导读:本文包含了嗅球前体细胞论文开题报告文献综述及选题提纲参考文献，主要关键词:内耳,CRP2,CRIP2,嗅球前体细胞
嗅球前体细胞论文文献综述
高雪[1]（2008）在《LIM蛋白CRP2及CRIP2在大鼠内耳的表达及在嗅球前体细胞中的分布》一文中研究指出多种疾病、感染、理化因素(噪声、毒物、耳毒性药物等)以及年龄等因素均可引起内耳毛细胞受到损伤,从而导致感音神经性聋。感音神经性聋是严重影响人们健康及生存质量的致残疾病,临床上尚无理想的治疗方法,目前关于感音神经性聋的防治研究已成为国际听力学和耳科学研究的热点和难点之一。耳蜗毛细胞作为声音的感受器将声刺激转化为神经冲动,对于听觉的产生有着不可替代的作用,鸟类和低等动物毛细胞具有较强的再生修复能力,而哺乳动物的毛细胞长期以来被人们认为是终末细胞。然而,近来研究发现哺乳动物毛细胞损伤后亦可通过其前体细胞增殖和分化进行部分修复,具有一定的再生修复能力。因此,诱导哺乳动物耳蜗毛细胞的再生和修复有望为治疗感音神经性耳聋开辟崭新的途径。LIM蛋白通过介导蛋白质-蛋白质相互作用,参与很多生物学功能,如细胞命运选择,细胞分化,细胞骨架形成等。因此,LIM蛋白可被看作是形成更高层次的蛋白质复合物的脚手架。CRP2和CRIP2分别由csrp2和crip2基因编码,CRP2蛋白包含了两个LIM结构域,它作为体内重要的转录因子,参与多种细胞的增殖分化,促进细胞进入有丝分裂,它对于细胞功能的维持也发挥着非常重要的作用。CRIP2是2003年新发现的LIM蛋白,它与CRP2蛋白的空间结构较为相似,均含有两个LIM结构域,但是与CRP2相比,它无明确的核定位序列,因此,它大部分在胞浆中表达,胞核中表达缺乏或很少。CRP2与CRIP2在蛋白水平上有42%的相似性。尽管,研究显示LIM蛋白在细胞增殖分化中发挥着非常重要的作用,目前还没有关于CRP2和CRIP2在内耳表达的报道。实验目的:本实验以LIM蛋白CRP2及CRIP2为研究对象,制备了特异性多克隆抗体,分析了它们在大鼠内耳及嗅球前体细胞中的表达及分布情况,并且从细胞水平观察了细菌脂多糖刺激后CRIP2的表达变化。为进一步研究CRP2及CRIP2在内耳发育及毛细胞再生中的作用奠定基础。实验方法和结果:1.CRP2及CRIP2原核表达载体的构建及多克隆抗体的制备根据GenBank公布的大鼠CRP2 (NM_177425)、CRIP2 (NM_022501)全长cDNA序列,借助计算机软件Primer Premier5.0、Oligo6.5设计了含有不同酶切位点的8条引物。采用RT-PCR技术从大鼠主动脉组织中提取总cDNA并扩增出相应大小的目的片段。将不同的目的基因片段分别克隆入载体pGEM-T-easy中进行测序,结果与GenBank报道的完全一致。将测序正确的csrp2、crip2按照BamHI和HindIII酶切位点克隆入原核表达载体pRSET-A中,将连接产物转化入E.coli BL21,挑出阳性克隆,IPTG诱导表达重组的6×His融合蛋白。SDS-PAGE分析的结果表明成功地表达出了相应的2种融合蛋白;用6×His的单克隆抗体进行Western Blot分析的结果也显示在相应条带处有特异性的阳性反应,其分子量与各自蛋白的预计大小相符。随后采用Ni-NTA亲和色谱柱纯化得到了2种融合蛋白,定量后保存于-20℃。采用获得的融合蛋白作为免疫原,常规免疫家兔及Bab/c小鼠制备特异性多克隆抗体。ELISA法检测制备抗体效价为1:3200至1:6400。Western Blot结果显示两株抗体可分别特异性识别CRP2及CRIP2融合蛋白。为了进一步鉴定抗体的特异性,我们将csrp2及crip2 DNA片段测序正确后克隆入真核表达载体pcDNA 3.1(-),重组质粒酶切鉴定正确后以阳离子聚合物转染Cos-7细胞,分别以RT-PCR方法检测mRNA表达和间接免疫荧光技术检测目的蛋白的表达。结果证明csrp2及crip2可在Cos-7细胞中表达,采用制备抗体可以特异性结合内源性CRP2及CRIP2蛋白。2.CRP2及CRIP2在内耳的表达及分布2.1 RT-PCR分析mRNA表达将实验大鼠按照年龄分组,时间点选为大鼠内耳发育成熟的重要时间,分别为胚胎15天(E15),出生后1天(P1)、3天(P3)、6天(P6)、9天(P9)以及25 d(P25)。分别取材后提取总RNA,随后进行反转录,获得模板cDNA,PCR扩增csrp2及crip2基因片段,对结果进行观察,用SPSS11.0对实验数据进行分析。结果表明CRP2 mRNA的表达只存在于E15胚胎大鼠内耳,出生后CRP2的表达消失。CRIP2 mRNA则具有不同的表达模式,出生前和出生后各时间点均有表达,并且表达水平相对稳定,各组间无明显差别。2.2 Western Blot分析蛋白表达为了检测CRP2及CRIP2蛋白在内耳的表达,采用制备的兔源性多抗作为一抗进行Western Blot分析,结果与RT-PCR结果相似,CRP2蛋白的表达只存在于E15胚胎大鼠内耳,出生后该蛋白的表达消失。CRIP2蛋白则具有不同的表达模式,出生前和出生后各时间点均有表达,并且表达水平相对稳定,各组间无明显差别。2.3 CRP2及CRIP2在内耳的分布研究因为CRP2蛋白在大鼠出生后内耳中无表达,因此我们研究了CRIP2在成熟大鼠内耳的分布情况,免疫组化分析显示CRIP2蛋白在耳蜗的基底膜、血管纹、螺旋神经节细胞中均有表达。3.LPS上调体外培养大鼠内耳血管纹边缘细胞中CRIP2的表达。我们首先采用免疫荧光法证实了CRIP2蛋白主要分布于MC的胞浆中。同时,我们发现所有CRIP2蛋白阳性的细胞均表达CK18,证实了血管纹表达CRIP2蛋白的细胞为MC。然后,我们采用不同浓度的LPS刺激体外培养的MC。结果显示:LPS可以上调体外培养的MC表达CRIP2蛋白,并且随着LPS浓度增加,CRIP2表达也相应增加。4.CRP2及CRIP2在大鼠嗅球神经前体细胞中的表达与定位我们利用制备的多抗检测了CRP2及CRIP2在大鼠嗅球神经前体细胞中的表达与定位,结果显示CRP2在未分化的嗅球神经前体细胞中有表达,并且在胞浆和胞核中都有分布。而CRIP2蛋白具有不同的表达及分布模式,它在分化前和和分化后的嗅球前体细胞中均有表达,只分布于胞浆,胞核中未发现表达。结论:LIM蛋白CRP2、CRIP2蛋白均在内耳中有表达,但表达模式不同。CRP2蛋白只在出生前大鼠内耳中有表达,而出生后则消失,提示该蛋白有可能参与了内耳的发育,而CRIP2在内耳发育、成熟中表达稳定,提示其与内耳的功能成熟有关,并且可能参与了G-感染所引起的内耳免疫反应。为了进一步鉴定CRP2、CRIP2蛋白的生物学特性,我们检测了它们在嗅球前体细胞中的表达,发现在具有增殖能力的嗅球前体细胞内CRP2及CRIP2的表达均为阳性,而分化后的细胞中只能检测到CRIP2的表达。结果显示CRP2蛋白可能参与了细胞的增殖;CRIP2可能与细胞的某些基本生理功能相关。本试验为研究LIM蛋白在内耳发育成熟中的作用奠定了一定的基础。(本文来源于《第四军医大学》期刊2008-04-01）
林颖[2]（2008）在《体外共培养诱导嗅球神经前体细胞分化为功能性外周神经元》一文中研究指出目的听觉神经系统损伤后的修复是临床亟待解决的问题之一。近几年的研究寄希望于将外源性多潜能细胞移植到内耳并替代受损的听感觉上皮和听神经元的功能。尽管不同来源的移植细胞在被移植动物的内耳可以部分存活,我们对它们的功能却一无所知。我们尝试在体外模拟内耳微环境,检测嗅球来源神经前体细胞在体外分化进程中能否发育为较成熟的神经元,拥有一定的功能。方法培养嗅球神经前体细胞取自孕14-16d胚胎大鼠,有限稀释法传代并免疫荧光染色鉴定神经干细胞及其分化潜能。将嗅球来源神经前体细胞与新生大鼠耳蜗细胞悬液共同培养,应用免疫组织化学、膜片钳技术、RT-PCR、钙测定等技术检测嗅球来源NPCs在体外分化细胞的形态学、分子生物学、生理学特性,并与听感觉神经元——螺旋神经节细胞进行比较。结果虽然经诱导分化得到的神经元样细胞、毛细胞样细胞的比例仍然不够高,但是这些细胞已显示对外周神经元标志物、毛细胞标志物免疫组织化学染色阳性。RT-PCR提示外周感觉神经原特异的蛋白与转录因子的mRNA的表达。在共培养诱导分化条件下,细胞逐渐发育,并能在外加刺激下形成较成熟的动作电位。分化两周的神经元样细胞可以形成有一定功能的离子型的谷氨酸受体。结论本试验说明嗅球来源NPCs可以在体外转化为功能性的谷氨酸能外周神经元,可以成为耳聋细胞移植治疗的合适的供体细胞。(本文来源于《第四军医大学》期刊2008-04-01）
陈阳,刘顺利,陈福权,乔莉,卢连军[3]（2008）在《增强声环境中嗅球神经前体细胞在耳蜗核的迁移》一文中研究指出目的观察增强声环境中移植到大鼠耳蜗核的嗅球神经前体细胞的迁移特点,是否产生部位特异性的修复过程。方法培养嗅球神经前体细胞取自孕14-16d胚胎大鼠,荧光染色Hoechst33342标记后移植到成年大鼠的耳蜗核内侧缘。移植大鼠分为A、B两组,A组置于增强声环境,B组在正常环境中饲养。14d取材观察移植细胞的迁移和分化。结果A组移植细胞有沿听觉神经通路移动的趋势。免疫荧光技术观察到Hoechst33342和神经元核蛋白(NeuN)、谷氨酸阳性叁重标记的移植细胞。结论嗅球神经前体细胞移植耳蜗核短期存活良好,增强声刺激可能促进前体细胞在听觉系统的迁移。(本文来源于《中华耳科学杂志》期刊2008年01期）
陈阳[4]（2007）在《声刺激诱导大鼠嗅球神经前体细胞向耳蜗核迁移、分化的研究》一文中研究指出目的听觉神经系统损伤后的修复是临床亟待解决的问题之一。声刺激有可能诱导听觉系统特异性的修复过程。本课题对耳蜗核移植神经前体细胞的大鼠施加增强的声音刺激,以观察验证上述假设。方法培养嗅球神经前体细胞取自孕14-16d胚胎大鼠,有限稀释法传代并免疫荧光染色鉴定神经干细胞及其分化潜能。耳蜗核定位注射移植Hoechst 33342标记的神经前体细胞,术后将试验组的动物置于增强声环境。不同时间测定听性脑干反应和取材观察移植细胞的存活及分化。结果巢蛋白免疫反应阳性嗅球神经前体细胞在体外可以自我复制传代6月,达40代,并分化出神经元和神经胶质细胞。免疫荧光技术观察到移植后2周耳蜗核Hoechst33342和神经元特异性烯醇化酶(NSE)、胶质纤维酸性蛋白(GFAP)、谷氨酸阳性双重标记的移植细胞。增强声环境下标记的神经前体细胞表现出沿听神经根迁移运动的趋势。结论嗅球神经前体细胞移植耳蜗核短期存活良好,并且分化出的神经元表达听觉神经递质,有可能用于听神经损伤修复。(本文来源于《第四军医大学》期刊2007-05-01）
陈阳,陈福权,邱建华,刘顺利,米文娟[5]（2007）在《毒性损伤大鼠耳蜗核移植嗅球神经前体细胞的初步观察》一文中研究指出目的体外培养大鼠嗅球神经前体细胞,并移植到谷氨酸诱导损伤的耳蜗核,观察其生存、分化过程。方法嗅球神经前体细胞取自孕15d胚胎大鼠,免疫荧光染色鉴定。耳蜗核定位注射谷氨酸制成损伤模型。伤后7d移植标记的神经前体细胞,不同时间测定听性脑干反应并取材观察移植细胞的存活及分化。结果巢蛋白阳性的嗅球神经前体细胞在体外可自我复制传代,并分化出神经元和神经胶质细胞。谷氨酸损伤和前体细胞移植均造成听性脑干诱发反应(ABR)阈值升高,并有部分的恢复。免疫荧光技术发现耳蜗核中Hoechst33342分别和神经元特异性烯醇化酶(NSE)、胶质纤维酸性蛋白(GFAP)、谷氨酸双重标记的移植细胞。结论嗅球神经前体细胞移植耳蜗核短期存活良好,所分化出的神经元可表达听觉神经递质。(本文来源于《中华神经外科疾病研究杂志》期刊2007年01期）
嗅球前体细胞论文开题报告
（1）论文研究背景及目的
此处内容要求：
首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景，再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题，并提出你的论文准备的观点或解决方法。
写法范例：
目的听觉神经系统损伤后的修复是临床亟待解决的问题之一。近几年的研究寄希望于将外源性多潜能细胞移植到内耳并替代受损的听感觉上皮和听神经元的功能。尽管不同来源的移植细胞在被移植动物的内耳可以部分存活,我们对它们的功能却一无所知。我们尝试在体外模拟内耳微环境,检测嗅球来源神经前体细胞在体外分化进程中能否发育为较成熟的神经元,拥有一定的功能。方法培养嗅球神经前体细胞取自孕14-16d胚胎大鼠,有限稀释法传代并免疫荧光染色鉴定神经干细胞及其分化潜能。将嗅球来源神经前体细胞与新生大鼠耳蜗细胞悬液共同培养,应用免疫组织化学、膜片钳技术、RT-PCR、钙测定等技术检测嗅球来源NPCs在体外分化细胞的形态学、分子生物学、生理学特性,并与听感觉神经元——螺旋神经节细胞进行比较。结果虽然经诱导分化得到的神经元样细胞、毛细胞样细胞的比例仍然不够高,但是这些细胞已显示对外周神经元标志物、毛细胞标志物免疫组织化学染色阳性。RT-PCR提示外周感觉神经原特异的蛋白与转录因子的mRNA的表达。在共培养诱导分化条件下,细胞逐渐发育,并能在外加刺激下形成较成熟的动作电位。分化两周的神经元样细胞可以形成有一定功能的离子型的谷氨酸受体。结论本试验说明嗅球来源NPCs可以在体外转化为功能性的谷氨酸能外周神经元,可以成为耳聋细胞移植治疗的合适的供体细胞。
（2）本文研究方法
调查法：该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。
观察法：用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。
实验法：通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。
文献研究法：通过调查文献来获得资料，从而全面的、正确的了解掌握研究方法。
实证研究法：依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。
定性分析法：对研究对象进行“质”的方面的研究，这个方法需要计算的数据较少。
定量分析法：通过具体的数字，使人们对研究对象的认识进一步精确化。
跨学科研究法：运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。
功能分析法：这是社会科学用来分析社会现象的一种方法，从某一功能出发研究多个方面的影响。
模拟法：通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。
嗅球前体细胞论文参考文献
[1].高雪.LIM蛋白CRP2及CRIP2在大鼠内耳的表达及在嗅球前体细胞中的分布[D].第四军医大学.2008
[2].林颖.体外共培养诱导嗅球神经前体细胞分化为功能性外周神经元[D].第四军医大学.2008
[3].陈阳,刘顺利,陈福权,乔莉,卢连军.增强声环境中嗅球神经前体细胞在耳蜗核的迁移[J].中华耳科学杂志.2008
[4].陈阳.声刺激诱导大鼠嗅球神经前体细胞向耳蜗核迁移、分化的研究[D].第四军医大学.2007
[5].陈阳,陈福权,邱建华,刘顺利,米文娟.毒性损伤大鼠耳蜗核移植嗅球神经前体细胞的初步观察[J].中华神经外科疾病研究杂志.2007