作:1.原核表达可溶性CD47胞外段蛋白。用PCR技术以人淋巴结cDNA为模板扩增出人CD47分子的胞外段,测序正确后将其插入原核表达载体pET32a(+)中,获得表达载体pET32a-hCD47ext。之后将表达载体转化大肠杆菌BL21,用IPTG诱导蛋白表达,优化表达条件,使目的蛋白获得最佳表达,扩大表达后用针对His标签的镍金属螯合柱纯化,蛋白裂解后获得纯的TrxHis-hCD47ext蛋白。用SDS-PAGE及Western blot分析蛋白的表达情况及蛋白大小的正确性。2.可溶性CD47胞外段蛋白TrxHis-hCD47ext与其受体SIRPα的结合。将我们表达的CD47胞外段蛋白添加到培养的巨噬细胞的上清中,用抗His的抗体通过流式细胞仪间接检测结合后细胞表面荧光强度的变化,从而验证TrxHis-hCD47ext是否能够与SIRPα相结合。3. TrxHis-hCD47ext对人急性T淋巴细胞白血病细胞系Jurkat的作用。为了验证可溶性的CD47胞外段蛋白是否能够阻断CD47-SIRPα信号通路,从而促进巨噬细胞对白血病细胞的清除作用,我们采用Dio标记的Jurkat细胞与巨噬细胞共培养的方法,将TrxHis-hCD47ext添加到共培养的上清中,用荧光显微镜观察蛋白作用后巨噬细胞对白血病细胞的吞噬作用的变化,同时验证TrxHis-hCD47ext的活性及功能。结论:1.实现了人CD47胞外段蛋白在原核表达系统中的可溶性表达,获得了纯的TrxHis-hCD47ext蛋白。2.验证了我们所表达的CD47胞外段蛋白能够与巨噬细胞上受体SIRPα很好的结合。3.通过Jurkat细胞与巨噬细胞共培养的方法,验证了TrxHis-hCD47ext蛋白的活性,并证明该蛋白能够促进巨噬细胞对Jurkat细胞吞噬作用。(本文来源于《第四军医大学》期刊2011-04-01）
胞外段蛋白论文开题报告
（1）论文研究背景及目的
此处内容要求：
首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景，再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题，并提出你的论文准备的观点或解决方法。
写法范例：
目的克隆小鼠信号调节蛋白α(SIRPα)胞外段基因(mSIRPα)并构建其原核表达载体,实现蛋白的可溶性表达后,研究mSIRPα~(ext)在肿瘤免疫调节中的作用。方法利用小鼠淋巴结来源的cDNA扩增mSIRPαext基因,并进一步构建pET32a-SIRPα~(ext)原核表达载体。在实现含有硫氧还蛋白(Trx)标签的重组Trx-mSIRPα~(ext)融合蛋白可溶性表达后,培养小鼠骨髓来源单核细胞并诱导其向巨噬细胞分化,接着将巨噬细胞与羟基荧光素二醋酸盐琥珀酰亚胺脂(CFSE)标记的L1210白血病细胞共培养,在共培养体系中添加Trx-mSIRPα~(ext)蛋白及Trx对照蛋白,通过免疫荧光细胞化学染色和共聚焦显微镜观察重组蛋白在巨噬细胞吞噬肿瘤细胞中的作用。结果获得纯化的可溶性Trx-mSIRPα~(ext)蛋白,利用体外吞噬实验证明该蛋白可增强巨噬细胞对小鼠L1210白血病细胞的吞噬作用。结论原核表达的Trx-mSIRPα~(ext)蛋白可有效提高巨噬细胞对白血病细胞的吞噬作用,从而发挥抗肿瘤免疫治疗效果。
（2）本文研究方法
调查法：该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。
观察法：用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。
实验法：通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。
文献研究法：通过调查文献来获得资料，从而全面的、正确的了解掌握研究方法。
实证研究法：依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。
定性分析法：对研究对象进行“质”的方面的研究，这个方法需要计算的数据较少。
定量分析法：通过具体的数字，使人们对研究对象的认识进一步精确化。
跨学科研究法：运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。
功能分析法：这是社会科学用来分析社会现象的一种方法，从某一功能出发研究多个方面的影响。
模拟法：通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。
胞外段蛋白论文参考文献
[1].贾丽娜,彭效祥,李明萱,罗淑萍,张云芳.P2X7受体胞外段蛋白的克隆、表达、纯化及鉴定[J].中国免疫学杂志.2019
[2].林燕,李玉品,虎崇康,曾令超,梁世倩.小鼠可溶性信号调节蛋白α(SIRPα)胞外段蛋白增强巨噬细胞对L1210白血病细胞的吞噬能力[J].细胞与分子免疫学杂志.2018
[3].陈艳平.人PD-L1胞外段蛋白的诱导表达及分离纯化[J].饮食科学.2017
[4].谢秋玲,陶悦,张小秦,莫茜,金燕梁.人Cosmc胞外段蛋白在昆虫细胞Sf-9中的表达与纯化研究[J].中国免疫学杂志.2016
[5].严学倩.CD47分子胞外段蛋白的表达及其对Jurkat细胞的作用研究[D].第四军医大学.2011