导读:本文包含了原核和真核表达系统论文开题报告文献综述及选题提纲参考文献，主要关键词:草鱼Ⅱ型呼肠孤病毒,VP56,原核表达,真核表达
原核和真核表达系统论文文献综述
盛佳璐,宗乾坤,喻飞,王浩,吕利群[1]（2018）在《利用原核及真核表达系统体外表达草鱼Ⅱ型呼肠孤病毒外突VP56蛋白的研究》一文中研究指出草鱼Ⅱ型呼肠孤病毒是当前引起我国草鱼出血病的主要流行毒株,VP56是其外层衣壳上的唯一突起蛋白并有可能在病毒入侵阶段发挥核心作用,但该蛋白的具体功能尚不清楚。为了探讨VP56的生物学功能,分别利用大肠杆菌原核表达系统和杆状病毒真核表达系统研究了VP56的体外表达特性。首先从GCRVJX02W株的细胞感染混合物中抽提总RNA,并通过RT-PCR方法获得目的基因VP56,分别克隆至pGEX-4T-3及pFastBacHTA载体上,将质粒pGEX-4T-3-VP56转化至BL21(DE3),经IPTG诱导后,成功表达融合蛋白GST-VP56,大小为83ku,以包涵体形式存在;蛋白经纯化后免疫老鼠,制备了VP56的多克隆抗体,可以和rVP56产生特异性免疫结合。将pFastBacHTA-VP56转化至DH10Bac,成功转座后,提取重组杆粒DNA并鉴定且测序正确后转染SF9昆虫细胞。结果表明,自转染96h起,转染杆粒的细胞生长停滞,不断裂解。Westernblot结果显示,细胞表达重组蛋白His-VP56,大小约为62ku,为可溶蛋白。本研究利用原核表达系统和真核表达系统体外表达了VP56蛋白,制备了抗VP56多克隆抗体,为深入研究VP56蛋白在病毒入侵时的生物学功能奠定了基础。(本文来源于《上海海洋大学学报》期刊2018年04期）
张钰[2]（2018）在《rhAm原核/真核表达系统的构建及其生物学活性研究》一文中研究指出目的:临床上牙周疾病治疗的终极目标在于恢复牙周组织原有的结构和功能—即牙周组织再生,形成牙周新附着。尽管从猪的牙胚中提取的釉基质蛋白(Enamel matrix proteins,EMPs)已经用于了被病变破坏的牙周组织的修复,实现牙周组织的功能性重建,但商品化的EMPs仍存在获取来源限制,获取方法耗时耗力等诸多问题。近年来,有研究者们提出釉原蛋白(amelogenin,Am)是EMPs促进牙周组织再生的主要活性成分,有望代替EMPs用于牙周组织再生。因此,本实验通过基因工程技术构建原核和真核表达系统,分别在E.coli WK6、毕赤酵母GS115以及HEK 293F中表达并纯化出rhAm,将hPDLFs与HS-5作为靶细胞,初步探究不同来源的rhAm对其生物学特性的影响,为rhAm后续开发应用奠定实验基础。方法:(1)利用基因克隆方法获取hAm-His基因,插入pET-22b载体,构建编码hAm-His重组蛋白的原核表达质粒pET-22b-Am-His。借助电转化技术将表达质粒导入大肠杆菌WK6中进行诱导表达,目的蛋白经Ni-NTA亲和层析纯化后,通过SDS-PAGE和Western Blotting对其进行鉴定。(2)利用基因克隆方法获取hAm-His基因,插入pCMV载体/pPIC9K载体,构建编码hAm-His重组蛋白的真核表达质粒pCMV-Am-His/pPIC9K-Am-His。借助瞬时基因转染技术将重组质粒pCMV-Am-His导入HEK 293F细胞,借助电转化技术将重组质粒pPIC9K-Am-His导入毕赤酵母GS115菌株。目的蛋白经Ni-NTA亲和层析纯化后,通过SDS-PAGE和Western Blotting检测对其进行鉴定。(3)用MTT检测,划痕实验,ALP检测试剂盒以及Western Blotting检测等方法比较不同来源的rhAm对hPDLFs和HS-5增殖、迁移、粘附以及细胞中ALP水平的影响和对HS-5中成骨分化标志物蛋白表达的影响。结果:(1)通过SDS-PAGE和Western Blotting检测的鉴定,在E.coli WK6及HEK293F细胞中获得了分子量约25kDa的rhAm。(2)大肠杆菌表达系统与哺乳动物细胞表达系统所表达的rhAm均能显着促进hPDLFs和HS-5的增殖、迁移、粘附和细胞内ALP水平的上调,还能促进HS-5中I型胶原、RunX2的表达,且二者的作用效果无显着性差异。结论:大肠杆菌表达系统与哺乳动物细胞表达系统所表达的rhAm都具有生物活性,且它们的生物活性相似。(本文来源于《暨南大学》期刊2018-06-30）
卢颖虎[3]（2012）在《阳离子抗菌肽G13的原核表达和真核表达系统的构建》一文中研究指出颗粒裂解肽(Granulysin)是阳离子抗菌肽的一种,来自细胞毒性T淋巴细胞和自然杀伤细胞。阳离子抗菌肽G13是Granulysin中,含19个氨基酸残基肽段,含有α-螺旋结构及loop结构,对细菌具有抑菌活性而对动物细胞无毒,具有重要的研究价值。抗菌肽原核表达主要采用融合表达技术抑制抗菌肽的毒性。但融合头一般在重组蛋白中比例较高,导致了抗菌肽的实际表达产量较低。本实验以pThiohisA-G13载体中的融合头为基础,设计了一对反向引物,采用反向PCR方法去除载体了融合头中87个氨基酸残基,构建了pThiohisA-G13-A质粒,同时获得了高效表达,将抗菌肽的实际产量提高了2.3倍,具有广泛的应用前景。融合头切割一直是抗菌肽融合表达的一个突出问题。传统的酶法成本极高,化学法中,溴化氰含有剧毒,难以广泛使用。本实验利用天冬氨酸-脯氨酸之间的肽键在低PH下不稳定的特性,在融合头与抗菌肽之间添加酸水解切割位点,构建了pThiohisA-G13-C质粒,获得了重组蛋白的可溶性表达。同时研究了酸水解反应条件,成功地切割了阳离子抗菌肽G13结构域,并通过阳离子交换获得了纯化的阳离子抗菌肽G13结构域,琼脂糖扩散法检测了重组阳离子抗菌肽G13对大肠杆菌DH5a抑菌活性。为抗菌肽在低成本大规模生产中的应用奠定了基础。本实验同时对抗菌肽真核表达进行了研究,成功地对阳离子抗菌肽G13在酿酒酵母中的表达条件进行了优化,获得了具有活性的阳离子抗菌肽G13,从而建立了一套稳定表达的方法。为后续的纯化和类似抗菌肽的表达提供了依据。本实验还成功构建了酿酒酵母pYES2-a-L50A表达载体,并获得了有活性的肠球菌素L50A,为后续的表达研究工作奠定了基础,同时初步证明了酿酒酵母真核表达系统用于表达多种抗菌物质的可能性。(本文来源于《安徽大学》期刊2012-04-01）
马爱霞,丁壮,李娜,宋子运,徐明[4]（2008）在《NA-1株鹅源副粘病毒糖蛋白基因在原核及真核表达系统中的表达》一文中研究指出前言鹅副粘病毒(GPMV)病是1997年开始在我国江苏、广东、吉林等许多地区流行,并造成严损失的一种新的烈性传染病,具有很高的发病率和死亡率。F和HN是两个重要的囊膜糖蛋白,是病毒毒力的决定因素。F蛋白具有促进病毒囊膜与宿主细胞膜融合的作用,从而使病毒基因组进入宿主细胞。而HN蛋白不但具有识别、吸附受体的功能,而且还具有促融合的功能。糖蛋白基因可作为研究NDV基因工程疫苗的保护性抗原基因。(本文来源于《中国畜牧兽医学会禽病学分会第十四次学术研讨会论文集》期刊2008-09-01）
马爱霞[5]（2008）在《鹅源副粘病毒NA-1株糖蛋白基因在原核及真核表达系统中的表达》一文中研究指出本研究将本实验室分离、鉴定并纯化的鹅源副粘病毒NA-1株进行了基因组RNA的提取,参考GenBank收录的ZJ1株鹅源副粘病毒全基因组核苷酸序列,设计2对特异性引物,通过RT-PCR方法分段扩增了F、HN基因核苷酸序列。本研究构建原核表达质粒pET-F、pET-HN,并分别转化表达菌DE3,通过IPTG的诱导表达,将表达蛋白进行SDS-PAGE检测,用全病毒高免血清进行Western blot检测,出现特异性条带。本研究构建真核表达质粒pCI-F、pCI-HN,将其分别转染Vero细胞,经G418筛选后,进行间接免疫荧光试验出现特异性绿色荧光,说明真核表达质粒能够表达F、HN蛋白;表达蛋白用全病毒高免血清进行Western blot检测,出现特异性条带。说明表达的F、HN蛋白具有良好的反应原性,为高效的亚单位基因工程苗的研制、新型诊断方法的建立及鹅源副粘病毒基因组融合功能的研究奠定基础。(本文来源于《吉林大学》期刊2008-04-10）
王青[6]（2007）在《新城疫病毒F基因在真核及原核表达系统中的表达》一文中研究指出新城疫(Newcastle Disease,ND)是由新城疫病毒引起的一种急性、高度接触性禽类传染病,被世界动物卫生组织(OIE)定为法定必报传染病,我国也将其列为一类动物疫病。新城疫病毒(NDV)是副黏病毒科、副黏病毒亚科、禽病毒属的成员,为有囊膜的负链RNA病毒,可存在于病禽的所有组织器官、体液、分泌物和排泄物中。长期以来,我国普遍开展了以接种疫苗为主的新城疫综合防控措施,使得ND的爆发得以控制,但近年来ND的流行又出现的新的特点,不表现特异性症状的ND病例日益增多,甚至于高抗体鸡群也发生该病,许多学者认为这些流行特点表明很可能是由变异或超强毒株引起。特别是近年来鹅源病毒新城疫变异株的出现,更引起人们对于非典型新城疫发病原因的兴趣。F蛋白也称融合蛋白,其主要作用是病毒囊膜与易感细胞发生融合,为NDV感染细胞所必需,与NDV的致病性密切相关。F蛋白首先以无活性的前体F0形式存在,此时无融合活性,只有当其被裂解产生F1和F2两条多肽后,才使病毒具有感染力,其中F1亚单位在病毒的抗原性及结构和功能上起着重要的作用,是F蛋白主要抗原决定簇。本研究采用分子生物学方法,将F基因在真核及原核系统中表达,为进一步的相关研究奠定基础。研究结果如下:1.应用PCR技术扩增出新城疫病毒F基因,将其克隆入pGEM-T Easy vector载体,进行核苷酸测序测定。然后将其与高效的真核表达载体pcDNA4/HisMax相连,构建重组质粒pc4F,采用Superfect转染试剂将pc4F转入COS-7细胞,并应用细胞免疫组化法检测其在细胞中的表达情况。结果表明,F基因表达成功。2.以含有新城疫病毒F基因的重组质粒为模板,设计特异的引物,应用PCR技术扩增获得F基因的F1片段,经BamHI和Hind III双酶切,定向插入原核表达载体pET-28a,构建重组质粒pETF1,经IPTG诱导,在其宿主菌BL21(DE3)感受态细胞中成功表达了分子质量约31 ku的蛋白,SDS-PAGE和Western blot分析显示,F1表达产物能够与新城疫多抗血清IgG反应,具有较好的抗原性和特异性。(本文来源于《西北农林科技大学》期刊2007-06-01）
袁志刚,张进平,王缨,储以微,徐薇[7]（2007）在《真核化的原核表达系统增强HBV preS2/S基因免疫的效果》一文中研究指出目的研究真核化的原核表达系统——pCMV-T7pol/pT7IRES-HBs双质粒共表达体系与常规真核表达质粒相比在真核细胞中的表达差异;基因免疫小鼠诱生特异性体液免疫应答的能力及二者所诱生的抗体亚型的差异。方法运用分子生物学方法构建真核化的原核表达系统,将构建的质粒进行基因免疫,应用DOT-EIA和ELISA等检测其所产生的抗体水平。结果①真核化的原核表达系统在真核细胞中的表达能力明显强于常规真核表达质粒。②真核化的原核表达系统基因免疫小鼠不仅可诱生特异性体液免疫应答,且具有明显增强效应(P<0·05)。③真核化的原核表达系统与常规真核表达质粒相比不仅可诱生同等程度的Th1型免疫应答,而且能够诱生更强的Th2型免疫应答(P<0·01)。结论真核化的原核表达系统——pCMV-T7pol/pT7IRES-HBs双质粒能诱导较强的体液免疫应答。(本文来源于《中国免疫学杂志》期刊2007年01期）
冯春燕,郭晓奎[8]（2006）在《问号钩端螺旋体融合基因Lip21-LipL32真核、原核表达系统的构建》一文中研究指出目的:构建问号钩端螺旋体融合基因Lip21-LipL32真核及原核表达系统。方法:采用连接引物通过PCR构建融合基因Lip21-LipL32,分别与相应的真核载体pVAX1及原核载体 pET28b连接,真核重组质粒转染HEK293细胞,Western Blot检测其在真核细胞中的表达。原核重组质粒转入大肠杆菌BL21,用IPTG诱导重组蛋白表达,Western Blot检测表达蛋白的特异性。结果:成功克隆出融合基因Lip21-LipL32的真核及原核重组质粒,表达产物经(本文来源于《2006中国微生物学会第九次全国会员代表大会暨学术年会论文摘要集》期刊2006-10-01）
冯春燕,郭晓奎[9]（2006）在《问号钩端螺旋体融合基因Lip21-LipL32真核、原核表达系统的构建》一文中研究指出【目的】构建问号钩端螺旋体融合基因Lip21-LipL32真核及原核表达系统。【方法】采用连接引物通过PCR构建融合基因Lip21-LipL32,分别与相应的真核载体pVAX1及原核载体pET28b连接,真核重组质粒转染HEK293细胞,Western Blot检测其在真核细胞中的表达。原核重组质粒转入大肠杆菌BL21,用IPTG诱导重组蛋白表达,Western Blot检测表达蛋白的特异性。【结果】成功克隆出融合基因Lip21-LipL32的真核及原核重组质粒,表达产物经Western Blot检测验证了其特异性。【结论】成功构建Lip21-LipL32的真核及原核重组质粒,为进一步研究其免疫反应性,为融合基因DNA疫苗和蛋白疫苗的研制奠定了良好的基础。(本文来源于《上海市预防医学会第二届学术年会论文汇编》期刊2006-09-01）
陈利弘[10]（2006）在《人源化抗CTLA-4单链抗体及其免疫毒素融合蛋白的表达与纯化研究：原核大肠杆菌与真核毕赤酵母表达系统》一文中研究指出细胞毒性T淋巴细胞抗原4(Cytotoxic T lymphocyte antigen-4，CTLA-4，CD152)是T细胞共刺激受体CD28的结构同源物，通过与抗原提呈细胞上CD28的共同配体CD80／CD86相互作用，而在T细胞反应中起负调节作用。CTLA4在活化的T细胞和一些肿瘤细胞表面表达，是T细胞活化的良好标志，可以作为免疫抑制剂和肿瘤治疗的靶标。 抗CTLA-4单链抗体(anti-CTLA4 scFv)具有特异性结合CD152的活性，在体外和体内是潜在的活化T细胞及肿瘤细胞的靶向分子。在抗CTLA-4单链抗体上融合具有特殊功能的效应分子，能起到对靶细胞特异杀伤的作用，从而为实现特异性免疫抑制和肿瘤靶向治疗提供可能途径。 人源化抗CTLA-4单链抗体及其相关免疫毒素融合蛋白在生物医学实验研究和免疫系统相关疾病、移植免疫以及肿瘤靶向治疗、诊断等领域有着广阔的应用前景。 本研究以人源化抗CTLA-4单链抗体(anti-CTLA4 scFv，简称hS)及其相关免疫毒素融合蛋白(hSP，在hS的C端融合了人穿孔素孔道形(本文来源于《四川大学》期刊2006-04-01）
原核和真核表达系统论文开题报告
（1）论文研究背景及目的
此处内容要求：
首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景，再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题，并提出你的论文准备的观点或解决方法。
写法范例：
目的:临床上牙周疾病治疗的终极目标在于恢复牙周组织原有的结构和功能—即牙周组织再生,形成牙周新附着。尽管从猪的牙胚中提取的釉基质蛋白(Enamel matrix proteins,EMPs)已经用于了被病变破坏的牙周组织的修复,实现牙周组织的功能性重建,但商品化的EMPs仍存在获取来源限制,获取方法耗时耗力等诸多问题。近年来,有研究者们提出釉原蛋白(amelogenin,Am)是EMPs促进牙周组织再生的主要活性成分,有望代替EMPs用于牙周组织再生。因此,本实验通过基因工程技术构建原核和真核表达系统,分别在E.coli WK6、毕赤酵母GS115以及HEK 293F中表达并纯化出rhAm,将hPDLFs与HS-5作为靶细胞,初步探究不同来源的rhAm对其生物学特性的影响,为rhAm后续开发应用奠定实验基础。方法:(1)利用基因克隆方法获取hAm-His基因,插入pET-22b载体,构建编码hAm-His重组蛋白的原核表达质粒pET-22b-Am-His。借助电转化技术将表达质粒导入大肠杆菌WK6中进行诱导表达,目的蛋白经Ni-NTA亲和层析纯化后,通过SDS-PAGE和Western Blotting对其进行鉴定。(2)利用基因克隆方法获取hAm-His基因,插入pCMV载体/pPIC9K载体,构建编码hAm-His重组蛋白的真核表达质粒pCMV-Am-His/pPIC9K-Am-His。借助瞬时基因转染技术将重组质粒pCMV-Am-His导入HEK 293F细胞,借助电转化技术将重组质粒pPIC9K-Am-His导入毕赤酵母GS115菌株。目的蛋白经Ni-NTA亲和层析纯化后,通过SDS-PAGE和Western Blotting检测对其进行鉴定。(3)用MTT检测,划痕实验,ALP检测试剂盒以及Western Blotting检测等方法比较不同来源的rhAm对hPDLFs和HS-5增殖、迁移、粘附以及细胞中ALP水平的影响和对HS-5中成骨分化标志物蛋白表达的影响。结果:(1)通过SDS-PAGE和Western Blotting检测的鉴定,在E.coli WK6及HEK293F细胞中获得了分子量约25kDa的rhAm。(2)大肠杆菌表达系统与哺乳动物细胞表达系统所表达的rhAm均能显着促进hPDLFs和HS-5的增殖、迁移、粘附和细胞内ALP水平的上调,还能促进HS-5中I型胶原、RunX2的表达,且二者的作用效果无显着性差异。结论:大肠杆菌表达系统与哺乳动物细胞表达系统所表达的rhAm都具有生物活性,且它们的生物活性相似。
（2）本文研究方法
调查法：该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。
观察法：用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。
实验法：通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。
文献研究法：通过调查文献来获得资料，从而全面的、正确的了解掌握研究方法。
实证研究法：依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。
定性分析法：对研究对象进行“质”的方面的研究，这个方法需要计算的数据较少。
定量分析法：通过具体的数字，使人们对研究对象的认识进一步精确化。
跨学科研究法：运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。
功能分析法：这是社会科学用来分析社会现象的一种方法，从某一功能出发研究多个方面的影响。
模拟法：通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。
原核和真核表达系统论文参考文献
[1].盛佳璐,宗乾坤,喻飞,王浩,吕利群.利用原核及真核表达系统体外表达草鱼Ⅱ型呼肠孤病毒外突VP56蛋白的研究[J].上海海洋大学学报.2018
[2].张钰.rhAm原核/真核表达系统的构建及其生物学活性研究[D].暨南大学.2018
[3].卢颖虎.阳离子抗菌肽G13的原核表达和真核表达系统的构建[D].安徽大学.2012
[4].马爱霞,丁壮,李娜,宋子运,徐明.NA-1株鹅源副粘病毒糖蛋白基因在原核及真核表达系统中的表达[C].中国畜牧兽医学会禽病学分会第十四次学术研讨会论文集.2008
[5].马爱霞.鹅源副粘病毒NA-1株糖蛋白基因在原核及真核表达系统中的表达[D].吉林大学.2008
[6].王青.新城疫病毒F基因在真核及原核表达系统中的表达[D].西北农林科技大学.2007
[7].袁志刚,张进平,王缨,储以微,徐薇.真核化的原核表达系统增强HBVpreS2/S基因免疫的效果[J].中国免疫学杂志.2007
[8].冯春燕,郭晓奎.问号钩端螺旋体融合基因Lip21-LipL32真核、原核表达系统的构建[C].2006中国微生物学会第九次全国会员代表大会暨学术年会论文摘要集.2006
[9].冯春燕,郭晓奎.问号钩端螺旋体融合基因Lip21-LipL32真核、原核表达系统的构建[C].上海市预防医学会第二届学术年会论文汇编.2006
[10].陈利弘.人源化抗CTLA-4单链抗体及其免疫毒素融合蛋白的表达与纯化研究：原核大肠杆菌与真核毕赤酵母表达系统[D].四川大学.2006