导读:本文包含了原核表达质粒论文开题报告文献综述及选题提纲参考文献，主要关键词:细粒棘球蚴,EgG1Y162-1,2,原核表达
原核表达质粒论文文献综述
李玉娇,马海梅,丁剑冰[1]（2018）在《细粒棘球蚴EgG1Y162-1/2基因原核表达质粒的构建、表达及鉴定》一文中研究指出目的:克隆有T-B联合表位的细粒棘球蚴特异性蛋白抗原优势表位区段,在原核表达系统中表达重组蛋白,鉴定和分析表达产物。方法 :根据生物信息学方法预测出的优势表位EgG1Y162-1和EgG1Y162-2分子克隆构建两段区域的重组表达质粒pET32a(+)-egG1Y162-1和pET32a(+)-egG1Y162-2,转化大肠杆菌诱导表达蛋白,SDS-PAGE电泳法分析经亲和层析法纯化的蛋白。用纯化的蛋白免疫家兔获取多克隆抗体,ELISA法检测抗体效价,Westernblot方法进行血清学鉴定。结果 :EgG1Y162重组蛋白分为EgG1Y162-1(1-51aa)、EgG1Y162-2(52-120aa)两段,构建的EgG1Y162-1/2抗原优势表位区域的重组表达质粒pET32a(+)-EgG1Y162-1和pET32a(+)-EgG1Y162-2能够高效表达重组蛋白。表达的目的蛋白EgG1Y162-1、EgG1Y162-2分子量约为26.2kDa、28.1kDa。UVP扫描证实目的蛋白以可溶性蛋白的形式表达分别约占总蛋白的39%和43%。Western-blot显示EgG1Y162-1与感染包虫犬血清无明显反应,与感染人血清有微弱的反应,与阴性犬血清和阴性人血清均不反应。EgG1Y162-2与感染包虫人和感染包虫犬血清均有明显的免疫反应,与阴性犬血清和阴性人血清均不反应。获得EgG1Y162和EgG1Y162-1/2多克隆抗体,ELISA法检测了兔抗体效价水平,EgG1Y162为1:20480,EgG1Y162-1为1:5120,EgG1Y162-2为1:20480。结论 :构建的EgG1Y162-2刺激机体产生的免疫反应和抗体水平明显高于EgG1Y162-1。EgG1Y162中较强特异性的优势抗原表位可能分布在EgG1Y162-2片段中,这为精确地定位EgG1Y162抗原表位的氨基酸残基,构建高效的多表位疫苗奠定了基础。(本文来源于《第十叁届全国免疫学学术大会壁报交流集》期刊2018-11-07）
吴思思,蒋维[2]（2018）在《人生长分化因子11基因原核表达质粒的构建、表达及其蛋白的纯化》一文中研究指出目的构建及表达人生长分化因子11(growth differentiation factor 11,GDF11)基因原核表达质粒,并对重组表达蛋白进行纯化。方法 PCR法扩增人源GDF11 cDNA全长序列,插入至载体pCold-I,构建重组质粒pCold-GDF11,转化感受态Rosetta(DE3)菌株,经终浓度为0.5 mmol/L的IPTG诱导表达后,超声破碎获得GDF11包涵体,添加8 mol/L尿素溶解,与Ni~(2+)NTA Agarose充分混匀后装柱,用含谷胱甘肽(glutathione,GSH)和氧化型谷胱甘肽(oxidized glutathione,GSSG)的复性液进行复性,经含咪唑的洗脱液洗脱获得目的蛋白,进行Western blot检测。结果重组质粒pCold-GDF11经双酶切及测序鉴定,构建正确;诱导表达蛋白的相对分子质量约45 000,主要以包涵体形式存在;GDF11蛋白纯化产物纯度达85%以上,每升菌液获得2.5 mg的目的蛋白,且可与小鼠抗His单克隆抗体发生特异性结合。结论成功构建了GDF11基因原核表达质粒,且表达产物经纯化后可获得纯度较高的目的蛋白。(本文来源于《中国生物制品学杂志》期刊2018年07期）
叶百川[3]（2018）在《猪圆环病毒2型Cap标记蛋白原核表达质粒的构建》一文中研究指出猪圆环病毒2型(Porcine circovirus type 2,PCV2)属于圆环病毒科(Circoviridae)圆环病毒属(Circovirus),是一无囊膜的单股环状负链DNA病毒。PCV2与其他病原体混合感染猪只,对我国猪业养殖威胁巨大,疫苗免疫是防控PCV2的常规方法。市面上PCV2疫苗主要为灭活疫苗,该类疫苗对PCV2的防控起到了重要作用。但此类疫苗存在一定缺陷,例如无法诱导宿主产生细胞免疫,所产生的抗体无法野毒与抗体相区分,且价格颇高。因此研究安全、高效、廉价,通过相应配套的ELISA试剂盒能快速区分所产生的抗体为疫苗或野毒感染的亚单位疫苗意义重大。大肠杆菌源表达系统作为原核蛋白表达系统中最为成熟的表达系统代表,因其具有遗传背景单一、宿主菌增殖迅速、诱导手段简洁、蛋白表达量高、成本低廉等优点,在基因工程研究中被广泛选用。本研究拟应用原核表达系统对带有V5标签的PCV2 Cap蛋白进行表达。采用基因工程技术,将V5表位标签引入PCV2 ORF2基因的末端,并构建相应的原核表达载体。1、携带标记的pET32a(+)-PCV2-ORF2m-V5重组质粒的构建本研究首先应用在线软件对PCV2 GZ-RH1株的ORF2与大肠杆菌的密码子进行了比对分析。结果表明,PCV2 GZ-RH1株的ORF2在选择大肠杆菌表达系统进行外源表达时,稀有密码子出现频率较高,需进行密码子优化以提高表达效率。据此,人工合成了两端携带不同酶切位点,并在3'端引入了V5标签和更换部分稀有密码子的PCV2-ORF2m-V5 DNA片段。该合成基因经T克隆后,用酶切、质粒PCR和测序鉴定。提取pMD19-T-PCV2-ORF2m-V5质粒,经酶切后纯化回收PCV2-ORF2m-V5 DNA片段,将其亚克隆至pET32a(+)原核表达载体中,成功构建了pET32a(+)-PCV2-ORF2m-V5重组原核表达质粒。2、携带分子标记的PCV2 Cap-V5蛋白的原核表达实验将构建的pET32a(+)-PCV2-ORF2m-V5质粒转化至大肠杆菌BL21(DE3)后,利用Amp筛选转化后的阳性菌落并增菌培养,以1 mmol/L IPTG作为诱导剂,分别在37℃和16℃条件下,诱导菌液表达3 h。分别取未经IPTG诱导的转化菌和经诱导的转化菌进行处理后,经聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)和免疫印迹试验(Western-blotting)鉴定分析,结果显示重组标记蛋白质大小与预期结果相符,约为47.6 kDa,且主要以包涵体形式表达;使用His、V5单克隆抗体均能与Cap-V5蛋白结合,且反应原性良好;在其他条件相同的情况下,37℃诱导Cap-V5蛋白表达量高于16℃。本研究可为PCV2亚单位标记疫苗的前期研究和区分疫苗抗体与野毒抗体的ELISA方法建立奠定实验基础。(本文来源于《贵州大学》期刊2018-06-01）
徐先达[4]（2018）在《绵羊肺腺瘤病毒囊膜基因原核表达质粒构建及表达》一文中研究指出绵羊肺腺瘤病(Ovine Pulmonary Adenocarc-inoma,OPA)是由绵羊肺腺瘤病毒(jaagsiekte sheep retrovirus,JSRV)引起的一种慢性、渐进式、传染性羊肿瘤疾病。这种普遍的羊肺肿瘤疾病已在世界上许多国家出现,几乎所有养羊业发达的国家,包括我国黑龙江、内蒙古、新疆、山东都有该病的报道,严重影响世界范围内养羊业的发展~([74])。因此确诊该病对于控制和了解其分布具有重要的科学意义。由于OPA病羊体内检测不到循环抗体以及无法在体外建立病原的培养体系~([74]),常规的免疫学方法、病毒分离鉴定无法诊断。目前,实验室确诊该病主要利用PCR和免疫组织化学方法。本实验为实现免疫组织化学方法诊断该病进行了基础研究。首先根据Gen Bank上发表的绵羊肺腺瘤囊膜基因序列(登录号JQ837489.1)设计引物,对p EGFP-C1/ex JSRV-env质粒(ex JSRV-env与真核表达载体p EGFP-C1的重组质粒)进行PCR、酶切、测序比对,确定该重组质粒含有完整ex JSRV-env基因;然后以p EGFP-C1/ex JSRV-env质粒为模板扩增ex JSRV-env基因,构建绵羊肺腺瘤囊膜基因原核表达重组质粒命名为p ET-32a/ex JSRV-env,并对质粒双酶切鉴定和测序鉴定;将p ET-32a/ex JSRV-env重组质粒转化到E.coli Transetta(DE3),用IPTG诱导表达,并对IPTG诱导融合蛋白表达的浓度进行了优化,SDS-PAGE分析表达蛋白的可溶性情况;最后用Western Blot对融合蛋白进行鉴定。结果表明:双酶切p EGFP-C1/ex JSRV-env质粒出现约5500bp和2000bp大小的条带,p EGFP-C1/ex JSRV-env质粒测序结果与NCBI数据库比对序列一致,表明该质粒含有ex JSRV-env基因;双酶切p ET-32a/ex JSRV-env质粒出现约5900bp和1862bp大小的条带,p ET-32a/ex JSRV-env质粒测序结果与NCBI数据库比对序列一致,表明成功构建了p ET-32a/ex JSRV-env原核表达质粒;在IPTG诱导下p ET-32a/ex JSRV-env重组质粒在E.coli Transetta(DE3)中表达出89k Da大小蛋白,最优IPTG诱导浓度为0.5mmol/L;SDS-PAGE电泳显示融合蛋白主要出现在菌液破碎的沉淀中,以包涵体的形式表达;Western Blot鉴定证明IPTG诱导表达蛋白。该蛋白可以用于制备JSRV Env多克隆抗体,为实现免疫组织化学方法诊断OPA奠定了实验基础。(本文来源于《内蒙古农业大学》期刊2018-06-01）
李瑶[5]（2018）在《hTSHR蛋白原核表达质粒的构建与蛋白表达》一文中研究指出目的:构建hTSHR原核表达质粒,在大肠杆菌系统中表达来获得结构完整并具有一定免疫活性的hTSHR蛋白。方法:设计引物,利用PCR方法钓取目的基因,酶切pET-28a(+)质粒载体将其线性化,通过同源重组的方法定向连接目的基因和线性化载体,将连接成功的重组DNA分子转化细菌感受态细胞。阳性克隆进行菌落PCR鉴定,将PCR阳性的菌液进行测序与比对分析,与目的基因序列完全重合的的即为构建成功的hTSHR原核表达质粒。重组后的质粒pET-28a(+)-hTSHR转入大肠杆菌BL21(DE3)中,IPTG诱导重组蛋白表达,以TSHR抗体、His抗体以及Graves患者TRAb阳性血清为探针,用Western blotting鉴定融合蛋白表达情况及其免疫活性。10%SDS-PAGE电泳并考马斯亮蓝染色探讨表达条件及表达形式。结果:PCR扩增得到2366 bp的hTSHR cDNA片段,与预期长度相符。重组质粒于大肠杆菌BL21(DE3)中诱导表达后,用TSHR及His特异性抗体做探针,Western blotting证实融合蛋白在100 KD处有显着增强的特异性蛋白条带。表达的融合蛋白可与TRAb阳性患者血清特异性结合,证实有一定的免疫活性。IPTG最佳诱导浓度是0.5 mmol/L,诱导时间是3 h。大肠杆菌中表达的hTSHR蛋白以可溶性的状态存在。结论:本实验构建了pET-28a(+)-hTSHR原核表达质粒,并且在大肠杆菌中表达了hTSHR蛋白,该蛋白可与TRAb特异性结合。(本文来源于《兰州大学》期刊2018-03-01）
朱晓霞,张露萍,叶亚婷,严蓉蓉,代吕霞[6]（2018）在《P物质融合毒素的质粒构建及其原核表达》一文中研究指出目的构建pET-CTR-PS重组原核表达质粒,原核表达Cholix Toxin的毒性部位和P物质的融合蛋白,为探讨该融合蛋白对肿瘤细胞的靶向杀伤作用奠定基础。方法用PCR方法扩增Cholix Toxin的催化活性部分CTR,扩增后连入T载体构建T-CTR质粒。人工合成P物质双链寡核苷酸,将其插入pET32a中得到重组质粒pET-PS。将T-CTR和pET-PS分别经EcoRI和SacI双酶切后相接,构建得到重组质粒pET-CTR-PS。将测序正确的pET-CTR-PS重组质粒转化大肠杆菌BL21(DE3),表达融合蛋白,用12%SDS-PAGE和Western-blot方法鉴定重组蛋白CTR-PS的表达。结果测序表明,CTR-PS序列与预期一致。SDS-PAGE结果表明,重组蛋白在18℃经0.02mmol/L IPTG诱导20h后,获得高效表达,Western-blot鉴定正确。结论本研究成功构建了pETCTR-PS原核表达重组子,并获得了可溶性高表达。(本文来源于《成都医学院学报》期刊2018年01期）
唐翠连,陈浩,刘玖林,周洲[7]（2017）在《沙眼衣原体假定蛋白CT389原核表达质粒的构建及结构预测》一文中研究指出目的构建能表达沙眼衣原体(Chlamydia trachomatis,Ct)假定蛋白CT389的质粒pGEX6P-ct389及预测其结构。方法设计特异性引物,以Ct基因组为模板,PCR法扩增ct389基因,构建携带目的基因的重组质粒pGEX6Pct389;通过PCR鉴定和双酶切鉴定初筛,测序鉴定验证结果;比较ct389和tc0668基因序列及其编码产物的相似性,采用生物信息学预测CT389蛋白的二级结构和叁级结构。结果获得大小约为1 300 bp的ct389基因片段,并成功得到重组质粒pGEX6P-ct389。ct389和tc0668基因及其编码产物的相似性高达84%和92%,CT389蛋白α-螺旋、无规卷曲和β片层的含量分别为27.7%、49.26%和占23.04%。与其叁级结构最接近的是鼠疫耶尔森氏菌的纤溶酶原激活物。结论Ct389与tc0668基因从DNA到编码产物具有较高的相似性,ct389可能是重要的沙眼衣原体毒力基因。(本文来源于《中南医学科学杂志》期刊2017年04期）
夏瑜椰,徐倩,孙婷婷,方浩,刘蔚[8]（2017）在《马来丝虫肌球蛋白29表位基因真核表达质粒及原核表达蛋白免疫小鼠诱导的免疫应答》一文中研究指出目的观察马来丝虫肌球蛋白29(Brugia malayi myosin 29,Bm M29)表位基因真核表达质粒pc DNA3.1(+)-Bm M29和原核表达的纯化重组蛋白r Bm M29免疫小鼠诱导的免疫应答效果。方法在大肠埃希菌(Escherichia coli)BL21诱导表达重组蛋白r Bm M29,纯化后作为重组蛋白疫苗;纯化真核表达重组质粒pc DNA3.1(+)-Bm M29作为核酸疫苗。核酸疫苗免疫注射部位为小鼠后腿胫前肌,重组蛋白为皮下多点注射。60只BALB/c小鼠随机分为A、B、C、D、E组,每组12只,分别注射PBS(100μg)、pc DNA3.1(+)/Cp G(100μg/30μg)、pc DNA3.1(+)-Bm M29/Cp G(100μg/30μg)、r Bm M29/Cp G(50μg/30μg)、pc DNA3.1(+)-Bm M29/r Bm M29/Cp G(前2次注射pc DNA3.1(+)-Bm M29/Cp G 100μg/30μg,第3次注射r Bm M29/Cp G 50μg/30μg),共免疫3次,每次免疫间隔2周。初次免疫后第4、6、8周,眼球摘除法采血制备血清,ELISA法检测免疫小鼠血清特异性Ig G抗体效价。免疫第8周处死小鼠,制备脾细胞悬液培养48 h,ELISA检测培养上清中细胞因子γ干扰素(IFN-γ)、白细胞介素-4(IL-4)水平。结果 ELISA检测结果显示,A、B、C、D和E组小鼠初次免疫后第4周血清中抗体的吸光度(A490值)分别为0.038±0.050、0.053±0.009、0.360±0.035、0.456±0.025、0.370±0.025,第6周分别为0.045±0.003、0.045±0.005、0.510±0.018、0.548±0.010、0.552±0.018,第8周分别为0.041±0.004、0.044±0.009、0.606±0.047、0.674±0.042、0.770±0.041,C、D、E组均高于A、B组(P<0.05),第8周时,E组Ig G抗体的A490值高于C组和D组(P<0.05)。初次免疫后第8周,A至E组小鼠脾细胞培养上清中IFN-γ的水平分别为(47.72±8.94)、(50.43±2.81)、(304.78±8.42)、(242.28±5.99)、(426.52±6.76)pg/ml,C、D、E组均高于A、B组(P<0.05),E组高于C组和D组(P<0.05);小鼠脾细胞培养上清中IL-4的水平分别为(60.00±11.14)、(57.71±15.95)、(93.17±12.56)、(96.67±11.48)、(101.17±5.81)pg/ml,C、D、E组均高于A、B组(P<0.05)。结论 pc DNA3.1(+)-Bm M29核酸疫苗和r Bm M29重组蛋白均可诱导BALB/c小鼠产生特异性体液和细胞免疫应答,核酸疫苗与重组蛋白疫苗联合免疫效果更佳。(本文来源于《中国寄生虫学与寄生虫病杂志》期刊2017年01期）
喻备,黄媛,胡海峰,汪自力,杨进[9]（2017）在《原核表达重组质粒pUC57-CTP-PTEN的构建及鉴定》一文中研究指出目的:合成基因CTP及PTEN基因,构建其原核表达重组质粒pUC57-CTP-PTEN,为后续研究其功能做准备。方法:合成基因CTP-PTEN,将该基因定向克隆到原核表达载体pUC57中,构建pUC57-CTP-PTEN重组质粒,转化大肠杆菌DH5α菌株,抽提质粒进行双酶切、测序鉴定后,用Western blotting检验表达。结果:测序鉴定CTP-PTEN基因合成成功。经双酶切、测序鉴定证实重组质粒pUC57-CTP-PTEN成功转入DH5α,Western blotting检验pUC57-CTP-PTEN成功表达。结论:成功构建了重组质粒pUC57-CTP-PTEN,并在大肠杆菌DH5α中成功表达。(本文来源于《现代肿瘤医学》期刊2017年04期）
张青苗,王雯雯,张会勇,张光谋[10]（2016）在《分枝杆菌热休克蛋白65重组质粒的构建与原核表达》一文中研究指出目的研究分枝杆菌热休克蛋白65(HSP65)重组质粒的构建与原核表达。方法 HSP65的开放阅读框经聚合酶链反应(PCR)扩增后,经NcoⅠ与NotⅠ内切酶依次酶切,连接至酶切后的原核表达载体PET-28a中,然后将重组质粒转入大肠杆菌BL-21中,PCR筛选阳性克隆,并经DNA测序进一步验证。阳性克隆进一步扩大培养,并进行乳糖诱导,十二烷基磺酸钠聚丙烯酰胺凝胶电泳对菌体蛋白进行检测。结果成功扩增出1 623 bp的目的片段HSP65;测序结果显示,该片段与目的序列完全相符,重组子PET-28a/HSP65构建成功;乳糖诱导后的HSP65在大肠杆菌中实现高表达。结论分枝杆菌HSP65蛋白的成功表达,为研究其在抗肿瘤疫苗中的应用奠定了基础。(本文来源于《新乡医学院学报》期刊2016年12期）
原核表达质粒论文开题报告
（1）论文研究背景及目的
此处内容要求：
首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景，再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题，并提出你的论文准备的观点或解决方法。
写法范例：
目的构建及表达人生长分化因子11(growth differentiation factor 11,GDF11)基因原核表达质粒,并对重组表达蛋白进行纯化。方法 PCR法扩增人源GDF11 cDNA全长序列,插入至载体pCold-I,构建重组质粒pCold-GDF11,转化感受态Rosetta(DE3)菌株,经终浓度为0.5 mmol/L的IPTG诱导表达后,超声破碎获得GDF11包涵体,添加8 mol/L尿素溶解,与Ni~(2+)NTA Agarose充分混匀后装柱,用含谷胱甘肽(glutathione,GSH)和氧化型谷胱甘肽(oxidized glutathione,GSSG)的复性液进行复性,经含咪唑的洗脱液洗脱获得目的蛋白,进行Western blot检测。结果重组质粒pCold-GDF11经双酶切及测序鉴定,构建正确;诱导表达蛋白的相对分子质量约45 000,主要以包涵体形式存在;GDF11蛋白纯化产物纯度达85%以上,每升菌液获得2.5 mg的目的蛋白,且可与小鼠抗His单克隆抗体发生特异性结合。结论成功构建了GDF11基因原核表达质粒,且表达产物经纯化后可获得纯度较高的目的蛋白。
（2）本文研究方法
调查法：该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。
观察法：用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。
实验法：通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。
文献研究法：通过调查文献来获得资料，从而全面的、正确的了解掌握研究方法。
实证研究法：依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。
定性分析法：对研究对象进行“质”的方面的研究，这个方法需要计算的数据较少。
定量分析法：通过具体的数字，使人们对研究对象的认识进一步精确化。
跨学科研究法：运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。
功能分析法：这是社会科学用来分析社会现象的一种方法，从某一功能出发研究多个方面的影响。
模拟法：通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。
原核表达质粒论文参考文献
[1].李玉娇,马海梅,丁剑冰.细粒棘球蚴EgG1Y162-1/2基因原核表达质粒的构建、表达及鉴定[C].第十叁届全国免疫学学术大会壁报交流集.2018
[2].吴思思,蒋维.人生长分化因子11基因原核表达质粒的构建、表达及其蛋白的纯化[J].中国生物制品学杂志.2018
[3].叶百川.猪圆环病毒2型Cap标记蛋白原核表达质粒的构建[D].贵州大学.2018
[4].徐先达.绵羊肺腺瘤病毒囊膜基因原核表达质粒构建及表达[D].内蒙古农业大学.2018
[5].李瑶.hTSHR蛋白原核表达质粒的构建与蛋白表达[D].兰州大学.2018
[6].朱晓霞,张露萍,叶亚婷,严蓉蓉,代吕霞.P物质融合毒素的质粒构建及其原核表达[J].成都医学院学报.2018
[7].唐翠连,陈浩,刘玖林,周洲.沙眼衣原体假定蛋白CT389原核表达质粒的构建及结构预测[J].中南医学科学杂志.2017
[8].夏瑜椰,徐倩,孙婷婷,方浩,刘蔚.马来丝虫肌球蛋白29表位基因真核表达质粒及原核表达蛋白免疫小鼠诱导的免疫应答[J].中国寄生虫学与寄生虫病杂志.2017
[9].喻备,黄媛,胡海峰,汪自力,杨进.原核表达重组质粒pUC57-CTP-PTEN的构建及鉴定[J].现代肿瘤医学.2017
[10].张青苗,王雯雯,张会勇,张光谋.分枝杆菌热休克蛋白65重组质粒的构建与原核表达[J].新乡医学院学报.2016
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