导读:本文包含了异时相论文开题报告文献综述及选题提纲参考文献，主要关键词:细胞周期素B1,细胞周期,细胞凋亡
异时相论文文献综述
何乐亚,魏欣,徐丰,李川,闵江[1]（2013）在《G_0/G_1期异时相Cyclin B1的表达对细胞凋亡的影响》一文中研究指出目的研究G0/G1期异时相细胞周期素B1(Cyclin B1)的大量表达对细胞凋亡的影响。方法首先构建了四环素可诱导表达Cyclin B1的单克隆细胞株,其次,筛选出能最大程度阻滞细胞于G0/G1期的胸腺嘧啶核苷(Thymidine)浓度,最后,在阻滞的时间内加入四环素诱导Cyclin B1表达,并用免疫印迹和流式细胞仪检测证实后,用膜联蛋白/碘化丙啶(AnnexinⅤ/PI)双染法和API法检测细胞凋亡。结果终浓度为5mmol/L的胸腺嘧啶核苷能阻滞单克隆细胞株在G0/G1期,并至少维持48h;在细胞同步化期间加四环素诱导后,Cyclin B1表达增加,并且G0/G1期特异性细胞凋亡增加。结论 G0/G1期异时相Cyclin B1的表达能诱导细胞凋亡。(本文来源于《华中科技大学学报(医学版)》期刊2013年01期）
张永红,于冬冬,何乐亚,魏欣,冷彦[2]（2009）在《异时相Cyclin B1/CDK1表达有助于正常在体细胞进入细胞分裂周期》一文中研究指出目的研究通常表达于G2/M期的Cyclin B1在G1期异时相表达的作用机制及意义。方法用丝裂原刺激因子(PHA)刺激人外周血淋巴细胞使之进入细胞周期,分别在刺激后0、36、48、60 h收集细胞,并分成两部分,一部分用流式Cyclins/DNA多参数技术分析,一部分用Post-sorting Western blot分析。结果处于G0期的淋巴细胞经PHA刺激进入细胞周期后,可以观察到Cyclin B1在G1期有异时相表达,相应的CDK1亦有异时相表达。结论异时相Cyc-lin B1/CDK1可能有助于正常在体细胞进入细胞分裂周期。(本文来源于《华中科技大学学报(医学版)》期刊2009年06期）
何乐亚[3]（2009）在《异时相Cyclin B1的表达与细胞凋亡的关系及其机制的探讨》一文中研究指出第一部分：四环素可控表达Cyclin B1的载体构建和单克隆细胞株的筛选目的：筛选四环素诱导细胞周期素B1(Cyclin B1)可控表达的293单克隆细胞株(Tetracycline-Regulated Expression 293 cells，T-REx~(TM)-293)。方法：用多聚酶链反应(polymerase chain reactions，PCR)的方法从人胎肝cDNA文库中调出带有酶切位点的Cyclin B1基因全长，在37℃经过BamH1和X-bal1双酶切过夜后，与经过同样酶切后的pcDNA4／TO／myc-HisB载体在16度连接过夜，转化BL21细菌感受态，然后涂在带有氨苄抗性的LB培养板上，37度培养过夜，挑细菌克隆，摇菌，测序鉴定。接着大提测序正确的质粒，用脂质体Lipofectamine~(TM)2000转染T-REx~(TM)-293细胞，用含有杀稻瘟菌素(Blasticidin，5μg／ml)和腐草霉素(Zeocin，200μg／ml)双药物的DMEM培养两周后，将细胞传96孔板，等单个细胞扩增出单细胞克隆。最后，用Western blot和流式细胞仪检测单克隆细胞株在加入四环素诱导后目的基因的表达情况。结果：构建的pcDNA4／TO／myc-HisB-Cyclin B1载体，经英骏公司测序鉴定序列正确。筛选出的单克隆细胞株，在未加四环素时没有外源性的Cyclin B1表达，在加入四环素后，3小时就有表达，随时间的增加，Cyclin B1表达量也增加，48小时最多。结论：筛选出的T-REx~(TM)-293单克隆细胞株能经四环素可控表达Cyclin B1。第二部分：G_0／G_1期异时相Cyclin B1的表达促进细胞凋亡目的：利用四环素诱导Cyclin B1可控表达的293单克隆细胞株来证明G_0／G_1期异时相Cyclin B1的表达促进细胞凋亡方法：挑选出一个最优的Thymidine的浓度，其能最大程度的阻滞细胞于G_0／G_1期。接着，将细胞大量阻滞在G_0／G_1期，然后在阻滞好的细胞中加入微量的四环素诱导Cyclin B1表达48小时，最后用Annexin V-PI双标法和API法检测细胞凋亡的量和凋亡的周期特异性，同时用Western blot检测细胞周期素依赖蛋白激酶1(Cdk1)的活性情况。结果：用Thymidine处理细胞后，绝大部分细胞都同步化在G_0／G_1期。在四环素诱导Cyclin B1表达48小时后，诱导组比非诱导组的Cyclin B1蛋白总量明显增加，细胞凋亡明显增加。此时，活性的Cdk1(Thr~(161)磷酸化)蛋白量较未诱导组也明显增加。结论：G_0／G_1期异时相Cyclin B1的表达能促进细胞凋亡。第叁部分：Cyclin B1导致的G_0／G_1期特异性细胞凋亡机制的探索目的：探索在由Cyclin B1导致的G_0／G_1期特异的细胞凋亡中，除了激活Cdk1外，Cyclin B1还可能和哪些蛋白相互作用，或者Cyclin B1／Cdk1能通过磷酸化哪些蛋白质起作用。方法：我们筛选好的单克隆细胞株在加入四环素后能表达带有Myc和His标签的外源性Cyclin B1。将未诱导的和用四环素诱导48小时的细胞裂解后，分别加入10μgMyc的单克隆抗体，用免疫沉淀(immune precipitation，IP)的方法将可能和Cyclin B1结合的蛋白沉淀下来，接着将蛋白混合物进行SDS PAGE电泳，用考马斯亮蓝染色法和银染法找出未诱导组和诱导组之间的差异蛋白，然后用质谱(mass spectrometry，MASS)分析出差异蛋白的名称。结果：用质谱鉴定出的蛋白有细胞周期素依赖蛋白激酶一(Cyclin-dependentkinase 1，Cdk1)，细胞周期素依赖蛋白激酶二(Cyclin-dependent kinase 2，Cdk2)，有丝分裂阻滞缺失样蛋白一(Mitotic arrest deficient-like protein 1，MAD1-like 1，MAD1L1)和热休克蛋白八(heat shock 70kDa protein 8 isoform 1)。结论：在由Cyclin B1导致的G_0／G_1期特异的细胞凋亡中，除了磷酸化Thr~(161)残基激活Cdk1后导致细胞凋亡外，Cyclin B1(Cyclin B1／Cdk1)与Cdk2、MAD1L1和Hsp70的结合都有可能参与其中。(本文来源于《华中科技大学》期刊2009-04-01）
异时相论文开题报告
（1）论文研究背景及目的
此处内容要求：
首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景，再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题，并提出你的论文准备的观点或解决方法。
写法范例：
目的研究通常表达于G2/M期的Cyclin B1在G1期异时相表达的作用机制及意义。方法用丝裂原刺激因子(PHA)刺激人外周血淋巴细胞使之进入细胞周期,分别在刺激后0、36、48、60 h收集细胞,并分成两部分,一部分用流式Cyclins/DNA多参数技术分析,一部分用Post-sorting Western blot分析。结果处于G0期的淋巴细胞经PHA刺激进入细胞周期后,可以观察到Cyclin B1在G1期有异时相表达,相应的CDK1亦有异时相表达。结论异时相Cyc-lin B1/CDK1可能有助于正常在体细胞进入细胞分裂周期。
（2）本文研究方法
调查法：该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。
观察法：用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。
实验法：通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。
文献研究法：通过调查文献来获得资料，从而全面的、正确的了解掌握研究方法。
实证研究法：依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。
定性分析法：对研究对象进行“质”的方面的研究，这个方法需要计算的数据较少。
定量分析法：通过具体的数字，使人们对研究对象的认识进一步精确化。
跨学科研究法：运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。
功能分析法：这是社会科学用来分析社会现象的一种方法，从某一功能出发研究多个方面的影响。
模拟法：通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。
异时相论文参考文献
[1].何乐亚,魏欣,徐丰,李川,闵江.G_0/G_1期异时相CyclinB1的表达对细胞凋亡的影响[J].华中科技大学学报(医学版).2013
[2].张永红,于冬冬,何乐亚,魏欣,冷彦.异时相CyclinB1/CDK1表达有助于正常在体细胞进入细胞分裂周期[J].华中科技大学学报(医学版).2009
[3].何乐亚.异时相CyclinB1的表达与细胞凋亡的关系及其机制的探讨[D].华中科技大学.2009