导读:本文包含了双价反义表达载体构建论文开题报告文献综述及选题提纲参考文献，主要关键词:中国水仙,LCYE基因,BCH基因,RNAi
双价反义表达载体构建论文文献综述
廖正平[1]（2014）在《LCYE RNAi与反义BCH双价植物表达载体的构建及转化中国水仙的研究》一文中研究指出中国水仙(Narcissus tazetta var.chinensis)隶属石蒜科水仙属,是法国水仙的变种,主要产于福建、浙江、上海等地,其中以漳州水仙最负盛名,是一类极具观赏价值的经济植物。但由于中国水仙为叁倍体,很难自然或人工杂交产生新品种,品种单一、品种退化等问题使中国水仙产业的发展受到很大限制。因此,开展中国水仙品种改良具有重大意义。随着分子生物学的兴起,植物基因工程技术成为中国水仙品种改良的新手段。本研究从漳州水仙花瓣中分离得到花色相关基因LCYE保守区片段,以pCAM1301-antiBCH植物表达载体为基础,构建了LCYE RNAi及反义BCH双价植物表达载体,并在优化中国水仙遗传转化体系的基础上,将其转入中国水仙,获得抗性植株,并进行了分子验证,为开发中国水仙新种质和花色改良提供技术基础和理论参考。主要研究内容及得到的结果如下：1.以中国水仙花葶为外植体,用载体pCAM1301-LCYB转化中国水仙并对预培养时间、筛选方式及共培养基激素组合等因素进行了优化,结果表明：预培养3d,共培养基中激素组合为BA+2,4-D且延迟5d筛选的方式能提高转化效率；2.提取漳州水仙花瓣的RNA,反转录为cDNA,并以此为模板,根据已发表的LCYE基因全长序列设计引物扩增出423bp的LCYE保守片段,并利用pKANNEL质粒及pBI121质粒,以pCAM1301-antiBCH植物表达载体为基础,构建了LCYERNAi及反义BCH双价植物表达载体pCKB-antiBCH-LCYE RNAi;3.以优化了的遗传转化体系为基础,将构建好的pCKB-antiBCH-LCYE RNAi双价植物表达载体转入中国水仙。漳州水仙花葶经预培养3d后,将其浸入含有pCKB-antiBCH-LCYE RNAi质粒的农杆菌中侵染10min,然后在共培养基(MS+2mg·L-1BA+0.5mg·L-12,4-D+100μm·L-1AS+3%蔗糖+0.7%琼脂糖)中暗培养3d,共培养后将外植体转移到不添加选择抗生素的筛选培养基上延迟培养5d后再接入筛选培养基中进行筛选培养得到抗性芽。4.对抗性芽进行了quantitative real-time PCR检测,证明得到了转基因植株并初步研究了导入目的基因的表达。(本文来源于《福建农林大学》期刊2014-03-01）
廖正平,郑益平,罗鹏,吴雪琴,曾黎辉[2]（2013）在《中国水仙NtBCH基因的克隆及LCYE RNAi与反义BCH双价植物表达载体的构建》一文中研究指出参考洋水仙BCH基因设计引物,以中国水仙花瓣cDNA为模板克隆出中国水仙NtBCH基因,全长959 bp,编码303个氨基酸。以中国水仙LCYE和BCH为目的基因,利用pKANNBIAL、pBI121和pCAMBIA1301等载体构建了LCYE RNAi与反义BCH双价植物表达载体,为利用基因工程技术改良中国水仙奠定了基础。(本文来源于《热带作物学报》期刊2013年12期）
申艳红,陈晓静,何玮毅[3]（2010）在《番木瓜PL和β-Gal基因双价反义表达载体的构建》一文中研究指出在已报道的番木瓜果胶裂解酶(PL)和β-半乳糖苷酶(β-Gal)基因序列的基础上,设计特异引物,分别扩增保守区序列,将其分别反向插入植物表达载体pCAMB IA1301-35S-GUS-Nos的CaMV35S启动子和Nos终止子之间,构建反义表达载体pCP和pCG.然后用2种不同的方法将带有完整启动子和终止子的PL和-βGal基因引入pCAMB IA2301中,获得PL和β-Gal基因的双价植物反义表达载体pCPG,并对2种方法进行比较.(本文来源于《福建农林大学学报(自然科学版)》期刊2010年02期）
肖琼,郭运玲,孔华,贺立卡,郭安平[4]（2009）在《木薯淀粉分支酶基因双价块根特异性反义表达载体的构建》一文中研究指出淀粉分支酶(starch branching enzyme,SBE)是高等植物淀粉生物合成的关键酶之一,包括分支酶I(SBEI)和分支酶II(SBEII)两种类型,调控着支链淀粉的合成。利用DNA重组技术,将这两种分支酶反义基因片段构建在一个植物表达载体中,形成双价反义表达载体p1301-SBEII-Spo-SBEI,其中SBEII反义基因置于CaMV35S启动子之后,SBEI反义基因置于块根特异型启动子Sporamin之后,两者具有各自的Nos终止子。通过反复冻融法,将双价表达载体转入农杆菌EHA105,并采用PCR技术对所构建的农杆菌工程菌株进行了鉴定分析。(本文来源于《热带作物学报》期刊2009年05期）
王智博[5]（2008）在《构建反义双价TuMV-Nib和LFY基因植物表达载体转春大白菜研究》一文中研究指出大白菜虽是原产我国的重要蔬菜作物,但春大白菜育种国内起步较晚,生产上大多使用从日本、韩国进口的种子。虽有一定的耐抽薹,但不抗病毒病。在大白菜生产中,先期抽薹和后期病毒病重已经成为亟待解决的问题。采用常规育种方法培育耐抽薹、抗病毒大白菜品种年限长、效率低。因此,结合常规育种方法,采用基因工程技术克隆相关基因,控制植物的开花和病毒的复制,创新大白菜抗病毒、耐抽薹种质材料,进而育成具有自主知识产权的商品性好、抗病毒病、冬性较强不易抽薹的春大白菜育种材料和品种,打破国内春大白菜种子依靠进口的局面,均具有重要经济价值和现实意义。本研究以中国春大白菜为材料,在采用RT-PCR技术克隆的TuMV-NIb、LFY基因的基础上,构建成反义双价基因的植物表达载体,利用TuMV-NIb基因的目的是抵抗芜菁花叶病毒,LFY基因的目的是延迟植物的开花时间。通过遗传转化研究,建立了大白菜遗传转化系统,为利用TuMV-NIb与LFY双价基因,抵抗大白菜芜菁花叶病毒和抑制抽薹奠定基础,培育抗病毒和耐抽薹春大白菜新种质。并获得了转TuMV-NIb、LFY基因的阳性植株。主要研究结果如下:1.近几年来,TuMV不同株系的核苷酸序列得到测定。病毒复制相关蛋白基因转入烟草发现,对TuMV有极强的抗性。LFY基因处于成花相关基因调控网络的关键位置,属于开花决定基因。通过基因工程手段控制花发育或开花时间基因的表达,可改变受体植物的花期,直接控制作物生育期。利用克隆的TuMV-NIb、LFY基因,通过酶切、连接、转化,重组质粒的PCR扩增、酶切鉴定,构建成双价反义基因的植物表达载体;采用冻融法转化农杆菌LBA4404,获得了工程菌株。2.研究了基因型、激素配比等影响大白菜再生的限制因素,确定了以“青3福山”大白菜带柄子叶为外植体的分化培养基为:MS+6-BA2mg/L+NAA0.5mg/L+TDZ0.1mg/L+AgNO_3 4mg/L;在25℃,16/8hr(光/暗)下培养,不定芽的分化频率均在85%以上3.完善了农杆菌介导的大白菜叶盘法遗传转化体系,确定了菌液浸染浓度为6.0,浸染5min;卡那霉素适宜筛选压力为10mg/L。获得的转化条件是:带柄子叶外植体预培养2-3d,农杆菌浸染外植体5min;共培养时间为2～3d,经过7～10d恢复培养,4～6周的选择培养后转到生根培养基上生根。最终在“青3福山”大白菜上获得了5株抗性植株,得到经PCR检测阳性株转化率为3.3‰。(本文来源于《吉林农业大学》期刊2008-06-01）
薛萍[6]（2003）在《反义pBI121-NR-LEACS2双价表达载体的构建及其向番茄的转化》一文中研究指出乙烯作为影响果实采后生理的重要因子，同时又是控制果实成熟衰老的关键所在，所以一直是人们采后研究的一项重要内容。近年来，在模式植物拟南芥中乙烯感受和信号转导的研究取得了很大的进展。但在果蔬成熟衰老研究的模式材料番茄中乙烯受体及信号转导的研究还不够深入。到目前为止，已从番茄中分离到六个乙烯受体基因，即ETR1的同源物LeETR1-6，但其功能还远远没有被认识。利用分离到的番茄乙烯受体基因，参考拟南芥乙烯信号转导模式，搞清楚番茄乙烯受体基因的功能，已成为我们研究的重点。在六个番茄乙烯受体基因中，NR(LeETR3)是比较特殊的一个。其表达受果实发育严格调控，并表现出与跃变型果实乙烯生物合成变化趋势完全一致。从NR基因的表达时机判断，它很可能是启动系统Ⅱ乙烯的关键因子。 本文构建了反义pBl121-NR-LEACS2双价植物表达载体并通过农杆菌介导法将其导入番茄，研本究将有助于搞清NR蛋白的功能及其对乙烯生物合成的反馈调控机制，也有助于丰富乙烯理论及果实成熟衰老机制。本研究取得的主要结果如下： (1) pBI121-NR用EcoRⅠ和HindⅢ双酶切后获得35S-NR(反向)-nos小片段，将其连接到pGreen0029载体上，构建了第一个中间载体pGreen0029-NR (2) pGreen0029-NR用BamHⅠ和HindⅢ双酶切后获得35S-NR(反向)-nos小片段，将其连接到pLP100载体上，构建了第二个中间载体pLP100-NR (3) pLP100-NR用EcoRⅠ单酶切获得35S-NR(反向)-nos小片段，pBI121-LEACS2用EcoRⅠ单酶切获得大片段，二者连接后获得反义pBI121-NR-LEACS2双价植物表达载体 (4) 采用冻融法将反义pBI121-NR-LEACS2双价植物表达载体转入土壤农杆菌EHA105 (5) 利用农杆菌介导法将反义pBI121-NR-LEACS2双价植物表达载体转入中蔬4号番茄品种，经过PCR检测共获得7株PCR阳性植株(本文来源于《中国农业大学》期刊2003-06-01）
双价反义表达载体构建论文开题报告
（1）论文研究背景及目的
此处内容要求：
首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景，再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题，并提出你的论文准备的观点或解决方法。
写法范例：
参考洋水仙BCH基因设计引物,以中国水仙花瓣cDNA为模板克隆出中国水仙NtBCH基因,全长959 bp,编码303个氨基酸。以中国水仙LCYE和BCH为目的基因,利用pKANNBIAL、pBI121和pCAMBIA1301等载体构建了LCYE RNAi与反义BCH双价植物表达载体,为利用基因工程技术改良中国水仙奠定了基础。
（2）本文研究方法
调查法：该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。
观察法：用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。
实验法：通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。
文献研究法：通过调查文献来获得资料，从而全面的、正确的了解掌握研究方法。
实证研究法：依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。
定性分析法：对研究对象进行“质”的方面的研究，这个方法需要计算的数据较少。
定量分析法：通过具体的数字，使人们对研究对象的认识进一步精确化。
跨学科研究法：运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。
功能分析法：这是社会科学用来分析社会现象的一种方法，从某一功能出发研究多个方面的影响。
模拟法：通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。
双价反义表达载体构建论文参考文献
[1].廖正平.LCYERNAi与反义BCH双价植物表达载体的构建及转化中国水仙的研究[D].福建农林大学.2014
[2].廖正平,郑益平,罗鹏,吴雪琴,曾黎辉.中国水仙NtBCH基因的克隆及LCYERNAi与反义BCH双价植物表达载体的构建[J].热带作物学报.2013
[3].申艳红,陈晓静,何玮毅.番木瓜PL和β-Gal基因双价反义表达载体的构建[J].福建农林大学学报(自然科学版).2010
[4].肖琼,郭运玲,孔华,贺立卡,郭安平.木薯淀粉分支酶基因双价块根特异性反义表达载体的构建[J].热带作物学报.2009
[5].王智博.构建反义双价TuMV-Nib和LFY基因植物表达载体转春大白菜研究[D].吉林农业大学.2008
[6].薛萍.反义pBI121-NR-LEACS2双价表达载体的构建及其向番茄的转化[D].中国农业大学.2003