导读:本文包含了霍乱毒素亚基基因论文开题报告文献综述及选题提纲参考文献，主要关键词:胰岛炎,非肥胖,糖尿病,代谢病
霍乱毒素亚基基因论文文献综述
周丽斌[1]（2007）在《口服表达霍乱毒素B亚基/胰岛素原融合蛋白的转基因莴苣和烟草阻止非肥胖糖尿病小鼠胰岛炎的发展》一文中研究指出利用转基因技术,产生表达霍乱毒素B亚基/人胰岛素原(CTB-Pins)融合蛋白的莴苣叶(生菜)和烟草叶绿体转基因植株,烟草中CTP-Pins的表达量可达总可溶性蛋白的16%,莴苣叶中可达2.5%。5周龄雌性非肥胖糖尿病(NOD)小鼠每周口服8 mg表达CTP-Pins的烟草粉末共7周,同时以表达CTB-绿色荧光蛋白(GFP)、干扰素-GFP或未转染的烟草为阴性对照,服用CTB-Pins小鼠的胰腺淋巴细胞浸润减少,胰岛中分泌胰岛素的B细胞较阴性对照组大量保存,血糖和尿糖水平明显降低,白细胞介素4(IL-4)、(本文来源于《中华内分泌代谢杂志》期刊2007年04期）
金慧清[2]（2005）在《霍乱毒素B亚基和小麦小孢子特异表达β-expansin基因的表达研究》一文中研究指出1. 霍乱毒素B亚基在家蚕杆状病毒表达系统的表达与活性分析 霍乱毒素B亚基(cholera toxin B submit,CTB)是霍乱毒素的无毒单位,具有很强的免疫原性,能刺激机体产生黏膜IgA和血清IgG抗体。B亚单位的主要功能是与有核细胞上的GM1-神经结苷脂结合而使得A亚单位进入细胞,这个功能使它在免疫佐剂、口服疫苗与多肽衍生疫苗的研究中具有越来越重要的作用。 在本论文中,霍乱毒素B亚单位与多角体蛋白的融合基因被克隆至昆虫杆状病毒表达载体系统(BEVS)的转移载体pBacPAK8中,使其置于多角体蛋白(polyhedrin)基因启动子控制之下,获得重组转移载体pBacPAK-mCTB。重组转移载体DNA与经Bsu36I酶切线性化的修饰型病毒Bm-BacPAK6 DNA共转染家蚕BmN细胞,然后经空斑纯化、PCR扩增、Southern杂交等方法鉴定出含CTB基因的重组病毒BacPAK-mCTB。将重组病毒BacPAK-mCTB感染BmN细胞及五龄幼虫, SDS-PAGE电泳分析显示重组杆状病毒的116kD的β-半乳糖苷酶条带缺失,证实外源基因已成功取代了LacZ基因:Western blotting分析发现在14kD及70kD处有分别都有明显条带。其表达的融合蛋白产物经ELISA检测显示细胞和虫体表达分别为5.6μg/ml54.4μg/ml.在蚕体中得到了高效表达:而GM1-ELISA说明CTB五聚体的结合GM1-神经结苷脂的生物学功能。NOD小鼠的免疫增强实验则明显的反映了CTB的免疫试剂及佐剂功能:它能显着增强胰岛素对自身免疫疾病的治疗效果,本实验诱导免疫耐受的较佳组合为混合的100μg胰岛素和10μg CTB含量的蚕血;而且单独喂养CTB的NOD小鼠也显示出良好的免疫增强作用,能够延缓NOD小鼠的糖尿病发作,制止进～步的胰岛的恶化。2. 小麦小孢子特异表达β-expansin基因TaEXPB2的克隆与表达 Expansin是一种体外诱导分离的植物细胞壁伸展的蛋白,在修饰细胞壁基础上使细胞膨胀。Expansin的功能众多,除了细胞生长,还包括营养生长、形态发生、授粉受精、果实软化等,并表现出高度组织、器官和细胞特异性。 本论文在小麦小孢子特异表达阶段,经基因组DNA提取、RT-PCR、Northern及Southern技术,首次鉴定出了一个小麦小孢子特异β-expansin cDNA-TaEXPB2(本文来源于《浙江大学》期刊2005-05-01）
丛华,古钦民,江渊,周怀瑜,何深一[3]（2005）在《弓形虫抗原与霍乱毒素A2/B亚基复合基因在小鼠体内诱导的免疫反应》一文中研究指出目的 观察弓形虫主要表面抗原SAG1、SAG2 与霍乱毒素A2 /B亚基复合基因真核质粒经肌肉免疫小鼠所诱导的免疫反应。方法 将SAG1基因、SAG2 基因及CTXA2 /B基因定向连接插入真核表达质粒pcDNA3.1,经酶切及测序,获得pcDNA3.1 SAG1 SAG2 及pcDNA3.1 SAG1 SAG2 CTXA2 /B的重组子;碱裂解法大量制备经肌肉注射免疫BALB/c鼠,每只鼠经后腿肌肉注射质粒10 0 μg ,每2周免疫1次,共3次,以PcDNA3.1空质粒注射组及PBS组为对照,分别于每次免疫前断尾取血和免疫后4周取小鼠脾脏测定T淋巴细胞增殖活性及NK细胞活性,ELISA法测定IgG抗体。结果 免疫组小鼠的IgG抗体水平明显提高,NK细胞杀伤活性和T细胞增殖活性也明显增强。免疫鼠抗攻击感染的时间延长。结论 含有霍乱毒素的复合基因免疫小鼠后体液免疫和细胞免疫水平均有提高。(本文来源于《中国人兽共患病杂志》期刊2005年04期）
朱一望[4]（2004）在《霍乱毒素B亚基乙肝表面抗原中蛋白融合基因在家蚕核型多角体病毒载体系统中的表达研究》一文中研究指出现有的乙肝基因工程疫苗(含S抗原)接种后，约10％接种者为免疫无应答者，而使用增加了PreS2抗原的中蛋白疫苗(含S和PreS2抗原)可减少免疫无应答者的出现。霍乱毒素B亚基(CTB)具有很强的免疫原性，能刺激机体产生粘膜IgA和血清IgG抗体。它在免疫佐剂、口服疫苗与多肽疫苗的研究中具有越来越重要的作用。为了获得能够口服吸收的并能引起免疫应答的融合蛋白，本研究利用基因工程方法，将霍乱毒素B亚基乙肝中蛋白融合基因在家蚕杆状病毒载体表达系统中进行了表达。 首先将霍乱毒素B亚基与乙肝中蛋白基因的重组到转移载体pBacPAK8，获得含有霍乱毒素B亚基与乙肝中蛋白融合基因的重组转移载体pBacPAK-CTB-HBM，并与已线性化的病毒Bm-BacPAK6 DNA共转染家蚕细胞，筛选出重组病毒BacPAK-CTB-HBM。将重组病毒BacPAK-CTB-HBM以10 pfu／细胞感染家蚕家蚕培养细胞和幼虫，Western印迹方法表明表达产物大小约为43kD。用ELISA法测定表达产物的抗原性，结果显示：家蚕培养细胞的胞内表达产物具有明显的抗原反应性，重组病毒BacPAK-CTB-HBM感染的家蚕培养细胞第48 h的表达量最高，量约1.61ug／mL；BacPAK-CTB-HBM感染的家蚕蛹血淋巴也具有明显的抗原反应性，第120 h的表达量最高，量约15.27ug／mL。 将表达产物免疫动物后，用ELISA法测定表达产物的免疫原性，结果显示：在口服初免方式中，连续摄入六周后，停止摄入后四周开始检测抗体。融合蛋白组有60％的鼠体内产生了抗-HBs抗体，中蛋白组20％的鼠体内产生了抗-HBs抗体。在抗-HBs抗体阳转的鼠体内也检测到了相应的抗-PreS2抗体。口服加强免疫：在商用疫苗初免后抗体水平下降到P／N值低于5.0时连续摄入表达产物四周后检测抗体。融合蛋白组和中蛋白组全部检测到抗-HBs抗体，抗体水平逐渐增强，而且抗体水平持续维持在较高水平。(本文来源于《浙江大学》期刊2004-05-01）
曹诚,李平,李杰之,石成华,马清钧[5]（2000）在《霍乱毒素A、B亚基基因比例表达的精确调节》一文中研究指出研究霍乱毒素A亚基基因内部翻译起始序列的翻译起始效率与A亚基基因翻译起始效率的关系。方法 :将基因内翻译起始序列合成后克隆到上游含有起始密码和无起始密码的报告质粒中 ,研究表达水平的差异。结果 :在上游翻译起始区 (translationinitiationregion ,TIR)与报告基因间插入该序列 ,基因的表达水平提高 1倍 ;当上游的翻译起始密码由ATG突变为ATC时 ,内部翻译起始序列几乎失去翻译起始功能。结论 :TIR 1的翻译起始效率与上游起始序列的起始效率相同 ;且受上游翻译起始序列的精确调控。(本文来源于《军事医学科学院院刊》期刊2000年02期）
曹诚,石成华,李平,马清钧[6]（1997）在《霍乱毒素B亚基基因具有自己的启动子》一文中研究指出本研究发现并证实霍乱毒素Ｂ亚基基因上游ＸｂａＩ～ＣｌａＩ限制性片段内存在具有启动子活性的序列；在该启动子作用下，霍乱毒素Ｂ亚基表达水平可达２００ｍｇ／Ｌ，氯霉素乙酰基转移酶基因表达水平随培养条件不同在０．３～１０ｍｇ／Ｌ之间，大肠杆菌β－半乳糖苷酶基因的表达量达４１００单位／ｍｌ。在该启动子的控制下霍乱毒素Ｂ亚基基因可以高效表达，该启动子的存在可能是霍乱毒素操纵子中霍乱毒素Ｂ亚基表达量是Ａ亚基的６倍的原因。(本文来源于《遗传学报》期刊1997年01期）
曹诚,石成华,李平,马清钧[7]（1996）在《霍乱毒素B亚基基因具有自己的启动子》一文中研究指出本研究发现并证实霍乱毒素B亚基基因上游Xba Ⅰ～Cla Ⅰ限制性片段内存在具有启动子活性的序列;在该启动子作用下,霍乱毒素B亚基表达水平可达200mg/L,氯霉素乙酰基转移酶基因表达水平随培养条件不同在0.3～10mg/L之间,大肠杆菌β-半乳糖苷酶基因的表达量达4100U/ml。在该启动子的控制下霍乱毒素B亚基基因可以高效表达,该启动子的存在可能是由于霍乱毒素操纵子中霍乱毒素B亚基表达量是A亚基的6倍。(本文来源于《生物技术通讯》期刊1996年03期）
曹诚,石成华,李平,马清钧[8]（1994）在《霍乱毒素B亚基基因上游序列对B亚基表达水平的影响》一文中研究指出本研究通过缺失突变和移码突变研究了ｃｔｘＢ基因上游Ａ基因部分序列对ｃｔｘＢ表达水平的影响，结果表明：（１）将霍乱毒素操纵子ＸｂａＩ－ＥｃｏＲＩ片段克隆至ｐＵＣ１９，构建的质粒ｐＵＣ１９ＣＴＢ中Ａ亚基的部分序列不能翻译，该质粒转化大肠杆菌后ＣＴＢ的表达产量为３０μｇ／μｌ；（２）在质粒ｐＵＣ１９ＣＴＢ的ＸｂａＩ位点引入移码突变，构建质位ｐＭＣ０２Ｃ，使Ａ亚基基因部分序列能够翻译至自然的终止密码，Ｂ基因的表达水平却降低一倍；（３）质粒ｐＵＣ１９ＣＴＢ缺失ＸｂａＩ－ＣｌａＩ（５５０ｂｐ）的非翻译序列，构建质粒ｐＭＣ０３（Ａ亚基序列不翻译），该质粒转化大肠杆菌后ｃｔｘＢ基因的表达水平降低１倍；（４）在质粒ｐＭＣ０３中ｃｔｘＢ基因上游引入移码突变，构建质粒ｐＭＣ０３Ｃ，其Ａ亚基部分序列能够表达，这时ＣＴＢ的表达水平较ｐＭＣ０３低得多，较ｐＵＣ１９ＣＴＢ低２０倍以上。进一步研究表明，在ＸｂａＩ－ＣｌａＩ片段之间存在具有较强启动子活性的ＤＮＡ序列是５５０ｂｐ非翻译序列缺失后ＣＴＢ表达水平降低的原因。对Ａ基因的阅读框架变化影响ＣＴＢ表达水平的可能机理进行了讨论。(本文来源于《遗传学报》期刊1994年06期）
石成华,曹诚,张京生,马清钧[9]（1994）在《乙肝PreS_2抗原决定簇和霍乱毒素B亚基基因的融合与表达》一文中研究指出通过全化学法按大肠杆菌密码偏性合成了乙肝炎病毒（ＨＢＶ）前Ｓ２抗原（ＰｒｅＳ２）抗原决定簇基因，与霍乱毒素Ｂ亚基基因的３’端融合。重组质粒转化大肠杆菌后融合基因得到高效表达，表达量达３０μｇ／ｍＬ，表达产物９５％以上分泌到胞外。表达的融合蛋白能与神经节苷脂ＧＭ１结合，说明融合蛋白保持了霍乱毒素Ｂ亚基（ＣＴＢ）的基本高级结构和生物学功能；酶联免疫吸附实验证明融合蛋白具有ＣＴＢ和ＨＢＶＰｒｅＳ２的抗原性；应用亲和层析纯化后得到了电泳纯融合蛋白制品，为研究融合蛋白免疫原性并进一步构建基因工程肽苗奠定了基础。(本文来源于《生物化学杂志》期刊1994年05期）
曹诚,石成华,李平,马清钧[10]（1994）在《霍乱毒素B亚基基因上游序列对B亚基表达水平的影响》一文中研究指出本研究通过缺失突变和移码突变研究了ctxB基因上游A基因部分序列对ctxB表达水平的影响,结果表明:(1)将ctx操纵子XbaI—EcoRI片段克隆至pUC19,构建的质粒pUC19CTB中A亚基的部分序列不能翻译,该质粒转化大肠杆菌后CTB的表达产量为30μg/ml;(2)在质粒pUC19CTB的XbaI位点引入移码突变,构建质粒pMC02C,这时A亚基的部分序列的阅读框架与lacZ一致,从而A基因能够翻译至自然的终止密码,B基因的表达水平却降低一倍;(3)质粒pUC19CTB缺失XbaI～ClaI(550bp)的非翻译序列,构建质粒pMC03(A亚基序列不翻译),该质粒转化大肠杆菌后ctxB基因的表达水平降低1倍;(4)在质粒pMC03中ctxB基因上游引入移码突变,构建的质粒pMC03C(ctxB上游基因能够表达)CTB的表达水平较pMCO3低得多,较pUC19CTB低20倍以上。对产生上述现象的原因进行了分析讨论。(本文来源于《生物技术通讯》期刊1994年03期）
霍乱毒素亚基基因论文开题报告
（1）论文研究背景及目的
此处内容要求：
首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景，再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题，并提出你的论文准备的观点或解决方法。
写法范例：
1. 霍乱毒素B亚基在家蚕杆状病毒表达系统的表达与活性分析 霍乱毒素B亚基(cholera toxin B submit,CTB)是霍乱毒素的无毒单位,具有很强的免疫原性,能刺激机体产生黏膜IgA和血清IgG抗体。B亚单位的主要功能是与有核细胞上的GM1-神经结苷脂结合而使得A亚单位进入细胞,这个功能使它在免疫佐剂、口服疫苗与多肽衍生疫苗的研究中具有越来越重要的作用。 在本论文中,霍乱毒素B亚单位与多角体蛋白的融合基因被克隆至昆虫杆状病毒表达载体系统(BEVS)的转移载体pBacPAK8中,使其置于多角体蛋白(polyhedrin)基因启动子控制之下,获得重组转移载体pBacPAK-mCTB。重组转移载体DNA与经Bsu36I酶切线性化的修饰型病毒Bm-BacPAK6 DNA共转染家蚕BmN细胞,然后经空斑纯化、PCR扩增、Southern杂交等方法鉴定出含CTB基因的重组病毒BacPAK-mCTB。将重组病毒BacPAK-mCTB感染BmN细胞及五龄幼虫, SDS-PAGE电泳分析显示重组杆状病毒的116kD的β-半乳糖苷酶条带缺失,证实外源基因已成功取代了LacZ基因:Western blotting分析发现在14kD及70kD处有分别都有明显条带。其表达的融合蛋白产物经ELISA检测显示细胞和虫体表达分别为5.6μg/ml54.4μg/ml.在蚕体中得到了高效表达:而GM1-ELISA说明CTB五聚体的结合GM1-神经结苷脂的生物学功能。NOD小鼠的免疫增强实验则明显的反映了CTB的免疫试剂及佐剂功能:它能显着增强胰岛素对自身免疫疾病的治疗效果,本实验诱导免疫耐受的较佳组合为混合的100μg胰岛素和10μg CTB含量的蚕血;而且单独喂养CTB的NOD小鼠也显示出良好的免疫增强作用,能够延缓NOD小鼠的糖尿病发作,制止进～步的胰岛的恶化。2. 小麦小孢子特异表达β-expansin基因TaEXPB2的克隆与表达 Expansin是一种体外诱导分离的植物细胞壁伸展的蛋白,在修饰细胞壁基础上使细胞膨胀。Expansin的功能众多,除了细胞生长,还包括营养生长、形态发生、授粉受精、果实软化等,并表现出高度组织、器官和细胞特异性。 本论文在小麦小孢子特异表达阶段,经基因组DNA提取、RT-PCR、Northern及Southern技术,首次鉴定出了一个小麦小孢子特异β-expansin cDNA-TaEXPB2
（2）本文研究方法
调查法：该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。
观察法：用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。
实验法：通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。
文献研究法：通过调查文献来获得资料，从而全面的、正确的了解掌握研究方法。
实证研究法：依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。
定性分析法：对研究对象进行“质”的方面的研究，这个方法需要计算的数据较少。
定量分析法：通过具体的数字，使人们对研究对象的认识进一步精确化。
跨学科研究法：运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。
功能分析法：这是社会科学用来分析社会现象的一种方法，从某一功能出发研究多个方面的影响。
模拟法：通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。
霍乱毒素亚基基因论文参考文献
[1].周丽斌.口服表达霍乱毒素B亚基/胰岛素原融合蛋白的转基因莴苣和烟草阻止非肥胖糖尿病小鼠胰岛炎的发展[J].中华内分泌代谢杂志.2007
[2].金慧清.霍乱毒素B亚基和小麦小孢子特异表达β-expansin基因的表达研究[D].浙江大学.2005
[3].丛华,古钦民,江渊,周怀瑜,何深一.弓形虫抗原与霍乱毒素A2/B亚基复合基因在小鼠体内诱导的免疫反应[J].中国人兽共患病杂志.2005
[4].朱一望.霍乱毒素B亚基乙肝表面抗原中蛋白融合基因在家蚕核型多角体病毒载体系统中的表达研究[D].浙江大学.2004
[5].曹诚,李平,李杰之,石成华,马清钧.霍乱毒素A、B亚基基因比例表达的精确调节[J].军事医学科学院院刊.2000
[6].曹诚,石成华,李平,马清钧.霍乱毒素B亚基基因具有自己的启动子[J].遗传学报.1997
[7].曹诚,石成华,李平,马清钧.霍乱毒素B亚基基因具有自己的启动子[J].生物技术通讯.1996
[8].曹诚,石成华,李平,马清钧.霍乱毒素B亚基基因上游序列对B亚基表达水平的影响[J].遗传学报.1994
[9].石成华,曹诚,张京生,马清钧.乙肝PreS_2抗原决定簇和霍乱毒素B亚基基因的融合与表达[J].生物化学杂志.1994
[10].曹诚,石成华,李平,马清钧.霍乱毒素B亚基基因上游序列对B亚基表达水平的影响[J].生物技术通讯.1994