黄晓燕1段福才2肖芳2徐志明3曹燕飞3黄莹4姚子宾5（1甘肃省人民医院甘肃兰州730900）（2白银市中心血站甘肃白银730900；3白银市第二人民医院甘肃白银730900）（4白银市第一人民医院甘肃白银730900；5白银市康复医院甘肃白银730900）
【摘要】目的探讨稀有B(A)血型的遗传特性、鉴定方法和输血策略。方法对1例ABO血型血清学正反定型不符标本的家系成员采用血型血清学方法和PCR-SSP方法进行B(A)血型鉴定，并分析血型遗传特点和规律；同时对B(A)型献血者和用血者进行临床输血研究。结果该家系调查发现3例血清学结果正反定型结果不符，均为血清学结果为正定型AB型，反定型B型，ABO基因型为B(A)04/O1型，1袋B(A)型红细胞输注给1例B型患者后临床有轻度的输血反应，B(A)型患者输注O型洗涤红细胞后患者未出现输血反应。结论对ABO血型血清学正反定型不符的标本，可以用家系调查和分子生物学方法进行辅助验证，B(A)型血液不能给B型或AB型患者输注，B(A)血型患者输血时应采取配合性成分输血或自身输血。
【关键词】ABO血型B(A)型血型血清学基因分型
【中图分类号】R457.1【文献标识码】A【文章编号】2095-1752（2012）27-0134-02
ABO亚型常给血型鉴定和配血工作带来困难，严重影响了临床输血的安全性，因此对ABO亚型的研究尤为重要。近期我们在工作中发现了1例正反定型不一致的标本，经基因检测确定为B(A)型。家系调查发现该家系有3例B(A)型，且同时存在献血者和用血者，我们进行了B(A)型临床输血研究，对患者进行了合理输血，现报告如下。
1材料与方法
1.1基本资料先证献血者禄某,汉族,男,33岁,2次无偿献血，第1次献血血液以B型红细胞和血浆分别发往临床输注给B型病人，第2次献血血液以AB型红细胞和血浆分别发往临床，输注给AB型病人，红细胞与AB型病人交叉配血发现不合，进一步检测确认为B(A)型。家系调查发现其母亲与儿子亦为B(A)型，其母亲既往血型鉴定为B型，并在输注B型血时发生过疑似输血反应，输注O型洗涤红细胞后未出现输血反应。
1.2试剂与仪器试剂主要包括人源多克隆抗-A、抗-B、抗-A，B(四川协和生物技术中心，批号：20101210)，单克隆抗-A和抗-B（上海血液生物医药有限公司，批号：20110909；长春博德生物技术有限责任公司产品，批号：20100506，20100809），抗-H(上海血液生物医药有限公司，批号：20110804)，抗-A1(上海血液生物医药有限公司，批号：20111103)，反定型用试剂红细胞为本实验室自制。仪器主要为KA-2200离心机(日本)，3130基因测序仪（美国ABI公司），DNAEngineDyadPCR仪（美国Bio-Rad）。
1.3血型血清学检测血型正反定型测定参照文献[1]的试管法操作。
1.4ABO基因分型经中国医学科学院输血研究所进行ABO血型基因鉴定，方法参照文献[2]，提取献血者DNA，并分别对ABO基因第6、7外显子进行PCR扩增和DNA序列分析。
2结果
2.1血型血清学结果被检者红细胞（RBC）与长春博德公司生产的单克隆抗-A试剂不凝集，而与上海血液中心生产的单克隆抗-A试剂和人源抗-A血清发生凝集，提示长春博德公司生产的单克隆抗-A试剂血清可能漏检被检血样红细胞上的弱A抗原;被检者血清仅与A1c凝集,而与A2c、Bc、Oc、自身红细胞不反应,反应格局提示被检者血浆中有抗-A1;被检者红细胞与抗-H凝集反应明显强于正常B型细胞,检出强H抗原。家系血型调查显示，先证者与其母亲、儿子的血型一致，推测可能为B(A)或cisAB(表1)。
2.2吸收放散试验先证者RBC、正常Ac、Bc和Oc分别与人源抗-A试剂血清做吸收放散试验,吸收后的血清上清液抗-A效价由原来的32分别降为16、0、32、32;被检者RBC、正常Ac、Bc、Oc、吸收后的末次洗涤液分别与Ac、Oc在RT、37℃、AGT中反应均为阴性,被检者RBC吸收后放散液与Ac凝集，说明被检者RBC上有A抗原。
2.3ABO基因PCR测序分析对该家庭成员样本的ABO基因PCR扩增产物直接测序发现：先证者和其母亲、儿子样本的第6、7外显子区域都存在261G/del、297A/G、526C/G、640A/G、657C/T、703A/G、796A/C、803C/G、930A/G的杂合（图1）。经检索，发现在B101基础上的640A>G突变为B(A)04等位基因，即该献血者和其母亲、儿子ABO血型基因型为B(A)04/001。
图1先证者和其母亲、儿子ABO基因第7外显子部分序列
2.4B(A)型临床输血调查先证献血者禄某[B(A)型]第1次献血红细胞悬液输注给B型病人存在输血反应，第1次献血血浆输注给B型病人后没发生输血反应，第2次献血血浆输注给AB型病人后没发生输血反应。先证者母亲[B(A)型]既往血型鉴定为B型，输注B型悬浮红细胞时发生过疑似输血反应并终止输血，输注O型洗涤红细胞后没发生输血反应。
3讨论
B(A)血型是一种非常罕见的ABO亚型，被认为是遗传学上的B型，但其红细胞上同时表达弱A抗原和较强的B抗原，且遗传上呈顺式遗传方式[3-4]。B(A)血型的形成机理可能是B等位基因在正常B基因序列的基础上发生了单碱基点突变，变异的B基因具有编码A抗原和B抗原双功能活性酶的能力，因此血清学除了表现B抗原特异性外还表现出少量A抗原特异性。按照ABO三复等位基因学说和孟得尔学说，血清学AB型和O型的亲代不可能生育出AB型或O型的子代，但B(A)和CisAB型的亲代却是例外，二者血型有相似之处，是传统遗传学的一个特例。从血型血清学表现上看，CisAB和B(A)表现型的抗原含量各有偏重，CisAB型血清学常常表现为A2B3或A2Bx，即这种表现型A抗原为主，B抗原较弱，而B(A)型红细胞上则含有少量A抗原活性和接近正常的B抗原特异性，H抗原含量接近O型细胞，明显高于正常B型细胞；B(A)型血清中含有的抗-A可以凝集A1细胞和部分A2细胞，而不像通常AxB亚型血清中的不规则抗-A1只与A1细胞反应，不与A2细胞反应。因此B(A)血型主要的血清学特点是红细胞与抗-A1、一些单克隆抗-A及人源抗-A发生弱凝集；与抗-B血清和抗-H血清发生较强凝集；反定型血清中含有较强的抗-A，可以凝集A1细胞及部分A2细胞。
B(A)血型最早发现于1956年，国内于1985年首次报道，目前发现的B(A)血型以黑种人为主，在中国人群中非常罕见[7]。到目前为止，已经报道的B(A)等位基因共有6种[5-6]，分别为B(A)01、B(A)02、B(A)03、B(A)04、B(A)05、B(A)06。与B101等位基因相比，已知的这些B(A)等位基因只有1-2个碱基的差异，这些碱基突变能够影响3个决定糖基转移酶的氨基酸残基，或其他的一些可能改变糖基转移酶的氨基酸残基。迄今为止，我国已经报道(A)02、B(A)04、B(A)05和B(A)06等4种B(A)等位基因，以B(A)02、B(A)04等位基因为主[7-8],本例为西北地区首次发现B(A)血型，属B(A)04型。与B101等位基因序列相比，B（A）04等位基因除存在7外显子区域存640A＞G突变外，其余碱基序列完全一致。该640A＞G突变使214位甲硫氨酸被缬氨酸置换，从而导致该B等位基因具有编码双功能活性酶的能力。
B(A)血型用常规的血型血清学方法难以正确定型，易于与AB型或B型相混淆，增加了异型输血的风险[9-10]。本例献血者在第一次献血时被鉴定为B型，红细胞和血浆输给了2名不同的B型患者；第二次献血时初筛为B型，血液复检鉴定为AB型，血型最终以AB型报告，其血浆和红细胞发往临床，血浆输给了AB型患者，红细胞与AB型患者配血时发现不合，进一步鉴定，怀疑为B(A)型，经基因检测最终确定为B(A)型。追询该献血者，其血型也曾被鉴定为AB型，献血时告诉为B型，怀疑是既往血型鉴定错误。先证者母亲[B(A)型]既往血型鉴定为B型，输注B型悬浮红细胞时发生过疑似输血反应并终止输血，输注O型洗涤红细胞后没发生输血反应。因此对在常规血型鉴定中发现的弱A或弱B血型且正反定型矛盾时，应进一步做分子生物学鉴定，并在条件允许下进行家系血型调查，准确鉴定血型，确保输血安全。B(A)血型的献血者，因其血型易出现血型鉴定结果不一致和交叉配血不合，有时还存在异型输血的风险，血型确定后一般应淘汰其献血资格或做为特殊血型献血者保留。对B(A)血型的患者输血，理想的血液是B(A)血型血液，但来源几无可能，一般可用O型洗涤红细胞或AB型血浆替代，主侧或次侧配血相合即可，但不宜输入B型或AB型全血；也可以考虑自身输血。
参考文献
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