HE染色显蓝方法的应用和体会

HE染色显蓝方法的应用和体会

李林丰夏勤刘智(四川遂宁市中心医院病理科629000)

【中图分类号】R446【文献标识码】A【文章编号】1672-5085(2013)03-0192-01

HE染色中的显蓝又称返蓝、促蓝、变蓝,是指用苏木将染色的组织切片经分化液分化后,其颜色由原来的深蓝色变成粉红色,再用弱碱性水溶液处理,使其由浅色变为有的蓝色,苏木素染色这一显蓝过程是HE染色所必需的,显蓝处理恰当,核才能呈现出鲜艳的蓝色,核膜及染色质形态结构清楚,而且利于下一步用伊红将胞浆染成艳丽的颜色。现将使用过的几种显蓝方法和体会介绍如下:

1、材料和方法

1.1材料收集遂宁市人民病理科常规石蜡切片200例,随机抽样将标本分为5组。

1.2试剂①氢氧化铵(氨水);②碳酸锂;③碳酸氢钾;④硫酸镁;⑤PBS(即用型)购自基团公司;⑥HE染色常用试剂苏木素伊红=甲苯、乙醇。

①和②逐滴加入蒸馏水中,经搅拌后,用PH试纸检验溶液,调值PH7.5—8.0左右配成氢氧化铵水溶液及碳酸锂水溶液,碳酸锂银1g硫酸镁10g蒸馏水500ml混匀配制为SCOTT氏促蓝液。

1.3方法①石蜡切片3-4mm脱蜡至水;②苏木素染色2min水洗;③1%盐酸乙醇分化数秒水洗;④使用5种不同的方法进行显蓝;⑤伊红1mm水洗;⑥梯度乙醇脱水;⑦二甲苯透明;⑧中性树胶封固。

1.4结果判定显微镜下观察,细胞核与细胞质染色对比是否清晰,颜色是否鲜艳。

2、结果

5种方法中PBS(即磷酸盐缓冲液)效果及效率最佳,不易脱片,层次分明,细胞核蓝色鲜艳,核膜及染色质形态结构特点清楚,核浆对比度明显。

3、讨论

在HE染色中,因为明矾苏木精染液的性质是在酸性溶液中颜色变浅,在碱性环境中才能显色,显蓝的目的不仅是为了确定苏木精染色程度和确定分化是否恰当,同时还能增强染色的强度,使苏木精色淀与组织中该着色部分结合得更加牢固。因此,经苏木精染色后的组织切片,应先用流动的自来水冲洗,以洗去残有的染液和浮色,增强已着染的颜色强度,经分化液分化后再充分水洗,为了促使及早显蓝,可用PH7-8弱碱性水溶液处理。常用的方法是氢氧化铵水溶液及碳酸锂水溶液,SCOTT氏促蓝液,以上方法配制相对复杂,且PH值不能达到理想效果,显蓝液的碱性过强易使切片脱落,甚至拒染伊红,有时虽能染上色但切片不能久存,易褪色,显蓝不足时,核的形态特点不清楚,复染伊红后变得模糊。自来水偏碱性,长时间的流动自动水冲洗,也能达到显蓝的目的,但受时间和条件的限制,在实际工作中也较少使用。在临床工作中,这几种返蓝液均出现个别脱片现象,尤其像脱钙后的骨组织,平滑肌组织及甲状腺等纤维成分或脂肪成为多的组织更甚。0.01mol/LPBS由磷酸二氢钠、磷酸氢二钠、Nacl及蒸馏水组成,PH值在7.2—7.4之间,能够对抗外来少量强酸或少量强碱,不易引起溶液PH值改变,PBS还具有缓冲作用,缓冲1%乙醇分化后形成的少量强酸的作用,从而起到蓝化细胞核的作用,而且PBS为一种盐PH值稳定,不易引起组织脱落,可长期反复使用且防脱片效果好,在工作中观察优于其它几种方法,效率较高,适合临床工作的使用。

参考文献

[1]张哲,宋辉.实用病理组织染色技术.1987.11.

[2]王永军.刘世正.等常规HE染色中蓝化方法的改进.(诊断病理学杂志)2005,12(6).475-476.

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