导读:本文包含了口服减毒鼠伤寒沙门氏菌论文开题报告文献综述及选题提纲参考文献，主要关键词:新城疫,HN基因,原核表达载体pYA3493,减毒鼠伤寒沙门氏菌
口服减毒鼠伤寒沙门氏菌论文文献综述
田芳华,程相朝,张春杰,李银聚,李静[1]（2013）在《以减毒鼠伤寒沙门氏菌为载体的重组NDV-HN口服疫苗的构建与鉴定》一文中研究指出试验旨在构建表达鸡新城疫病毒(NDV)HN基因的重组减毒鼠伤寒沙门氏菌SL1344ΔcrpΔasd(pYA3493-HN)。以pMD18-T-HN为模板,通过PCR扩增出NDV HN基因片段,定向插入原核表达载体pYA3493中,将重组表达质粒pYA3493-HN转入χ6097,再转入减毒鼠伤寒沙门氏菌SL1344ΔcrpΔasd,通过双酶切和PCR对质粒进行鉴定。结果表明,携带NDV HN基因片段的重组减毒鼠伤寒沙门氏菌SL1344ΔcrpΔasd(pYA3493-HN)构建成功。本研究结果为开发鸡新城疫的口服基因工程活载体疫苗奠定了基础。(本文来源于《中国畜牧兽医》期刊2013年11期）
朱向莹[2]（2010）在《减毒鼠伤寒沙门氏菌介导的抗原递呈系统在肿瘤治疗性口服DNA疫苗及蛋白质疫苗制备中的应用》一文中研究指出治疗性疫苗能够打破免疫耐受并引起针对癌症细胞的长时程免疫反应,由于疫苗给药途径与构建有效的抗原递呈系统是疫苗制备需要解决的关键性问题。减毒鼠伤寒沙门氏菌作为癌症疫苗的载体能够将DNA从原核细胞传递至真核细胞,并且能够选择性积聚在肿瘤组织。热休克蛋白70能够通过其多肽结合结构域与抗原结合并与抗原递呈细胞表面的Hsp70受体作用,将抗原传递至抗原递呈细胞。本论文的第一部分,我们构建了一种新型的低拷贝DNA疫苗,该疫苗基于Hsp70-TAA复合物构建,并由减毒鼠伤寒沙门氏菌SL3261菌株作为载体将DNA运送至小鼠体内。口服该重组细菌疫苗能够诱发针对黑色素肿瘤细胞的CTL细胞毒性细胞杀伤作用并显着激活T细胞反应。在肿瘤预防实验组C57BL/6J小鼠模型中,该治疗性口服疫苗能够诱发57.1%的肿瘤预防免疫反应,在肿瘤治疗组中,该疫苗能够完全消除62.5%的C57BL/6J小鼠中B16F10肿瘤的生长,显着延长小鼠的生存期。口服减毒沙门氏菌疫苗载体通常定位在吞噬性细胞中,限制了其所携带的抗原蛋白进入抗原递呈途径,论文的第二部分我们利用沙门氏菌Ⅲ型分泌系统对蛋白质的转运功能来克服这种限制。Ⅲ型分泌蛋白能够将沙门氏菌编码的抗原蛋白直接运送至抗原递呈细胞胞质。抗原递呈细胞表面存在Hsp70的特异性受体,故Hsp70能够以Hsp70-TAA复合物的形式向APC细胞递呈抗原。本研究利用Ⅲ型分泌系统来实现对Hsp70-TRP2融合抗原蛋白的转运和递呈。口服该重组细菌疫苗能够实现对肿瘤特异性抗原的有效递呈,打破免疫耐受,诱导产生肿瘤细胞特异性的CTL反应和NK细胞杀伤作用,并在C57BL/6J小鼠上建立的B16F10黑色素肿瘤模型中获得了75%的肿瘤预防效果和62.5%的治疗效果。我们设计了以减毒鼠伤寒沙门氏菌作为肿瘤DNA疫苗及蛋白疫苗的传递工具的两套抗原递呈系统,为肿瘤的预防和治疗提供了有效的新方法。(本文来源于《复旦大学》期刊2010-04-20）
符薇[3]（2008）在《口服减毒鼠伤寒沙门氏菌介导ePNP/MePdR自杀基因系统对荷瘤鼠协同抗肿瘤作用的研究》一文中研究指出随着细菌学和分子生物学的发展,拓宽了细菌介导肿瘤治疗的思路,减毒沙门氏菌载体系统作为治疗恶性肿瘤的呈递工具逐步得到人们的认可。沙门氏菌是兼性厌氧菌,在好氧和厌氧环境都能生长,所以可在肿瘤的厌氧环境繁殖。为了使沙门氏菌成为安全的基因传递系统,通过突变代谢过程的基因来限制其致病性,降低毒性,使它可在生长旺盛的肿瘤中积聚。体内外实验发现,减毒沙门氏菌培养方便且可将含外源基因的质粒转至哺乳动物细胞内,促进了减毒沙门氏菌载体系统的应用。ePNP/MePdR自杀基因系统作为一种基因导向性酶前药治疗法(gene-directedenzyme prodrug therapy,GDEPT)正受到越来越多的关注。6-甲基嘌呤-2′-脱氧核苷(6-methylpurine-2′-deoxyriboside,MePdR)本身是无毒的药物前体,可被大肠杆菌(Escherichia coli)的嘌呤核苷磷酸化酶(purine nucleosidephosphorylase,ePNP)分解成有毒的6-甲基嘌呤(6-methylpurine,MeP)。MeP会抑制DNA、RNA和蛋白质合成,高效杀伤肿瘤细胞;哺乳动物来源的PNP则不能分解MePdR。由于ePNP/MePdR自杀基因系统有强大的旁观者效应,可以杀伤非增殖期的肿瘤细胞,它被认为是治疗神经胶质瘤、肝癌、胰腺癌、卵巢癌、前列腺癌、结肠癌、黑色素瘤等人类恶性实体瘤的最佳选择之一。利用减毒鼠伤寒沙门氏菌介导ePNP/MePdR自杀系统,国际上还没有人尝试过。本研究采用减毒鼠伤寒沙门氏菌SC36(hisG aro A purI cys),它是由本实验室对SL3261进行二次DES诱变筛选而得的,属嘌呤和氨基酸双重缺陷株,毒性较SL3261更低。重组菌株携带的外源基因包括大肠杆菌嘌呤核苷磷酸化酶基因(ePNP)、鼠源的白介素-12(mIL-12)和胞嘧啶脱氨酶(CD),口服治疗常见的鼠源实体瘤(Lewis肺癌和B16F10黑色素瘤)。我们首先构建了CMV通用启动子调控下的ePNP基因表达载体pEGFP-C1-PNP。为了研究减毒沙门氏菌介导的pEGFP-C1-PNP在体内外表达情况,将pEGFP-C1-PNP,白介素-12(mIL-12)、胞嘧啶脱氨酶(CD)分别转化至减毒沙门氏菌SC36中。我们利用MTT,凋亡试验等试验,评估沙门氏菌介导的ePNP/MePdR单自杀基因系统、ePNP/MePdR和CD/5-FC双自杀基因系统,细胞因子mIL-12和ePNP/MePdR联合系统在体外杀伤肿瘤细胞的效应。体内实验结果显示,SC36能优先在肿瘤组织中集聚。荷瘤小鼠口服细菌实验结果表明,减毒沙门氏菌能够增强ePNP/MePdR自杀基因系统的抗肿瘤作用,而双自杀基因系统以及联合细胞因子的自杀基因系统可减少前药的用量,增强旁观者效应,有更好的应用价值。(本文来源于《复旦大学》期刊2008-10-10）
陈晓宇[4]（2008）在《表达TsoL18抗原的口服减毒鼠伤寒沙门氏菌重组活载体疫苗的构建》一文中研究指出囊尾蚴病(Cysticercosis)是由猪带绦虫(Taenia solium)的幼虫囊尾蚴(Cysticercus cellulose)寄生于人或猪等而引起的人畜共患寄生虫病,是公认的世界经济病之一。囊尾蚴病在中国大部分地区尤其在少数民族地区是一个重要的公共卫生问题,严重威胁着人体健康,不仅如此,猪囊尾蚴病的广泛存在极大影响了我国畜产品在国际市场上的竞争力,给畜牧业造成重大经济损失,猪囊尾蚴病的免疫防治势在必行,然而在猪囊尾蚴病疫苗研究中,疫苗抗原的选择和来源一直困扰着兽医工作者。Tsol18是猪带绦虫六钩蚴(T. solium oncosphere)阶段特异性表达的抗原,主要在六钩蚴感染中间宿主的早期阶段分泌,其免疫血清在体外试验中能杀死六钩蚴,是猪囊尾蚴病疫苗研制的主要候选抗原之一。在已有的研究中,Tsol18重组蛋白在原核系统中多以包涵体形式表达,给蛋白质的复性和纯化带来许多困难,并且包涵体活性较低、保存期短、降解快,因而限制了Tsol18在猪囊尾蚴病疫苗研制上的应用。鼠伤寒沙门氏菌(Salmonella typhimurium)是一种常见的侵袭性胞内菌,通过基因工程方法减毒后对宿主致病性显着降低,但仍保留良好的侵袭力,可将免疫抗原直接递呈给免疫细胞而诱导特异性的免疫应答反应,减毒鼠伤寒沙门氏菌作为口服疫苗载体是目前疫苗免疫研究的热点之一。为了优化猪囊尾蚴病疫苗候选抗原Tsol18重组蛋白,探索猪囊尾蚴病口服重组活载体疫苗的免疫机制,研究其在猪囊尾蚴病免疫预防上的作用,进行了本项研究。收集成熟的猪带绦虫虫卵,经孵化和激活后,提取六钩蚴总RNA,设计特异性引物RT-PCR扩增Tsol18基因片段,并同义突变Tsol18基因片段中四个大肠杆菌低利用率密码子,截去其N端的16个氨基酸的信号肽编码序列,构建原核表达载体pGEX-4T-Tsol18并表达,进行GST-Tsol18重组蛋白的SDS-PAGE、Western-blot及稳定性分析,并以GST-Tsol18重组蛋白为抗原制备兔高免血清;将改造的Tsol18基因片段插入Asd+的组成型表达载体pYA3341,构建重组载体pYA3341-Tsol18,将重组载体电转化入缺失腺苷酸环化酶(Δcya)、环腺苷酸受体蛋白基因(Δcrp)以及天冬氨酸-β-半醛脱氢酶(Δasd)的减毒鼠伤寒沙门氏菌X4550,研究重组活载体疫苗X4550(pYA3341-Tsol18)表达Tsol18重组蛋白的免疫原性、生长稳定性、口服安全性及ELISA检测免疫小鼠血清中抗Tsol18抗体的产生情况,评价重组疫苗X4550(pYA3341-Tsol18)的免疫效果。结果显示改造后的GST-Tsol18重组蛋白多以可溶性形式表达,蛋白表达量占菌体总蛋白的24%,Western-blot证明GST-Tsol18重组蛋白具有良好的抗原性,4℃保存120d只有20.1%降解,显示重组蛋白稳定性有很大改善。重组疫苗X4550(pYA3341-Tsol18)在没有选择压力的情况下连续培养100代后,随机挑选的重组疫苗株全部都能生长和表达Tsol18重组蛋白,表明重组疫苗生长稳定;BALB/c鼠口服重组疫苗株2.0×1012cfu30天后,存活率100%,证实重组疫苗口服安全可靠。ELISA检测显示在二免后四周小鼠血清中抗Tsol18IgG抗体的OD值达到0.645,表明重组疫苗能激发机体产生免疫应答反应。本研究获得了具有高效表达、良好免疫原性和稳定性的猪囊尾蚴病疫苗候选抗原GST-Tsol18重组蛋白,构建了携带Tsol18重组蛋白的减毒鼠伤寒沙门氏菌疫苗X4550(pYA3341-Tsol18),初步评价了重组疫苗的免疫效果,为猪囊尾蚴病基因工程疫苗的研制开拓了新的思路。(本文来源于《甘肃农业大学》期刊2008-06-01）
丁军涛[5]（2008）在《表达Tsol18抗原的口服减毒鼠伤寒沙门氏菌重组活载体疫苗的构建及其免疫学研究》一文中研究指出囊尾蚴病(Cysticercosis)是由猪带绦虫(Taenia solium)的幼虫囊尾蚴(Cysticercus cellulosae)寄生于人或猪等而引起的人畜共患寄生虫病,是公认的世界经济病之一。囊尾蚴病在中国大部分地区尤其在少数民族地区是一个重要的公共卫生问题,严重威胁着人体健康,不仅如此,猪囊尾蚴病的广泛存在极大影响了我国畜产品在国际市场上的竞争力,给畜牧业造成重大经济损失,猪囊尾蚴病的免疫防治势在必行,然而在猪囊尾蚴病疫苗研究中,疫苗抗原的选择和来源一直困扰着兽医工作者。Tsol18是猪带绦虫六钩蚴(T.solium oncosphere)阶段特异性表达的抗原,主要在六钩蚴感染中间宿主的早期阶段分泌,其免疫血清在体外试验中能杀死六钩蚴,是猪囊尾蚴病疫苗研制的主要候选抗原之一。在已有的研究中,Tsol18重组蛋白在原核系统中多以包涵体形式表达,给蛋白质的复性和纯化带来许多困难,并且包涵体活性较低、保存期短、降解快,因而限制了Tsol18在猪囊尾蚴病疫苗研制上的应用。鼠伤寒沙门氏菌(Salmonella typhimurium)是一种常见的侵袭性胞内菌,通过基因工程方法减毒后对宿主致病性显着降低,但仍保留良好的侵袭力,可将免疫抗原直接递呈给免疫细胞而诱导特异性的免疫应答反应,减毒鼠伤寒沙门氏菌作为口服疫苗载体是目前疫苗免疫研究的热点之一。为了优化猪囊尾蚴病疫苗候选抗原Tsol18重组蛋白,探索猪囊尾蚴病口服重组活载体疫苗的免疫应答,研究其在猪囊尾蚴病免疫预防上的作用,进行了本项研究。收集成熟的猪带绦虫虫卵,经孵化和激活后,提取六钩蚴总RNA,设计特异性引物RT-PCR扩增Tsol18基因片段,并同义突变Tsol18基因片段中四个大肠杆菌低利用率密码子,截去其N端的16个氨基酸的信号肽编码序列,构建原核表达载体pGEX-4T-Tsol18并表达,进行GST-Tsol18重组蛋白的SDS-PAGE、Western blot及稳定性分析,并以GST-Tsol18重组蛋白为抗原制备兔高免血清;将改造的Tsol18基因片段插入Asd+的组成型表达载体pYA3341,构建重组载体pYA3341-Tsol18,将重组载体电转化入缺失腺苷酸环化酶(Δcya)、环腺苷酸受体蛋白基因(Δcrp)以及天冬氨酸-β-半醛脱氢酶(Δasd)的减毒鼠伤寒沙门氏菌X4550,研究重组活载体疫苗X4550(pYA3341-Tsol18)表达Tsol18重组蛋白的免疫原性、生长稳定性、口服安全性及在小鼠体内的分布情况,ELISA检测免疫小鼠血清和肠液中抗Tsol18抗体的产生情况,流式细胞术分析其脾细胞亚型的分化,ELISA检测免疫猪血清中抗Tsol18抗体的动态变化,探讨重组疫苗可能的免疫应答。结果显示改造后的GST-Tsol18重组蛋白多以可溶性形式表达,蛋白表达量占菌体总蛋白的24 %,Western blot证明GST-Tsol18重组蛋白具有良好的抗原性,4℃保存120 d只有20.1 %降解,显示重组蛋白稳定性有很大改善。重组疫苗4550(pYA3341-Tsol18)在没有选择压力的情况下连续培养100代后,随机挑选的重组疫苗株全部都能生长和表达Tsol18重组蛋白,表明重组疫苗生长稳定;BALB/c鼠口服重组疫苗株2.0×1012 cfu 30天后,存活率100 %,证实重组疫苗口服安全可靠,小鼠口服免疫后第21天在脾脏仍能测到大量的重组疫苗株,表明重组疫苗在体内能够长久存活,有利于刺激机体产生持久的免疫应答;ELISA检测显示在二免后四周小鼠血清中抗Tsol18 IgG抗体的OD值达到0.645,二免后六周小鼠肠液中有抗Tsol18分泌性IgA抗体产生,表明重组疫苗能诱导小鼠产生较强的抗体水平和激发多种免疫应答方式;免疫小鼠的CD4+、CD8+T淋巴细胞数目明显增多,CD4+/CD8+ T细胞比值也显着增高(P<0.01),提示口服疫苗4550(pYA3341-Tsol18)可能同时诱导Th1和Th2免疫应答反应。猪免疫后20 d抗Tsol18 IgG抗体水平开始上升,在二免后30天抗体OD值达到1.025,表明重组疫苗能诱导猪产生抗猪囊尾蚴病的免疫应答效应。本研究获得了具有高效表达、良好免疫原性和稳定性的猪囊尾蚴病疫苗候选抗原GST-Tsol18重组蛋白,构建了携带Tsol18重组蛋白的减毒鼠伤寒沙门氏菌疫苗4550(pYA3341-Tsol18),初步进行了重组疫苗的免疫学研究,为猪囊尾蚴病基因工程疫苗的研制和应用开拓了新的思路。(本文来源于《中国农业科学院》期刊2008-05-25）
方希修,乐国伟,王冬梅,刘建文,施用辉[6]（2006）在《以减毒鼠伤寒沙门氏菌为载体的重组HBsAg口服疫苗构建与鉴定》一文中研究指出采用大量培养含有pcDNA3s的大肠杆菌,提取pcDNA3s质粒,利用电转化方法将pcD-NA3s质粒转化到感受态减毒鼠伤寒沙门氏菌,SDS-PAPG检测到930 bp大小的条带,基因序列分析到重组菌含有乙肝表面抗原(HBsAg)基因序列;观察重组菌体外传代培养的稳定性,该重组菌株在体外能稳定地繁殖、生长和传代。试验结果表明,携带HBsAg的重组减毒鼠伤寒沙门氏菌疫苗X8786/pcDNA3s已成功构建,为研究和应用人和动物治疗用乙型肝炎病毒口服基因工程活疫苗奠定了基础。(本文来源于《食品与生物技术学报》期刊2006年05期）
孟繁平[7]（2002）在《利用减毒鼠伤寒沙门氏菌研制胃癌MG7-Ag模拟表位口服活菌疫苗》一文中研究指出背景 我国胃癌死亡率居各类癌症之首，是严重威胁我国人民健康的恶性肿瘤。目前，胃癌常规疗法效果不佳，由于缺乏胃癌特异性抗原，尚未研制出一种有效的疫苗用于胃癌免疫治疗。胃癌MG7-Ag是我实验室发现的较好的胃癌标志物，其抗原决定簇位于糖链上，属于碳水化合物抗原。我们应用噬菌体文库显示技术筛选得到了胃癌MG7-Ag的模拟表位多肽，抗体竞争结合试验证实该多肽具有良好的模拟原始抗原的能力。模拟表位多肽的确定为研制胃癌特异性疫苗奠定了基础。减毒沙门氏菌口服免疫后，可形成自限性感染，获得相应粘膜的局部免疫、体液免疫和细胞免疫。此外，该类疫苗具有安全、高效、简便和经济等优点。将MG7-Ag基因与HBcAg基因重组后转化S.typhimurium，通过口服免疫诱导特异性的粘膜、体液免疫和细胞免疫，有可能成为胃癌免疫治疗的一种有效途径。本实验采用作为口服疫苗载体的具有致死性平衡系统的减毒鼠伤寒杆菌，建立了能表达异源MG7-Ag基因的转化菌株，可引起抗胃癌的免疫反应。 目的 以减毒鼠伤寒沙门氏菌为疫苗载体，构建基于胃癌MG7-Ag模拟表位的口服活菌疫苗，观察其口服免疫Balb／c小鼠后诱导的体液和细胞免疫反应。 方法将Nco Ⅰ和Hind Ⅲ酶切位点、MG7-Ag模拟表位和HBcAg编 第四军医大学硕士学位论文 码序列的反向互补序列顺次设计于上游引物中，通过聚合酶链式反应将2 种表位相连接。将目的基因插入pUCm1载体，酶切鉴定和序列测定证实 后，利用pUCm＊载体和pYA3341载体共有的Nco和Hind Ill酶切位点， 经酶切鉴定和序列测定证实后，亚克隆至与减毒鼠伤寒杆菌X4550互补o 的质粒pYA3341中，以此重组质粒转化减毒鼠伤寒杆菌X4550，构建日服 鼠伤寒杆菌疫苗。用构建的口服鼠伤寒杆菌疫苗口服免疫Balb／c ，J’鼠，每 隔Z周加强免疫一次。以P＊S和携带pYA3341空载体的减毒鼠伤寒沙门 氏菌代替日服疫苗接种小鼠作为对照。观察小鼠对疫苗的耐受情况。初次 口服接种5石周后应用ELISA法检测小鼠血清中抗MG7叭g抗体的滴度。 初次免疫后8周时，取免疫鼠的脾细胞，以’℃r释放法检测小鼠脾淋巴细 胞对靶细胞的杀伤效果，反映细胞免疫反应情况。初次免疫8周后，用表 达MG7－Ag的小鼠艾氏腹水瘤细胞进行肿瘤攻击实验，观察疫苗对小鼠的 保护作用。 结果 经过PCR扩增出约600hp大小的片段，与目的基因大小相符， 测序结果表明：PCR产物为载体片段、Nco和Hnd Ill酶切位点、MG7－Ag 模拟表位及HBCAg的融合片段c将目的基因亚克隆入pYA3341，基因后测 序证实得到胃癌MG7叭g模拟表位与HBCAg的融合基因片段。最终得到 含有目的基因片段的重组表达载体pYA3341。重组质粒在X4550中的表 达产物，经 Western blot表明，在相对分子质量（Mr哟在22 000处有 1条 可与抗MG7hab特异性结合的多肽表位。口服疫茵免疫小鼠后疫苗免疫t 组小鼠血清抗MG7－Ag抗体较PBS和空载体对照组显着增高。各组小鼠 脾淋巴细胞体外杀伤实验未见显着差异。小鼠艾氏腹水瘤的攻击实验显 示：疫苗免疫组中5只小鼠有1只未见肿瘤形成，而对照组小鼠则全部成 瘤。 结论 成功研制可表达胃癌MG7人g模拟表位减毒鼠伤寒杆菌疫苗， －5－ 第四军医大学硕士学位论文 为进一步研究其在胃癌免疫治疗中的作用奠定了基础。以胃癌MG7Ag 模拟表位为基础的曰服减毒鼠伤寒沙l”刁氏菌疫苗具有免疫原性，可以诱导 个鼠产生显着的体液免疫反应，虽然MG7叭g模拟表位多肽刺激小鼠脾细 胞的增殖实验各组未见差异，但肿瘤攻击实验表明胃癌MG7叭g模拟表位｝曰服减毒鼠伤寒沙门氏菌疫苗可以保护部分小鼠免受肿瘤攻击，提示可能 存在细胞免疫反应。实验表明：利用模拟表位构建减毒鼠伤寒沙门氏菌疫 苗是可行的；减毒鼠伤寒沙门氏菌是一种良好的疫苗载体；以胃癌 uo人叭g模拟表位为基础构建的口服鼠伤寒杆菌疫苗可以诱导抗肿瘤免 疫反亡，并可能具有部分保护作用。(本文来源于《第四军医大学》期刊2002-05-01）
郭长存[8]（2001）在《利用减毒鼠伤寒沙门氏菌研制胃癌MG7-Ag模拟表位口服DNA疫苗》一文中研究指出背景 我国胃癌死亡率居各类癌症之首，是严重威胁我国人民健康的恶性肿瘤。目前，胃癌常规疗法效果不佳，而且由于缺乏胃癌特异性抗原，尚未研制出一种有效的疫苗用于胃癌免疫治疗。胃癌MG_7-Ag是我所发现的较好的胃癌标志物，其抗原决定簇位于糖链上，属于碳水化合物抗原。我们应用噬菌体文库显示技术筛选得到了胃癌MG_7-Ag的模拟表位多肽，抗体竞争结合试验证实该多肽具有良好的模拟原始抗原的能力。模拟表位多肽的确定为研制胃癌特异性疫苗奠定了基础。DNA疫苗被称作第叁代疫苗，它可以诱导特异、高效、持久的免疫反应，而且制备简便。目前已有骨髓瘤、淋巴瘤、黑色素瘤、前列腺癌等肿瘤DNA疫苗进入临床试验，结果表明可以诱导机体产生特异的抗肿瘤免疫反应，而且安全可靠。DNA疫苗的免疫途径有肌肉注射、皮内注射、皮下注射和基因枪皮肤轰击等。减毒鼠伤寒沙门氏菌是良好的口服疫苗载体，可以诱导体液和细胞免疫反应。最近的研究发现，携带外源基因真核质粒的减毒鼠伤寒沙门氏菌口服后可以将真核质粒特异地转入脾脏树突状细胞（DC）并被表达。由于DC细胞是职业抗原提呈细胞（APC），以减毒鼠伤寒沙门氏菌为载体构建口服DNA疫苗更有利于诱导机体产生免疫反应。动物试验证实以沙门氏菌为载体的口服DNA疫苗具有良好的抗菌、抗肿瘤保护能力。 为增强DNA疫苗的免疫效能，常用的策略有以下几种：①应用原形或质粒DNA形式的细胞因子佐剂（包括IL-1、IL-12、GM-CSF和IFN-γ等。②将抗原基因与载体蛋白基因融合（如KLH和HBcAg）。③研制 第四军医大学硕土学位论文多表位疫苗（即包含多个抗原表位基因的 DNA疫i）＠利用质粒的兔疫刺激序列如：CpG等。在兔疫应答中，CD4＋辅助性T细胞叮H）有重要作用，有效的激活 CD4＋TH细胞可以增强疫茵诱导的免疫反应。研究表明包括细胞毒性T细胞（CTL）和／或B细胞表位的DNA疫苗中加入TH表位可以增强疫苗的兔疫效能。这是由于：CTL和 TH细胞表位同时提呈至抗原提呈细胞表面可以使TH细胞在CTL细胞邻近发挥辅助作用，从而有效地激活 CTL细胞；TH细胞分泌细胞因子活化 CTL细胞和 B细胞；TH细胞上调APC细胞表面共刺激分子表达，提高APC提呈抗原和激活CTL的能力。现己证实同时包含肿瘤特异性的 CD4＋T细胞表位和 CTL表位（或B细胞表位）的DNA疫苗可以更有效的诱导机体的抗肿瘤免疫反应。1994年，lexander等在多聚丙氨酸骨架中导入 MHC 11分子结合锚定氨基酸，发明了一种通用性 TH表位，称为 PADRE爬an－DR bindingepitope卜PADRE可以与人类多数HLA－DR分子及部分小鼠＊类基因分子结合，在诱导 Th细胞反应的效能方面，PADRE比自然源性 Th表位高 1000倍，且可以诱导 Th和 ThZ型反应。将 PADRE与 CTL表位或 B细胞表位串联构建的多肽疫苗或小基因疫苗可以诱导高效的细胞或体液免疫，而且临床试验证实PADRE对人体安全、无毒、无副作用。由于目前胃癌特异性TH表位尚未确定，PADRE可以作为其替代物研制胃癌特异性DNA疫苗。 目的 以减毒鼠伤寒沙门氏菌为疫苗载体，构建重组胃癌MG7－Ag模拟表位的口服DNA疫苗，观察C57BL／6）小鼠口服免疫后诱导的体液和细胞免疫反应。 方法 将 Hind Ill酶切位点、MG，叭g模拟表位和 MRE编码序列的反向互补序列顺次设计于下游引物中，通过2次聚合酶链式反应（Polymerase chain reaction PCR），将二种表位连接于一段无关的载体基因，Hind Ill酶切位点位于载体片段与表位基因之间。将目的基因插入 3 第四军医大学硕土学位论文pUCm1载体，酶切鉴定和序列测定证实后，利用pUCm1载体和pcDNA3二l什）载体共有的 Kpn和 ha酶切位点，将目的基因亚克隆入真核表达载体 pcDNA3二什）载体。利用目的基因和 pCDNA3．l什）载体上的Hind Ill酶切点，Hind Ill酶切除载体基因片段，得到胃癌MG卜Ag模拟表位和 PADRE融合基因的真核表达载体。携带绿色荧光蛋白真核质粒pcDNA3．l什）IGFP的减毒鼠伤寒沙门氏菌SL3261体外感染小鼠腹腔灌洗巨噬细胞，流式细胞仪检测，验证菌株作为DNA疫苗载体将真核质粒转入 APC细胞的能力＊重组质粒 pCDNA3．1什卜MG7－Ag／PADRE转入减毒鼠伤寒沙门氏菌，构建口服DNA疫苗。用构建的DNA疫苗口服兔疫C57BL历J小鼠，每隔2周加强兔疫一次。以PBS和携带pcDNA3二什）空载体的减毒鼠伤寒沙门氏菌代替口服疫苗接种小鼠作为对照。观察小鼠对疫苗的耐受情况。口服接种6周后应用ELISA ＄检测小鼠血清中抗MG7－Ag抗体的滴度。第8周时取兔疫鼠的脾细胞，加入人工合成的to－xg模拟表位多肽，us－ma掺入检测小鼠脾淋巴细胞对抗原肽刺激的增殖反应，间接反映细胞免疫反应情况。初次免疫8 周后，用表达MG卜Ag的小鼠艾氏腹水瘤细胞进行肿瘤攻击实验，观察疫苗对小鼠的保护作用。 结果 经过2?(本文来源于《第四军医大学》期刊2001-05-01）
吴卫,林元凯,江琪,任大明,谢匡成[9]（1998）在《淋球菌重组与减毒鼠伤寒沙门氏菌活疫苗口服免疫的初步研究》一文中研究指出在克隆淋球菌膜抗原CppB基因并在大肠杆菌和减毒鼠伤寒沙门氏菌中获得高效表达的基础上,用表达CppB-LacZ融合蛋白的重组减毒鼠伤寒沙门氏菌口服免疫Balb/c小鼠。ELISA检测表明被免疫小鼠血清中特异性抗体滴度可达1:160,并诱发了DTH反应,说明产生了特异的免疫反应。重组菌可在肠道中较持久地寄生,对小鼠未见有明显的毒副反应。(本文来源于《上海免疫学杂志》期刊1998年02期）
马学军[10]（1991）在《小鼠口服含表达流产布鲁氏菌31KDa蛋白质的重组质粒减毒鼠伤寒沙门氏菌的免疫效果》一文中研究指出鼠伤寒沙门菌常自然侵入并存在于与肠道相联的淋巴组织。本文报道以鼠伤寒沙门菌SR-Ⅱ的突变体,减毒鼠伤寒沙门菌X4060(Δcya Δcrp)作为释放来自布鲁氏菌的31KDa蛋白质抗原(BCSP31)的载体,口服免疫8～10周龄的BALB/cByJ小鼠并观察其效果。表达BCSP31的质粒PBA31-R7是通过转导噬菌体P22(HT int~-)导入X4064而形成鼠伤寒沙门菌X4064(PBA31-R7)。rBCSP31的表达是用免疫印迹法检测,由鼠伤寒沙门菌X4064(PBA31-R7)诱导的所有抗体的滴度用ELISA法检测。(本文来源于《国外医学.预防.诊断.治疗用生物制品分册》期刊1991年03期）
口服减毒鼠伤寒沙门氏菌论文开题报告
（1）论文研究背景及目的
此处内容要求：
首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景，再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题，并提出你的论文准备的观点或解决方法。
写法范例：
治疗性疫苗能够打破免疫耐受并引起针对癌症细胞的长时程免疫反应,由于疫苗给药途径与构建有效的抗原递呈系统是疫苗制备需要解决的关键性问题。减毒鼠伤寒沙门氏菌作为癌症疫苗的载体能够将DNA从原核细胞传递至真核细胞,并且能够选择性积聚在肿瘤组织。热休克蛋白70能够通过其多肽结合结构域与抗原结合并与抗原递呈细胞表面的Hsp70受体作用,将抗原传递至抗原递呈细胞。本论文的第一部分,我们构建了一种新型的低拷贝DNA疫苗,该疫苗基于Hsp70-TAA复合物构建,并由减毒鼠伤寒沙门氏菌SL3261菌株作为载体将DNA运送至小鼠体内。口服该重组细菌疫苗能够诱发针对黑色素肿瘤细胞的CTL细胞毒性细胞杀伤作用并显着激活T细胞反应。在肿瘤预防实验组C57BL/6J小鼠模型中,该治疗性口服疫苗能够诱发57.1%的肿瘤预防免疫反应,在肿瘤治疗组中,该疫苗能够完全消除62.5%的C57BL/6J小鼠中B16F10肿瘤的生长,显着延长小鼠的生存期。口服减毒沙门氏菌疫苗载体通常定位在吞噬性细胞中,限制了其所携带的抗原蛋白进入抗原递呈途径,论文的第二部分我们利用沙门氏菌Ⅲ型分泌系统对蛋白质的转运功能来克服这种限制。Ⅲ型分泌蛋白能够将沙门氏菌编码的抗原蛋白直接运送至抗原递呈细胞胞质。抗原递呈细胞表面存在Hsp70的特异性受体,故Hsp70能够以Hsp70-TAA复合物的形式向APC细胞递呈抗原。本研究利用Ⅲ型分泌系统来实现对Hsp70-TRP2融合抗原蛋白的转运和递呈。口服该重组细菌疫苗能够实现对肿瘤特异性抗原的有效递呈,打破免疫耐受,诱导产生肿瘤细胞特异性的CTL反应和NK细胞杀伤作用,并在C57BL/6J小鼠上建立的B16F10黑色素肿瘤模型中获得了75%的肿瘤预防效果和62.5%的治疗效果。我们设计了以减毒鼠伤寒沙门氏菌作为肿瘤DNA疫苗及蛋白疫苗的传递工具的两套抗原递呈系统,为肿瘤的预防和治疗提供了有效的新方法。
（2）本文研究方法
调查法：该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。
观察法：用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。
实验法：通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。
文献研究法：通过调查文献来获得资料，从而全面的、正确的了解掌握研究方法。
实证研究法：依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。
定性分析法：对研究对象进行“质”的方面的研究，这个方法需要计算的数据较少。
定量分析法：通过具体的数字，使人们对研究对象的认识进一步精确化。
跨学科研究法：运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。
功能分析法：这是社会科学用来分析社会现象的一种方法，从某一功能出发研究多个方面的影响。
模拟法：通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。
口服减毒鼠伤寒沙门氏菌论文参考文献
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标签：新城疫; HN基因; 原核表达载体pYA3493; 减毒鼠伤寒沙门氏菌;