导读:本文包含了缺氧再给氧论文开题报告文献综述及选题提纲参考文献，主要关键词:urotensinⅡ,心肌细胞,缺氧再给氧损伤,细胞内游离钙离子
缺氧再给氧论文文献综述
王荣俊,丁波,文继月,陈志武[1]（2016）在《人urotensin Ⅱ对大鼠心肌细胞缺氧-再给氧损伤的保护作用及机制》一文中研究指出目的:研究人urotensinⅡ(human urotensin II,h UII)对大鼠心肌细胞缺氧-再给氧损伤的作用及机制。方法:将培养的新生大鼠心肌细胞缺氧3 h后再给氧3 h造成细胞缺氧再给氧损伤(A/R)模型,用台盼蓝染色和MTT染色法分别检测细胞存活率和细胞活性,测定细胞培养上清液中肌酸激酶(CK)和一氧化氮合酶(NOS)活性及一氧化氮(NO)和心肌肌钙蛋白I(c Tn I)含量,用激光共聚焦显微镜检测细胞内游离Ca~(2+)荧光强度。结果:在1×10~(-10.5)~1×10~(-9.5)mol/L范围内,h UII明显地抑制A/R损伤引起的大鼠心肌细胞存活率和细胞活性的下降、CK活性和c Tn I含量的增高、NOS活性和NO含量的降低及心肌细胞内游离Ca~(2+)含量的增高,但1×10~(-9)、1×10~(-8.5)、1×10~(-8)mol/L h UII却无上述抑制作用。结论:h UII在低浓度时,对大鼠心肌细胞缺氧性损伤有保护作用,其机制可能与促进NO合成和降低细胞内游离Ca~(2+)有关。(本文来源于《中国临床药理学与治疗学》期刊2016年12期）
程洁[2]（2016）在《吗啡预处理通过调控miR-133b-5p减轻心肌细胞缺氧再给氧损伤的作用及机制》一文中研究指出背景micro RNAs(mi RNAs)是一类新型非编码小RNA,在转录后水平调节靶基因的表达,参与各种病理生理过程。已报道mi RNA可以参与调节心肌细胞凋亡、心肌梗死、心肌重塑、心肌缺血再灌注损伤、药物预处理等过程。本课题组前期利用mi RNA芯片技术发现mi R-133b-5p在心力衰竭大鼠心肌细胞中表达量明显降低,而经历吗啡预处理(morphine preconditioning,MPC)后,mi R-133b-5p水平显着升高。本课题拟在前期研究基础上,进一步研究mi R-133b-5p介导MPC心肌细胞保护效应的作用及机制。方法1.mi R-133b-5p inhibitor转染效率验证。对数期生长的H9c2心肌细胞长至40-50%细胞融合度时转染mi R-133b-5p inhibitor(FAM标记),48 h后荧光显微镜下观察绿色荧光标记的细胞占总细胞的比例,q RT-PCR验证细胞内mi R-133b-5p下降水平。2.mi R-133b-5p在心肌细胞凋亡中的作用及其机制。对数期生长的H9c2心肌细胞随机分为3组:正常对照组(CON)、抑制剂组(mi R-133b-5p inhibitor)、抑制剂对照组(inhibitor-NC)。CON正常培养,mi R-133b-5p inhibitor在细胞长至40-50%融合度时转染mi R-133b-5p inhibitor,inhibitor-NC在细胞长至40-50%融合度时转染mi R-133b-5p inhibitor-NC。48 h后收集培养液上清检测乳酸脱氢酶(lactate dehydrogenase,LDH)活性,收集细胞利用流式细胞仪检测心肌细胞凋亡率,最后利用q RT-PCR和Western Blot检测各组凋亡相关分子Fas的表达情况。3.mi R-133b-5p在吗啡预处理减轻心肌细胞缺氧再给氧损伤中的作用及其机制。对数期生长的H9c2心肌细胞随机分为5组:正常对照组(CON)、缺氧再给氧组(hypoxia/reoxygenation,H/R)、吗啡预处理组(MPC)、吗啡预处理+抑制剂组(MPC+mi R-133b-5p inhibitor)、吗啡预处理+抑制剂对照组(MPC+inhibitor-NC)。CON细胞正常培养。H/R细胞给予缺氧5h、复氧1h处理。MPC细胞在H/R之前给予1mmol/L吗啡预处理10 min。MPC+mi R-133b-5p inhibitor细胞在吗啡预处理前24 h转染mi R-133b-5p inhibitor。MPC+inhibitor-NC细胞在吗啡预处理前24 h转染mi R-133b-5p inhibitor。吸取各组细胞培养液上清检测LDH活性,细胞计数试剂盒8(cell counting kit-8,CCK-8)检测心肌细胞活力,流式细胞仪检测细胞凋亡率,最后利用q RT-PCR和Western Blot检测各组凋亡相关分子Fas的表达情况。结果1.mi R-133b-5p inhibitor转染效率验证。H9c2心肌细胞转染mi R-133b-5p inhibitor(FAM标记)48后,荧光显微镜下观察发现大于80%的细胞带有绿色荧光标记,q RT-PCR检测发现细胞转染mi R-133b-5p inhibitor后mi R-133b-5p表达水平明显降低,即转染效率满意。2.mi R-133b-5p在心肌细胞凋亡中的作用及其机制。与CON组相比,mi R-133b-5p inhibitor组细胞mi R-133b-5p表达明显下降,培养液LDH活性增多,细胞凋亡率升高(P<0.05),而inhibitor-NC组细胞mi R-133b-5p表达、LDH活性、细胞凋亡率变化均无统计学意义。与CON组相比,mi R-133b-5p inhibitor组细胞Fas m RNA与Fas蛋白表达增加(P<0.05),而inhibitor-NC组Fas表达无明显变化。3.mi R-133b-5p在吗啡预处理减轻心肌细胞缺氧再给氧损伤中的作用及其机制。与CON相比,H/R、MPC MPC+mi R-133b-5p inhibitor和MPC+inhibitor-NC组细胞活力下降,LDH水平增加,凋亡率增加,mi R-133b-5p表达下调(P<0.05)。与H/R组相比,MPC组mi R-133b-5p表达明显上调,细胞活力增加,LDH水平减少,细胞凋亡率减少,Fas表达下调(P<0.05)。与MPC组相比,MPC+mi R-133b-5p inhibitor组mi R-133b-5p表达明显下调,细胞活力降低,LDH水平增加,细胞凋亡率增加,Fas表达上调(P<0.05),而MPC+inhibitor-NC组mi R-133b-5p表达、细胞活力、LDH水平、细胞凋亡率、Fas表达变化均无统计学意义。结论吗啡预处理可能通过上调mi R-133b-5p,进一步抑制靶基因Fas m RNA和蛋白表达水平,从而减轻心肌细胞缺血再灌注缺氧再给氧损伤。(本文来源于《安徽医科大学》期刊2016-03-01）
张亚飞,王加中,吉鸿,陆宏伟,卢乐[3]（2015）在《缺氧再给氧对肝细胞膜纤维形肌动蛋白微丝损伤的分子机制》一文中研究指出背景:建立人肝细胞体外缺氧再给氧损伤模型,模拟移植器官缺血再灌注损伤,从细胞分子水平探讨缺血再灌注所致纤维形肌动蛋白微丝损伤的机制,目前尚无相关研究报道。目的:分析缺氧再给氧对肝细胞膜纤维形肌动蛋白微丝损伤的分子机制。方法:建立体外大鼠肝细胞缺氧再给氧模型。肝细胞随机分为正常对照组、缺氧再给氧组。缺氧再给氧组又分为缺氧再给氧2 h、缺氧再给氧4 h、缺氧再给氧6 h组(分别为细胞缺氧3 h后再给氧2,4,6 h)。光镜观察细胞形态,电镜观察超微结构的改变,共聚焦激光显微镜观察纤维形肌动蛋白微丝含量变化,Real-time PCR检测HSP27、丝切蛋白基因的转录水平,Western blot检测HSP27、丝切蛋白蛋白的表达水平。结果与结论:光镜下缺氧再给氧各组梭形细胞显着增多,且脱落细胞明显增多;透射电镜下缺氧再给氧组与对照组相比内质网数量明显减少,线粒体密度深,糖原消失;共聚焦激光显微镜可见缺氧再给氧组纤维形肌动蛋白纤维荧光紊乱,形态明显改变,荧光染色明显减弱,平均荧光强度缺氧再给氧各组明显低于对照组(P<0.05);Real-time PCR和Western blot检测H/R各组HSP27、丝切蛋白基因转录和蛋白表达水平显着低于正常对照组(P<0.05)。表明缺氧再给氧可能是通过抑制肝细胞内HSP27、丝切蛋白的蛋白表达和基因转录,从而影响纤维形肌动蛋白微丝的正确装配以及减弱纤维形肌动蛋白的正常循环,进而改变纤维形肌动蛋白微丝骨架。(本文来源于《中国组织工程研究》期刊2015年49期）
潘建萍,钟禹霖,李文,张婧,陈小兵[4]（2015）在《仙人掌多糖对大鼠海马神经细胞缺氧/缺糖再给氧损伤的保护作用》一文中研究指出目的观察仙人掌多糖对体外培养大鼠海马神经细胞缺氧/缺糖再给氧损伤的保护作用。方法建立缺氧/缺糖再给氧模型,模拟缺血再灌注损伤。流式细胞术检测凋亡细胞百分率,同时测定细胞培养液中乳酸脱氢酶(LDH)和细胞中超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽(GSH)含量。结果海马神经细胞缺氧/缺糖5 h后再给氧可诱导神经细胞凋亡和细胞坏死,并显着增加LDH释放,降低细胞中SOD和GSH含量;仙人掌多糖预处理后能降低神经细胞凋亡及坏死的百分率,同时,减少LDH的漏出、增加细胞中SOD和GSH的含量,并具有剂量依赖效应。结论仙人掌多糖能够减轻缺氧/缺糖再给氧所致大鼠海马神经细胞的凋亡作用,其机制可能与其增强机体的抗自由基抗氧化能力有关。(本文来源于《临床医药文献电子杂志》期刊2015年23期）
余小蒙,吴剑,陈志武,郭岩[5]（2014）在《内源性内皮衍生超极化因子对缺氧/再给氧致大鼠海马神经细胞凋亡的抑制作用》一文中研究指出目的研究乙酰胆碱(ACh)诱导内源性内皮衍生超极化因子(EDHF)对缺氧/再给氧大鼠海马神经细胞凋亡的影响。方法取原代培养的大鼠海马神经细胞制备缺氧/再给氧损伤模型;大鼠大脑中动脉(MCA)血管段用一氧化氮合酶抑制剂NG-nitro-L-argininemethyl ester(L-NAME)和前列环素抑制剂indomethacin(Indo)预处理,用ACh诱导血管内皮细胞合成释放内源性EDHF;分别用流式细胞仪法和Hoechst荧光法检测海马神经元凋亡。结果流式细胞仪法和Hoechst荧光法检测均表明假缺氧组海马神经细胞的凋亡率很低,分别为3.1%和2.2%左右,而缺氧/再给氧的模型组细胞凋亡率有显着升高;与缺氧/再给氧模型组相比,内皮完整血管段合用1μmol/L ACh或合用1μmol/L ACh、30μmol/L L-NAME及10μmol/L Indo均可明显抑制缺氧/再给氧所致的细胞凋亡,而单用ACh或内皮完整的血管或ACh合用去内皮的血管段对细胞凋亡无明显影响。结论 ACh诱导大鼠脑血管内皮细胞释放的内源性EDHF对缺氧/再给氧海马神经细胞凋亡有明显的抑制作用。(本文来源于《安徽医科大学学报》期刊2014年09期）
罗蕾,李震宇,罗光恒,夏旻,盛长城[6]（2014）在《灯盏花素调控MICA基因表达对人肾小管上皮细胞缺氧再给氧损伤的保护作用》一文中研究指出目的观察灯盏花素提取液对人肾小管细胞(HK-2)缺氧再给氧(hypoxia/re-oxygenation,H/R)损伤的保护作用,探讨其可能的治疗作用及保护机理。方法建立HK-2体外H/R损伤模型。随机分为3组:对照组、缺氧组、灯盏花素组(灯盏花素预处理+缺氧)。在缺氧16 h后设立4个时间点:复氧0、4、8、16 h。倒置显微镜下观察细胞的形态学改变,荧光定量和流式检测各组HK-2 MICA分子和蛋白水平的表达,乳酸脱氢酶释放法测定NK细胞对HK-2的杀伤能力。结果与对照组相比,缺氧组HK-2细胞MICA转录水平和蛋白表达水平在缺氧16 h后显着升高,于复氧8 h达峰值后逐渐下降,并于复氧16 h后恢复正常。NK细胞对H/R处理的HK-2细胞的杀伤活性与MICA的表达变化呈正相关。与缺氧组相比,灯盏花素组显着降低H/R处理的HK-2细胞MICA的表达和NK细胞对其的杀伤活性。结论在IRI过程中,下调H/R处理的HK-2细胞的MICA,从而抑制NK细胞对其的杀伤活性,可能是灯盏花素抗氧化应激和增强抗氧化防御功能的有效机制之一。(本文来源于《免疫学杂志》期刊2014年08期）
朱海娟[7]（2014）在《吗啡预处理保护心力衰竭大鼠心肌细胞缺氧再给氧损伤的相关特异性microRNA的筛选验证及生物信息学分析》一文中研究指出背景心力衰竭是各种心脏疾病发展的严重阶段，及时手术治疗是冠心病、心脏瓣膜病等所致心力衰竭患者延长生命、改善预后的关键，但这类患者更易发生围术期心肌缺血再灌注损伤（ischemia-reperfusion injury, IRI），给麻醉安全和患者生命都带来严重威胁。本课题组发现经典的心肌保护措施缺氧预处理（Hypoxicpreconditioning, HPC）对心力衰竭心肌细胞缺氧再给氧损伤（Hypoxia-reoxygenationinjury, HR injury）的保护作用消失而吗啡预处理（Morphine preconditioning, MPC）的保护作用仍存在，其机制尚待阐明。MicroRNA(miRNA)是近年来新发现的一类小分子非编码RNA，参与调控心肌缺血再灌注损伤、缺血预处理的保护作用、心衰发展、阿片药理作用等多个过程，但miRNA是否介导MPC保护心衰心肌细胞缺氧再给氧损伤目前尚未见报道。本研究利用微阵列分析技术探索MPC对心力衰竭大鼠心肌细胞microRNA (miRNA)表达谱的影响并预测分析miRNA的靶基因及其功能。方法选择健康成年雄性SD大鼠，尾静脉注射阿霉素制备慢性心力衰竭模型，分离心室肌细胞，制备心肌细胞MPC及HR损伤模型，本课题实验分为两部分完成。实验一，miRNA芯片筛选。心室肌细胞随机分为3组：正常对照组（nCON）、心衰对照组（fCON）、心衰吗啡预处理组（fMPC）。各组处理后即刻收集细胞，提取总RNA行芯片分析检测miRNA表达谱的变化，重点比较fCON和fMPC组间差异表达的miRNA；TargetScan、miRanda软件预测差异表达miRNA的靶基因，GO（基因功能）和KEGG Pathway（信号通路）分析靶基因功能，构建miRNA-基因网络调控图，识别可能的核心miRNA及靶基因。实时定量PCR（quantitiverealtime PCR, qRT-PCR）法验证芯片结果。实验二，根据生物信息学分析结果，选择miR-133b-5p为目的miRNA，进一步检测其靶基因Fas在心衰心肌细胞HR损伤中的表达变化及预处理的干预作用。正常和心衰心肌细胞分离后，分为4组：正常对照组（nCON）、心衰对照组（fCON）、心衰缺氧再给氧组（fHR）、心衰吗啡预处理组（fMPC+HR）。各组处理完毕后收集细胞提取RNA及蛋白，行qRT-PCR和Western blot检测靶基因Fas mRNA和蛋白表达水平。结果1. miRNA芯片分析结果miRNA芯片分析显示，与nCON组比较，fCON组有5个miRNA上调7个miRNA下调；与fCON组比较，fMPC组有8个miRNA上调10个miRNA下调（p<0.01，信号值>500）。其中miR-133b-5p、miR-6216、miR-664-1-5p、let7e-5p等miRNA发生了显着改变（Fold change>2）。miR-133b-5p在心衰心肌细胞（fCON vs. nCON）中显着下调，而经MPC处理后miR-133b-5p表达水平增加（fMPC vs. fCON）；miR-6216，let7e-5p在心衰心肌细胞中均显着上调，但经MPC处理后表达水平降低。miR-664-1-5p在心衰过程中差异无显着性，而fMPC处理后其表达显着下调。2.靶基因生物信息学分析GO及KEGG Pathway分析发现fMPC诱导差异表达的miRNA所调控的靶基因主要与凋亡、钙稳态、MAPK信号通路等功能有关。miRNA-gene-network发现miR-133b-5p及Fas可能是介导凋亡的核心miRNA和靶基因，并发现Fas的3’UTR区域含有miR-133b-5p的特异性结合位点。3. qRT-PCR验证芯片结果qRT-PCR结果显示在nCON、fCON、fMPC叁组中miR-133b-5p、miR-6216及let7e-5p的表达水平和变化趋势与miRNA芯片分析结果一致。4. miR-133b-5p的靶基因Fas在心衰心肌细胞HR损伤中的表达及MPC的干预作用qRT-PCR结果显示，与nCON组比较，fCON组Fas mRNA表达增加，与fCON比较，fHR组Fas mRNA表达下调，而fMPC+HR组较之fHR组则进一步下调（p<0.01）；Western blot结果显示，与nCON组比较，fCON组Fas蛋白表达亦显着增加，不同于mRNA表达，fHR组与fCON组比较Fas蛋白表达进一步增加，而fMPC+HR组较之fHR组则降低（p<0.01）。从各组Fas蛋白表达的变化趋势，我们发现miR-133b-5p和Fas蛋白存在一种反向调节的关系。结论MPC对心衰心肌细胞miRNA表达谱产生影响，其中miR-133b-5p、miR-6216、let7e-5p改变最为显着；差异表达miRNA调控的靶基因功能主要集中于凋亡、钙稳态以及MAPK信号通路；miR-133b-5p可能通过其靶基因Fas介导MPC对心力衰竭心肌细胞缺氧再给氧损伤的保护作用。(本文来源于《安徽医科大学》期刊2014-03-01）
赵久茗,何斯荣,王成世,刘敬平,李胜富[8]（2013）在《BMSCs对猪胰岛缺氧再给氧损伤的保护作用》一文中研究指出目的研究恒河猴BMSCs在缺氧再给氧环境下对新生猪胰岛活性和功能的保护作用。方法取健康成年恒河猴5只,体重6～10 kg,取骨髓采用骨髓单核细胞贴壁培养法筛选获得BMSCs;取3～5日龄新生长白猪5只,取胰腺以Ⅴ型胶原酶消化制备新生猪胰岛。将实验分为胰岛正常组(A组)、胰岛加BMSCs正常组(B组)、胰岛缺氧再给氧组(C组)、胰岛加BMSCs缺氧再给氧组(D组),观察比较常规培养和缺氧(1%O2)12 h再给氧24 h或48 h条件下,胰岛的功能活性变化:二乙酸荧光素/碘化丙啶(propidium iodide,PI)染色计算胰岛成活率;细胞计数试剂盒8法检测新生猪胰岛的代谢活性;膜联蛋白V-FITC/PI标记后流式细胞仪检测胰岛凋亡率;葡萄糖刺激法分析胰岛功能糖刺激指数(stimulation index,SI)。结果 C组较A、B组胰岛团更为分散,死亡细胞增多;D组较C组胰岛团完整,成活率更高。A、B、C、D组胰岛成活率分别为90.2%±9.1%、88.3%±5.9%、52.3%±12.1%、71.4%±11.5%,C、D组显着低于A、B组(P<0.05),D组显着高于C组(P<0.05)。D组BMSCs以1∶10和1∶20比例与胰岛缺氧再给氧共培养后,代谢活性显着高于C组(P<0.05)。A、B、C、D组胰岛凋亡率分别为27.1%±3.2%、24.0%±1.0%、64.3%±1.8%、46.2%±1.4%,C、D组显着高于A、B组(P<0.05),但D组显着低于C组(P<0.05)。各时间点A、B组SI比较差异均无统计学意义(P>0.05),C组显着低于A、B组(P<0.05),在24 h和72 h时D组显着高于C组(P<0.05)。结论 BMSCs对缺氧再给氧诱导的新生猪胰岛活性和功能损伤具有保护作用。(本文来源于《中国修复重建外科杂志》期刊2013年08期）
金辉,岳海波,王丽岩,杨煜,吕若谷[9]（2013）在《巴戟天醇提物对实验性心肌缺血及缺氧再给氧损伤的影响》一文中研究指出目的研究巴戟天醇提物对实验性心肌缺血及缺氧再给氧损伤的影响。方法取杂种犬30只,随机分为模型组、阳性药对照组(刺五加注射液,10.0 mg/kg)、巴戟天醇提物(2.5、5.0、10.0 mg/kg)组每组6只。结扎犬左冠状动脉前降支,制备急性心肌梗死模型,观察巴戟天醇提物对磷酸肌酸激酶(CK)、乳酸脱氢酶(LDH)、天门冬氨酸氨基转移酶(AST)、游离脂肪酸(FFA)、过氧化脂质(LPO)、超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽过氧化物(GSH-Px)的影响。新生大鼠随机分为正常组,损伤组,阳性药对照组(刺五加注射液),巴戟天醇提物1 000、500、250μg/ml组,每组8只。观察巴戟天醇提物对缺氧缺糖新生大鼠心肌细胞LDH的影响。结果巴戟天醇提物降低血清中CK、LDH、AST的活性,降低血清中FFA、LPO含量,提高SOD、GSH-Px活性,减少新生大鼠心肌细胞LDH的释放。结论巴戟天醇提物对实验性心肌缺血引起的脂质过氧化损伤具有保护作用。(本文来源于《中国老年学杂志》期刊2013年13期）
黄春霞[10]（2013）在《吗啡预处理对阿霉素所致的慢性充血性心力衰竭大鼠心肌细胞缺氧再给氧损伤的保护作用》一文中研究指出目的心力衰竭作为临床常见的危重症，是多种心血管疾病的末期表现，严重威胁患者的健康。阿霉素因其很好的抗肿瘤疗效而在临床上广泛使用，但其严重的心肌损害引起越来越多的重视。外科手术中心脏的缺血再灌注损伤亦是很常见，而经典的缺血预处理早已被证明显现出很好的保护作用。本研究将观察吗啡预处理阿霉素致慢性充血性心力衰竭大鼠心肌细胞缺氧再给氧损伤的作用，并探讨可能的作用机制。方法成年♂SD大鼠，体重220-250g，尾静脉注射阿霉素2mg/kg，每周一次，计六周，累积剂量达12mg/kg，观察大鼠一般情况。末次注射2周后，麻醉大鼠后用0.05%I型胶原酶分离原代心肌细胞，正常培养48h后，随机将心肌细胞分组：正常对照组（CON），缺氧预处理组（HPC），不同剂量吗啡（0.03,0.1,0.3,1,3μmol/L）预处理组（MPC），除CON外均给予缺氧-再给氧处理。分别检测缺氧前后和再给氧前后及预处理后培养液中LDH水平和CK的活性，采用MTT检测各组相应处理后的心肌细胞活力。为进一步研究其机制，又将心肌细胞细分组：正常对照组（CON），缺氧预处理组（HPC），吗啡（1μmol/L）预处理组（MPC），纳洛酮组（Nal），钠曲吲哚组（Nat），缺氧预处理+纳洛酮组（HPC+Nal），吗啡预处理+纳洛酮组（MPC+Nal），缺氧预处理+钠曲吲哚组（HPC+Nat），吗啡预处理+钠曲吲哚组（MPC+Nat）。两种阻断剂分别在预处理前10min分别加入非选择性阿片受体阻断剂纳洛酮（10μmol/L）和δ-阿片受体阻断剂钠曲吲哚（1μmol/L），分别检测缺氧前后和再给氧前后培养液中LDH水平和CK的活性，采用胎盘蓝染色和MTT检测处理后的各组心肌细胞活力，Hoechst33234染色检测凋亡率。结果与CON组相比，H/R组心肌细胞活力明显降低，凋亡细胞数增加，而LDH和CK活性明显升高（P<0.05）。HPC较H/R组未见明显改善，而MPC组呈剂量依赖性改善细胞H/R后的损伤，且1μmol/L可能为最佳剂量，增加细胞存活率47.4%，降低LDH释放38.1%。纳洛酮可完全阻断MPC的心肌保护作用，而钠曲吲哚部分阻断该作用。结论缺氧预处理对对阿霉素所致的慢性充血性心力衰竭大鼠心肌细胞缺氧再给氧损伤无保护作用，吗啡预处理有保护作用，且该作用可能是通过激活阿片受体介导的，主要为δ-阿片受体。(本文来源于《安徽医科大学》期刊2013-03-01）
缺氧再给氧论文开题报告
（1）论文研究背景及目的
此处内容要求：
首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景，再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题，并提出你的论文准备的观点或解决方法。
写法范例：
背景micro RNAs(mi RNAs)是一类新型非编码小RNA,在转录后水平调节靶基因的表达,参与各种病理生理过程。已报道mi RNA可以参与调节心肌细胞凋亡、心肌梗死、心肌重塑、心肌缺血再灌注损伤、药物预处理等过程。本课题组前期利用mi RNA芯片技术发现mi R-133b-5p在心力衰竭大鼠心肌细胞中表达量明显降低,而经历吗啡预处理(morphine preconditioning,MPC)后,mi R-133b-5p水平显着升高。本课题拟在前期研究基础上,进一步研究mi R-133b-5p介导MPC心肌细胞保护效应的作用及机制。方法1.mi R-133b-5p inhibitor转染效率验证。对数期生长的H9c2心肌细胞长至40-50%细胞融合度时转染mi R-133b-5p inhibitor(FAM标记),48 h后荧光显微镜下观察绿色荧光标记的细胞占总细胞的比例,q RT-PCR验证细胞内mi R-133b-5p下降水平。2.mi R-133b-5p在心肌细胞凋亡中的作用及其机制。对数期生长的H9c2心肌细胞随机分为3组:正常对照组(CON)、抑制剂组(mi R-133b-5p inhibitor)、抑制剂对照组(inhibitor-NC)。CON正常培养,mi R-133b-5p inhibitor在细胞长至40-50%融合度时转染mi R-133b-5p inhibitor,inhibitor-NC在细胞长至40-50%融合度时转染mi R-133b-5p inhibitor-NC。48 h后收集培养液上清检测乳酸脱氢酶(lactate dehydrogenase,LDH)活性,收集细胞利用流式细胞仪检测心肌细胞凋亡率,最后利用q RT-PCR和Western Blot检测各组凋亡相关分子Fas的表达情况。3.mi R-133b-5p在吗啡预处理减轻心肌细胞缺氧再给氧损伤中的作用及其机制。对数期生长的H9c2心肌细胞随机分为5组:正常对照组(CON)、缺氧再给氧组(hypoxia/reoxygenation,H/R)、吗啡预处理组(MPC)、吗啡预处理+抑制剂组(MPC+mi R-133b-5p inhibitor)、吗啡预处理+抑制剂对照组(MPC+inhibitor-NC)。CON细胞正常培养。H/R细胞给予缺氧5h、复氧1h处理。MPC细胞在H/R之前给予1mmol/L吗啡预处理10 min。MPC+mi R-133b-5p inhibitor细胞在吗啡预处理前24 h转染mi R-133b-5p inhibitor。MPC+inhibitor-NC细胞在吗啡预处理前24 h转染mi R-133b-5p inhibitor。吸取各组细胞培养液上清检测LDH活性,细胞计数试剂盒8(cell counting kit-8,CCK-8)检测心肌细胞活力,流式细胞仪检测细胞凋亡率,最后利用q RT-PCR和Western Blot检测各组凋亡相关分子Fas的表达情况。结果1.mi R-133b-5p inhibitor转染效率验证。H9c2心肌细胞转染mi R-133b-5p inhibitor(FAM标记)48后,荧光显微镜下观察发现大于80%的细胞带有绿色荧光标记,q RT-PCR检测发现细胞转染mi R-133b-5p inhibitor后mi R-133b-5p表达水平明显降低,即转染效率满意。2.mi R-133b-5p在心肌细胞凋亡中的作用及其机制。与CON组相比,mi R-133b-5p inhibitor组细胞mi R-133b-5p表达明显下降,培养液LDH活性增多,细胞凋亡率升高(P<0.05),而inhibitor-NC组细胞mi R-133b-5p表达、LDH活性、细胞凋亡率变化均无统计学意义。与CON组相比,mi R-133b-5p inhibitor组细胞Fas m RNA与Fas蛋白表达增加(P<0.05),而inhibitor-NC组Fas表达无明显变化。3.mi R-133b-5p在吗啡预处理减轻心肌细胞缺氧再给氧损伤中的作用及其机制。与CON相比,H/R、MPC MPC+mi R-133b-5p inhibitor和MPC+inhibitor-NC组细胞活力下降,LDH水平增加,凋亡率增加,mi R-133b-5p表达下调(P<0.05)。与H/R组相比,MPC组mi R-133b-5p表达明显上调,细胞活力增加,LDH水平减少,细胞凋亡率减少,Fas表达下调(P<0.05)。与MPC组相比,MPC+mi R-133b-5p inhibitor组mi R-133b-5p表达明显下调,细胞活力降低,LDH水平增加,细胞凋亡率增加,Fas表达上调(P<0.05),而MPC+inhibitor-NC组mi R-133b-5p表达、细胞活力、LDH水平、细胞凋亡率、Fas表达变化均无统计学意义。结论吗啡预处理可能通过上调mi R-133b-5p,进一步抑制靶基因Fas m RNA和蛋白表达水平,从而减轻心肌细胞缺血再灌注缺氧再给氧损伤。
（2）本文研究方法
调查法：该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。
观察法：用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。
实验法：通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。
文献研究法：通过调查文献来获得资料，从而全面的、正确的了解掌握研究方法。
实证研究法：依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。
定性分析法：对研究对象进行“质”的方面的研究，这个方法需要计算的数据较少。
定量分析法：通过具体的数字，使人们对研究对象的认识进一步精确化。
跨学科研究法：运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。
功能分析法：这是社会科学用来分析社会现象的一种方法，从某一功能出发研究多个方面的影响。
模拟法：通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。
缺氧再给氧论文参考文献
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标签：urotensinⅡ; 心肌细胞; 缺氧再给氧损伤; 细胞内游离钙离子;