导读:本文包含了油体表达体系论文开题报告文献综述及选题提纲参考文献，主要关键词:慢性间歇性低压低氧,多巴胺转运体,酪氨酸羟化酶,成年大鼠
油体表达体系论文文献综述
郎依琳,张乃文,魏慧娜,席航,李一然[1]（2019）在《慢性间歇性低压低氧提高成年大鼠自发运动行为及黑质-苍白球多巴胺能体系酪氨酸羟化酶和多巴胺转运体表达》一文中研究指出慢性间歇性低压低氧(CIHH)可对抗氧化应激和凋亡引起的海马神经元损伤导致的认知功能障碍。但对与运动行为相关的黑质-苍白球多巴胺能体系有何影响目前未见报道。本研究探讨CIHH对成年大鼠自发运动行为以及黑质-苍白球多巴胺能体系酪氨酸羟化酶(TH)和多巴胺转运体(DAT)表达的影响。健康成年雄性SD大鼠随机分为CIHH实验组和正常对照组。CIHH实验组动(本文来源于《中国解剖学会2019年年会论文文摘汇编》期刊2019-08-18）
李梅[2]（2009）在《sCT纯化方法的建立和油体表达体系的优化》一文中研究指出鲑鱼降钙素(calcitonin,CT )已临床应用30多年,是治疗骨质疏松、变形性骨炎、骨痛等的一线药物。在大肠杆菌或酵母中表达的降钙素,由于C-端氨基酸不能酰胺化,生物学活性很低,每毫克只有100-200 IU,因而目前降钙素的市场价格很高,注射针剂中的降钙素为12,000元/mg,原药价格也高达1.8-2万元/g。近年来人们一直在努力尝试如何利用基因工程的方法廉价生产具有生物学活性的降钙素。植物油体表达体系具有提取工艺简单,易于分离纯化的优点。现有研究资料表明,利用油菜油体表达体系表达的鲑鱼降钙素,至少能够部分酰胺化,与大肠杆菌和酵母体系相比,在生物学活性和生产成本方面具有明显优势。本研究利用高效表达鲑鱼降钙素的转基因油菜株系,建立了鲑鱼降钙素的纯化方法。通过对多种实验的比较发现,离心力和离心时间是获得高纯度油体的关键因素。利用优化后的油体蛋白提取方法,可彻底去除杂质,获得的油体呈乳白色,无可见颗粒状杂质,更细腻,也更有利于后继的凝血酶的酶切反应。通过比较提取油体蛋白后进行凝血酶酶切分离目的蛋白和提取油体直接进行凝血酶酶切的方法发现,两种方法均能用凝血酶酶切得到3.45 kD的目的带,但后者获得的降钙素量更大,酶切效率更高。msCT转基因油菜油体经凝血酶酶切后,回收水相冻干进行HPLC检测发现,可检测到降钙素特征峰,测序验证工作正在进行。针对原有技术体系的不足,根据生产企业意见,对油菜油体表达技术平台在以下4个方面进行了优化:a.引入了His-tag标记技术;b.利用肠激酶代替凝血酶作为蛋白酶切位点,使得到的降钙素的氨基酸序列与天然降钙素的完全相同;c.利用gus作为报告基因,监测转基因油菜种子的纯度;d.利用大鼠酰胺化酶基因,进一步提高降钙素的酰胺化程度。为此,我们按照双子叶植物偏爱密码子,综合考虑GC含量、肠激酶酶切位点等设计合成了天然鲑鱼降钙素基因(sCT),克隆了His-tag标记的芝麻oleosin基因,构建了以油菜oleosin启动子驱动芝麻oleosin-sCT融合蛋白基因的植物表达载体pBOsC2301,转化甘蓝型油菜品种中双4号,获得了14株转基因植株,PCR、RT-PCR、GUS检测和southern blot结果表明目的基因已整合进油菜基因组并表达。SDS-PAGE凝胶电泳发现,转基因油菜油体肠激酶酶切前后蛋白条带发生了明显改变,说明肠激酶可以对纯化的油体进行有效切割。目前正在进行目的蛋白的HPLC和His-tag亲和层析。为利用大鼠酰胺化酶PHM基因,进一步提高的鲑鱼降钙素的生物学活性,构建了植物表达载体pDOV2301。该载体包括3个独立的表达盒,分别是由拟南芥oleosin启动子驱动大豆oleosin-PHM融合蛋白基因的表达盒;以油菜oleosin启动子驱动芝麻oleosin-sCT融合蛋白基因的表达盒,以及GUS表达盒。已获得6株转基因植株,PCR检测均为阳性。本研究建立的鲑鱼降钙素的纯化方法和油体表达技术平台,对降低降钙素生产和纯化成本具有重要意义。(本文来源于《中国农业科学院》期刊2009-06-01）
刘昱辉,贾士荣[3]（2006）在《利用油菜油体表达体系生产鲑鱼降钙素》一文中研究指出降钙素是一种重要的治疗骨质疏松、变形性骨炎(Pagete's症)、骨痛等的小分子多肽药物,临床应用已近30年,目前国际市场的年销售额达7亿美元。骨质疏松严重威胁人类健康,据统计,中国人的骨密度比西方人低8％,我国60岁以上老年人骨质疏松症的发病率达60％,每年因骨质疏松症而并发骨折的约9．6％。全球每年股骨骨折病例约170万,随着老龄化的增加,预计到2050年全球每年将有640万人受股骨骨折之苦,其中51％将发生在亚洲。(本文来源于《中国生物工程学会2006年学术年会暨全国生物反应器学术研讨会论文摘要集》期刊2006-08-01）
刘昱辉,贾士荣[4]（2006）在《利用油菜油体表达体系生产鲑鱼降钙素》一文中研究指出本研究以建立油菜油体表达体系、表达医用蛋白-鲑鱼降钙素为重点,首先分离和克隆了油菜 oleosin油体蛋白基因的启动子、芝麻oleosin结构基因,并按照植物偏爱的密码子设计合成了鲑鱼降钙素突变基因msCT,构建了以油菜oleosin启动子驱动的oleosin-msCT。融合蛋白基因植物表达载体。为将目的基因导入受体植物,获得大量备选的转基因植株,我们优化和建立了农杆菌介导的高效油菜遗传转化体系,4周内转化频率12．5％。转基因油菜经PCR、PCR-Southern、Western、SDS-PAGE 凝胶电泳、凝胶定量检测等,证明oleosin-鲑鱼降钙素融合蛋白基因在转基因油菜基因组中整合,并(本文来源于《中国农业生物技术学会第叁届会员代表大会暨学术交流会论文摘要集》期刊2006-05-01）
刘昱辉,贾士荣[5]（2003）在《植物油体表达体系的研究进展》一文中研究指出介绍了植物种子中油体和油体蛋白(oleosin)的结构特征及其编码基因的调控,阐述了用植物油体表达体系这一新型植物生物反应器生产目的蛋白的研究进展和前景。(本文来源于《农业生物技术学报》期刊2003年05期）
刘昱辉[6]（2001）在《植物油体表达体系的建立及Profilin2维管束特异表达启动子的区段缺失分析》一文中研究指出本论文的目的是：（1）建立在植物油体中表达外源蛋白的表达体系，以简化目的蛋白的分离纯化过程；（2）对维管束特异表达的Profilin2启动子进行区段分析，寻找控制维管束特异表达的区段和元件，为在抗维管束病害的基因工程中使抗病基因产物直接在维管束中特异表达并对病原体建立防御体系，以节省能量，同时增加转基因作物的安全性。 为建立油体表达体系，本论文进行了以下研究：（1）分离和克隆了油菜Oleosin基因的启动子及编码芝麻Oleosin蛋白的结构基因。（2）克隆了鲑鱼降钙素的突变基因msCT[Ser~6，des-Leu~(19)]，将其插在芝麻油体蛋白Oleosin基因的C端。据文献报道，鲑鱼降钙素（sCT）在治疗缺钙症等中有明显的疗效。（3）构建了由油菜Oleosin基因启动子驱动的Oleosin-Calcitonin融合蛋白植物表达载体，转化油菜和棉花，获得了转基因植株。转基因油菜经PCR检测，证明降钙素基因已整合到油菜基因组中。转基因棉花经PCR-Southern和Western检测，证明msCT基因在棉花中整合并在油体中表达。目前已得到T_2代转基因棉花株系44个，由于在田间对T_1、T_2代植株的叶片用高浓度（5000 ppm）的卡那霉素溶液涂抹，故筛选出的Kan~R株理论上应为高表达的个体。用植物油体表达体系在转基因棉籽油中表达鲑鱼降钙素，在文献中尚未见报道。 在Profilin2维管束特异表达启动子的区段分析中，根据Pfn全长启动子（Pfn1.7，-1667～-1bp）及其5’端4种不同长度（Pfn1.4、Pfn1.2、Pfn1.0、Pfn0.6）的缺失分析，检测gus基因在转基因伽蓝菜中的表达，可将Pfn全长启动子分成叁部分：区段A，-1667～-1380 bp，缺失该区段（Pfn1.4），由维管束特异表达变为组成型表达，由此推测在该区段内存在维管束特异表达的元件。区段B，-1153～-597bp，强烈抑制gus基因的表达，推测在该区段中存在负调控因子。区段C，-597～-1bp，即Pfn0.6，除在维管束中表达较强外，还在薄壁细胞中表达，故可认为该区段是Profilin2的基本启动子。进一步分析发现，Profilin2启动子在-1391～-1388 bp处及-565～-562bp处各有一个bZIP蛋白结合位点的核心序列ACGT（bZIP蛋白是植物中最丰富的一类转录因子）；-1647～-1640bp处有一个与控制菜豆苯丙氨酸氨裂合酶2（PAL2）维管束特异表达的序列AC-I（CCCACCTACC）相类似的序列（CCACCTAC）。为弄清ACGT及AC-I序列在Profilin2启动子中是否调控维管束的特异表达，我们又分别构建了P1（-1667～- 刃 县1403，含 AC－l）、PZ（如27一羽80，含 ACGT）、P3（－1667～羽80，含 ACGT和AC－1）、P4（－1667一1627，含AC－l）、PS（－1403一1376，含ACGT）等五个不同区段与80 hp CaMV35S最小启动子（P35Sm）连接的融合启动子，构建植物表达载体，转化烟草和伽蓝菜。在烟草短暂表达中，PZ（含ACGT）启动子的表达强度明显高于n（含AC0，推测bZIP蛋白结合序列ACGT在调控表达强度方面可能起更重要的作用。转基因烟草的稳定表达结果表明，P135Smfus构建物（含AC工序列）仅在茎、叶维管束中检测到GUS表达。鉴于355最小启动子在植物的所有发育阶段都不能表达，故说明AC．I作为一个顺式作用元件k七lementX 确能调控维管柬的特异表达。其余构建物因目前仅得到转基因的小芽，尚不能进行检测，故其对稳定表达的影响尚待进一步研究。据作者所知，这是首次对profilinZ启动子进行的区段缺失和基元序列分析。(本文来源于《中国农业科学院》期刊2001-07-01）
油体表达体系论文开题报告
（1）论文研究背景及目的
此处内容要求：
首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景，再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题，并提出你的论文准备的观点或解决方法。
写法范例：
鲑鱼降钙素(calcitonin,CT )已临床应用30多年,是治疗骨质疏松、变形性骨炎、骨痛等的一线药物。在大肠杆菌或酵母中表达的降钙素,由于C-端氨基酸不能酰胺化,生物学活性很低,每毫克只有100-200 IU,因而目前降钙素的市场价格很高,注射针剂中的降钙素为12,000元/mg,原药价格也高达1.8-2万元/g。近年来人们一直在努力尝试如何利用基因工程的方法廉价生产具有生物学活性的降钙素。植物油体表达体系具有提取工艺简单,易于分离纯化的优点。现有研究资料表明,利用油菜油体表达体系表达的鲑鱼降钙素,至少能够部分酰胺化,与大肠杆菌和酵母体系相比,在生物学活性和生产成本方面具有明显优势。本研究利用高效表达鲑鱼降钙素的转基因油菜株系,建立了鲑鱼降钙素的纯化方法。通过对多种实验的比较发现,离心力和离心时间是获得高纯度油体的关键因素。利用优化后的油体蛋白提取方法,可彻底去除杂质,获得的油体呈乳白色,无可见颗粒状杂质,更细腻,也更有利于后继的凝血酶的酶切反应。通过比较提取油体蛋白后进行凝血酶酶切分离目的蛋白和提取油体直接进行凝血酶酶切的方法发现,两种方法均能用凝血酶酶切得到3.45 kD的目的带,但后者获得的降钙素量更大,酶切效率更高。msCT转基因油菜油体经凝血酶酶切后,回收水相冻干进行HPLC检测发现,可检测到降钙素特征峰,测序验证工作正在进行。针对原有技术体系的不足,根据生产企业意见,对油菜油体表达技术平台在以下4个方面进行了优化:a.引入了His-tag标记技术;b.利用肠激酶代替凝血酶作为蛋白酶切位点,使得到的降钙素的氨基酸序列与天然降钙素的完全相同;c.利用gus作为报告基因,监测转基因油菜种子的纯度;d.利用大鼠酰胺化酶基因,进一步提高降钙素的酰胺化程度。为此,我们按照双子叶植物偏爱密码子,综合考虑GC含量、肠激酶酶切位点等设计合成了天然鲑鱼降钙素基因(sCT),克隆了His-tag标记的芝麻oleosin基因,构建了以油菜oleosin启动子驱动芝麻oleosin-sCT融合蛋白基因的植物表达载体pBOsC2301,转化甘蓝型油菜品种中双4号,获得了14株转基因植株,PCR、RT-PCR、GUS检测和southern blot结果表明目的基因已整合进油菜基因组并表达。SDS-PAGE凝胶电泳发现,转基因油菜油体肠激酶酶切前后蛋白条带发生了明显改变,说明肠激酶可以对纯化的油体进行有效切割。目前正在进行目的蛋白的HPLC和His-tag亲和层析。为利用大鼠酰胺化酶PHM基因,进一步提高的鲑鱼降钙素的生物学活性,构建了植物表达载体pDOV2301。该载体包括3个独立的表达盒,分别是由拟南芥oleosin启动子驱动大豆oleosin-PHM融合蛋白基因的表达盒;以油菜oleosin启动子驱动芝麻oleosin-sCT融合蛋白基因的表达盒,以及GUS表达盒。已获得6株转基因植株,PCR检测均为阳性。本研究建立的鲑鱼降钙素的纯化方法和油体表达技术平台,对降低降钙素生产和纯化成本具有重要意义。
（2）本文研究方法
调查法：该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。
观察法：用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。
实验法：通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。
文献研究法：通过调查文献来获得资料，从而全面的、正确的了解掌握研究方法。
实证研究法：依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。
定性分析法：对研究对象进行“质”的方面的研究，这个方法需要计算的数据较少。
定量分析法：通过具体的数字，使人们对研究对象的认识进一步精确化。
跨学科研究法：运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。
功能分析法：这是社会科学用来分析社会现象的一种方法，从某一功能出发研究多个方面的影响。
模拟法：通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。
油体表达体系论文参考文献
[1].郎依琳,张乃文,魏慧娜,席航,李一然.慢性间歇性低压低氧提高成年大鼠自发运动行为及黑质-苍白球多巴胺能体系酪氨酸羟化酶和多巴胺转运体表达[C].中国解剖学会2019年年会论文文摘汇编.2019
[2].李梅.sCT纯化方法的建立和油体表达体系的优化[D].中国农业科学院.2009
[3].刘昱辉,贾士荣.利用油菜油体表达体系生产鲑鱼降钙素[C].中国生物工程学会2006年学术年会暨全国生物反应器学术研讨会论文摘要集.2006
[4].刘昱辉,贾士荣.利用油菜油体表达体系生产鲑鱼降钙素[C].中国农业生物技术学会第叁届会员代表大会暨学术交流会论文摘要集.2006
[5].刘昱辉,贾士荣.植物油体表达体系的研究进展[J].农业生物技术学报.2003
[6].刘昱辉.植物油体表达体系的建立及Profilin2维管束特异表达启动子的区段缺失分析[D].中国农业科学院.2001