导读:本文包含了犬细小病毒基因论文开题报告文献综述及选题提纲参考文献，主要关键词:犬细小病毒(CPV),基因工程抗体,共转染,HEK-293F细胞
犬细小病毒基因论文文献综述
李希辰,雷欢,李雪,石晶,殷玉和[1]（2019）在《一种犬细小病毒基因工程抗体的制备》一文中研究指出本研究旨在利用HEK-293细胞系制备鼠源犬细小病毒(canine parovirus,CPV)基因工程抗体并检测其生物活性。通过抗体亚型检测试剂盒检测CPV单克隆抗体亚型;采用间接ELISA检测CPV单克隆抗体的亲和力和特异性;经RACE-PCR获得CPV单克隆抗体的可变区序列,将可变区序列与鼠源抗体恒定区序列连接;分别构建真核表达载体pcDNA3.1(+)-L和pcDNA3.1(+)-H,将载体共转染HEK-293细胞,采用血凝抑制与中和试验的方法检测鼠源CPV基因工程抗体生物活性;采用HEK-293F细胞悬浮表达并用间接ELISA方法检测鼠源CPV基因工程抗体的表达量;用Protein A亲和层析柱纯化鼠源CPV基因工程抗体后进行SDS-PAGE鉴定;间接免疫荧光检测纯化后鼠源CPV基因工程抗体的活性。结果显示,CPV单克隆抗体亚型为IgG_(2b),亲和力常数6个Ka平均值为1.02×10~(11) L/mol,只与CPV VLPs发生反应。琼脂糖凝胶电泳结果显示,试验成功构建真核表达载体pcDNA3.1(+)-L和pcDNA3.1(+)-H;HEK-293和HEK-293F细胞培养上清液血抑效价分别为1∶2~4和1∶2~6,中和试验结果显示,HEK-293和HEK-293F细胞培养上清液中和效价分别为1∶152和1∶1 290;鼠源CPV基因工程抗体在HEK-293F细胞中的表达量为5.97 mg/L,SDS-PAGE分析在55和25 ku处出现条带,表明鼠源CPV基因工程抗体成功在HEK-293F细胞中表达并纯化。间接免疫荧光检测结果表明,纯化后鼠源CPV基因工程抗体具有良好的生物活性。本研究在HEK-293F细胞中成功表达具有中和活性、纯度较高的鼠源CPV基因工程抗体,为今后CPV基因工程抗体药物的研发奠定基础。(本文来源于《中国畜牧兽医》期刊2019年10期）
薛雨佳,宋彩玲,赵爽爽,李彤彤,王文静[2]（2019）在《抗猫细小病毒嵌合抗体基因在昆虫细胞中的表达与鉴定》一文中研究指出为降低单克隆抗体(MAb)在犬体内的免疫原性,本研究克隆了具有中和猫、犬细小病毒(FPV、CPV)活性的MAb (3EB)的轻、重链可变区基因及犬天然抗体(NAb)轻、重链恒定区基因,通过融合PCR获得鼠-犬嵌合抗体基因。构建能够表达嵌合抗体的重组质粒,经昆虫杆状病毒表达系统对重组嵌合抗体进行表达。SDS-PAGE和western blot试验显示鼠-犬嵌合抗体重链为55 ku、轻链为25 ku。间接免疫荧光试验显示该嵌合抗体能够与抗犬IgG和FPV特异性结合。上述结果表明,嵌合抗体保留了原MAb 3EB对病毒特异结合能力的基础上,将鼠源恒定区替换为犬源NAb的恒定区。病毒中和试验表明嵌合抗体保留了3EB对FPV、CPV的中和活性。本研究首次通过昆虫杆状病毒表达系统表达了抗FPV、CPV的嵌合抗体,降低了原MAb的免疫原性,对FPV、CPV病临床治疗用抗体药物的研制具有重要指导意义。(本文来源于《中国预防兽医学报》期刊2019年06期）
孙鑫鹏[3]（2019）在《犬细小病毒的分离鉴定及VP2基因的原核表达》一文中研究指出犬细小病毒病是由犬细小病毒(canine parvovirus,CPV)引起犬的一种高度接触性的烈性传染病,临床上主要表现为肠炎型和心肌炎型。该病广泛分布于世界各地,近年来,病发率呈现逐年上升的趋势,给养犬业带来了极大经济损失。VP2蛋白是CPV的主要结构蛋白,也是CPV的主要抗原决定簇。本研究从1只患有犬细小病毒病的病犬粪便中分离出1株CPV,对其进行鉴定和VP2基因的原核表达。根据GenBank公布的CPV基因序列设计1对用于鉴定CPV引物,目的片段大小为1755 bp;参考文献设计鉴别犬冠状病毒(CCV)、犬瘟热病毒(CDV)、犬副流感病毒(CPIV)的引物用于检测患病犬是否感染其他病毒;通过免疫荧光试验测定其半数细胞感染数量(TCID50)。结果显示用于鉴定CPV的引物扩增出的基因片段与预期大小相符;将目的基因与GenBank中收录的CPV-VP2基因进行遗传性与进化性分析,表明此基因与新CPV-2a型毒株GQ379042.1同源性最高,由此确定该株分离病毒为CPV,且为新2a亚型;其他病毒检测结果表明CCV、CDV、CPIV均为阴性;盲传5代时其TCID50为104.0/mL。将该株病毒的VP2基因连接至原核表达载体pET-32a,得到的重组表达质粒pET-32a-VP2,将鉴定正确的原核重组表达载体pET-32a-VP2转化至感受态细胞E.coli BL21(DE3)进行诱导表达。结果表明:目的蛋白的表达形式为包涵体沉淀,大小约为87kDa;对诱导条件进行摸索,当IPTG浓度为1 mM、诱导时间为4h、诱导温度为32℃时,蛋白的表达量最大;经Western blot鉴定,证明表达出的VP2蛋白具有反应原性。(本文来源于《宁夏大学》期刊2019-05-01）
尹柏双,赵翠青,刘立明,沙万里,李国江[4]（2019）在《广西猪细小病毒6型VP1基因序列进化分析》一文中研究指出为研究广西地区是否存在猪细小病毒6型(PPV6)毒株流行,分析PPV6毒株遗传进化和分子特征,采用PCR技术对广西地区采集的猪组织样品进行PPV6基因片段检测。结果表明,广西地区猪群存在PPV6,感染率为36%(27/75),同时也存在着PPV6与猪圆环病毒2型(PCV2)混合感染现象,感染率为32%;5株PPV6 VP1基因与中国参考株TJ株、韩国参考株KSU1-AZ-2014株、美国参考株U18-4株、波兰参考株P15-1株核苷酸序列同源性分别为99.3%～99.8%,99.3%～99.8%,98.9%～99.8%,99.3%～99.8%;VP1基因遗传进化分析表明,PPV6包含两个基因亚群,5株PPV6与中国参考株BJ、SC、JS、TJ株及波兰参考株处在G2亚群,而美国U18-4株则单独处于一个G1亚群。本研究为中国PPV6毒株流行病学及其病毒致病性研究提供研究基础。(本文来源于《畜牧与兽医》期刊2019年04期）
罗艺晨,桂志胜,郝永峰,刘娟[5]（2019）在《复方苦芩有效成分对犬细小病毒病病犬小肠组织细胞凋亡及基因表达的影响》一文中研究指出为探讨复方苦芩3种有效活性成分对人工感染肠炎型犬细小病毒病(canine parvovirus disease,CPVD)病犬小肠组织的保护作用,将50只试验犬随机分为复方苦芩总多糖组、复方苦芩总生物碱组、复方苦芩总黄酮组、空白对照组和模型组。其中,试验药物组均按1.5 mL/kg肌肉注射复方苦芩3种有效成分,2次/d,连续用药7 d后灌服2 mL(5×10~5 PFU/mL)的病毒液进行人工复制病理模型,空白组肌注射生理盐水,模型组只攻毒不给药。接种病毒后经检测为阳性后3天在无菌条件下取各组犬只小肠组织,用TUNEL法检测各组小肠组织细胞的凋亡率,同时采用荧光定量PCR对各试验组小肠组织Bax和Bcl-2 mRNA转录进行相对定量检测,并运用Western blot方法检测Bcl-2和Bax蛋白表达量。结果显示,通过组织切片观察,复方苦芩3种有效活性成分可防止病毒对犬小肠细胞形态的病理作用,可降低细胞凋亡率,并且3种有效成分对小肠组织可增高小肠组织Bcl-2/Bax基因和蛋白表达量,从而减少因病毒所引起的细胞凋亡;结果表明,复方苦芩3种有效成分对CPVD病犬小肠组织均有一定的保护作用,其中复方苦芩总生物碱对CPVD病犬小肠组织细胞凋亡的预防效果最显着。(本文来源于《中国兽医学报》期刊2019年03期）
张雪竹,王海军,孙明洁,杜帅帅,孙伯涵[6]（2019）在《东北叁省部分地区猫细小病毒VP2基因进化分析》一文中研究指出为了研究我国东北叁省部分地区猫细小病毒(Feline parvovirus, FPV)基因的遗传进化情况,试验用PCR方法对我国东北地区25份猫肛拭子进行检测,并对检测结果呈阳性的猫进行细小病毒VP2基因克隆测序,然后进行遗传进化分析。结果表明:经PCR扩增有10份为FPV阳性,其VP2基因序列与标准株M38246和疫苗株EU498681及EU498680的相似性达99.1%以上,有9株属于G1群,1株属于G2群。说明东北地区FPV基因型主要以G1群为主。(本文来源于《黑龙江畜牧兽医》期刊2019年04期）
刘俊平,王洋,柴秀丽,鲁荣光,胡博[7]（2019）在《蓝狐细小病毒分离鉴定及VP2基因遗传进化分析》一文中研究指出为了鉴定从蓝狐粪便中分离的病毒是否为细小病毒,试验采用病毒培养、电镜观察、中和试验、间接免疫荧光试验和分子生物学试验对其进行鉴定。结果表明:分离毒株在F81细胞中培养96 h后出现细胞病变(CPE);电镜观察可见直径为20 nm左右的病毒粒子;该病毒能被水貂肠炎细小病毒(MEV)阳性血清中和;PCR检测可扩增得到大小为570 bp的特异性条带,并证明分离毒株为细小病毒,将其命名为BFPV-HeB05/16;VP2全基因遗传进化与氨基酸序列分析显示,分离毒株BFPV-HeB05/16与MEV和BFPV处在同一分支上,具有较高的同源性,其关键氨基酸位点(80,300,426,564,568位)与BFPV和MEV保持一致。(本文来源于《黑龙江畜牧兽医》期刊2019年03期）
李世静,龙丹丹,嵇辛勤,黄梦秋,陈佳琪[8]（2019）在《贵阳地区犬细小病毒NS1基因的克隆及序列分析》一文中研究指出为了解贵阳地区犬细小病毒(CPV)非结构蛋白NS1的遗传变异进化状况,试验采用PCR检测、分子克隆、测序及生物信息学软件对分离自贵阳的8株CPV的NS1基因进行序列分析。结果表明:成功扩增并克隆测序得到8株CPV NS1基因,全长为2 007 bp,共编码668个氨基酸;分离株间NS1基因核苷酸序列的同源性为98.4%～99.8%,与10株犬类参考毒株CPV NS1基因序列的同源性为98.3%～99.6%,与其他11株非犬类参考毒株NS1基因核苷酸的同源性为39.4%～99.1%。说明CPV NS1基因具有一定的种属特异性,其亲缘关系越近同源性越高。(本文来源于《黑龙江畜牧兽医》期刊2019年03期）
赵屹钦,曾梦颖,郭娟,张迪,高洪[9]（2019）在《犬细小病毒昆明流行株的分离鉴定与VP2基因序列分析》一文中研究指出为了解昆明市犬细小病毒(canine parvovirus,CPV)流行及抗原变异情况,有针对性地筛选疫苗及研发新疫苗,本研究从昆明市部分宠物医院收集6份疑似CPV粪便样品进行病毒分离培养,对获得的疑似病毒液进行PCR、免疫荧光试验(IFA)、血凝效价测定、TCID50测定及VP2基因序列分析。结果显示,分离的1株病毒能使F81猫肾细胞产生明显的细胞病变(CPE),PCR扩增产物大小为164bp,IFA鉴定感染的F81细胞出现绿色荧光,血凝效价为1∶512,病毒TCID50为10-4.375/0.1mL,VP2基因PCR扩增条带大小为1 755bp。对分离株VP2结构蛋白进行测序分析,判定该分离株为CPV-2a亚型,与标准毒株存在5个变异氨基酸位点,属于变异株。将测序结果与商品化疫苗株及国内参考株序列进行比对分析,结果显示与弱毒苗Intervet/vaccine/06和Pfizer/vaccine/06核苷酸同源性均为98.7%;与国内参考毒株序列同源性为98.2%～99.5%,与ANTU-1和WH02/06株同源性最高;与ANTU-1株、WH02/06株及BJ01株亲缘关系最近,位于进化树的同一簇。本研究对监测CPV的遗传变异趋势及疫苗的研制具有重要意义。(本文来源于《中国畜牧兽医》期刊2019年01期）
傅秋玲,傅光华,万春和,韦启鹏,陈红梅[10]（2018）在《红毛鸭胚源鹅细小病毒江西株的分离鉴定与NS基因的分析》一文中研究指出自死亡的红毛鸭胚中分离获得1株病毒株(命名为JX-JA-2017株),经胶体金试纸条检测呈鹅细小病毒(GPV)阳性,经中和试验测定可被GPV阳性血清特异性中和,表明该毒株为GPV。对其进行非结构基因(NS)特征分析发现,其NS基因与GenBank登入的13株鹅细小病毒核苷酸序列同源性为94%～99.6%,氨基酸同源性为94.8%～99.5%;经分子进化分析发现,该株病毒与亚洲型GPV分离株共处于一个进化分支。以上结果揭示,红毛鸭胚存在GPV感染,且其JX-JA-2017株病毒与经典的GPV具有共同的遗传起源,丰富了GPV的流行病学与分子生态学内涵,为加强我国鹅细小病毒病的防控提供科学依据。(本文来源于《中国兽医杂志》期刊2018年12期）
犬细小病毒基因论文开题报告
（1）论文研究背景及目的
此处内容要求：
首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景，再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题，并提出你的论文准备的观点或解决方法。
写法范例：
为降低单克隆抗体(MAb)在犬体内的免疫原性,本研究克隆了具有中和猫、犬细小病毒(FPV、CPV)活性的MAb (3EB)的轻、重链可变区基因及犬天然抗体(NAb)轻、重链恒定区基因,通过融合PCR获得鼠-犬嵌合抗体基因。构建能够表达嵌合抗体的重组质粒,经昆虫杆状病毒表达系统对重组嵌合抗体进行表达。SDS-PAGE和western blot试验显示鼠-犬嵌合抗体重链为55 ku、轻链为25 ku。间接免疫荧光试验显示该嵌合抗体能够与抗犬IgG和FPV特异性结合。上述结果表明,嵌合抗体保留了原MAb 3EB对病毒特异结合能力的基础上,将鼠源恒定区替换为犬源NAb的恒定区。病毒中和试验表明嵌合抗体保留了3EB对FPV、CPV的中和活性。本研究首次通过昆虫杆状病毒表达系统表达了抗FPV、CPV的嵌合抗体,降低了原MAb的免疫原性,对FPV、CPV病临床治疗用抗体药物的研制具有重要指导意义。
（2）本文研究方法
调查法：该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。
观察法：用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。
实验法：通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。
文献研究法：通过调查文献来获得资料，从而全面的、正确的了解掌握研究方法。
实证研究法：依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。
定性分析法：对研究对象进行“质”的方面的研究，这个方法需要计算的数据较少。
定量分析法：通过具体的数字，使人们对研究对象的认识进一步精确化。
跨学科研究法：运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。
功能分析法：这是社会科学用来分析社会现象的一种方法，从某一功能出发研究多个方面的影响。
模拟法：通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。
犬细小病毒基因论文参考文献
[1].李希辰,雷欢,李雪,石晶,殷玉和.一种犬细小病毒基因工程抗体的制备[J].中国畜牧兽医.2019
[2].薛雨佳,宋彩玲,赵爽爽,李彤彤,王文静.抗猫细小病毒嵌合抗体基因在昆虫细胞中的表达与鉴定[J].中国预防兽医学报.2019
[3].孙鑫鹏.犬细小病毒的分离鉴定及VP2基因的原核表达[D].宁夏大学.2019
[4].尹柏双,赵翠青,刘立明,沙万里,李国江.广西猪细小病毒6型VP1基因序列进化分析[J].畜牧与兽医.2019
[5].罗艺晨,桂志胜,郝永峰,刘娟.复方苦芩有效成分对犬细小病毒病病犬小肠组织细胞凋亡及基因表达的影响[J].中国兽医学报.2019
[6].张雪竹,王海军,孙明洁,杜帅帅,孙伯涵.东北叁省部分地区猫细小病毒VP2基因进化分析[J].黑龙江畜牧兽医.2019
[7].刘俊平,王洋,柴秀丽,鲁荣光,胡博.蓝狐细小病毒分离鉴定及VP2基因遗传进化分析[J].黑龙江畜牧兽医.2019
[8].李世静,龙丹丹,嵇辛勤,黄梦秋,陈佳琪.贵阳地区犬细小病毒NS1基因的克隆及序列分析[J].黑龙江畜牧兽医.2019
[9].赵屹钦,曾梦颖,郭娟,张迪,高洪.犬细小病毒昆明流行株的分离鉴定与VP2基因序列分析[J].中国畜牧兽医.2019
[10].傅秋玲,傅光华,万春和,韦启鹏,陈红梅.红毛鸭胚源鹅细小病毒江西株的分离鉴定与NS基因的分析[J].中国兽医杂志.2018
标签：犬细小病毒(CPV); 基因工程抗体; 共转染; HEK-293F细胞;