本文主要研究内容
作者张海威,翟璐,王丽姿,黄艳梅,涂伟,徐乐,宋佰芬（2019）在《牛单纯疱疹病毒Ⅰ型gB基因原核表达载体的构建及蛋白表达》一文中研究指出：目的:获取牛单纯疱疹病毒Ⅰ型gB基因编码的蛋白。方法:根据GenBank中牛疱疹病毒Ⅰ型VRL27-FEB-2012株囊膜糖蛋白B(UL27)基因,设计并合成一对特异性引物,利用PCR方法扩增gB基因序列的第100～1197bp,将此目的片段其命名为1F8基因,随后将PCR扩增后的1F8基因克隆到pMD18-T载体上,重组质粒命名为pMD18-T-1F8;对构建的重组克隆质粒进行PCR、双酶切和测序鉴定正确后,将目的基因亚克隆到pET-32a(+)原核表达载体上,并转化到BL21感受态细胞中,获得的重组表达质粒pET-32a(+)-1F8,再通过双酶切和测序进行鉴定;鉴定正确后,在37℃条件下用终浓度为0.1mM IPTG诱导重组菌4h,取诱导后产物进行SDS-PAGE分析和Western Blot鉴定。结果:通过琼脂糖凝胶电泳实验结果表明,在1097bp处出现了目的条带;对pMD18-T-1F8重组质粒的PCR、酶切及测序结果表明,扩增的目的条带为牛疱疹病毒Ⅰ型gB基因序列;通过SDS-PAGE和Western Blot实验对表达蛋白的鉴定结果显示,在58.6kDa左右出现目的条带,与软件预测蛋白的大小相符,确定为牛疱疹病毒Ⅰ型gB蛋白。结论:研究成功构建了牛单纯疱疹病毒Ⅰ型gB基因部分片段1F8的重组表达质粒pET-32a(+)-1F8,并成功表达1F8蛋白,为后续牛单纯疱疹病毒Ⅰ型单克隆抗体的制备和检测方法的建立奠定了基础。
Abstract
mu de :huo qu niu chan chun pao zhen bing du Ⅰxing gBji yin bian ma de dan bai 。fang fa :gen ju GenBankzhong niu pao zhen bing du Ⅰxing VRL27-FEB-2012zhu nang mo tang dan bai B(UL27)ji yin ,she ji bing ge cheng yi dui te yi xing yin wu ,li yong PCRfang fa kuo zeng gBji yin xu lie de di 100～1197bp,jiang ci mu de pian duan ji ming ming wei 1F8ji yin ,sui hou jiang PCRkuo zeng hou de 1F8ji yin ke long dao pMD18-Tzai ti shang ,chong zu zhi li ming ming wei pMD18-T-1F8;dui gou jian de chong zu ke long zhi li jin hang PCR、shuang mei qie he ce xu jian ding zheng que hou ,jiang mu de ji yin ya ke long dao pET-32a(+)yuan he biao da zai ti shang ,bing zhuai hua dao BL21gan shou tai xi bao zhong ,huo de de chong zu biao da zhi li pET-32a(+)-1F8,zai tong guo shuang mei qie he ce xu jin hang jian ding ;jian ding zheng que hou ,zai 37℃tiao jian xia yong zhong nong du wei 0.1mM IPTGyou dao chong zu jun 4h,qu you dao hou chan wu jin hang SDS-PAGEfen xi he Western Blotjian ding 。jie guo :tong guo qiong zhi tang ning jiao dian yong shi yan jie guo biao ming ,zai 1097bpchu chu xian le mu de tiao dai ;dui pMD18-T-1F8chong zu zhi li de PCR、mei qie ji ce xu jie guo biao ming ,kuo zeng de mu de tiao dai wei niu pao zhen bing du Ⅰxing gBji yin xu lie ;tong guo SDS-PAGEhe Western Blotshi yan dui biao da dan bai de jian ding jie guo xian shi ,zai 58.6kDazuo you chu xian mu de tiao dai ,yu ruan jian yu ce dan bai de da xiao xiang fu ,que ding wei niu pao zhen bing du Ⅰxing gBdan bai 。jie lun :yan jiu cheng gong gou jian le niu chan chun pao zhen bing du Ⅰxing gBji yin bu fen pian duan 1F8de chong zu biao da zhi li pET-32a(+)-1F8,bing cheng gong biao da 1F8dan bai ,wei hou xu niu chan chun pao zhen bing du Ⅰxing chan ke long kang ti de zhi bei he jian ce fang fa de jian li dian ding le ji chu 。
论文参考文献
论文详细介绍
论文作者分别是来自安徽农学通报的张海威,翟璐,王丽姿,黄艳梅,涂伟,徐乐,宋佰芬，发表于刊物安徽农学通报2019年04期论文，是一篇关于牛单纯疱疹病毒型论文,基因论文,原核表达论文,安徽农学通报2019年04期论文的文章。本文可供学术参考使用，各位学者可以免费参考阅读下载，文章观点不代表本站观点，资料来自安徽农学通报2019年04期论文网站，若本站收录的文献无意侵犯了您的著作版权，请联系我们删除。
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