导读:本文包含了线粒体功能损伤论文开题报告文献综述及选题提纲参考文献，主要关键词:糖尿病肾脏疾病,足细胞,线粒体
线粒体功能损伤论文文献综述
梁栋,张晓敏[1]（2019）在《足细胞损伤及其线粒体功能障碍在糖尿病肾脏疾病发病机制中的研究进展》一文中研究指出DKD是糖尿病常见的微血管并发症之一,也是导致慢性肾脏病和终末期肾脏病主要病因之一。足细胞是DKD蛋白尿发生的中心靶点,足细胞损伤和丢失是DKD进行性发展的重要因素,其中足细胞线粒体功能障碍发挥关键作用。本文对线粒体功能障碍导致足细胞损伤的机制进行综述。(本文来源于《中国糖尿病杂志》期刊2019年11期）
李威,于海龙,王亮珠,杨柳,王新月[2]（2019）在《脑缺血再灌注损伤后线粒体功能障碍及中药制剂保护作用的研究进展》一文中研究指出线粒体功能障碍是脑缺血再灌注(CIR)损伤的重要病理机制之一。CIR损伤中线粒体脂质过氧化、蛋白质结构和功能改变、氧化呼吸链的抑制、线粒体DNA受损、线粒体膜结构破坏、线粒体通透性转换孔(mPTP)的开放等引发的线粒体功能障碍与脑细胞死亡密切相关。近年来的研究显示,以线粒体为靶点的中药制剂可减轻CIR损伤及神经功能障碍。寻找改善线粒体功能障碍的中药制剂是目前缺血性脑卒中神经保护研究的热点。本文作者对CIR损伤中线粒体功能障碍的病理机制以及以线粒体为靶点的中药制剂的保护作用的研究进展进行综述,为缺血性脑卒中的治疗提供新的潜在靶点。(本文来源于《东南大学学报(医学版)》期刊2019年05期）
李洁,刘如秀[3]（2019）在《银盏心脉滴丸对缺氧/复氧损伤大鼠心肌细胞线粒体功能的影响》一文中研究指出[目的]探讨银盏心脉滴丸(YZXM)含药血清对缺氧/复氧损伤大鼠心肌细胞线粒体功能的影响。[方法]以大鼠心室肌细胞(H9C2)为研究对象,制备银盏心脉滴丸含药血清,分对照组、模型组(缺氧/复氧损伤)、YZXM组(30 min、12 h和24 h),采用流式细胞术检测细胞凋亡率,采用海马能量测定仪测量细胞基础呼吸、最大呼吸率、储备能力、ATP生成量。[结果]与对照组相比,模型组细胞凋亡指数高于对照组(P<0.01)。与模型组相比,YZXM组细胞凋亡指数降低(P<0.01)。YZXM增加缺氧/复氧损伤的H9c2细胞线粒体基础耗氧率、ATP生成量、最大呼吸以及储备能力(n=4,P<0.05)。[结论]银盏心脉滴丸通过改善线粒体功能及能量代谢减轻细胞凋亡保护缺氧/复氧心肌细胞。(本文来源于《天津中医药大学学报》期刊2019年04期）
Wei,SUN,Chao-rong,ZENG,Dong,YUE,Yan-chun,HU[4]（2019）在《紫茎泽兰引起小鼠线粒体功能障碍从而导致肝脏毒性损伤（英文）》一文中研究指出目的:研究紫茎泽兰造成小鼠肝脏毒性损伤后,肝脏线粒体结构和功能发生变化的情况。创新点:紫茎泽兰可以导致肝脏细胞发生凋亡和焦亡,从而产生中毒损伤,然而尚未有报道其对线粒体超微结构和功能的改变。本研究通过多种手段解决了这一问题。方法:将40只小鼠随机分成4组,分别饲喂不同浓度的紫茎泽兰饲料(对照组、100、200和300 g/kg紫茎泽兰添加饲料组)。采用苏木精-伊红染色法(H&E)研究肝脏损伤情况,利用透射电子显微技术研究线粒体超微结构改变。同时,结合实时荧光定量聚合酶链反应(q RT-PCR)、流式细胞术和化学分析方法对线粒体DNA拷贝数、肿胀度和叁磷酸腺苷(ATP)酶活性的改变进行探究。结论:紫茎泽兰导致线粒体超微结构的改变,增大了线粒体肿胀度,降低了钠钾ATP酶(Na+K+-ATPase)和钙镁ATP酶(Ca2+Mg2+-ATPase)活力,同时减少了DNA拷贝数,从而引起肝脏损伤。(本文来源于《Journal of Zhejiang University-Science B(Biomedicine & Biotechnology)》期刊2019年08期）
吴新伟[5]（2019）在《氢气对大鼠海马神经元OGD/R损伤线粒体功能稳态及线粒体自噬的影响》一文中研究指出目的:研究氢气对氧糖剥夺/再灌注损伤的原代培养大鼠海马神经元细胞线粒体功能稳态及线粒体自噬的影响。方法:将培养至第七天左右稳定成熟的原代海马神经细胞分为:1.对照组(Control组,正常环境下培养);2.氧糖剥夺/再灌注组(OGD/R组,放入缺氧缺糖环境中2h后再灌注阶段放入正常环境中继续24h);3.氧糖剥夺+氢气组(OGD/R+H2组,氧糖剥夺2h后再灌注阶段放入富氢培养箱中继续培养24h);4.氧糖剥夺+雷帕霉素组(OGD/R+RAP组,氧糖剥夺2h后再灌注阶段培养基中加入雷帕霉素使其浓度达到200 nmol/L,正常环境下继续培养24h);5.氧糖剥夺+3-甲基腺嘌呤组(OGD/R+3-MA组,氧糖剥夺2h后再灌注阶段培养基中加入3-甲基腺嘌呤使其浓度达到10 mmol/L,正常环境下继续培养24h);6.氧糖剥夺+雷帕霉素+3甲基腺嘌呤组(OGD/R+RAP+3-MA组,氧糖剥夺2h后再灌注阶段培养基中加入雷帕霉素和3甲基腺嘌呤使其浓度分别达到200 nmol/L和10 mmol/L,正常环境下继续培养24h);7.氧糖剥夺+氢气+3甲基腺嘌呤组(OGD/R+H2+3-MA组,氧糖剥夺2h后再灌注阶段培养基中加入3-甲基腺嘌呤使其浓度达到10 mmol/L并放入富氢培养箱中继续培养24h);8.氧糖剥夺+氢气+雷帕霉素组(OGD/R+H2+RAP组,氧糖剥夺2h后再灌注阶段培养基中加入雷帕霉素使其浓度达到200 nmol/L并放入富氢培养箱中继续培养24h)。通过MTT法检测各组细胞存活率;流式细胞分析技术检测各组细胞凋亡水平;荧光显微镜观察各组细胞内活性氧水平;JC-10试剂盒检测各组细胞线粒体膜电位水平;构建质粒转染细胞检测各组细胞线粒体自噬水平;应用蛋白质印迹法检测技术以及RT-PCR技术检测线粒体自噬相关因子LC3、PINK1和Parkin的表达。结果:与Control组相比,OGD/R组神经元细胞存活率、线粒体膜电位水平显着降低(P<0.01),活性氧水平、细胞凋亡水平以及线粒体自噬水平明显升高(P<0.01),线粒体自噬相关因子LC3、PINK1和Parkin的表达水平也显着升高;与OGD/R组相比,OGD/R+H2组以及OGD/R+RAP组能够提高OGD/R损伤后的细胞存活率及线粒体膜电位水平(P<0.01),降低细胞内活性氧水平和细胞凋亡水平(P<0.01),进一步提高线粒体自噬水平以及自噬相关因子的表达(P<0.01);相反的,OGD/R+3-MA组则进一步降低了细胞存活率以及线粒体膜电位水平(p<0.01),升高细胞内活性氧水平及细胞凋亡水平(P<0.01),降低线粒体自噬水平及自噬相关因子的表达水平(P<0.01)。在OGD/R+H2+3-MA组以及OGD/R+RAP+3-MA组中,相比于OGD/R+H2组以及OGD/R+RAP组,3-MA的加入降低了细胞存活率以及线粒体膜电位水平(P<0.01),升高细胞内活性氧水平及细胞凋亡水平(P<0.01),降低线粒体自噬水平及自噬相关因子的表达水平(P<0.01)。结论:氢气和雷帕霉素均能提高氧糖剥夺/再灌注损伤后海马神经元的细胞存活率以及线粒体膜电位水平,降低细胞凋亡及细胞内活性氧水平,诱导线粒体自噬及其相关基因和蛋白的表达,最终对神经元氧糖剥夺/再灌注损伤产生保护作用,并且它们的保护作用均能被3-甲基腺嘌呤所抑制。综上所述,我们的研究结果表明,H2通过保护线粒体功能稳态发挥对OGD/R损伤神经元的保护作用,其潜在的保护线粒体功能稳态的机制可能与诱导了PINK1/Parkin信号通路介导的线粒体自噬相关。(本文来源于《桂林医学院》期刊2019-06-01）
刘彦波,韩晓雨,王贤冬,马诗语,丛滨海[6]（2019）在《组织激肽释放酶1改善大鼠心脏缺血/再灌注损伤后线粒体功能障碍》一文中研究指出目的探讨组织激肽释放酶1(KLK1)对心脏缺血/再灌注损伤大鼠线粒体功能的影响及其机制。方法通过KLK1重组腺病毒感染实现大鼠心脏KLK1过表达,然后采用冠状动脉左前降支结扎和再灌注的方法建立大鼠心脏缺血/再灌注损伤模型,检测梗死区面积和心脏缺血危险区细胞凋亡情况;分离大鼠心脏缺血危险区心肌组织线粒体,检测线粒体功能(线粒体过氧化物生成量、线粒体膜电位、线粒体ATP生成量)。分离新生大鼠心肌细胞,通过KLK1重组腺病毒感染实现KLK1过表达,然后建立心肌细胞缺氧/复氧损伤模型,对心肌细胞缺氧/复氧损伤模型应用缓激肽1型受体(B1R)阻断剂R715或缓激肽2型受体(B2R)阻断剂HOE140处理,利用MTT法检测细胞活力,并观察线粒体功能的变化。结果在大鼠心脏缺血/再灌注损伤模型中,KLK1过表达能减轻心肌缺血/再灌注损伤,使心肌梗死区面积减小、缺血危险区细胞凋亡减少(P均<0.01);改善心脏缺血/再灌注损伤后线粒体功能障碍,降低过氧化物生成量、增加线粒体膜电位和线粒体ATP生成量(P均<0.01)。在离体大鼠心肌细胞缺氧/复氧模型中,KLK1过表达能减轻心肌细胞损伤(P<0.05)、改善线粒体功能障碍(P<0.05,P<0.01),并且其作用可被B2R阻断剂HOE140抑制。结论 KLK1能改善心脏缺血/再灌注损伤后线粒体功能障碍,这可能是其具有心脏保护作用的重要机制。(本文来源于《第二军医大学学报》期刊2019年05期）
奚望[7]（2019）在《线粒体功能障碍介导内质网应激在心肌缺血再灌注损伤中对心肌细胞的功能影响及机制研究》一文中研究指出一、研究背景心肌缺血再灌注(ischemia/reperfusion,I/R)损伤是指缺血心肌恢复正常灌注后,细胞或者组织的结构损伤和功能障碍反而呈进行性加重的病理生理现象,在心内直视手术、冠状动脉搭桥术、冠状动脉腔内成形术以及溶栓术后等发生率极高。I/R可导致严重的并发症,甚至会引发恶性心律失常而导致猝死,是影响临床疗效的重要因素,其发生、发展的机制以及如何有效地预防或改善心肌I/R损伤,一直都是心血管基础和临床研究的热点和焦点。针对心肌I/R损伤发生机制的研究进行了数十年,但由于高仿真模拟临床心肌缺氧/复氧(hypoxia/reoxygenation,H/R)细胞模型构建存在困难,且涉及通路和信号分子复杂等原因,导致其真正的原因和机制尚未完全阐明。目前认为主要与心肌细胞内活性氧簇(reactive oxygen species,ROS)过量产生、钙离子超负荷(calcium overload)、炎症细胞活化及能量代谢障碍有关。且越来越多证据表明线粒体功能异常和内质网应激(endoplasmic reticulum stress,ERS)在心肌I/R损伤中扮演了重要角色,但现有研究多聚焦于ERS介导的凋亡通路,对于存活细胞的舒缩功能、细胞内[Ca~(2+)]_(cyt)浓度及钙敏感性改变等研究较少。本研究通过构建高度模拟临床心肌I/R损伤的原代分离成年大鼠心肌细胞H/R模型,观察H/R过程中存活心肌细胞舒缩功能、细胞内[Ca~(2+)]_(cyt)浓度及钙敏感性的变化,明确线粒体结构和功能的改变情况,并通过采用ROS清除剂等线粒体保护措施,研究其对ERS通路的激活和存活心肌细胞结构和功能的影响,探索其中可能存在的分子机制及通路,从而为临床心肌I/R损伤的预防和治疗提供理论依据和循证医学证据。二、研究目的(一)明确H/R过程中,心肌细胞收缩功能、细胞内[Ca~(2+)]_(cyt)浓度以及钙敏感性的变化并探讨可能存在的机制;(二)明确H/R过程中,线粒体结构和功能的改变情况并探究有效的保护方案;(叁)明确H/R过程中,通过保护线粒体的结构和功能对ERS通路激活以及心肌细胞结构和功能影响并探讨可能存在的机制。叁、研究方法(一)原代分离成年大鼠心肌细胞H/R模型的构建研究采用Langendorff离体心脏灌流系统分离原代的成年大鼠心肌细胞,随机分为对照组(CTL组)和缺氧/复氧(H/R组),利用Mayo Clinic构建的气液混合瓶和流量控制泵系统,动态调控细胞培养皿所在腔室内气体和灌注液氧浓度。CTL组持续灌注37℃正常氧浓度含葡萄糖的1.8 mmol/L Ca~(2+)Tyrode溶液;H/R组首先在低氧环境中灌注37℃低氧浓度不含葡萄糖的1.8 mmol/L Ca~(2+)Tyrode溶液30 min,之后在正常氧浓度环境中恢复灌注37℃正常氧浓度含葡萄糖的1.8 mmol/L Ca~(2+)Tyrode溶液120min,用来模拟心肌细胞H/R的过程。利用IonOptix系统、激光扫描共聚焦荧光显微镜(laser scanning confocal microscopy,LSCM)、免疫荧光法、氧浓度测定探针及细胞内氧含量测定试剂盒等,对原代分离的成年大鼠心肌细胞的纯度以及模型构建可靠性等进行研究和验证。利用台盼蓝染色、IonOptix系统、倒置相差显微镜、激光扫描共聚焦荧光显微镜(laser scanning confocal microscopy,LSCM)以及fura-2 AM荧光标记法等,观测存活心肌细胞的存活率以及形态学改变,同时动态监测候选细胞的收缩舒张功能以及细胞内的[Ca~(2+)]_(cyt)浓度变化,前者包括心肌细胞肌节静息长度(sarcomere resting length,SRL)、肌节收缩长度(sarcomere shortening length,SSL)、收缩速度和舒张速度等指标,后者包括[Ca~(2+)]_(cyt)浓度基础值、峰值、钙敏感性等指标,从而明确H/R过程中心肌细胞功能的改变。同时,利用免疫荧光法,测定H/R对存活的大鼠心肌细胞内总心肌肌钙蛋白I(cardiac troponin I,cTnI)及磷酸化cTnI(p-cTnI)的表达影响,探讨心肌细胞功能改变可能存在的分子生物学机制。(二)H/R对心肌细胞线粒体形态和功能影响的研究实验细胞随机分为CTL组、H/R组、缺氧复氧+SDH抑制剂丙二酸(Malonate)组(缺氧复氧前加入SDH抑制剂Malonate 5 mmol/L孵育30 min)以及缺氧复氧+ROS清除剂(TEMPO)组(缺氧复氧前加入ROS清除剂TEMPO 1 mmol/L孵育30 min),展开线粒体结构和功能的检测,利用电子显微镜观察线粒体的结构变化,利用SDH试剂盒测定线粒体琥珀酸浓度以及SDH活性,并利用激光扫描共聚焦荧光显微镜检测线粒体ROS以及线粒体膜电位变化,利用Western blot测定线粒体动力相关蛋白1(dynamin-related protein 1,Drp1)和线粒体融合蛋白2(mitofusin-2,Mfn2)的表达情况,从而明确H/R损伤时存活心肌细胞线粒体形态和功能的变化。(叁)线粒体功能保护对ERS通路及心肌细胞结构功能影响的机制与防治研究实验细胞随机分为CTL组、H/R组以及TEMPO组,利用Western blot和Phos-tag技术,检测ERS的叁条主要通路——蛋白需要肌醇酶1?(inositol-requiring enzyme1?,IRE1?)-X盒结合蛋白1(X-box binding protein 1,XBP1)通路、蛋白激酶R样内质网激酶(protein kinase R-like ER kinase,PERK)-真核起始因子2?(eukaryotic initiation factor 2?,eIF2?)通路以及活性转录因子(activating transcription factor 6,ATF6)通路的激活情况,尤其是IRE1?和PERK的磷酸化水平,以及ATF6的剪切情况,从而明确保护线粒体对ERS通路的影响。同时,检测单个心肌细胞的舒缩功能、[Ca~(2+)]_(cyt)浓度、钙敏感性的改变以及细胞内cTnI的磷酸化水平的改变等,具体方法同前。四、研究结果(一)原代分离成年大鼠心肌细胞H/R模型的构建1、原代分离大鼠心肌细胞H/R模型构建可靠性测定根据氧浓度测定探针和细胞内氧含量测定试剂盒的结果,证实灌注液实际氧浓度以及细胞内氧浓度在模型构建中均达到预期标准,模型构建可靠。2、大鼠原代心肌细胞的纯度鉴定激光扫描共聚焦荧光显微镜下观察,可见被细胞核染剂4',6-二脒基-2-苯基吲哚(4',6-diamidino-2-phenylindole,DAPI)标记为蓝色的细胞核,对应的大多为强黄绿色荧光的细胞,提示细胞纯度较高,计算大鼠心肌细胞纯度为98.35±0.67%。3、原代分离大鼠心肌细胞的存活率测定台盼蓝(Trypan Blue)染色显示,缺氧30 min后,CTL组和H/R组细胞存活率分别为68.37±3.01%和63.63±2.87%(P=0.024),复氧120 min后,存活率分别为62.35±3.16%和51.84±3.92%(P<0.01);提示缺氧过程会造成细胞损伤,降低心肌细胞存活率,而复氧过程可加重细胞的损伤程度,细胞存活率随复氧时间增加进一步降低,提示出现H/R损伤。4、大鼠原代心肌细胞的形态学观察分离后的原代大鼠心肌细胞成短柱状、形态完整、立体感强、折光性好,长宽比为4~6:1,细胞横纹清晰,无电刺激条件下,1/3心肌细胞出现低频率(0.2Hz)的收缩,与人类心肌细胞不同,大鼠心肌细胞约80%为双核细胞,20%为单核。5、单个心肌细胞肌节长度(sarcomere length,SL)收缩舒张的变化情况与CTL相比,缺氧、复氧两个阶段,H/R组肌节静息长度(sarcomere resting length,SRL)变化均无统计学意义(P=0.916,P=0.976);H/R组肌节收缩长度(sarcomere shortening length,SSL)在缺氧30 min后缩短(P<0.01),复氧120 min,SSL较缺氧时进一步缩短(P=0.017),提示心肌收缩力减弱;收缩速度和舒张速度方面,缺氧30 min,H/R组收缩和舒张速度较CTL组均减慢(P=0.031,P=0.036),复氧120min后,H/R组收缩和舒张速度进一步减慢(P=0.022,P=0.017)。6、心肌细胞内[Ca~(2+)]_(cyt)浓度、钙敏感性的变化情况缺氧30 min,H/R组较CTL组[Ca~(2+)]_(cyt)浓度基础值和峰值均升高(P=0.034,P=0.040),在复氧120 min后,与CTL组相比,H/R组[Ca~(2+)]_(cyt)浓度基础值和峰值进一步升高(P<0.01,P<0.01),提示细胞内出现了钙超载。通过Phase-loop钙敏感性图可见,H/R组在缺氧30 min后曲线右移,钙敏感性下降,在复氧120 min后,H/R组钙敏感性进一步下降,提示虽然细胞内[Ca~(2+)]_(cyt)浓度进一步升高,但产生的收缩力反而减小。7、心肌细胞内总cTnI及磷酸化cTnI的变化情况免疫荧光法显示,H/R组p-cTnI/total-cTnI在缺氧30 min以及复氧120 min较初始磷酸化水平均升高(P<0.01,P<0.01),且复氧120 min时,p-cTnI/total-cTnI比值较缺氧阶段进一步升高(P=0.041)。提示H/R过程中,细胞内cTnI磷酸化水平升高。(二)H/R对心肌细胞线粒体形态和功能影响的研究1、电镜下线粒体的结构改变电镜下CTL组可见大量线粒体围绕在内质网附近,线粒体膜和嵴的结构清晰完整,未见分裂线粒体;H/R组可见大量线粒体处于分裂中,线粒体膜结构不完整、线粒体嵴消失,提示异常分裂增强;TEMPO组可见80%以上线粒体结构完整,只有约10%处于分裂状态,提示清除ROS能有效维持线粒体结构的稳定。2、线粒体分裂/融合相关蛋白表达情况Western blot结果显示,缺氧复氧后H/R组心肌细胞Drp1表达较CTL组增加(P<0.01),而Mfn2表达量降低(P<0.01),加入ROS的清除剂TEMPO后,这一趋势得到明显改善(P=0.041,P<0.01)。提示ROS可诱导Drp1激活以及降低Mfn2表达,从而促进线粒体分裂,促进更多ROS产生的同时加重钙负荷,导致线粒体功能障碍,形成恶性循环。3、琥珀酸浓度及SDH活性变化情况SDH试剂盒测定结果显示,与CTL组相比,缺氧30 min后H/R组琥珀酸浓度升高(P<0.01),H/R组复氧120 min后SDH活性高于CTL组(P<0.01)。4、线粒体ROS水平变化情况MitoSox选择性检测线粒体ROS水平,并使用H_2O_2进行校准后显示,缺氧复氧后,H/R组ROS水平较CTL组升高(P<0.01),而加入SDH抑制剂TEMPO后ROS降低(P=0.034),提示SDH活性与ROS产生密切相关,SDH活性升高可能是线粒体功能障碍的起始原因之一。5、线粒体膜电位变化情况TMRM定量检测显示,缺氧复氧时H/R组心肌细胞线粒体膜电位(mitochondrial membrane potential,ΔΨm)较CTL组降低(P<0.01),而加入ROS的清除剂TEMPO后可改善膜电位的降低(P=0.029),提示ROS可通过降低ΔΨm影响线粒体功能。6、线粒体膜ATP合成变化情况ATP试剂盒检测显示,缺氧复氧时H/R组ATP水平较CTL组下降(P<0.01),而加入TEMPO后可缓解这一变化(P=0.026),提示ROS可通过降低ATP水平影响线粒体功能。(叁)线粒体功能保护对ERS通路及心肌细胞结构功能影响的机制与防治研究1、IRE1α-XBP1通路激活情况Western blot结果显示,与CTL组相比,缺氧复氧后H/R组p-IRE1α的表达升高(P<0.01),其下游的未剪切XBP1(unsplcing XBP1,uXBP1)表达无统计学意义(P=0.874),而剪切XBP1(splcing XBP1,sXBP1)的表达升高(P<0.01),提示IRE1α-XBP1通路被激活;而与H/R组相比,TEMPO组能有效降低p-IRE1α以及sXBP1的表达(P<0.01,P=0.032)。2、PERK-eIF2α通路激活情况Western blot和Phos-tag结果显示,缺氧复氧后H/R组的PERK、p-PERK表达较CTL组均升高(P<0.01,P<0.01);其下游的磷酸化eIF2α(p-eIF2α)表达也升高(P<0.01),提示PERK-eIF2α通路被激活;而与H/R组相比,TEMPO组能有效降低PERK和其磷酸化水平(P<0.01,P=0.026),同时降低下游p-eIF2α表达(P=0.029)。3、ATF6通路激活情况Western blot结果显示,缺氧复氧后H/R组具有活性的ATF6 p50片段的表达水平较CTL组升高(P<0.01),非活性片段ATF6 p90表达无统计学差异(P=0.935),提示ATF6通路被激活;而与H/R组相比,TEMPO组能有效降低活性片段ATF6 p50的表达水平(P=0.036)。4、心肌细胞舒缩功能、[Ca~(2+)]_(cyt)浓度、钙敏感性及cTnI磷酸化水平的变化情况IonOptix结果显示,与H/R组相比,应用ROS清除剂TEMPO后,能有效增强心肌细胞的肌节收缩长度(P<0.01),降低[Ca~(2+)]_(cyt)浓度基础值和峰值(P<0.01,P<0.01),增加心肌细胞的钙敏感性;免疫荧光结果显示,TEMPO组能有效降低细胞内cTnI磷酸化水平(P<0.01)。五、研究结论1、心肌细胞H/R过程中会出现细胞内钙超载,导致心肌细胞舒缩功能减弱和钙敏感性降低,其机制可能与cTnI的磷酸化水平升高有关;2、心肌细胞H/R过程中出现琥珀酸的缺血性蓄积,引发SDH活性的升高以及ROS的异常增加,从而导致线粒体结构和功能的障碍;3、H/R过程中,心肌细胞结构和功能改变的具体机制与线粒体功能障碍介导的ERS有关,使用ROS清除剂可维持线粒体的正常结构和功能,抑制ERS通路的过度激活,从而改善心肌细胞的结构和功能。(本文来源于《中国人民解放军海军军医大学》期刊2019-05-01）
陈世平[8]（2019）在《CVB-D抑制Ca~(2+)超载-线粒体功能障碍改善醛固酮诱导乳鼠心肌细胞损伤的实验研究》一文中研究指出目的:研究醛固酮(ALD)诱导乳鼠心肌细胞(NRCMs)损伤过程中有关Ca~(2+)-线粒体功能障碍的调控机制。阐明环维黄杨星D(CVB-D)对ALD诱导NRCMs损伤的改善作用,探索其作用机制与抑制Ca~(2+)超载-线粒体功能障碍有关。方法:采用0.08%胰酶消化出生1-2 d的SD大鼠心脏组织,经1.5 h差速贴壁后获取NRCMs进行原代培养,用5-Brdu抑制非心肌细胞增殖。应用显微镜观察NRCMs生长状态并拍照记录细胞形态的变化;采用免疫细胞化学法观察心肌细胞的特异性标记物心肌肌钙蛋白(cTnT)表达的细胞数并计算细胞纯度。采用溴化噻唑蓝四氮唑(MTT)法测定ALD诱导心肌细胞损伤的最佳浓度-效应和时间-效应,与此同时测定不同浓度的CVB-D、螺内酯(Spiro)、钙螯合剂(BAPTA-AM)和米酵菌酸(BA)对ALD诱导NRCMs损伤的影响;实验共分8组,对照组(Control,无血清DMEM),ALD组(ALD 10μM),Sprio组(Sprio 0.1μM+ALD 10μM),CVB-D低剂量组(CVB-D 0.1μM+ALD 10μM),CVB-D高剂量组(CVB-D 0.5μM+ALD 10μM),BA组(BA 0.5μM+ALD 10μM),BAPTA-AM组(BAPTA-AM0.05μM+ALD 10μM),CVB H+BAPTA-AM组(CVB-D 0.5μM+BAPTA-AM0.05μM+ALD 10μM)。Annexin V-FITC/PI检测NRCMs凋亡情况;采用Giemsa染色观察NRCMs病理形态学改变;采用相应试剂盒测定NRCMs内GSH与MDA的含量、SOD与ATPase的活性以及LDH的胞外活性;荧光探针Flou-3AM、JC-1、DCFH-DA分别检测细胞内Ca~(2+)浓度、线粒体膜电位(ΔΨm)、活性氧(ROS)水平;Calcein-AM/CoCl2检测线粒体膜通透性转换孔(mPTP)开放情况;Western blot检测细胞凋亡相关蛋白Bcl_2和Bax的表达、线粒体融合与分裂相关蛋白Drp1和Mfn1的表达、自噬通路相关蛋白LC3-I/LC3-II和P62的表达。结果:分离纯化获得的NRCMs在原代培养72 h后,细胞成簇并同步搏动。免疫细胞化学法鉴定NRCMs纯度为95%以上。MTT法和Annexin V-FITC/PI法的结果显示,ALD作用NRCMs 24 h后,细胞存活率显着降低,而CVB-D和螺内酯预处理之后,细胞存活率增加。细胞LDH外漏量的检测结果显示,ALD作用NRCMs 24 h后,细胞内LDH外漏量增加,而CVB-D显着降低细胞内LDH的外漏。Giemsa染色结果显示,ALD可诱导NRCMs产生核固缩,核周围有空泡等病理形态的改变;而CVB-D和Spiro可以显着改善ALD诱导的病理形态的改变。Western blot实验结果证实,ALD作用NRCMs 24 h后,Bcl_2/Bax的比值显着降低;CVB-D和螺内酯预处理后,Bcl2/Bax的比值显着增加。荧光探针Flou-3AM、JC-1和DCFH-DA检测结果显示,ALD显着增加NRCM细胞中的Ca~(2+)浓度和ROS水平,显着降低线粒体膜电位;而CVB-D、Spiro和BAPTA-AM显着改善ALD诱导的Ca~(2+)超载、ROS水平增加和线粒体膜电位降低,并且CVB-D与BAPTA-AM的联用对ALD诱导ROS水平增加和线粒体膜电位降低的影响与的BAPTA-AM结果无差异性。不同试剂盒测定的结果显示,与Control组比较,ALD组的MDA含量显着增加,SOD活性、GSH含量和ATP活性显着减低;而CVB-D和Spiro不同程度改善ALD诱导细胞内GSH与MDA含量、SOD与ATPase活性的变化;BAPTA-AM对ALD诱导细胞内ATPase活性减低的影响与CVB-D和Spiro的结果类似。Calcein-AM/CoCl_2检测结果证实,ALD作用于NRCMs 24 h后,引起大量的mPTP开放;而CVB-D、Spiro和BAPTA-AM显着抑制mPTP开放,且CVB-D与BAPTA-AM联用组对ALD诱导mPTP开放的影响与BAPTA-AM组无显着性差异。Western blot实验结果表明,ALD作用NRCMs 24 h后,细胞内Drp1显着上调,Mfn1显着下调,P62显着上调,LC3-I/LC-3II的比值显着增加;而与ALD组相比,CVB-D、Spiro和BAPTA-AM显着下调Drp1,显着上调Mfn1,显着下调P62,显着降低LC3-I/LC-3II的比值,且CVB-D与BAPTA-AM的联用对ALD诱导Drp1表达量,Mfn1表达量,P62表达量,LC3-I/LC-3II比值的影响与BAPTA-AM结果无显着性差异。结论:ALD可诱导NRCMs损伤,其调控机制与Ca~(2+)超载介导线粒体功能障碍有关。CVB-D通过抑制Ca~(2+)超载-线粒体功能障碍信号通路改善ALD诱导NRCMs损伤作用。(本文来源于《贵州医科大学》期刊2019-05-01）
罗诗雨[9]（2019）在《UCP2过表达对脓毒症心肌损伤线粒体动力学影响及心肌线粒体功能的保护》一文中研究指出目的:本实验通过构建大鼠脓毒症心肌损伤模型,探究心肌线粒体UCP2过表达对脓毒症心肌线粒体动力学(Drp1、Opal、Fis1蛋白表达水平)及线粒体功能的影响,从在体心肌线粒体水平探讨UCP2过表达对脓毒症心肌损伤潜在的保护机制。方法:40只SD雄性大鼠,按随机分为4组:Control组(假CLP组)、Sham组(假转染手术组)、AAV组(单纯腺相关病毒转染组)、UCP2组(UCP2过表达组)。通过盲肠结扎穿孔建立脓毒症心肌损伤大鼠模型,用超声心动图检测大鼠心脏功能、Elisa检测大鼠心肌损伤相关指标以鉴定脓毒症心肌损伤模型。用UCP2腺相关病毒感染SD大鼠心肌,Western blot检测心脏组织中UCP2的表达变化,荧光显微镜观察UCP2组转染情况。电镜观察心肌线粒体超微结构,DHE检测ROS的产生,ATP试剂盒检测ATP的产生。Western blot检测心肌组织中Drp1、Opa1、Fis1相关蛋白表达。结果:1.建立CLP模型后,LVAWd、LVAWs、LVPWd、LVPWs、LVEF、LVFS明显升高(P<0.05)。LVIDd、LVIDs、LVESV、LVEDV明显降低(P<0.05)。血清IL-6、TNF-α、CK、CTn-I、LDH水平明显上升(P<0.05),且大鼠出现明显脓毒症症状,脓毒症心肌损伤模型建立成功。2.UCP2组UCP2蛋白水平明显高于其余叁组(P<0.05),且能观察到绿色荧光,UCP2过表达模型建立成功。3.UCP2组较Sham组和AAV组LVAWs、LVEF、LVFS显着降低(P<0.05),LVIDs、LVESV上升(P<0.05),血清IL-6、TNF-α、CK、CTn-I、LDH水平明显降低(P<0.05),且线粒体超微结构明显改善,ROS产生显着减少(P<0.05),ATP生成增加(P<0.05)。4.Control组、Sham组、AAV组及UCP2组心肌组织样本中Opa1、Fis1蛋白表达水平无明显差异(P>0.05)。建立CLP模型后,Sham组和AAV组Drp1蛋白表达水平较Control组显着上升(P<0.05),但当UCP2过表达后,心肌组织中Drp1表达水平均较Sham组、AAV组降低(P<0.05)。结论:1.UCP2过表达能在一定程度上改善脓毒症心肌收缩功能异常;2.UCP2过表达能改善脓毒症心肌损伤线粒体功能障碍。3.UCP2过表达使ROS生成减少,降低Drp1蛋白的表达,通过抑制线粒体分裂,进而调控线粒体动力学,改善线粒体功能,发挥心肌保护的作用。(本文来源于《遵义医科大学》期刊2019-05-01）
龚哲,彭英[10]（2019）在《线粒体功能损伤在NOD样受体家族蛋白3炎症体激活中的调控机制》一文中研究指出NOD样受体家族蛋白3(NLRP3)炎症体的激活多由各种外源性或内源性刺激产生,进一步激活caspase-1,促使IL-1β和IL-18的成熟分化及分泌,从而引发炎症反应。激活过度的NLRP3炎症体可造成组织损伤及器官功能失调,甚至导致多种疾病。但目前对其激活机制的具体调控并不十分清楚。越来越多的证据表明,线粒体功能障碍与多种疾病中的NLRP3激活有关,且多作为上游激活因子提供ROS促使NLRP3寡聚化,并作为炎症体聚合的重要场所,或者乙酰化α-tubulin使线粒体位置靠近NLRP3。其分子机制多与K+外流及胞内失平衡有关。本文将着眼于NLRP3炎症体激活的机制以及线粒体功能障碍与其激活的相关研究。(本文来源于《国际神经病学神经外科学杂志》期刊2019年01期）
线粒体功能损伤论文开题报告
（1）论文研究背景及目的
此处内容要求：
首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景，再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题，并提出你的论文准备的观点或解决方法。
写法范例：
线粒体功能障碍是脑缺血再灌注(CIR)损伤的重要病理机制之一。CIR损伤中线粒体脂质过氧化、蛋白质结构和功能改变、氧化呼吸链的抑制、线粒体DNA受损、线粒体膜结构破坏、线粒体通透性转换孔(mPTP)的开放等引发的线粒体功能障碍与脑细胞死亡密切相关。近年来的研究显示,以线粒体为靶点的中药制剂可减轻CIR损伤及神经功能障碍。寻找改善线粒体功能障碍的中药制剂是目前缺血性脑卒中神经保护研究的热点。本文作者对CIR损伤中线粒体功能障碍的病理机制以及以线粒体为靶点的中药制剂的保护作用的研究进展进行综述,为缺血性脑卒中的治疗提供新的潜在靶点。
（2）本文研究方法
调查法：该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。
观察法：用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。
实验法：通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。
文献研究法：通过调查文献来获得资料，从而全面的、正确的了解掌握研究方法。
实证研究法：依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。
定性分析法：对研究对象进行“质”的方面的研究，这个方法需要计算的数据较少。
定量分析法：通过具体的数字，使人们对研究对象的认识进一步精确化。
跨学科研究法：运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。
功能分析法：这是社会科学用来分析社会现象的一种方法，从某一功能出发研究多个方面的影响。
模拟法：通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。
线粒体功能损伤论文参考文献
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[10].龚哲,彭英.线粒体功能损伤在NOD样受体家族蛋白3炎症体激活中的调控机制[J].国际神经病学神经外科学杂志.2019