导读:本文包含了四价抗体论文开题报告文献综述及选题提纲参考文献，主要关键词:TfR,四价抗体,ADCC,抗体亲和力
四价抗体论文文献综述
孙媛丽,符明鹏,郭子龙,朱慧芬,雷萍[1]（2017）在《抗TfR四价抗体的构建表达及其体外生物学效应研究》一文中研究指出背景及目的:转铁蛋白受体(transferrin receptor,TfR)属于细胞膜Ⅱ型跨膜糖蛋白,与细胞铁摄取有关,影响细胞的生长和增殖。文件报道及课题组前期研究表明,TfR在正常组织细胞中表达较低,在肿瘤细胞表面稳定高表达,其表达水平与肿瘤的分期和预后密切相关。因此,TfR作为肿瘤靶向显像和治疗的重要特异(本文来源于《第十二届全国免疫学学术大会分会场交流报告集》期刊2017-10-26）
陈锦荣,Patel,M[2]（2015）在《脑膜炎四价结合疫苗接种后C群抗体应答的持久性》一文中研究指出C群脑膜炎球菌(Men C)病在美国占到所有脑膜炎球菌病的叁分之一,常引起脑膜炎球菌病的暴发。其与白喉类毒素相结合的四价结合苗(Men ACYWD)2005年被推荐用于青年人和部队新兵这样的高危人群。作者评估了Men ACYWD或脑膜炎球菌多糖疫苗(MPSV4)接种的美国部队人员中抗Men C抗体的持久性。从国防医学监测系统中随机地选用了1 200名2006年到2008年间的Men ACY-(本文来源于《微生物学免疫学进展》期刊2015年06期）
贾明[3]（2015）在《抗人CD19单链抗体二价及四价多聚体的改建及功能研究》一文中研究指出研究背景及目的：据报道,我国每年新发生的小儿恶性肿瘤达3万例,其中1/3为白血病。特别是急性白血病已成为威胁儿童生命健康的第一位恶性肿瘤。随着诊疗水平的提高及治疗方案改进,目前中国儿童急性淋巴细胞白血病(ALL)完全缓解(CR)率已达95%以上,5年生存率已提高到80%以上¨。但白血病耐药和复发情况仍是目前影响白血病患者预后的重要原因。从分子和基因水平寻找新的作用靶点,在此基础上设计特异的靶向药物,这将为ALL的个体化治疗提供独特手段。肿瘤靶向治疗是定向对靶细胞进行特异性杀伤。通过与靶细胞表面特异性分子标志结合而直接作用于靶细胞,从而不影响正常组织细胞的功能。其中以抗体的靶向治疗研究得最为深入。CD19是继CD20之后B细胞恶性肿瘤免疫治疗引人瞩目的另一个分子靶点,因为它只在正常或恶性B淋巴细胞表面表达,几乎不在其他组织表达；且在B细胞恶性转化过程中不丢失。其特异性和稳定性使其作为一个理想的靶点受人关注。我院自主研制的ZCH-4-2E8(抗人CD19)抗体为鼠源的IgM抗体,前期研究显示其可靶向B系白血病细胞。本实验室在亲本2E8抗体的基础上已成功构建人鼠嵌合单链抗体scFv2E8-Fc。功能试验显示,改造后的scFv2E8-Fc抗体与亲本2E8抗体相比,与抗原结合的亲和力明显降低。国外研究表明,抗体多价化后由于其抗原结合位点的增多和分子量的增大,其亲和力较单价抗体会有明显提高。因此,本研究在前期研究的基础上,通过基因工程技术构建抗人CD19的二价及四价抗体,并进行后续的体外及体内功能试验研究。本研究主要由以下几个部分组成：1、构建抗人CD19的二价及四价抗体真核表达载体。2、二价及四价多聚体蛋白在真核细胞中华仓鼠卵巢(Chinese Hamster Ovary, CHO)细胞中的表达及体外功能研究。3、建立血液系统恶性肿瘤动物模型,检测多价抗体的体内治疗作用。方法：1单链抗体scFv2E8及其双价抗体diascFv2E8真核表达载体的构建1.1单链抗体pcDNA3.1/scFv2E8真核表达载体的构建以能够持续分泌scFv2E8-Fc融合蛋白并已成功建株的pcDNA3.1-scFv2E8-FcCHO细胞作为目的细胞,采用RT-PCR法钓取细胞中scFv2E8目的基因,克隆至pcDNA3.1质粒中,构建单链抗体pcDNA3.1/scFv2E8真核表达载体。1.2 pcDNA3.1/Fc-6×his真核表达载体的构建以本实验室前期已成功构建的pcDNA3.1/Fc质粒为模板,针对Fc基因片段设计引物进行PCR,通过引物在Fc段下游引入6xhis标签,并在基因序列的5’和3’端分别引入EcoR I和Xba I酶切位点。构建中间载体pcDNA3.1/Fc-6xhis.1.3双价抗体pcDNA3.1/diascFv2E8真核表达载体的构建以pcDNA3.1/scFv2E8质粒作为模板,设计引物,通过SOE-PCR的方法扩增"VH2E8-linker5-VL2E8"目的基因片段,将VH2E8与VL2Es之间的连接肽(linker)缩短为五个氨基酸的G4S,并且在VL2E8基因的末端引入6xhis标签和终止子TAG,并将其克隆至pcDNA3.1载体,构建双价抗体真核表达载体pcDNA3.1/diascFv2E8.2 pcDNA3.1/diascFv2E8-Fc和pcDNA3.1/scFv2E8-P53两种四价多聚体真核表达载体的构建2.1 四价抗体pcDNA3.1/diascFv2E8-Fc真核表达载体的构建将二价抗体真核表达载体pcDNA3.1/diascFv2E8相应酶切位点之间的基因片段VH2E8-linker5-VL2E8平行克隆至中间载体pcDNA3.1/Fc-6xhis上,通过两个Fc段之间的二硫键的偶联,构建四价抗体的真核表达载体pcDNA3.1/diascFv2E8-Fc.2.2四价抗体Miniantibody pcDNA3.1/scFv2E8-P53真核表达载体的构建以pcDNA3.1/scFv2E8质粒为模板,设计引物扩增scFv2E8基因片段,并在其两端引入Hind Ⅲ和BamH I酶切位点。全基因合成P53-hinge-hisx6片段,通过一段连接肽(人IgG3上游铰链区)将其与单链scFv2E8基因片段相连。通过P53四聚化结构域指导scFv2E8蛋白自动组装为四聚体,构建四价抗体真核表达载体Miniantibody pcDNA3.1/scFv2E8-P53.3二价diascFv2E8和四价diascFv2E8-Fc及scFv2E8-P53多聚体蛋白的表达和功能测定3.1二价diascFv2E8和四价diascFv2E8-Fc及scFv2E8-P53多聚体蛋白的真核细胞表达抽提转染级质粒pcDNA3.1/diascFv2E8、pcDNA3.1/diascFv2E8-Fc和pcDNA3.1/scFv2E8-P53,转染真核细胞CHO。转染后G418持续加压筛选,流式细胞术鉴定各转染细胞培养上清中是否存在有活性的二价及四价重组蛋白。通过有限稀释法亚克隆相应阳性细胞株,收集其上清中的蛋白。通过Millipore超滤管20：1超滤浓缩收集上清,Ni-IDA亲和层析法纯化带有6xhis标签的重组蛋白。改良Marshall法制备2E8-FITC直标抗体。3.2二价diascFv2E8和四价diascFv2E8-Fc、scFv2E8-P53多聚体蛋白的功能研究利用上述浓缩纯化的二价及四价重组蛋白进行如下功能研究：BCA法测定重组蛋白的浓度；流式细胞术检测叁种重组蛋白diascFv2E8、diascFv2E8-Fc和scFv2E8-P53的滴定实验；流式细胞术检测叁种重组蛋白diascFv2E8、diascFv2E8-Fc和scFv2E8-P53对2E8-FITC直标抗体的阻滞作用；RT-PCR检测CHO/diascFv2E8、 CHO/diascFv2E8-Fc和CHO/scFv2E8-P53细胞中的目的基因的表达；细胞免疫荧光法鉴定重组蛋白diascFv2E8、diascFv2E8-Fc和scFv2E8-P53;竞争性结合实验鉴定四种抗体scFv2E8、diascFv2E8、diascFv2E8-Fc和scFv2E8-P53的相对亲和力；流式细胞术检测四种抗体scFv2E8、diascFv2E8、diascFv2E8-Fc和scFv2E8-P53的内化特性；四种抗体scFv2E8、diascFv2E8、diascFv2E8-Fc和scFv2E8-P53的解离率实验；scFv2E8、diascFv2E8、diascFv2E8-Fc和scFv2E8-P53抗体诱导的凋亡作用；比较人鼠嵌合抗体scFv2E8-Fc和四价抗体diascFv2E8-Fc的.ADCC、CDC作用；SDS-PAGE和Western-Blot检测细胞培养上清中重组蛋白的表达。4多价抗体的血液系统肿瘤动物模型体内治疗作用研究通过对重症联合免疫缺陷小鼠(NOD/SCID小鼠)的尾静脉注射Raji细胞,建立伯基特淋巴瘤动物模型。小鼠随机分组进行治疗,共分为6组：PBS空白对照组、造模组、scFv2E8抗体治疗组、diascFv2E8抗体治疗组、diascFv2E8-Fc抗体治疗组和scFv2E8-P53抗体治疗组。上述各抗体治疗组分别于Raji细胞注射一周后,通过尾静脉注射各纯化的抗体50μg/只,连续3天。密切观察小鼠的状况,定期测量小鼠体重,以后肢瘫痪为发病标准。记录发病及死亡日期,绘制生存曲线。颈椎脱臼法处死濒死小鼠,取各脏器做石蜡包埋切片,行HE染色和免疫组化检查。结果：1单链抗体scFv2E8及其双价抗体diascFv2E8真核表达载体成功构建1.1单链抗体pcDNA3.1/scFv2E8真核表达载体成功构建以pcDNA3.1-scFv2E8-Fc CHO细胞作为模板,RT-PCR成功扩增scFv2E8目的基因,切胶回收目的基因产物TA克隆至pGEM(?)-T easy载体,将pGEM-T/scFv2E8载体上的目的基因片段采用EcoR I和BamH I双酶切平行克隆至pcDNA3.1载体,测序证实pcDNA3.1/scFv2E8质粒构建成功。1.2 pcDNA3.1/Fc-6xhis真核表达载体成功构建通过PCR成功扩增目的基因片段Fc-6xhis,切胶纯化回收后TA克隆至pGEM(?)-T easy载体,将pGEM-T/Fc-6×his载体上的目的基因片段采用EcoR I和Xba I双酶切平行克隆至pcDNA3.1载体,测序证实pcDNA3.1/Fc-6×his中间载体构建成功。1.3双价抗体pcDNA3.1/diascFv2E8真核表达载体成功构建SOE-PCR成功扩增目的基因片段VH2E8-linker5-VL2E8 (810bp),切胶回收目的基因产物TA克隆至pGEM(?)-T easy载体,将pGEM-T/VH2E8-linker5-VL2E8载体上的目的基因片段采用BamH I和EcoR I双酶切平行克隆至pcDNA3.1载体,测序证实pcDNA3.1/diascFv2E8载体构建成功。2 pcDNA3.1/diascFv2E8-Fc和pcDNA3.1/scFv2E8-P53两种四价抗体真核表达载体成功构建2.1 四价抗体pcDNA3.1/diascFv2E8-Fc真核表达载体成功构建分别用BamHI和EcoR I对pcDNA3.1/diascFv2E8和pcDNA3.1/Fc-6xhis质粒进行双酶切,切胶回收目的基因片段diascFv2E8和载体pcDNA3.1/Fc-6xhis,两者按3：1摩尔比成功连接,测序证实pcDNA3.1/diascFv2E8-Fc质粒构建成功。2.2四价抗体Miniantibody pcDNA3.1/scFv2E8-P53真核表达载体成功构建PCR成功扩增scFv2E8基因片段,切胶回收目的基因产物TA克隆至pGEM(?)-T easy载体。全基因合成P53-hinge-his×6基因片段(213bp),成功构建pcDNA3.1/P53-hinge-his×6质粒。将pGEM-T/Hind III-scFv2E8-BamH I载体上的单链scFv2E8基因平行克隆至pcDNA3.1/P53-hinge-hisx6载体。测序证实Miniantibody pcDNA3.1/scFv2E8-P53质粒构建成功。3二价diascFv2E8和四价diascFv2E8-Fc及scFv2E8-P53多聚体蛋白的成功表达及功能测定3.1 二价diascFv2E8和四价diascFv2E8-Fc及scFv2E8-P53多聚体蛋白在真核细胞CHO中成功表达pcDNA3.1/diascFv2E8, pcDNA3.1/diascFv2E8-Fc和pcDNA3.1/scFv2E8-P53转染级质粒抽提成功。上述质粒转染CHO细胞后,以6418 600μg/ml加压稳定转染。流式检测发现转染细胞CHO/diascFv2E8、CHO/diascFv2E8-Fc和CHO/scFv2E8-P53的培养上清中均存在有活性的能识别Raji细胞上CD19抗原的重组多聚体蛋白。经过3次亚克隆后,转染细胞CHO/diascFv2E8、CHO/diascFv2E8-Fc和CHO/scFv2E8-P53均已成功建株。收集上清中相应蛋白并已浓缩纯化。改良Marshall法成功制备2E8-FITC直标抗体。3.2二价diascFv2E8和四价diascFv2E8-Fc、scFv2E8-P53多聚体蛋白的功能研究BCA法测重组蛋白diascFv2E8、diascFv2E8-Fc 和 scFv2E8-P53浓度分别为0.210mg/ml、0.231mg/ml和0.177mg/ml;滴定实验显示,饱和lx106Raji细胞分别需要diascFv2E8、diascFv2E8-Fc、scFv2E8-P53和2E8-FITC抗体的量为2.1μg、 1.5μg、2.0μg和1.5μg；阻滞实验发现,多价抗体对亲本2E8的阻滞作用均优于单价抗体,且四价抗体diascFv2E8-Fc效果最佳；RT-PCR检测发现各目的基因已成功转染至CHO真核细胞；细胞免疫荧光法检测发现转染细胞CHO/diascFv2E8、 CHO/diascFv2E8-Fc和CHO/scFv2E8-P53胞浆内均可见清晰的绿色荧光,说明上述叁种转染细胞均已成功表达融合蛋白；通过竞争结合实验计算scFv2E8、 diascFv2E8、scFv2E8-P53和diascFv2E8-Fc蛋白的相对亲和力常数为：1×1010M-1、 4×1010M-1、1.6×1011M-1和4×1011M-1；内化实验显示,二价抗体diascFv2E8较单价抗体scFv2E8内化快。但两种四价抗体diascFv2E8-Fc和scFv2E8-P53蛋白内化率与单价scFv2E8相比没有明显差异；解离率实验显示四价抗体的解离速率明显低于双价及单价抗体；凋亡实验显示：四价抗体diascFv2E8-Fc诱导的凋亡作用最强,优于二价抗体diascFv2E8,单价scFv2E8抗体几乎没有促凋亡的作用；四价抗体diascFv2E8-Fc的ADCC作用强于scFv2E8-Fc抗体；在抗体高浓度时(50μg/ml, 25μg/ml),四价抗体diascFv2E8-Fc的CDC作用强于scFv2E8-Fc抗体；SDS-PAGE和Western Blot结果显示,diascFv2E8、diascFv2E8-Fc和scFv2E8-P53蛋白产物均以混合体的形式存在。4多价抗体的血液系统肿瘤动物模型体内治疗作用研究伯基特淋巴瘤动物模型建立成功；发病小鼠出现体重下降,后肢瘫痪,并伴有脊柱侧弯、弓背、呈恶病质；HE染色和免疫组化(抗人CD19抗体标记)检测结果显示,发病小鼠脑膜均有肿瘤细胞浸润,免疫组化染色可见褐黄色肿瘤细胞浸润脑膜；生存分析显示,各组间的生存时间差异具有统计学意义(p<0.05)。四价抗体在体内治疗作用优于二价及单价抗体,尤以四价抗体diascFv2E8-Fc的体内治疗效果最好。结论：1、二价抗体pcDNA3.1/diascFv2E8及两种四价抗体pcDNA3.1/diascFv2E8-Fc和pcDNA3.1/scFv2E8-P53真核表达载体构建成功。2、二价diascFv2E8和四价diascFv2E8-Fc及scFv2E8-P53多聚体蛋白在真核细胞CHO中成功表达。这些多价抗体都能够识别表达CD19抗原分子的Raji细胞。3、体外功能试验显示：四价抗体的亲和力显着优于二价及单价抗体,尤以四价抗体diascFv2E8-Fc的亲和力最强；四价抗体的解离速率明显低于双价及单价抗体,半衰期延长,可以在体内更好地发挥作用；多价抗体能引起明显的诱导肿瘤细胞凋亡的作用；四价抗体diascFv2E8-Fc的ADCC和CDC作用强于人鼠嵌合单链抗体scFv2E8-Fc,提示多价抗体可以通过CDC、ADCC作用和诱导肿瘤细胞凋亡更好地靶向杀伤肿瘤细胞。4、伯基特淋巴瘤动物模型建立成功；体内功能试验显示,四价抗体在小鼠体内治疗作用优于二价及单价抗体,尤以四价抗体diascFv2E8-Fc的体内治疗效果最好。(本文来源于《浙江大学》期刊2015-12-01）
张萍萍,邓捷,张小刚,孙哲,朱涛[4]（2015）在《四价脑膜炎球菌多糖单克隆抗体的制备及其应用》一文中研究指出目的制备四价脑膜炎球菌多糖的单克隆抗体,并将其应用于速率散射比浊试验。方法分别用A、C、W135、Y群脑膜炎球菌多糖(meningococcal polysaccharides of group A,C,W135 and Y,分别简写为GAMP、GCMP、GWMP、GYMP)与白喉毒素无毒变异体CRM197结合物(GAMP-CRM197、GCMP-CRM197、GWMP-CRM197、GYMP-CRM197)免疫BALB/c小鼠,取脾细胞与骨髓瘤细胞SP2/0融合,采用间接ELISA法筛选杂交瘤细胞株,对阳性细胞株进行特异性检测及纯化抗体效价检测。每种血清群选1株单抗,用于速率散射比浊试验定标。结果分别获得稳定分泌抗GAMP、GCMP、GWMP、GYMP细胞株20、18、9和13株,其中抗GAMP特异性单抗5株,抗GCMP特异性单抗5株,抗GWMP特异性单抗3株,抗GYMP特异性单抗5株,均与CRM197及其他3个血清群多糖无交叉反应。抗GAMP纯化抗体效价均>1∶4 000 000,抗GCMP纯化抗体效价均>1∶200 000,抗GWMP纯化抗体效价均可达1∶40 000,抗GYMP纯化抗体效价均可达1∶40 000。抗GAMP单抗6B7和抗GCMP单抗2H4在标准品浓度2~10μg/ml范围内,可用于速率散射比浊试验定标,R2分别为0.990 9和0.991 9;抗GWMP单抗5F1在标准品浓度4.33~21.7μg/ml范围内,可用于速率散射比浊试验定标,R2为0.851 8;抗GYMP单抗7C6在标准品浓度1~8μg/ml范围内,可用于速率散射比浊试验定标,R2为0.998 7。结论成功制备了四价脑膜炎球菌多糖特异性单抗,并应用于速率散射比浊试验。(本文来源于《中国生物制品学杂志》期刊2015年03期）
朱涛,邓捷,邓新,邵忠琦,毛慧华[5]（2015）在《四价脑膜炎球菌多糖疫苗中结合物多糖抗原含量双抗体夹心ELISA检测方法的建立及验证》一文中研究指出目的建立一种检测A、C、W135和Y群四价脑膜炎球菌多糖疫苗中各血清群多糖蛋白结合物的双抗体夹心定量ELISA检测方法,并进行验证。方法以白喉类毒素无毒变异体(CRM197)特异性单抗为包被抗体,HRP标记的脑膜炎球菌A、C、W135和Y群多糖特异性单抗为捕获抗体,建立可定量检测脑膜炎球菌各血清群结合物多糖含量的双抗体夹心ELISA法,确定方法的最佳线性范围和检测限,并对方法的特异性、准确性和重复性进行验证。结果定量检测A群脑膜炎球菌结合物(GAMP-CRM197)多糖抗原含量的双抗体夹心ELISA法的线性范围为3.75~120 ng/ml,检测限为3.75 ng/ml;定量检测C群脑膜炎球菌结合物(GCMP-CRM197)多糖抗原含量的双抗体夹心ELISA法的线性范围为1.875~30 ng/ml,检测限为0.938 ng/ml;定量检测W135群脑膜炎球菌结合物(GWMPCRM197)多糖抗原含量的双抗体夹心ELISA法的线性范围为7.5~240 ng/ml,检测限为7.5 ng/ml;定量检测Y群脑膜炎球菌结合物(GYMP-CRM197)多糖抗原含量的双抗体夹心ELISA法的线性范围为1.875~60 ng/ml,检测限为0.938 ng/ml。A、C、W135、Y群双抗体夹心ELISA法均能特异性地检测相应的结合物多糖抗原含量,而不与其他群的结合物多糖抗原发生交叉反应;A、C、W135、Y群双抗体夹心ELISA法的回收率均在80%~120%之间,检测相应的结合抗原样品时,变异系数(CV)均小于15%。结论建立的双抗体夹心ELISA法特异性较强,准确性较高,重复性良好,可用于四价脑膜炎球菌多糖疫苗中各血清群结合物多糖抗原的定量检测。(本文来源于《中国生物制品学杂志》期刊2015年02期）
马玲,邵帅,潘汉世,陈凤莲,黄红梅[6]（2013）在《重组嵌合抗人CD22四价基因工程抗体在昆虫杆状病毒中的表达》一文中研究指出重组嵌合抗人CD22四价基因工程抗体是由一条短肽链将两个鼠源抗CD22mAb的scFv连接起来,再与人IgG1的CH3片段连接所获得重组基因工程抗体(cRFB4-CH3),是目前开发治疗B细胞系淋巴瘤的人源化基因工程抗体。为探讨该重组基因工程抗体高效表达技术,本研究利用DNA重组技术将含有人IgG1的CH3段的抗人CD22四价基因工程抗体基因克隆到含信号肽的重组杆状病毒载体pAcSG2中,构建重组质粒pAcSG2-cRFB4-CH3并转染到Sf9细胞中,构建携带有重组嵌合抗人CD22四价基因工程抗体基因的重组杆状病毒AcNPV-cRFB4-CH3。通过对该重组毒进行PCR和IFA鉴定,证实获得了可以稳定表达抗人CD22四价基因工程抗体的重组杆状病毒。以蚀斑试验进一步纯化病毒,经过3次病毒蚀斑克隆,获得毒价达到4.5×107pfu/mL重组病毒,为治疗白血病药物的开发和应用打下了基础。(本文来源于《基因组学与应用生物学》期刊2013年03期）
石胜,钟华,马玲,农江,白安斌[7]（2012）在《重组嵌合抗人CD22四价基因工程抗体在毕赤酵母中的表达及活性检测》一文中研究指出目的:采用酵母多拷贝分泌表达载体pPIC9K表达重组嵌合抗人CD22四价基因工程抗体cRFB4FC和cRFB4CH3,并进行活性检测。方法:采用基因克隆技术获得两抗体的基因,然后将其克隆入表达载体pPIC9K中,构建重组质粒pPIC9K/cRFB4FC和pPIC9K/cRFB4CH3,经测序鉴定正确,电转化入毕赤酵母SMD1163中,将经G418抗性筛选出的重组酵母菌株进行PCR鉴定,经甲醇诱导,表达产物经SDS-PAGE分析和Western blot鉴定,经ELISA检测生物学活性。采用正交试验优化重组酵母菌株的表达条件以提高抗体的表达量。结果:获得重组表达质粒pPIC9K/cRFB4FC和pPIC9K/cRFB4CH3,经G418筛选及PCR鉴定得到高拷贝整合的重组酵母菌株,经甲醇诱导表达出cRFB4FC和cRFB4CH3蛋白。它们在SDS-PAGE上分别表现为相对分子质量(Mr)约326 000和295 000的蛋白区带,在Western blot分析中均可被山羊抗人IgG Fc单克隆抗体(mAb)识别,经ELISA分析它们都具有较高的生物学活性。优化表达条件后,抗体的表达量分别提高了196.4%和151.7%。结论:抗体cRFB4FC和cRFB4CH3在酵母菌SMD1163中成功获得高效分泌表达,并有免疫学活性。(本文来源于《细胞与分子免疫学杂志》期刊2012年06期）
张付凯,乔亚奇,王磊,兰丽平,潘家荣[8]（2012）在《抗对硫磷基因工程四价抗体在大肠杆菌中高效表达与鉴定》一文中研究指出为提高抗对硫磷基因工程四价抗体在大肠杆菌中可溶性表达量,本研究利用克隆技术得到四价抗体基因sc-sa,将该融合基因连接至表达载体pTO-T7的Ω序列和T7启动子下游,构建成功的表达质粒导入大肠杆菌OrigamiB(DE3),经IPTG诱导表达,SDS-PAGE和Western Blot鉴定表达产物,Ni亲和层析纯化蛋白,间接非竞争ELISA法测定该四价抗体的亲和力。结果表明在大肠杆菌OrigamiB(DE3)中表达分子量约为46kDa的四价抗体,0.1mmol/L的IPTG在30℃条件下诱导原核表达,外源蛋白占菌体总蛋白含量近50%,纯化后可溶性蛋白纯度在90%以上,ELISA结果显示该抗体与对硫磷结合呈阳性,抗体效价在1∶1×106以上,亲和常数为6.84×108L/mol。与母源抗体和相应单链抗体相比,利用pTO-T7载体四价抗体在大肠杆菌OrigamiB(DE3)中可实现高效表达,且抗体效价和亲和力均得到进一步提高。(本文来源于《核农学报》期刊2012年01期）
李仁良,袁子国,侯杰,谭志坚,林瑞庆[9]（2011）在《检测鸡球虫四价弱毒疫苗抗体应答的ELISA方法的建立及初步应用》一文中研究指出本研究旨在建立检测鸡球虫四价弱毒疫苗(柔嫩艾美耳球虫、毒害艾美耳球虫、堆型艾美耳球虫、巨型艾美耳球虫)抗体应答的酶联免疫吸附试验(ELISA),并初步阐明鸡免疫四价弱毒疫苗及攻虫后的抗体应答。将300羽岭南黄鸡分为A(免疫攻虫组)、B(不免疫不攻虫组)、C(不免疫攻虫组)共3个组。A组雏鸡在4日龄时进行首免,11日龄时鸡开始二免,二免完成后(17日龄时)对A组及C组的鸡进行攻虫(28万个4种球虫的混合卵囊/羽),7d后检查A、C两组鸡的存活率。在鸡二免和叁免完成后,分别对A、B组进行采血,通过优化最佳抗原包被浓度、酶结合物工作浓度及最佳血清稀释度,建立了ELISA方法来检测鸡体对球虫四价弱毒疫苗的抗体应答情况。A组鸡血清抗体的平均D值为0.870和0.904,明显高于B组鸡的平均D值0.261和0.270,证明了鸡体免疫疫苗后可以刺激产生相应抗体。免疫鸡攻虫后的存活率和抗体应答的检测结果,都充分说明了此鸡球虫弱毒四价疫苗具有良好的免疫原性,所建立的ELISA方法为今后评价鸡球虫弱毒四价疫苗的免疫效力提供了有效手段。(本文来源于《中国畜牧兽医》期刊2011年08期）
张付凯[10]（2011）在《抗对硫磷基因工程四价抗体在大肠杆菌中的高效表达》一文中研究指出1、抗对硫磷四价抗体表达载体构建根据抗对硫磷四价抗体基因序列设计对应对引物,用经优化后的PCR反应条件扩增得到抗对硫磷四价抗体基因后经酶切、PCR扩增初步验证及基因测序确认为目的基因后,将其与达载体pTO-T7连接,转化大肠杆菌rigami 2(DE3),成功构建抗对硫磷四价抗体表达载体。2、抗对硫磷四价抗体的表达及检测抗对硫磷四价抗体表达载体经IPTG诱导目的基因表达,表达产物经SDS-PAGE检测蛋白分子量和Western Blot特异性鉴定,结果表明,虽然表达产物中仍有包涵体,但与抗体改造前相比,可溶性蛋白含量已得到显着提高,经浓度测定得知目的蛋白浓度为0.29 mg/ml。3、抗对硫磷四价抗体的ELISA反应活性检测改造后的基因工程抗体经纯化后用ELISA方法测定生物学活性,并与实验室保存的单克隆抗体、单链抗体、前期制备的四价抗体相比较,ELISA结果显示该抗体与对硫磷特异结合呈阳性,抗体亲和常数为3.84×10~8 L /mol,半数抑制浓度为0.50μg/ml,表明该抗体亲和力较好,ELISA检测灵敏度得到显着提高。4.导致包涵体形成的因素很多,目前尚无明确解决的方法,本实验考虑抗体基因序列密码子偏倚性、基因调控序列、诱导条件等方面原因,通过选用合适的表达载体和宿主菌,优化表达条件后提高可溶性蛋白产量,为工程抗体在原核表达系统中实现可溶性表达作出有益探索。(本文来源于《中国农业科学院》期刊2011-06-01）
四价抗体论文开题报告
（1）论文研究背景及目的
此处内容要求：
首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景，再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题，并提出你的论文准备的观点或解决方法。
写法范例：
C群脑膜炎球菌(Men C)病在美国占到所有脑膜炎球菌病的叁分之一,常引起脑膜炎球菌病的暴发。其与白喉类毒素相结合的四价结合苗(Men ACYWD)2005年被推荐用于青年人和部队新兵这样的高危人群。作者评估了Men ACYWD或脑膜炎球菌多糖疫苗(MPSV4)接种的美国部队人员中抗Men C抗体的持久性。从国防医学监测系统中随机地选用了1 200名2006年到2008年间的Men ACY-
（2）本文研究方法
调查法：该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。
观察法：用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。
实验法：通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。
文献研究法：通过调查文献来获得资料，从而全面的、正确的了解掌握研究方法。
实证研究法：依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。
定性分析法：对研究对象进行“质”的方面的研究，这个方法需要计算的数据较少。
定量分析法：通过具体的数字，使人们对研究对象的认识进一步精确化。
跨学科研究法：运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。
功能分析法：这是社会科学用来分析社会现象的一种方法，从某一功能出发研究多个方面的影响。
模拟法：通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。
四价抗体论文参考文献
[1].孙媛丽,符明鹏,郭子龙,朱慧芬,雷萍.抗TfR四价抗体的构建表达及其体外生物学效应研究[C].第十二届全国免疫学学术大会分会场交流报告集.2017
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[3].贾明.抗人CD19单链抗体二价及四价多聚体的改建及功能研究[D].浙江大学.2015
[4].张萍萍,邓捷,张小刚,孙哲,朱涛.四价脑膜炎球菌多糖单克隆抗体的制备及其应用[J].中国生物制品学杂志.2015
[5].朱涛,邓捷,邓新,邵忠琦,毛慧华.四价脑膜炎球菌多糖疫苗中结合物多糖抗原含量双抗体夹心ELISA检测方法的建立及验证[J].中国生物制品学杂志.2015
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[7].石胜,钟华,马玲,农江,白安斌.重组嵌合抗人CD22四价基因工程抗体在毕赤酵母中的表达及活性检测[J].细胞与分子免疫学杂志.2012
[8].张付凯,乔亚奇,王磊,兰丽平,潘家荣.抗对硫磷基因工程四价抗体在大肠杆菌中高效表达与鉴定[J].核农学报.2012
[9].李仁良,袁子国,侯杰,谭志坚,林瑞庆.检测鸡球虫四价弱毒疫苗抗体应答的ELISA方法的建立及初步应用[J].中国畜牧兽医.2011
[10].张付凯.抗对硫磷基因工程四价抗体在大肠杆菌中的高效表达[D].中国农业科学院.2011