（江苏省淮安市第四人民医院江苏淮安223002）
【摘要】目的：探讨γ干扰素释放结核感染T细胞斑点试验（T-SPOT.TB）在菌阴肺结核诊断中的应用价值。方法：选取2012年1月~2014年12月期间我院住院收治的49例菌阴结核病患者，非结核病患者35例，分别给予结核抗体检测、结核菌素试验及T细胞斑点试验，统计分析各种检测方法在菌阴肺结核病中的诊断价值。结果：菌阴肺结核49例，PPD阳性38例（77.55%）；结核抗体阳性37例（75.51%），T细胞斑点试验阳性47例（95.91%），与PPD、结核抗体阳性率差异比较明显（P＜0.05）；在35例非结核病中，PPD阳性12例（34.29%），结核抗体阳性为15例（42.86%），T细胞斑点试验阳性为3例（8.57%），差异明显（P＜0.05）；T细胞斑点试验组间阳性率差异明显（P＜0.05），具有统计学意义。结论：在菌阴肺结核的临床诊断中，T细胞斑点试验为新型检测分枝杆菌感染免疫学方法，检测阳性率高，值得在临床治疗中推广应用。
【关键词】T细胞斑点试验；菌阴肺结核；PPD；诊断；应用价值
【中图分类号】R521【文献标识码】A【文章编号】1004-6194（2015）02-0156-01
在我国重大传染病中，结核为重大传染病类型之一，同时也是威胁人类健康的重大呼吸道传染病类型之一。近年来，随着环境的恶化，尤其是大气环境的恶化，结核病的发病率呈逐年上升趋势[1]。对于活动性结核患者来说，快速准确诊断为防控与治疗的关键。而传统抗酸杆菌涂片敏感度50%~60%，分枝杆菌培养时间较长，且阳性率偏低[2]。本研究纳入我院收治的菌阴肺结核患者49例，探讨T细胞斑点试验在临床诊断中的价值，现报道如下。
1资料与方法
1.1一般资料随机选取2012年1月到2014年12月期间我院收治的菌阴结核患者49例，均符合中华结核病诊治指南的诊断标准，年龄32~76岁，平均年龄为（51.4±12.4）岁；49例患者中，男性28例，女性21例。选择同期非结核患者35例，均经临床检查与治疗后，排除结核感染患者，男性21例，女性14例，年龄34~68岁，平均年龄(47.5±11.5）岁，包括肺炎22例、陈旧性结核3例，以及慢性支气管炎1例、腹腔积液2例、恶性肿瘤3例、胸腔积液2例，以及慢性咳嗽1例、发热1例。两组患者在年龄、性别等方面无明显差异（P＞0.05），存在可比性。
1.2方法
1.2.1T细胞斑点试验T细胞斑点试验试剂盒(OxfordImmunotec公司)由上海复星科技有限公司生产提供，肝素抗凝管用8ml-10ml外周静脉血，加入Ficoll淋巴细胞分离液后离心分离外周单个核细胞，计数后，每个培养孔接种2.5×105个细胞，37℃，5%CO2孵育18～20hrs，经洗板，酶促反应及底物显色后，干燥培养板，最后应用酶联斑点分析仪进行斑点计数，实验结果以每250000PBMCs中斑点形成细胞(Spot-formingcells,SFCs)数目来表示，结果判断标准以试剂盒说明书为准。
1.2.2结核抗体结核抗体用酶联免疫（ELISA）方法，按照试剂说明书规范操作。结核抗体检测试剂盒（北京贝尔生物工程有限公司生产）。
1.2.3结核菌素试验结核菌素纯蛋白衍生物(Purifiedproteinderivatives,PPD)试剂由北京祥瑞生物制品有限公司生产。规格为50U/ml，于左前臂内侧上中1/3交界皮内，以5U注入体内，从而形成皮丘，观察48~72h内的反应，根据局部硬结直径为主要依据，阴性判断标准为小于5mm，阳性判断标准为5mm~9mm，中度阳性反应为10~19mm，水疱或坏死视为强阳性反应[3]。
1.3统计学方法所有数据均用SPSS13.0软件包进行处理，计数资料用百分率（%）形式进行表示，用卡方检验，以P＜0.05差异显著，具有统计学意义。
2结果
菌阴肺结核49例患者中，PPD阳性38例，占比为77.55%；结核抗体阳性37例，占比为75.51%，T细胞斑点试验阳性47例，占比为95.91%，与PPD、结核抗体阳性率差异比较明显（P＜0.05），具有统计学意义。在35例非结核病中，PPD阳性12例（34.29%），结核抗体阳性为15例（42.86%），T细胞斑点试验阳性为3例（8.57%），差异明显（P＜0.05）；T细胞斑点试验组间阳性率差异明显（P＜0.05），具有统计学意义。T细胞斑点试验在组间的检测阳性差异明显（P＜0.05），具有统计学意义。详见表1。
3讨论
根据我国卫生部门全国第五次结核病流行病学抽样调查结果，2010年我国超过500万结核病或定性患者，且感染结核病菌人数首次超过5亿人次，约占全国总人口的45%，且结核病菌感染率呈现进一步上升趋势[4]。结核病为慢性传染病，是由结核分枝杆菌引起的，可累及全身多个器官。每年，我国死于活动性结核病的人数高达十多万，我国已经成为仅次于印度的全球第二结核病高发国家，结核病的防治成为全社会共同关心的问题。
在结核临床诊断中，结核菌病原学检查为诊断“金标准”，但是结核菌病原学检查受标本中细菌数量的影响较大，常规培养耗费时间长，而且培养的阳性率较低，对于肺结核的早发现、早治疗极为不利[5]。在目前的临床结核感染筛查中，PPD试验为常规防范手段，但是由于某些抗原成分与卡介苗、非结核性分枝杆菌抗原成分相同，导致发生交叉反应的可能性比较大，进而在检测中，可能出现假阳性状况，而免疫抑制、HIV及老年患者，可能出席那假阴性。同时，皮试操作易受主观因素影响，检查的准确性无法保证、所以，在临床诊断中，寻找一种快速、准确的活动性结核病诊断方法，成为临床研究的重要课题。而T细胞斑点试验是以特异性抗原为刺激源，属于应用了酶联免疫斑点技术的一种诊断结核病的新方法，具有较高的特异性、敏感度，且仅需耗时1d，与PPD方法相比，耗时相对较少[6]。宋梅梅等研究结果显示：T细胞斑点试验菌阴肺结核阳性36例、阴性为3例，以及非结核呼吸道疾病阴性33例，阳性为2例，诊断的敏感度、特异度为92.3%、94.3%，而阳性预测值、阴性预测值分别为94.7%、91.7%，说明T细胞斑点试验具有较高的敏感度与特异度，对于菌阴肺结核的临床诊断具有重要的应用价值。
结核分枝杆菌感染患者，外周血单核细胞中，有一种结核分枝杆菌特异性活化T淋巴细胞，在结核分枝杆菌特异性抗原刺激后，会分泌出大量的IFNγ，根据这一特点来设计T细胞斑点试验，可通过计数斑点，用以推测患者体内是不是存在效应T细胞，来辅助结核病的临床诊断[7]。本研究采用三种方法对患者进行了诊断，结果显示：（1）菌阴肺结核49例患者中，PPD阳性38例，占比为77.55%；结核抗体阳性37例，占比为75.51%，T细胞斑点试验阳性47例，占比为95.91%，与PPD、结核抗体阳性率差异比较明显（P＜0.05）
在非结核病中，PPD阳性12例（34.29%），结核抗体阳性为15例（42.86%），T细胞斑点试验阳性为3例（8.57%），差异明显（P＜0.05）；T细胞斑点试验组间阳性率差异明显（P＜0.05），具有统计学意义。由此可知，T细胞斑点试验组间阳性率上，差异明显（P＜0.05），具有统计学意义，说明T细胞斑点试验的应用价值高。
抗酸杆菌涂片、结核抗体以及PPD检测，由于特异性与敏感度缺乏，在结核病临床诊断中易出现误诊与漏诊情况，且培养菌时间长，结核菌阳性率低，常常在患者出院后方可出具报告，不利于临床诊断及治疗，而T细胞斑点试验克服了这些缺点，能够为患者早诊断、早治疗提供帮助。
综上所述，由于T细胞斑点试验属新型结核分枝杆菌感染免疫学方法，检测阳性率高，且培养时间短，可作为结核病早期诊断的理想辅助方法之一，在敏感度、特异性方面具有一定的优越性，24h内便可出具结果，对于结核病患者的早诊断、早治疗，具有重要价值，值得待临床诊断中推广应用。
参考文献：
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[3]李婷,时代强.T细胞斑点试验在痰菌涂阴肺结核中的诊断价值[J].中华临床感染病杂志,2014,07(03):255-257.
[4]陶学芳,王华钧,王建华等.T细胞斑点试验在肺结核诊断和疗效评价中的意义[J].中华临床感染病杂志,2012,05(04):221-224.
[5]李林阳,陈林利,李琦等.结核感染T细胞斑点试验对肺结核的临床诊断价值[J].中华肺部疾病杂志（电子版）,2014,07(06):32-36.
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[7]童学成,陈国春,濮翔科等.结核感染T细胞斑点试验对艾滋病合并肺结核的临床诊断价值[J].中华医院感染学杂志,2014,24(14):3632-3634.
作者简介：
曾东晓（1971-），男，学士，副主任技师，主要从事感染性疾病的临床实验室诊断。