导读:本文包含了双启动子干扰论文开题报告文献综述及选题提纲参考文献，主要关键词:癌,肝细胞,基因,转基因,自杀,RNA干扰,小鼠,裸
双启动子干扰论文文献综述
杨六成,吴凯,黄宗海,徐帅,王健俊[1]（2015）在《KDR启动子驱动的CD/TK双自杀基因联合survivin基因干扰抑制肝癌细胞生长的体内研究》一文中研究指出目的:探讨腺病毒介导的KDR启动子驱动的CD/TK双自杀基因系统(Ad-KDRP-CD/TK)联合survivin基因干扰对肝癌细胞在裸鼠体内生长的抑制作用。方法:将20只裸鼠随机分均为模型组(皮下植入BEL-7402肝癌细胞成瘤,不加任何处理)、双自杀基因转染组(皮下植入转染Ad-KDRP-CD/TK的BEL-7402细胞,成瘤后瘤内注射前药更昔洛韦与5-氟胞嘧啶)、survivin si RNA转染组(皮下注射BEL-7402肝癌细胞,成瘤后瘤内注射survivin si RNA/LipDMEM转染混合物)、联合转染组(双自杀基因转染+survivin si RNA转染处理)。治疗2周后处死各组小鼠,称取肿瘤质量,计算肿瘤抑制率,检测瘤组织微血管密度(MVD)及survivin m RNA与蛋白表达。结果:各治疗组的肿瘤质量明显小于模型组(均P<0.05),且联合转染组的抑瘤率最大(均P<0.05);肿瘤组织MVD、survivin m RNA与蛋白水平均明显降低,且联合转染组的降低程度最为明显(均P<0.05)。结论:双自杀基因联合survivin干扰是抑制鼠肝癌细胞在体内生长的有效途径。(本文来源于《中国普通外科杂志》期刊2015年01期）
龚霞,张慧慧,彭剑雄,罗建新[2]（2014）在《U6/H1双启动子siRNA表达框架构建及其对肿瘤细胞端粒酶活性的干扰作用》一文中研究指出目的:构建针对端粒酶hTERT基因的U6/H1双启动子siRNA表达框架(SEC),并观察其转录产物对HeLa细胞端粒酶活性的干扰作用。方法:利用融合PCR技术,针对人端粒酶hTERT基因开放阅读区构建3条U6/H1双启动子SEC以及针对其3'端非翻译区构建1条U6/H1双启动子SEC,对各SEC鉴定后,分别转染人宫颈癌HeLa细胞,用端粒重复序列扩增法(TRAP)检测HeLa细胞的端粒酶活性。结果:4种针对端粒酶hTERT基因的U6/H1双启动子SEC均成功构建,转染HeLa细胞后,对端粒酶活性的抑制率分别为36.8%、57.39%、80.47%、70.31%。结论:针对端粒酶hTERT基因的U6/H1双启动子SEC的成功构建,为开展肿瘤端粒酶基因干扰的实验研究提供了新的有效手段。(本文来源于《中国普通外科杂志》期刊2014年06期）
龚霞[3]（2014）在《体外构建双启动子SECs及其对HepG2细胞端粒酶活性的干扰作用》一文中研究指出目的：构建针对端粒酶逆转录酶(human telomerase reverse transcriptase, hTERT)基因的H1/U6双启动子表达框架(siRNA expression cassettes,SECs)并研究其转录生成的siRNA/miRNA对人肝癌细胞(HepG2)端粒酶活性的干扰作用,以确定siRNA/miRNA表达载体的有效性,探索制备干扰性RNA的新途径,从而为人类肿瘤的治疗提供新方法。方法：利用融合PCR技术,针对人端粒酶hTERT基因开放阅读区1800-1818和2650-2668位点构建2条H1/U6双启动子SECs,针对其3’端非翻译区3878-3896和3964-3982位点构建2条H1/U6双启动子SECs,并构建一随机序列干扰片段为对照。利用阳离子聚合物转染试剂以及磷酸钙共沉淀法两种方法分别转染HepG2细胞,转录生成siRNA或miRNA。利用TRAP-PCR-银染法检测端粒酶活性,并对其电泳条带进行灰度扫描,计算端粒酶活性抑制率；用SYBR Green I荧光定量法直接定量端粒酶活性,分析H1/U6双启动子SECs对HepG2细胞端粒酶活性的干扰作用。结果：2.5%的琼脂糖凝胶电泳分析以及测序结果显示成功构建了针对端粒酶hTERT的H1/U6双启动子SECs。与对照组相比,针对不同位点的SECs的各转染组,端粒酶活性出现不同程度的抑制。采用阳离子聚合物转染法,针对位点1800-1818、2650-2668、3878-3896和3964-3982的各转染组细胞端粒酶活性抑制率分别为42.38%、61.80%、77.95%、79.51%；采用磷酸钙共沉淀法各转染组细胞端粒酶活性抑制率分别为20.19%、27.38%、42.53%、64.3%。结论：利用融合PCR成功构建了SECs,并且其对HepG2细胞端粒酶hTERT基因表达有明显的干扰作用。这一方法可为合成干扰RNA提供新的方法,为高通量筛选有效的干扰位点和建立RNAi文库开拓新思路,为临床开展针对肿瘤端粒酶基因干扰的实验研究奠定了基础。(本文来源于《中南大学》期刊2014-05-01）
曾永秋,曹洋,余红,赵矫,税青林[4]（2013）在《Survivin启动子调控的hTERT基因RNAi载体的构建及其肿瘤靶向干扰作用研究》一文中研究指出目的:构建带有肿瘤特异性Survivin启动子、hTERT基因靶向的shRNA表达载体pYr-Survivinp-miR30-hTERT,探讨该载体的肿瘤靶向性及其RNAi作用效率,为RNAi技术在肿瘤基因治疗中的进一步优化进行有益的探索。方法:化学合成hTERT基因shRNA寡核苷酸序列,克隆至质粒pYr-CMV-Mir30-shRNA,构建重组质粒pYr-CMV-Mir30-hTERT;克隆Survivin启动子序列,取代该质粒原有的CMV启动子,构建重组质粒pYr-Survivinp-miR30-hTERT,同时构建阴性对照质粒pYr-CMV-Mir30-NC,以上质粒均进行酶切及测序鉴定。将以上载体分别转染人乳腺癌MCF-7细胞、人宫颈癌Hela细胞及293T细胞,荧光显微镜下观察细胞转染情况,并采用半定量RT-PCR、western blot技术检测MCF-7细胞和Hela细胞中hTERT mRNA和蛋白的表达。结果:重组质粒经酶切及测序鉴定证实均符合设计要求,构建成功;荧光检测结果表明,CMV组在叁种细胞中均有荧光蛋白的表达,而Survivin组质粒仅在MCF-7细胞和Hela细胞中表达绿色荧光,转染效率均能达到70%以上,而在293T细胞中则未见荧光;RT-PCR和Western blot的结果均显示MCF-7细胞和Hela细胞的Survivin组和CMV组中hTERT mRNA和蛋白的表达均受到明显抑制(P<0.05),两组之间无明显差异(P>0.05)。结论:Survivin启动子调控的hTERT基因RNAi载体能有效抑制Survivin阳性肿瘤细胞中hTERT的表达,而对正常细胞不产生影响。(本文来源于《泸州医学院学报》期刊2013年04期）
曹柯,孙朕,黄培华,樊宝良[5]（2013）在《RNA聚合酶Ⅱ启动子驱动的长双链RNA干扰载体的构建与验证》一文中研究指出为了探索构建由RNA聚合酶Ⅱ型启动子驱动、能有效避免干扰素反应的表达长双链RNA的RNA干扰载体,试验在转录单元两端各添加了一个自剪切核酶序列,在转录后切成RNA出核所必要的5'帽子和3'polyA尾,以绿色荧光蛋白(EGFP)基因为报告基因插入2个核酶之间作为试验载体,以表达红色荧光蛋白基因的载体作转染效率校准,通过瞬间转染对荧光蛋白的表达情况进行观察和RT-PCR分析。结果表明:在转染效率基本一致的情况下,试验组未观察到绿色荧光;2个核酶能够完全自剪切,试验组细胞质中有EGFP mRNA的存在,但与正常对照组相比下降了46.1%。说明研究设计的载体达到了延迟表达RNA出核的目的,为用该载体表达长双链RNA时在其出核之前被Dicer酶有效切割成小双链RNA从而避免其出核引起干扰素反应提供了时间保障。(本文来源于《黑龙江畜牧兽医》期刊2013年15期）
崔文静,张矫,马祥敏,王雯雯,王欣[6]（2013）在《双启动子shRNA干扰的协同效应》一文中研究指出目的构建含有两段不同靶特异干扰序列的双启动子shRNA载体,并比较其与单个靶特异干扰序列的shRNA载体的干扰效应。方法通过PCR方法扩增H1启动子序列,构建含有U6和H1双启动子的shRNA载体,命名为PLKO.1-H1。设计2对针对EGFP基因不同位点的shRNA片段,同时设计2对无干扰作用的片段shS1和shS2作为对照。分别构建携带上述片段的慢病毒表达载体shEGFP1-H1-shS2、shS1-H1-shEGFP2及shEGFP1-H1-shEGFP2,同时以shS1-H1-shS2质粒作为对照。将重组质粒转染293t细胞,收集病毒感染Hela/EGFP细胞。比较各组之间细胞的荧光强度,并以Western blot检测EGFP的蛋白表达情况。结果成功构建含有双启动子的shRNA慢病毒表达载体。实验组与对照组相比,EGFP蛋白表达水平明显下调,以shEGFP1-H1-shEGFP2重组质粒干扰效应最强。结论含有两段不同靶特异干扰序列的双启动子shRNA载体存在协同干扰效应。(本文来源于《山东医药》期刊2013年11期）
刘海英,宋巍,石宇[7]（2012）在《siRNA干扰Oct4基因对P19细胞中miR-302启动子活性的影响》一文中研究指出目的检测siRNA干扰Oct4基因对P19细胞中miR-302启动子活性的影响,探讨维持胚胎癌(EC)细胞及胚胎干细胞(ES)全能性的调控机制。方法采用Western blotting检测Oct4 siRNA对Oct4蛋白的干扰效果;采用双荧光素酶报告基因分析系统检测siRNA干扰Oct4基因对P19细胞中miR-302基因启动子活性的影响。结果对于Oct4蛋白的最适干扰量为2.0μg siRNA1和2.0μg siRNA2;向P19细胞中转染Oct4 siRNA可以降低miR-302启动子的荧光素酶活性。结论 Oct4对miR-302的启动子具有正向调控作用。(本文来源于《中国优生与遗传杂志》期刊2012年08期）
刘微,毕秋英,瞿全新[8]（2012）在《带hTERT启动子的腺病毒干扰ERCC1基因表达逆转卵巢癌顺铂耐药的研究》一文中研究指出目的:研究带hTERT启动子的腺病毒通过干扰ERCC1基因表达而逆转卵巢癌顺铂耐药的作用。方法:以1、10、50、80感染复数(MOI)的重组腺病毒分别感染卵巢癌细胞株SKOV3、卵巢癌细胞顺铂耐药株SKOV3/DDP和脐静脉内皮细胞ECV304,同时以相同滴度的空载体腺病毒感染细胞,将感染前的细胞作为对照,以RT-PCR方法检测重组腺病毒转染细胞中ERCC1 mRNA表达,以Western blot方法检测重组腺病毒转染细胞中ERCC1蛋白表达,并以MTT法检测肿瘤细胞对顺铂化疗敏感性的影响。结果:(1)在SKOV3及SKOV3/DDP细胞中,不同剂量Ad-hTERT-ERCC1 shRNA转染组与转染前相比,ERCC1 mRNA及ERCC1蛋白表达水平下调,差异有统计学意义(P<0.01)。而在空载体腺病毒转染组及ECV304细胞中,ERCC1 mRNA及ERCC1蛋白表达水平无改变,差异无统计学意义(P>0.05);(2)重组腺病毒转染后,SKOV3/DDP细胞对顺铂的敏感性显着增加(P<0.01),并呈剂量依赖性。结论:带hTERT启动子的腺病毒能够通过干扰ER-CC1基因表达而逆转卵巢癌顺铂耐药,并且具有剂量依赖性。(本文来源于《现代妇产科进展》期刊2012年04期）
张晓伟[9]（2012）在《Bmi-1启动子介导Bmi-1干扰靶向性治疗胃癌研究》一文中研究指出第一部分Bmi-1在调控胃癌干细胞及化疗药物敏感性中的作用背景：肿瘤干细胞理论的提出为目前肿瘤的不可治愈性、复发与转移等特性提供了很好的解释,越来越多的研究证实肿瘤干细胞的存在。肿瘤干细胞是肿瘤中一小部分具有干细胞性质的细胞群体,具有自我更新的能力,是形成不同分化程度的肿瘤细胞和肿瘤不断扩大的源泉。肿瘤干细胞虽占肿瘤细胞的比重很低,但由于其处于静止期且常高表达耐药相关基因,表现为化、放疗抵抗,同时其具有的高转移能力,亦成为肿瘤治疗失败、复发的根源。肿瘤干细胞研究已成为目前肿瘤研究的热点。目前已成功分离乳腺癌、脑胶质瘤、肝癌、结肠癌等肿瘤干细胞,但胃癌干细胞的研究报道较少,目前发现CD44+处于静息或较低的增殖状态细胞可能是体内胃癌细胞的来源,CD44+胃癌细胞具有类干细胞特性,表现为较高的成瘤性和化、放疗抵抗。亦有报道CD133+胃癌细胞具有肿瘤干细胞样特性。从胃癌中分离的SP(side population)细胞表现较高的腹膜粘附性和转移性,目前对胃癌干细胞的分离方法仍很不成熟,更缺乏靶向肿瘤干细胞的治疗方法。Bmi-1在调节干细胞与肿瘤细胞的增殖与自我更新中发挥重要作用；Hedgehog信号传导通路的过度活化为肿瘤干细胞形成与无限增殖的元凶之一,已有研究表明Bmi-1在Hedgehog信号通路调控正常乳腺干细胞与乳腺癌干细胞的自我更新中发挥关键作用。可见,Bmi-1可能在肿瘤干细胞特性的维持中发挥重要作用,可能成为肿瘤干细胞的治疗靶点。方法：无血清培养法、细胞表面标记CD44、CD133流式细胞分选分离胃癌干细胞；从肿瘤干细胞标志物检测、化疗抵抗、高转移性和体内成瘤性等四个方面特性鉴定胃癌干细胞；改变Bmi-1表达观察其对胃癌干细胞特性和对化疗药物敏感性的影响。结果：从胃癌细胞株及原代胃癌细胞中分离出微球体具有胃癌干细胞样特性；CD133(+)或CD44(+)胃癌细胞具有化疗抵抗、更高的转移能力和成瘤能力；Bmi-1在维持胃癌干细胞自我更新和化疗药物抵抗中发挥作用；5-Fu化疗药物可富集胃癌干细胞。结论：Bmi-1在维持胃癌干细胞特性及化疗耐药中发挥作用,干扰其表达后可部分逆转其干细胞特性和提高化疗药物敏感性。第二部分Bmi-1启动子介导Bmi-1基因干扰腺病毒体内、外靶向杀伤胃癌作用及机制研究背景：寻找在肿瘤中特异性表达的靶点、开发靶向性的RNA干扰(RNAi)载体是当前RNAi治疗研究的两大重要方面；肿瘤干细胞是肿瘤治疗失败的主要原因之一,已成为新的治疗靶点。Bmi-1为干细胞与肿瘤细胞的自我更新能力所必需,我们前期工作发现Bmi-1特异性高表达于胃癌组织,并与胃癌的侵犯深度、淋巴结转移、预后相关,具有较好的靶向治疗意义。因而,我们设想构建Bmi-1启动子介导的Bmi-1干扰腺病毒载体,使其特异性地在高水平表达Bmi-1的癌细胞中表达,通过特异性的沉默Bmi-1表达,进而抑制或杀伤胃癌细胞。方法：采用荧光素酶报告载体检测(?)Bmi-1启动子活性,构建Bmi-1启动子介导Bmi-1干扰腺病毒(Ad-Bmi-1i)。1)体外细胞实验：检钡(?)Ad-Bmi-1i腺病毒载体对不同Bmi-1表达水平的胃癌细胞Bmi-1沉默效果,及对肿瘤细胞增殖、凋亡、细胞衰老、细胞运动/转移等的影响；(?)(?)estern blot验证Bmi-1干扰对p53、p16、Erk、Oct4和Akt等传导通路相关蛋白表达水平的影响。2)体内实验：Bmi-1低表达和Bmi-1高表达胃癌细胞感染Ad-Bmi-1腺病毒筛选获得Bmi-1稳定干扰胃癌细胞株,观察Bmi-1干扰对体内成瘤的影响；原位组织β-半乳糖苷酶染色明确体内Bmi-1干扰对肿瘤细胞衰老的影响；IHC和Western blot检测相关潜在下游靶蛋白表达明确其体内的调控机制。3)基因治疗：采用瘤内注射方法观察Ad-Bmi-1i腺病毒对不同Bmi-1表达水平胃癌细胞裸鼠皮下移植瘤的杀伤效果；IHC法检测相关可能靶基因和干细胞标志物的表达明确Bmi-1体内调控机制及Ad-Bmi-1i病毒是否可以杀伤肿瘤干细胞。结果：体外感染Ad-Bmi-1i病毒可诱导胃癌细胞衰老,明显抑制胃癌细胞的恶性表型和细胞运动、迁移能力,其抑制效果与细胞自身Bmi-1表达水平呈正相关。感染Ad-Bmi-1i稳定干扰Bmi-1后,胃癌细胞体内成瘤能力明显减弱,且Ad-Bmi-1i体内抑瘤效果与细胞自身Bmi-1表达水平呈正相关。瘤内直接注射Ad-Bmi-1i病毒可明显杀伤胃癌细胞,可能对胃癌干细胞样细胞亦有杀伤作用。Bmi-1主要通过调节Akt、p16及p53通路诱导细胞衰老来杀伤胃癌细胞。结论：Ad-Bmi-1i病毒载体在体内、外均可较好地特异性杀伤胃癌细胞,具有潜在的临床应用价值。(本文来源于《复旦大学》期刊2012-04-15）
刘俊杰[10]（2012）在《肾癌特异启动子G250调控的条件增殖腺病毒介导RNA干扰靶向治疗肾癌研究》一文中研究指出目的构建G250启动子调控表达Ki67-siRNA的条件增殖型腺病毒G250-Ki67，体外实验研究该CRAd靶向抑制肾癌细胞的疗效，为其体内实验及临床应用提供实验基础。方法腺病毒左臂质粒pG250-Ki67、pG250–EGFP及腺病毒右臂质粒pBHGE3大量制备及酶切鉴定。将鉴定正确的质粒分别与含有腺病毒的右臂质粒pBHGE3共转染低代293细胞，9～12d后出现病毒空斑，挑取空斑进行重组腺病毒小量扩增，后提取基因组DNA，PCR鉴定，正确者分别命名为G250-Ki67、G250-EGFP。G250-Ki67、G250-EGFP及实验室前期构建的增殖缺陷型腺病毒Ad-Ki67大规模转染低代293细胞，扩增后纯化，并测定滴度。G250-Ki67、G250-EGFP、Ad-Ki67分别转染肾癌786-0细胞（G250阳性表达，G250+）、ACHN细胞（G250阴性表达，G250－）及正常肾小管上皮HK-2细胞。Western Blot法及免疫组化法检测腺病毒E1A蛋白在肾癌细胞中的表达。结晶紫染色法检测腺病毒对肾癌细胞的细胞毒作用。RT-PCR法检测腺病毒对肾癌细胞Ki67基因的沉默效果。MTT法检测腺病毒对肾癌细胞增殖的影响。Annexin V-PE/7-AAD法检测腺病毒对肾癌细胞凋亡的影响。结果1.酶切鉴定左臂质粒pG250-Ki67、pG250-EGFP及右臂质粒pBHGE3正确。PCR鉴定表明重组腺病毒G250-Ki67及G250-EGFP包含目的基因，且无野生型腺病毒污染。G250-Ki67、G250-EGFP及Ad-Ki67病毒的滴度分别为：2.3×1011PFU/ml、2.11×1011PFU/ml、1.97×1011PFU/ml。2.腺病毒G250-Ki67、G250-EGFP在肾癌786-0（G250+）细胞中均表达E1A蛋白；在肾癌ACHN（G250－）细胞中，荷载G250启动子腺病毒均不表达E1A。在正常肾小管HK-2细胞中均未检测到E1A的表达； Ad-Ki67感染的786-0、ACHN细胞没有EIA的表达。3.G250-Ki67抑制肾癌细胞Ki67表达能力明显高于Ad-Ki67，且特异性比Ad-Ki67更高（P＜0.05）。4.叁种病毒对786-O、ACHN细胞均有杀伤作用，MOI=1的G250-Ki67可以将肾癌786-0细胞部分杀灭，MOI=10时全部杀灭。MOI=100的G250-Ki67可以将肾癌ACHN细胞部分杀灭，G250-EGFP对肾癌ACHN细胞无明显杀伤作用。MOI=100时叁种病毒对正常肾小管HK-2细胞均无杀伤作用。Ad-Ki67杀伤作用最弱，Ad-Ki67在MOI=10时对786-O、ACHN细胞无影响。5.G250-Ki67、G250-EGFP、Ad-Ki67对肾癌786-0细胞增殖均有抑制作用，并且存在浓度及时间依赖性，当MOI=0.1时，抑制作用较弱，随着浓度增高，抑制作用逐渐增强，MOI=100时抑制作用最强。MOI=10时，随着天数增加，抑制逐渐增强，第四天抑制作用最强。Ad-Ki67对肾癌ACHN细胞增殖有抑制作用，G250-Ki67、G250-EGFP对肾癌ACHN细胞增殖无明显抑制作用。6. AnnexinV-PE/7-AAD法检测细胞凋亡，在肾癌786-0细胞中，与其它组比较，G250-Ki67对肾癌786-0细胞凋亡诱导能力最强（P＜0.05）。在肾癌ACHN细胞中，荷载G250启动子腺病毒诱导ACHN细胞凋亡的作用较弱。各组病毒诱导正常HK-2细胞凋亡的作用较弱且组无明显差异（P＞0.05）。结论成功构建G250-Ki67，其在肾癌细胞内大量扩增且高效表达Ki67-siRNA、抑制肾癌细胞增殖、诱导肾癌细胞凋亡，为肾癌靶向治疗奠定了基础。目的研究G250启动子调控的荷载Ki67小干扰RNA的条件增殖腺病毒（G250-Ki67）对人肾癌细胞裸鼠皮下移植瘤生长的影响，为临床肾癌的病毒-基因联合治疗提供依据。方法将培养至对数生长期的786-0细胞注射裸鼠皮下，构建裸鼠皮下移植瘤模型，建模成功后将裸鼠随机分为4组，每组10只，分别用G250-Ki67病毒、G250-EGFP病毒、Ad-Ki67病毒及PBS进行治疗，病毒每次注射0.2ml（7×108PFU），PBS注射0.2ml，隔天注射一次，共叁次。在治疗结束的第7天，每组随机脱颈处死4只动物，取下瘤体组织，免疫组化法检测瘤体内Ki67蛋白及E1A蛋白的表达，Western检测E1A，HE染色观察肿瘤细胞生长情况，TUNEL法检测组织细胞凋亡，其余动物继续饲养，定期测量肿瘤体积，绘制肿瘤时间-体积生长抑制曲线，在治疗的第35天时处死全部动物，测量最终体积，取下肝脏组织，HE染色观察病毒治疗的毒性作用。结果成功构建人肾透明细胞癌裸鼠皮下移植瘤模型。免疫组化结果显示G2505-Ki67组Ki67蛋白的表达明显低于其余各组，抑制Ki67表达作用由强到弱依次为G250-Ki67＞Ad-Ki67＞G250-EGFP＞PBS，G250-Ki67组与其余各组之间比较，差异有统计学意义（P<0.05）；Western及免疫组化法显示，病毒复制蛋白E1A在PBS组与Ad-Ki67组无表达，而G250-EGFP组及G250-Ki67组可见蛋白表达阳性信号，提示病毒在这两组肿瘤的瘤体内复制；瘤组织HE染色中PBS组细胞浆染色松散色浅，可见胞核呈双叶或多叶分裂像，提示细胞增殖活跃，而G250-Ki67，G250-EGFP及Ad-Ki67组可见到不同程度的细胞核深染，很少有核分裂像，显示肿瘤组织生长抑制，抑制作用由强到弱依次为G250-Ki67＞G250-EGFP＞Ad-Ki67＞PBS；TUNEL检测各治疗组凋亡率分别为PBS组（3.78±1.64）%，G250-EGFP组（27.25±1.10）%，Ad-Ki67组（31.43±2.57）%，G250-Ki67组（65.32±3.24）%，G250-Ki67组与其余叁组之间比较差异有统计学意义（P<0.05）；肿瘤生长抑制曲线显示G250-Ki67组与其余组比较，抑制肿瘤生长效果最强；病理HE染色，各处理组肝脏未见明显差异。结论条件增殖腺病毒G250-Ki67能靶向抑制肿瘤组织增殖、促进其凋亡，可有效抑制人肾癌裸鼠移植瘤Ki67蛋白表达，进而抑制肿瘤的生长，为肾癌的病毒-基因联合治疗的提供实验依据。(本文来源于《南京医科大学》期刊2012-04-01）
双启动子干扰论文开题报告
（1）论文研究背景及目的
此处内容要求：
首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景，再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题，并提出你的论文准备的观点或解决方法。
写法范例：
目的:构建针对端粒酶hTERT基因的U6/H1双启动子siRNA表达框架(SEC),并观察其转录产物对HeLa细胞端粒酶活性的干扰作用。方法:利用融合PCR技术,针对人端粒酶hTERT基因开放阅读区构建3条U6/H1双启动子SEC以及针对其3'端非翻译区构建1条U6/H1双启动子SEC,对各SEC鉴定后,分别转染人宫颈癌HeLa细胞,用端粒重复序列扩增法(TRAP)检测HeLa细胞的端粒酶活性。结果:4种针对端粒酶hTERT基因的U6/H1双启动子SEC均成功构建,转染HeLa细胞后,对端粒酶活性的抑制率分别为36.8%、57.39%、80.47%、70.31%。结论:针对端粒酶hTERT基因的U6/H1双启动子SEC的成功构建,为开展肿瘤端粒酶基因干扰的实验研究提供了新的有效手段。
（2）本文研究方法
调查法：该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。
观察法：用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。
实验法：通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。
文献研究法：通过调查文献来获得资料，从而全面的、正确的了解掌握研究方法。
实证研究法：依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。
定性分析法：对研究对象进行“质”的方面的研究，这个方法需要计算的数据较少。
定量分析法：通过具体的数字，使人们对研究对象的认识进一步精确化。
跨学科研究法：运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。
功能分析法：这是社会科学用来分析社会现象的一种方法，从某一功能出发研究多个方面的影响。
模拟法：通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。
双启动子干扰论文参考文献
[1].杨六成,吴凯,黄宗海,徐帅,王健俊.KDR启动子驱动的CD/TK双自杀基因联合survivin基因干扰抑制肝癌细胞生长的体内研究[J].中国普通外科杂志.2015
[2].龚霞,张慧慧,彭剑雄,罗建新.U6/H1双启动子siRNA表达框架构建及其对肿瘤细胞端粒酶活性的干扰作用[J].中国普通外科杂志.2014
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[10].刘俊杰.肾癌特异启动子G250调控的条件增殖腺病毒介导RNA干扰靶向治疗肾癌研究[D].南京医科大学.2012