导读:本文包含了抗砷性论文开题报告文献综述及选题提纲参考文献，主要关键词:叁磷酸腺苷结合盒转运体A1,突变体,重迭区扩增基因拼接法,抗砷性
抗砷性论文文献综述
罗燕,程建兵,谭晓华,尹小菲,杨磊[1]（2012）在《叁磷酸腺苷结合盒转运体A1蛋白第二跨膜结构域缺失突变体的构建及其抗砷性研究》一文中研究指出目的检测叁磷酸腺苷结合盒转运体A1(ABCA1)蛋白第2跨膜结构域(the second transmembrane domain,TMD2)中关键的抗砷结构域。方法采用重迭区扩增基因拼接法构建叁磷酸腺苷结合盒转运体A1基因TMD2的一系列缺失突变体,分别转染至HeLa细胞,激光共聚焦观察其定位,Cell Counting Kit-8检测48 h急性砷中毒后生存率的变化,原子荧光吸收光谱法检测细胞内的总砷含量。结果激光共聚焦证实各突变体的编码蛋白均定位在HeLa细胞的细胞膜上。CCK-8结果显示,转染胞外第4、5环,胞内第4、5环缺失突变体的HeLa细胞IC50分别为33.18、32.84、33.45、34.29μmol.L-1,与转染野生型叁磷酸腺苷结合盒转运体A1质粒的HeLa细胞(IC50为33.96μmol.L-1)无显着差异,均高于空载体转染对照组(IC50为19.01μmol.L-1)。转染胞外第6环缺失突变体HeLa细胞的IC50为19.95μmol.L-1,与空载体对照组无显着差异,显着低于野生型叁磷酸腺苷结合盒转运体A1质粒转染组。原子荧光分光光度法结果显示,转染胞外第6环缺失叁磷酸腺苷结合盒转运体A1的HeLa细胞内砷含量与转染空载体接近,而转染其他突变体的结果与转染野生型叁磷酸腺苷结合盒转运体A1的结果基本一致。结论成功构建了5个叁磷酸腺苷结合盒转运体A1蛋白第2跨膜结构域的缺失突变体,且其表达的蛋白仍然正确定位于HeLa细胞的细胞膜上。突变体(除胞外第6环外)仍然具有一定的抗砷性,提示叁磷酸腺苷结合盒转运体A1胞外第6环可能是关键抗砷结构域。(本文来源于《中国药学杂志》期刊2012年23期）
张晓菲[2]（2010）在《ABCA1胞外第一环缺失突变体构建及其抗砷性研究》一文中研究指出目的：本课题运用改进的重迭区扩增基因拼接法(gene splicing by overlap extension,SOE)分别构建缺失ABCA1蛋白胞外第一环第323-579,535-625位氨基酸密码子的基因,真核表达后激光共聚焦显微镜观察突变体表达情况。同时进行细胞砷耐受性实验,并观察细胞内砷含量变化及凋亡率检测,从而确定突变体是否具有抗砷功能。方法：应用重迭区扩增基因拼接法的原理,在拼接延伸后,再进行一次PCR扩增,得到ABCA1缺失第323-579,第535-625位氨基酸密码子的两条基因,克隆至pcDNA3.1/V5-His真核表达载体。在Lipofectamine2000的介导下将突变体真核表达载体转染入Hela细胞,激光共聚焦显微镜检测转染后突变体的表达。通过噻唑篮(MTT)检测48h急性砷染毒后光密度值(OD)计算生存率及半数抑制浓度(IC50),分析细胞抗砷性变化。然后运用原子荧光光度法(AFS)检测细胞内砷蓄积量的变化。同时利用annexin-V/P I双染流式细胞术检测突变体对Hela细胞凋亡的影响并与完整ABCA1及空载体比较分析。结果：成功构建缺失ABCA1蛋白胞外第一环第323-579位,将其命名为胞外-A；缺失第535-625位将其命名为胞外-B。氨基酸密码子的基因。通过激光共聚焦显微镜对pcDNA3.1/ABCA1Δ323-579AA, pcDNA3.1/ABCA1Δ535-625AA基因表达蛋白的细胞定位情况进行了分析。以pcDNA3.1/ABCA1质粒为对照结果显示：实验组与对照组结合鼠抗IgG/DyLight488后受激发光激发发出绿色荧光,均分布在细胞膜。因此认为突变后基因表达基本没有发生改变,可能定位在细胞膜上,可以进行下一步研究。Hela细胞转染胞外-A、胞外-B、野生pcDNA3.1/ABCA1质粒组、pcDNA载体组后给予不同浓度砷剂孵育48小时后用MTT法测OD值计算生存率及IC50。结果显示野生组细胞在各浓度下生存率均高于同步突变组和空载体组,随机区组方差分析各浓度下野生组与胞外-A、胞外-B、及空载体组生存率差异有统计学意义(P<0.05)；突变组与空载体组无统计学意义(P>0.05)。胞外-A、胞夕(?)-B、pcDNA载体组空载体组和野生组IC50分别为18.31μmol/l,18.26μmol/l,18.52μmol/l和29.4μmol/l。原子荧光光度法结果显示,实验组在10小时内细胞内砷的蓄积量均低于对照组,annexin-V/P I双染流式细胞术检测结果表明,NaAsO2作用24h后实验组细胞的早期凋亡率和晚期凋亡率,与野生对照组相比,调亡细胞所占比例显着增加(p<0.05)。结论：ABCA1蛋白胞外第一环缺失突变后基本丧失抗砷功能,可能与ABCA1抗砷功能有重要关系。(本文来源于《石河子大学》期刊2010-06-01）
李莉[3]（2010）在《ARG1基因真核表达载体的构建及其对细胞抗砷性影响的研究》一文中研究指出目的：通过构建ARG1基因真核表达载体PcDNA3.1-IE-ARG1,转染293T细胞来研究ARG1基因的抗砷性。方法：采用脂质体介导的转染方法将PcDNA3.1-IE-ARG1转染入293T细胞中,用激光共聚焦显微镜和real-timePCR方法进行ARG1基因表达鉴定；MTT法检测48小时急性砷中毒时细胞的生存率；原子吸收分光光度法测定不同浓度(1.4、8μmol/L)砷作用于PcDNA3.1-IE-ARG1组、空载体组及未转染组细胞24h后,细胞内砷含量及细胞分别在24小时、48小时的排砷量；用含NaAsO2浓度为0、4、8μmol/L的培养基培养叁组细胞48小时,二硫双硝基苯甲酸(DTNB)法测定细胞内谷胱甘肽(GSH)含量及谷胱甘肽转移酶(GST)活性,蛋白印记法测定细胞内多药耐药相关蛋白2(MRP2)的表达。结果：PcDNA3.1-IE-ARG1成功转入293T细胞中且表达良好；48小时急性砷中毒试验显示各组细胞生存率均明显下降,存在剂量-效应依赖关系,随着砷浓度的增加,各组细胞在各浓度下的生存率都逐渐降低；但PcDNA3.1-IE-ARG1组细胞在低浓度(砷浓度≤8μmol/L)砷作用下,生存率均明显高于其它两组,差异具有统计学意义(P<0.05)；用浓度为1、4、8μmol/L的NaAsO2作用细胞24小时,PcDNA3.1-IE-ARG1组细胞内砷含量明显降低,24小时、48小时的排砷量明显增高,与其它两组相比差异具有统计学意义(p<0.05)；用浓度为0、4、8μmol/L的NaAsO2作用细胞48小时后,PcDNA3.1-IE-ARG1组细胞内GSH与GST的含量及MRP2蛋白表达明显增高,与其它两组相比差异具有统计学意义(p<0.05),且随着砷作用剂量的增加GSH.GST及MRP2表达亦增加。结论：ARG1基因在293T细胞中相对高表达后,提高了293T细胞对砷的耐受性。(本文来源于《石河子大学》期刊2010-06-01）
张晓菲,谭晓华,程建兵,李金涛,孟强[4]（2010）在《ABCA1中间缺失突变体的构建及其抗砷性研究》一文中研究指出目的:构建缺失ABCA1,ABCA1蛋白胞外第一环第264-520位氨基酸密码子的基因,并真核表达检测其抗砷性变化。方法:应用重迭区扩增基因拼接法的原理,在拼接延伸后,再进行一次PCR扩增,得到缺失第264-520位氨基酸密码子的ABCA1基因,克隆至pcDNA3.1/V5-His真核表达载体。通过激光共聚焦检测突变体细胞定位,MTT加砷后检测突变体生存率变化。结果:成功构建缺失ABCA1蛋白胞外第一环第264-520位氨基酸密码子的基因。共聚焦显微镜观察突变体定位于细胞膜上,随机区组方差分析结果显示ABCA1突变体生存率明显低于ABCA1野生型。结论:ABCA1胞外第一环缺失突变后基本丧失抗砷功能。(本文来源于《现代生物医学进展》期刊2010年08期）
程建兵,谭晓华,罗燕,杨磊[5]（2010）在《ABCA1胞外第四环缺失突变体的构建及其抗砷性初步研究》一文中研究指出目的:构建ABCA1细胞外第四环第1479～1597位氨基酸残基缺失的突变体。方法:采用重迭区扩增基因拼接法构建ABCA1第1479～1597位氨基酸残基缺失的突变体基因,并将其克隆至pcDNA3.1/V5-His/ABCA1重组载体上,脂质体法转染Hela细胞,激光共聚焦观察突变体定位,Cell Counting Kit-8(CCK-8)试剂盒检测其48h急性砷中毒后生存率的变化。结果:该突变体基因经DNA序列分析表明其具有正确的序列和阅读框。激光共聚焦证实其表达的蛋白仍然能正确定位在Hela细胞的细胞膜上。CCK-8结果显示转染重组质粒和突变体质粒的细胞在各种砷浓度下生存率都较空载体组高。结论:成功构建了ABCA1胞外第四环第1479～1597位氨基酸残基缺失的突变体,且其表达的蛋白仍然定位于细胞膜上,突变体仍然具有一定的抗砷性,提示ABCA1胞外第四环可能不是关键抗砷结构域。(本文来源于《中国生物工程杂志》期刊2010年03期）
蔡林,王革娇[6]（2009）在《抗砷性微生物及其抗砷分子机制研究进展》一文中研究指出砷(Arsenic,As)是一种剧毒类金属(Metalloid),在自然环境中主要以叁价亚砷酸盐[Arsenite,AsO2-,As(III)]和五价砷酸盐[Arsenate,AsO43-,As(V)]的无机形式广泛存在。许多微生物在含砷环境的长期适应过程中,进化了多种不同的砷解毒抗性机制。目前研究发现主要存在4种类型的砷抗性机理,包括:As(III)氧化,细胞质As(V)还原,呼吸性As(V)还原,As(III)甲基化,这些机制赋予微生物砷抗性并在砷的转化和地球化学循环中起着极其重要的作用。本文主要介绍这几种微生物砷抗性机制的机理及研究概况和潜在的砷污染生物修复功能。(本文来源于《微生物学通报》期刊2009年08期）
王一[7]（2009）在《ABCG2与抗砷性产生关系的研究》一文中研究指出目的:通过检测过表达ABCG2的细胞模型砷耐受性的改变,初步探讨ABCG2与抗砷性产生关系。方法:(1)免疫荧光化学方法检测ChAsE-BMSCs、膀胱癌抗砷细胞以及23例急性白血病患者骨髓内ABCG2的表达情况;(2)真核表达载体pEGFP-C1-ABCG2经转化、筛选、测序鉴定后,抽提并获取高纯度的重组质粒,采用脂质体介导转染法转染至293T细胞,western-blot鉴定转染效果(3)台盼兰计数方法检测ABCG2过表达对293T细胞增殖的影响(4)细胞毒性实验检测ABCG2过表达细胞对砷剂耐受性的改变。结果: (1)免疫荧光方法检测两种抗砷细胞中ABCG2蛋白表达均低于对照组细胞;(2)免疫荧光方法检测23例急性白血病患者ABCG2蛋白表达强度,从低到高依次为:正常对照组、初发组和复发组,叁者之间差异有统计学意义(P<0.0001)(3)激光共聚焦显微镜观察和Western-blot结果证明转染成功;(4)ABCG2过表达降低细胞的增殖能力;(5)ABCG2过表达细胞对砷剂耐受性下降。结论: (1)抗砷细胞内ABCG2蛋白表达下调,细胞抗砷性与ABCG2表达呈负相关;(2)ABCG2高表达是急性白血病患者不利的预后因素;(3)成功建立过表达ABCG2基因的细胞模型;(本文来源于《石河子大学》期刊2009-06-01）
冯丽娜,慕晓玲[8]（2008）在《细胞抗砷性与多药耐药的关系》一文中研究指出砷治疗急性早幼粒细胞白血病和其他肿瘤已取得显着疗效,但长期和重复使用砷易使肿瘤细胞对砷耐药,同时砷与其他化疗药物之间存在着多药耐药现象,这些耐药问题对砷剂治疗肿瘤是不利的,而多药耐药是肿瘤化疗失败的主要原因之一,参阅大量文献发现细胞的抗砷过程和细胞对药物(本文来源于《农垦医学》期刊2008年03期）
杨丽[9]（2008）在《ABCA1基因对哺乳动物细胞抗砷性影响的研究》一文中研究指出目的:本课题运用分子生物学方法,研究ABCA1基因表达增高和降低后哺乳动物细胞株抗砷性的变化,同时观察细胞内砷含量的变化,从而确定ABCA1基因的抗砷功能,并推测其可能的抗砷机制。方法:在Lipofectamine 2000转染剂的介导下,将含有ABCA1基因的真核表达载体转染入HeLa细胞,实时荧光定量PCR(real-time PCR)方法检测转染后目的基因mRNA水平;用蛋白质免疫印记法(Western-blot)检测转染后ABCA1蛋白水平的改变,从而确定转染效率,通过噻唑兰法(MTT)检测48h急性砷染毒后光密度值(OD)值计算生存率及半数抑制浓度(IC50),分析细胞抗砷性的变化,然后运用原子荧光分光光度法(AFS)检测细胞内砷蓄积量的变化。同时,利用RNA干扰技术将ABCA1的小分子干扰RNA(siRNA)转染入抗砷细胞ECV-304中,Western-blot检测干扰后ABCA1蛋白水平的改变,确定干扰效率,然后通过噻唑兰法检测48h急性砷染毒后OD值计算生存率及IC50,分析细胞抗砷性的变化。结果:转染48h后的real-time PCR结果显示所有标本的管家基因GAPDH和ABCA1均可见较标准的扩增曲线,无非特异扩增。各组ABCA1及GAPDH Ct值比较结果显示,转染重组质粒pcDNA3.1/ ABCA1在HeLa细胞中ABCA1的表达量是转染空质粒pcDNA3.1/V5-His组的22.6倍(P<0.01),转染空质粒pcDNA 3.1/V5-His组与未转染的HeLa细胞ABCA1表达量无明显差异(P>0.05);Western-blot结果显示重组质粒组、空质粒组及未转染组在254 KD处均有特异性蛋白条带,其大小与ABCA1蛋白大小相符,且重组质粒组蛋白表达量明显高于转染空载体组及未转染组。这说明pcDNA3.1/ABCA1重组质粒已转入HeLa细胞并使ABCA1蛋白在HeLa细胞中呈高表达状态。转染后急性砷染毒48h用噻唑兰法计算生存率及IC50,结果显示实验组细胞在各种砷浓度下生存率均高于同步对照组细胞,两组生存率差异有统计学意义(P<0.01)。实验组IC50为36.740μmol/l高于对照组IC50为20.721μmol/l。原子荧光分光光度法结果显示,ABCA1蛋白高表达后,HeLa细胞内砷含量在各时间段均低于对照组细胞,且4小时候后细胞内砷蓄积量趋于稳定,而对照组细胞内砷蓄积量持续增加。抗砷细胞ECV-304经siRNA干扰后,实验组ABCA1蛋白表达量明显低于阴性对照组,呈低表达状态,干扰后急性砷染毒48h,结果显示实验组细胞在各种砷浓度下生存率均低于同步对照组细胞,两组生存率差异有统计学意义(P<0.01)。实验组IC50为7.640μmol/l低于对照组IC50为14.520μmol/l。结论:ABCA1基因在HeLa细胞中高表达后,细胞内砷的蓄积量在短时间即达平衡,不再增加,对砷敏感的HeLa细胞对砷毒表现出耐受性,ABCA1基因在细胞中低表达后,抗砷细胞株的抗砷性明显降低,综合实验结果,进一步明确了ABCA1基因可能是抗砷的关键基因。(本文来源于《石河子大学》期刊2008-06-01）
杨丽,杨磊,曾妍,张金莉,郭淑丽[10]（2007）在《Hela细胞转染表达ABCA1对其抗砷性的影响》一文中研究指出研究含有ATP结合转运子A1基因的真核表达载体pcDNA3.1/ABCA1转染真核细胞后,在细胞中的表达及对细胞抗砷性的影响。由脂质体介导将pcDNA3.1/ABCA1转染入Hela细胞中,用Western-blot方法检测ABCA1蛋白的表达,用MTT法检测48h急性砷染毒后细胞生存率的改变。Western结果显示重组质粒成功转入Hela细胞中且表达良好,MTT结果显示转染重组质粒组细胞在各浓度下生存率均较对照组高。这表明,ABCA1蛋白在真核细胞中相对高表达后增强了细胞的抗砷性。(本文来源于《石河子大学学报(自然科学版)》期刊2007年06期）
抗砷性论文开题报告
（1）论文研究背景及目的
此处内容要求：
首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景，再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题，并提出你的论文准备的观点或解决方法。
写法范例：
目的：本课题运用改进的重迭区扩增基因拼接法(gene splicing by overlap extension,SOE)分别构建缺失ABCA1蛋白胞外第一环第323-579,535-625位氨基酸密码子的基因,真核表达后激光共聚焦显微镜观察突变体表达情况。同时进行细胞砷耐受性实验,并观察细胞内砷含量变化及凋亡率检测,从而确定突变体是否具有抗砷功能。方法：应用重迭区扩增基因拼接法的原理,在拼接延伸后,再进行一次PCR扩增,得到ABCA1缺失第323-579,第535-625位氨基酸密码子的两条基因,克隆至pcDNA3.1/V5-His真核表达载体。在Lipofectamine2000的介导下将突变体真核表达载体转染入Hela细胞,激光共聚焦显微镜检测转染后突变体的表达。通过噻唑篮(MTT)检测48h急性砷染毒后光密度值(OD)计算生存率及半数抑制浓度(IC50),分析细胞抗砷性变化。然后运用原子荧光光度法(AFS)检测细胞内砷蓄积量的变化。同时利用annexin-V/P I双染流式细胞术检测突变体对Hela细胞凋亡的影响并与完整ABCA1及空载体比较分析。结果：成功构建缺失ABCA1蛋白胞外第一环第323-579位,将其命名为胞外-A；缺失第535-625位将其命名为胞外-B。氨基酸密码子的基因。通过激光共聚焦显微镜对pcDNA3.1/ABCA1Δ323-579AA, pcDNA3.1/ABCA1Δ535-625AA基因表达蛋白的细胞定位情况进行了分析。以pcDNA3.1/ABCA1质粒为对照结果显示：实验组与对照组结合鼠抗IgG/DyLight488后受激发光激发发出绿色荧光,均分布在细胞膜。因此认为突变后基因表达基本没有发生改变,可能定位在细胞膜上,可以进行下一步研究。Hela细胞转染胞外-A、胞外-B、野生pcDNA3.1/ABCA1质粒组、pcDNA载体组后给予不同浓度砷剂孵育48小时后用MTT法测OD值计算生存率及IC50。结果显示野生组细胞在各浓度下生存率均高于同步突变组和空载体组,随机区组方差分析各浓度下野生组与胞外-A、胞外-B、及空载体组生存率差异有统计学意义(P<0.05)；突变组与空载体组无统计学意义(P>0.05)。胞外-A、胞夕(?)-B、pcDNA载体组空载体组和野生组IC50分别为18.31μmol/l,18.26μmol/l,18.52μmol/l和29.4μmol/l。原子荧光光度法结果显示,实验组在10小时内细胞内砷的蓄积量均低于对照组,annexin-V/P I双染流式细胞术检测结果表明,NaAsO2作用24h后实验组细胞的早期凋亡率和晚期凋亡率,与野生对照组相比,调亡细胞所占比例显着增加(p<0.05)。结论：ABCA1蛋白胞外第一环缺失突变后基本丧失抗砷功能,可能与ABCA1抗砷功能有重要关系。
（2）本文研究方法
调查法：该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。
观察法：用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。
实验法：通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。
文献研究法：通过调查文献来获得资料，从而全面的、正确的了解掌握研究方法。
实证研究法：依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。
定性分析法：对研究对象进行“质”的方面的研究，这个方法需要计算的数据较少。
定量分析法：通过具体的数字，使人们对研究对象的认识进一步精确化。
跨学科研究法：运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。
功能分析法：这是社会科学用来分析社会现象的一种方法，从某一功能出发研究多个方面的影响。
模拟法：通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。
抗砷性论文参考文献
[1].罗燕,程建兵,谭晓华,尹小菲,杨磊.叁磷酸腺苷结合盒转运体A1蛋白第二跨膜结构域缺失突变体的构建及其抗砷性研究[J].中国药学杂志.2012
[2].张晓菲.ABCA1胞外第一环缺失突变体构建及其抗砷性研究[D].石河子大学.2010
[3].李莉.ARG1基因真核表达载体的构建及其对细胞抗砷性影响的研究[D].石河子大学.2010
[4].张晓菲,谭晓华,程建兵,李金涛,孟强.ABCA1中间缺失突变体的构建及其抗砷性研究[J].现代生物医学进展.2010
[5].程建兵,谭晓华,罗燕,杨磊.ABCA1胞外第四环缺失突变体的构建及其抗砷性初步研究[J].中国生物工程杂志.2010
[6].蔡林,王革娇.抗砷性微生物及其抗砷分子机制研究进展[J].微生物学通报.2009
[7].王一.ABCG2与抗砷性产生关系的研究[D].石河子大学.2009
[8].冯丽娜,慕晓玲.细胞抗砷性与多药耐药的关系[J].农垦医学.2008
[9].杨丽.ABCA1基因对哺乳动物细胞抗砷性影响的研究[D].石河子大学.2008
[10].杨丽,杨磊,曾妍,张金莉,郭淑丽.Hela细胞转染表达ABCA1对其抗砷性的影响[J].石河子大学学报(自然科学版).2007
标签：叁磷酸腺苷结合盒转运体A1; 突变体; 重迭区扩增基因拼接法; 抗砷性;