导读:本文包含了卵巢癌耐药细胞论文开题报告文献综述及选题提纲参考文献，主要关键词:塞来昔布,顺铂,卵巢癌,耐药
卵巢癌耐药细胞论文文献综述
简露,陈林,陈俞先,李涛[1]（2019）在《塞来昔布联合顺铂对人卵巢癌顺铂耐药细胞株COC1/DDP生长和凋亡的影响》一文中研究指出目的探讨塞来昔布联合顺铂对人卵巢癌顺铂耐药细胞株COC1/DDP生长和凋亡的影响及其机制。方法采用MTT法检测不同浓度(0、0. 625、12. 5、25、50及100μmol/L)塞来昔布对COC1/DDP细胞生长的影响,计算出24、48及72h的IC50。将对数生长期的COC1/DDP细胞随机分为对照组(未做处理)、顺铂组(给予2μg/ml顺铂)、塞来昔布组(给予25μg/ml塞来昔布)及联合组(给予25μg/ml塞来昔布+2μg/ml顺铂)。MTT法检测各组细胞的生长情况,FCM检测各组细胞的凋亡情况,Western blot检测各组细胞中增殖细胞核抗原(Ki67)、细胞周期素D1 (Cyclin D1)、生存素(Survivin)和B淋巴细胞瘤-2基因(Bcl-2)蛋白的表达。结果塞来昔布能够呈时间-浓度依赖性抑制COC1/DDP细胞生长,其在24、48和72 h的IC50分别为47. 05、25. 86和16. 11μmol/L。与对照组相比,顺铂组、塞来昔布组和联合组中COC1/DDP细胞的OD值以及Ki67、Cyclin D1、Survivin及Bcl-2蛋白的表达水平均显着降低,凋亡率均显着升高;但顺铂对COC1/DDP细胞的作用较弱,塞来昔布对COC1/DDP细胞的作用较强,联合用药能够增强两者对COC1/DDP细胞的作用且高于两者之和。结论塞来昔布联合顺铂能够协调抑制COC1/DDP细胞生长并诱导细胞凋亡,降低COC1/DDP细胞对顺铂的耐药性,其分子机制可能与下调Ki67、Cyclin D1、Survivin及Bcl-2蛋白表达有关。(本文来源于《中国妇幼保健》期刊2019年13期）
王冰蓉[2]（2019）在《昼夜节律基因CRY1介导细胞自噬调控卵巢癌顺铂耐药细胞株A2780/DDP耐药性的相关机制研究》一文中研究指出目的:检测昼夜节律基因CRY1与细胞自噬在卵巢癌顺铂耐药细胞株A2780/DDP及其亲本细胞株A2780中的表达差异,探讨CRY1与细胞自噬的相关性及其是否参与A2780/DDP耐药性的产生。方法:1.qRT-PCR及Western Blot检测A2780及A2780/DDP细胞株中细胞自噬和昼夜节律基因及相关蛋白表达水平;细胞免疫荧光检测LC3和CRY1的表达及分布情况。2.顺铂处理肿瘤细胞后,CCK8检测细胞1~5天的存活率;吖啶橙及Hoechst33342观察自噬囊泡和细胞核形态;Western Blot检测自噬和昼夜节律基因表达。3.3-甲基腺嘌呤处理肿瘤细胞后,Western Blot检测自噬和昼夜节律基因的表达变化。4.慢病毒介导CRY1干扰及过表达质粒分别调控A2780和A2780/DDP细胞CRY1基因的表达水平;qRT-PCR和Western Blot检测CRY1稳定转染细胞CRY1及细胞自噬相关蛋白;CCK8比较调控CRY1前后细胞顺铂敏感性变化。结果:1.与A2780细胞相比,qRT-PCR结果显示A2780/DDP中CRY1、CRY2、CLOCK、LC3表达明显上调,p62/SQSTM1下调;Western Blot结果示LC3上调,p62/SQSTM1、CRY1、CRY2、CLOCK的表达明显下调,其中CRY1和CLOCK差异最为明显;细胞免疫荧光法结果显示A2780/DDP细胞中LC3的表达明显增加、CRY1减少。2.顺铂处理A2780和A2780/DDP后,CCK8结果显示A2780/DDP的顺铂抵抗性明显强于A2780,A2780/DDP的24h和48h IC50分别为22.131μg/ml、25.378μg/ml,A2780 IC50分别为6.066μg/ml、4.316μg/ml。3.顺铂处理48h后,吖啶橙结果显示顺铂可诱导A2780和A2780/DDP的自噬效应。Hoechst33342观察细胞核形态,结果为当顺铂浓度分别为5μg/ml和10μg/ml时A2780和A2780/DDP的凋亡效应明显增加。与A2780相比,Western Blot结果显示:顺铂浓度≤5μg/ml时,诱导A2780/DDP细胞自噬效应增加不明显,CRY1呈上升趋势。但当顺铂浓度达到20μg/ml时,A2780/DDP自噬效应明显增加,CRY1下调。4.3-MA抑制细胞自噬后,Western Blot结果显示:A2780及A2780/DDP细胞CRY1表达均呈上升趋势,且两者增加程度差异相当。5.分别将慢病毒介导的shCRY1和3xflag CRY1重组质粒稳定转染到A2780和A2780/DDP细胞中并获得稳转株,前者CRY1的mRNA和蛋白水平均呈下降趋势,后者为上调显着。Western Blot检测LC3,结果显示干扰CRY1后,自噬效应变化差异均无统计学意义;CRY1过表达后,A2780自噬效应无明显变化,A2780/DDP细胞自噬效应明显增加。CCK8检测稳定转染细胞株顺铂处理后1~5天的存活率,发现CRY1过表达,自噬效应增加,但细胞的存活率下降;而CRY1敲减后,自噬表达差异无统计学意义,但其存活率却呈现上升趋势。结论:1.与A2780细胞相比,昼夜节律基因CRY1在A2780/DDP中表达明显降低,自噬效应显着增加。顺铂可诱导细胞自噬效应的增加,降低CRY1的表达。2.抑制细胞自噬CRY1表达明显增加。CRY1基因沉默使A2780和A2780/DDP细胞对顺铂的敏感性下降,且前者下降更为明显。CRY1过表达能有效逆转A2780/DDP细胞对顺铂的耐药性。3.细胞自噬可能通过下调CRY1表达在A2780/DDP细胞中发挥作用,上调CRY1可增加A2780/DDP的顺铂敏感性。CRY1可能成为难治性卵巢癌的靶向治疗的新靶点。(本文来源于《福建中医药大学》期刊2019-06-01）
封洁珠,李恩泽,彭子瀚,裴一飞,朱林燕[3]（2019）在《卵巢癌顺铂敏感与耐药细胞ClC-3蛋白表达及通道功能的差异》一文中研究指出目的:从分子和细胞水平研究卵巢癌顺铂敏感(a2780)及耐药(a2780cp)细胞中ClC-3氯通道蛋白表达及通道功能的差异。方法:MTT法检测人卵巢癌a2780和a2780cp细胞对顺铂敏感性的差异;real-time PCR法检测ClC氯通道家族在a2780和a2780cp细胞中的mRNA表达;Western blot检测ClC-3蛋白的表达;免疫荧光法观察ClC-3蛋白在a2780和a2780cp细胞的分布;全细胞膜片钳技术记录细胞氯电流。结果:(1) a2780和a2780cp细胞对顺铂的敏感性存在差异,其IC_(50)值分别为5μmol/L和20μmol/L(P<0.01);(2)对ClC氯通道家族mRNA表达的检测结果显示,a2780和a2780cp细胞主要表达ClC-3,且在a2780cp细胞中ClC-3 mRNA表达显着减少(P<0.01);(3)在蛋白水平上,与a2780细胞相比,a2780cp细胞的ClC-3蛋白表达量显着降低(P<0.01);(4)免疫荧光显示ClC-3在a2780细胞中主要分布在胞膜上,而在a2780cp细胞中则主要表达在胞质内;(5)顺铂能激活a2780细胞的氯通道,产生ClC-3介导的氯电流,但在a2780cp细胞中则不能;(6)ClC-3 siRNA处理a2780细胞后,顺铂诱导的氯电流则不再出现。结论:ClC-3氯通道在顺铂敏感和耐药的卵巢癌细胞蛋白分布、表达和功能上存在差异,可能是引起顺铂耐药的潜在机制之一。(本文来源于《中国病理生理杂志》期刊2019年05期）
冯勤梅,候茜媛,吕真娇[4]（2019）在《1-甲基色氨酸作用卵巢癌耐药细胞后对免疫细胞功能的影响》一文中研究指出目的应用1-甲基色氨酸(MT-1)干预卵巢癌耐药细胞SKOV3/CBP,探讨其干预耐药癌细胞能否对免疫细胞增殖及功能有影响。方法将MT-1与卵巢癌耐药细胞株即SKOV3/CBP细胞株共培养后加入淋巴细胞,以未加入MT-1的SKOV3/CBP细胞株为对照,四甲基偶氮唑盐(MTT)法监测淋巴细胞的增殖能力,随后分别将耐药SKOV3/CBP及SKOV3/CBP+MT-1与自然杀伤细胞(NK)细胞、CD8+T细胞共培养,乳酸脱氢酶(LDH)检测NK细胞的杀伤能力,酶联免疫斑点检测(ELISPOT)CD8+T细胞的杀伤能力。结果与未加入MT-1组对比,加入MT-1组SKOV3/CBP细胞中的淋巴细胞的增值,NK细胞的杀伤能力及CD8+T细胞的杀伤能力增强且差异有统计学意义(P<0.05)。结论 MT-1可提高卵巢癌耐药细胞对免疫细胞作用的敏感性,故MT-1可作为卵巢癌耐药治疗的新手段。(本文来源于《中国药物与临床》期刊2019年06期）
续云洁[5]（2018）在《Bcl-2抑制剂ABT737通过调节糖代谢增加卵巢癌顺铂耐药细胞凋亡敏感性机制的研究》一文中研究指出目前,卵巢癌的治疗方案主要以铂类为基础的化疗药物,而铂类耐药成为卵巢癌死亡率和发病率居高不下的主要原因。虽然对顺铂耐药机制的探讨一直是过去几十年来的研究热点,但其复杂的发生机制至今尚不清楚。近来研究认为,顺铂耐药的主要原因与肿瘤细胞凋亡逃逸有关。以往研究结果提示,肿瘤耐药细胞高表达抗凋亡Bcl-2蛋白引起的凋亡逃逸是形成耐药的机制之一。线粒体是细胞凋亡、代谢、氧化还原、信号转导等细胞调控的交汇点。最近研究认为,定位于线粒体外膜的抗凋亡Bcl-2蛋白通过降低促凋亡蛋白Bax对线粒体复合体I的抑制,也参与了线粒体功能的调节,发挥了非凋亡调节功能。近期,人们开发了靶向抗凋亡Bcl-2蛋白的ABT737、S1等小分子化合物,并发现此类化合物能够诱导细胞线粒体途径凋亡,同时为研究肿瘤耐药细胞线粒体功能提供了一个工具。铂类耐药可能与肿瘤细胞代谢改变有关。早在80年前,人们发现肿瘤细胞糖代谢以有氧糖酵解为主,该现象称为Warburg效应,并认为这是由于线粒体功能的弱化引起的。但是,近期研究表明肿瘤细胞具有正常功能的线粒体,在小鼠胰腺癌模型的研究中,发现了代谢模式不同的细胞群,其中最耐受凋亡的癌细胞依赖于线粒体氧化磷酸化(oxidative phosphorylation,OXPHOS),提示肿瘤耐药细胞和敏感细胞之间存在代谢差异。由于肿瘤耐药细胞的糖代谢特点与线粒体的功能可能更加复杂,因此需要进一步探讨。Sirtuins是高度保守的蛋白,在应对代谢信号时,能调整细胞的生理和能量需求。线粒体中的Sirtuins成员中SIRT3蛋白主要是通过转录后去乙酰化修饰作用来调节线粒体蛋白的功能。NAD~+/NADH比率的变化可引起SIRT3活性的改变。SIRT3活性下降能够降低线粒体蛋白的去乙酰化修饰,抑制电子传递链有效的电子传递,使NADH向NAD~+转化减少,进一步降低SIRT3的活性,结合我们的前期实验,卵巢癌顺铂耐药细胞SKOV3/DDP高表达Bcl-2,却低表达SIRT3,我们推测对于卵巢癌顺铂耐药细胞来说,SIRT3可能是一种抑癌基因。在化疗药物等诱导细胞凋亡过程中,Bcl-2与SIRT3之间可能存在着密切的联系。本研究以人卵巢癌细胞SKOV3及其顺铂耐药细胞SKOV3/DDP为研究对象,利用靶向抗凋亡Bcl-2蛋白的小分子化合物ABT737,通过探讨Bcl-2与SIRT3调控作用,分析卵巢癌顺铂耐药细胞SKOV3/DDP的糖代谢方式及线粒体功能的变化,阐明抗凋亡Bcl-2蛋白参与卵巢癌顺铂耐药的调控机制。方法:1.利用MTT法检测卵巢癌顺铂耐药细胞SKOV3/DDP对顺铂的敏感性;利用流式细胞术检测细胞周期的分布。2.利用PCR array方法检测人葡萄糖代谢通路84种相关基因的变化,观察SKOV3/DDP细胞中糖代谢相关基因的表达特点。3.采用葡萄糖模拟物2-NBDG检测葡萄糖摄取速率,葡萄糖试剂盒和糖原试剂盒检测葡萄糖消耗量和糖原含量,观察SKOV3/DDP细胞对葡萄糖的需求情况。4.利用OCR、ECAR方法检测细胞氧耗率和胞外酸化率、ATP试剂盒检测APT水平,分析SKOV3/DDP细胞是否依赖线粒体OXPHOS。5.采用MitoSox Red、DCFH-DA染料分别检测线粒体超氧化物、细胞总ROS水平;利用NADPH、GSH、G6PD活性检测试剂盒分别检测NADPH、GSH含量和G6PD活性,qRT-PCR和western blot方法检测G6PD表达,评价SKOV3/DDP细胞内氧化还原状态。6.利用western blot方法检测SKOV3/DDP细胞Bcl-2蛋白表达水平;采用MCTS培养技术、Calcein AM/PI染料和Annexin V-FITC/PI染色等方法检测Bcl-2抑制剂ABT737对顺铂凋亡敏感性的影响;采用MCTS培养技术观察3D细胞球体生长情况。7.利用western blot方法检测SKOV3/DDP细胞SIRT3和HIF-1α表达水平;采用NAD~+/NADH试剂盒,SOD2试剂盒检测NAD~+/NADH的比值及SOD2的活性;将人SIRT3全长cDNA片段亚克隆到pcDNA3.1载体上,构建SIRT3全长表达载体,利用western blot方法在SKOV3/DDP细胞中验证。免疫共沉淀技术等方法,检测ABT737对SIRT3、HIF-1α和SOD2在细胞内的表达、分布和相互作用情况8.利用GSH试剂盒和DCFH-DA染料分析2-DG联合ABT737对细胞GSH和ROS水平的影响;采用MCTS培养技术观察SKOV3/DDP细胞球体生长情况。结果:1.基础水平下,与卵巢癌细胞SKOV3相比,人卵巢癌顺铂耐药细胞SKOV3/DDP处于细胞周期G1,G2期的细胞明显较多,S期明显较少。2.PCR array检测结果表明,与SKOV3细胞相比,SKOV3/DDP细胞糖代谢整体水平发生明显改变:糖酵解途径,糖异生和TCA循环相关基因表达上调。3.与SKOV3细胞相比,SKOV3/DDP细胞对葡萄糖的摄取和消耗增加,葡萄糖转运体Glut1基因表达水平增加,乳酸分泌减少,糖代谢关键酶PFKL表达增强,细胞内糖原含量增加;在糖剥夺的情况下,SKOV3/DDP细胞对糖酵解抑制剂2-DG的敏感性增强。4.ECAR结果显示,与SKOV3细胞相比,SKOV3/DDP细胞的糖酵解水平相对较低,且MTT结果显示SKOV3/DDP细胞对2-DG处理不敏感。而OCR结果表明,其线粒体OXPHOS水平相对更强,细胞内氧浓度较低,ATP水平增强。5.MitoSox Red、DCFH-DA染色结果表明,与SKOV3细胞相比,SKOV3/DDP细胞线粒体超氧化物和细胞内总ROS水平明显增强,同时,NADPH和GSH试剂盒检测发现细胞内NADPH、GSH含量明显升高,G6PD活性试剂盒,qRT-PCR和western blot检测发现G6PD的表达和活性明显增强,提示磷酸戊糖途径增强。6.Western blot检测表明,与SKOV3细胞相比,SKOV3/DDP细胞高表达Bcl-2蛋白。OCR和ATP检测试剂盒结果表明,Bcl-2抑制剂ABT737通过抑制SKOV3/DDP细胞线粒体OXPHOS,抑制糖代谢,减少能量生成,并显着增强了顺铂凋亡敏感性。7.Western blot检测表明,与SKOV3细胞相比,SKOV3/DDP细胞内SIRT3蛋白表达较低,HIF1-α蛋白表达较高,且细胞内NAD~+/NADH的比值较低;ABT737能够上调SKOV3/DDP细胞中SIRT3的表达,免疫共沉淀检测表明ABT737可促进SIRT3与SOD2的结合,降低SOD2的乙酰化水平,同时SOD2试剂盒检测表明SOD2活性的增强。且ABT737可通过SIRT3蛋白的上调,抑制HIF1-α蛋白表达。8.2-DG联合ABT737,western blot检测SKOV3/DDP细胞内葡萄糖代谢相关蛋白表达降低,同时DCFH-DA染色和GSH试剂盒分析发现ROS水平升高、GSH水平降低,MCTS培养技术发现细胞球体的生长明显受到抑制。结论:1.基础水平下,人卵巢癌顺铂耐药细胞SKOV3/DDP的细胞周期分布不同于卵巢癌细胞SKOV3,提示其细胞代谢方式的可能发生改变。2.与SKOV3细胞相比,SKOV3/DDP细胞中糖代谢相关基因的表达存在明显差异,对葡萄糖的依赖性增强,糖酵解水平相对较低,线粒体OXPHOS水平相对较高。3.抗凋亡Bcl-2蛋白参与了SKOV3/DDP细胞中糖代谢重编程,更依赖于OXPHOS,且Bcl-2抑制剂ABT737可显着增强SKOV3/DDP细胞对顺铂的凋亡敏感性。糖酵解抑制剂2-DG联合ABT737可抑制糖代谢相关酶的表达,并影响ROS、GSH的水平,表明卵巢癌顺铂耐药细胞高表达Bcl-2可能与较高水平的氧化与抗氧化平衡、代谢重编程有关。4.Bcl-2抑制剂ABT737与过表达SIRT3实验均发现,Bcl-2抑制剂ABT737可促进SKOV3/DDP细胞中SIRT3的表达,上调NAD~+/NADH的比值,增强SIRT3蛋白的活性,进而促进SOD2活性,下调HIF1-α蛋白水平,抑制HIF1-α对糖代谢相关基因的转录,表明Bcl-2抑制剂ABT737可能通过干扰卵巢癌耐药细胞的糖代谢、线粒体氧化磷酸化,影响氧化与抗氧化平衡等,导致线粒体功能障碍,增加了卵巢癌耐药细胞顺铂凋亡敏感性。综上,我们聚焦于人卵巢癌耐药细胞SKOV3/DDP独特的代谢模式,利用抗凋亡Bcl-2蛋白的小分子化合物ABT737,探讨了抗凋亡Bcl-2蛋白通过整合细胞凋亡和代谢,参与顺铂耐药细胞代谢模式的调控机制,并针对肿瘤耐药细胞和非耐药细胞之间的代谢差异,提出了靶向抗凋亡Bcl-2蛋白的小分子化合物联合抑制糖酵解和增加化疗药物敏感性的新设想,为改善卵巢癌等恶性肿瘤的治疗提供理论依据。(本文来源于《吉林大学》期刊2018-12-01）
王芬[6]（2018）在《氯化镧增强卵巢癌顺铂耐药细胞敏感性及其机制的实验研究》一文中研究指出目的:卵巢癌是女性生殖系统中恶性程度最高的肿瘤,研究表明:卵巢癌肿瘤细胞减灭术后的化疗治疗无可替代,以铂类为基础的化疗方案被视为标准方案,作为一线化疗方案广泛应用于临床。近年来,尽管新的化疗药物层出不穷,但晚期卵巢癌患者5年生存率仍得到有效提高,其主要原因是化疗耐药。本研究从卵巢癌化疗耐药这一临床实际出发,在本课题小组前期工作(在细胞水平证实氯化镧在体外可增强卵巢癌顺铂耐药细胞化疗敏感性)的基础上,在动物水平验证体外试验的研究结果,利用差异蛋白质组学寻找出差异表达的蛋白,并利用免疫组化以及western-blot技术验证其结果,初步探讨氯化镧增强卵巢癌顺铂耐药细胞敏感性的分子机制,为顺铂耐药性卵巢癌的临床治疗提供新的思路和手段,同时为开发稀土氯化镧的药用价值提供科学依据。方法:1.两株细胞(敏感株和耐药株)体内移植瘤分别设为对照组、顺铂组、氯化镧组、氯化镧+顺铂组,游标卡尺测量记录各实验组体内瘤结节的长度(a)、宽度(b)和高度(c),按公式计算肿瘤近似体积(V),V=abc*π/6,单位cm3。2.用TUNEL检测不同组(对照组、顺铂组、氯化镧组、氯化镧+顺铂组)COC1和COC1/DDP细胞移植瘤的凋亡情况。3.免疫组化法检测不同组(对照组、顺铂组、氯化镧组、氯化镧+顺铂组)COC1和COC1/DDP细胞移植瘤肿瘤相关蛋白表达情况。4.采用非标定量蛋白质组学分析方法测定顺铂应用前后对顺铂敏感的卵巢癌细胞COC1和对顺铂耐药的卵巢癌细胞COC1/DDP中的差异表达蛋白。利用GO分析,根据这些蛋白质的细胞成分、生物学过程和分子功能,将它们分为不同的亚群。利用KEGG通路分析来确定这些蛋白质参与的关键信号通路。5.取对数生长期的COC1/DDP细胞分为对照组、顺铂组、氯化镧组、氯化镧+顺铂组,培养48h后用Western blot法检测不同实验组细胞中ERCC1、Ki67、CDK6、c-Cbl和EB1 5种蛋白的表达情况。结果:1:氯化镧对体内移植瘤生长的影响:顺铂和氯化镧联合作用可以抑制肿瘤在体内的生长。与对照组比,单用顺铂处理可显着降低肿瘤的重量和体积,分别降低45%和54%(p<0.001)。顺铂和氯化镧联合处理使肿瘤的重量和体积分别比对照组(p<0.001)减少54%和61%。相比之下,氯化镧本身对肿瘤的生长的影响无统计学意义(p>0.005)。在COC1和COC1/DDP两组中得出结果基本一致,结果表明,氯化镧联合顺铂可抑制卵巢肿瘤的体内生长。2:TUNEL法检测各组移植瘤的凋亡:与对照组相比,顺铂处理后的COC1细胞中的Tunel阳性细胞明显增多,统计学有显着差异(p<0.001)。与氯化镧+顺铂组相比,氯化镧的加入进一步促进了肿瘤细胞的凋亡,因此顺铂联合氯化镧处理组的凋亡细胞比例显着提高(p<0.001)。然而,单独使用氯化镧处理组肿瘤细胞与对照组相比,凋亡没有明显的影响(P>0.05)。在COC1/DDP细胞移植瘤中的结果与COC1细胞移植瘤结果一致。3:免疫组化法检测各组体内移植瘤中肿瘤相关蛋白表达情况:与对照组相比,顺铂组Ki 67的表达水平降低,氯化镧联合顺铂组Ki67的表达进一步降低,相比之下,单用氯化镧对Ki67表达的影响很小。癌基因和抗凋亡蛋白BCL-2的表达,与Ki67有相似的趋势。相反,人类肿瘤抑制基因BRCA1和BRCA2的表达水平与Ki67和BCL-2相反。也就是说,顺铂提高了BRCA1和BRCA2的表达水平,而顺铂与氯化镧共处理进一步提高了BRCA1和BRCA2的表达水平。DNA修复基因ERCC1的表达,其表达水平与Ki67和BCL-2基本一致,在单用顺铂和顺铂联合氯化镧组中,ERCC1表达的减少。经统计学处理,对照组BCL-2和Ki-67阳性率极显着高于氯化镧组+顺铂组和顺铂组(P<0.01)。而BRCA1和BRCA2各组的阳性表达率与ERCC1、BCL-2和Ki-67恰好相反。4:蛋白组学研究结果显示:实验共计检测定性定量蛋白3537个,并对这些蛋白进行了GO注释分析。在COC1和COC1/DDP之间差异表达的蛋白有710个,COC1+顺铂和COC1/DDP+顺铂之间差异表达的蛋白有783个,COC1+氯化镧和COC1/DDP+氯化镧之间差异表达的蛋白有917个,COC1/DDP+顺铂与COC1/DDP+顺铂+氯化镧之间差异表达的蛋白有775个,加顺铂前后,COC1细胞株和COC1/DDP细胞株都有差异的蛋白有411个;加顺铂前后,COC1/DDP和COC1/DDP+氯化镧都有差异的蛋白有536个。其中,14%定位于细胞膜上,KEGG分析,将差异表达的蛋白分为21亚组。5:采用Western blot技术验证功能蛋白表达结果显示:采用Western blot验证5种功能蛋白(ERCC1、Ki67、CDK6、c-Cbl和EB1)在顺铂单药、氯化镧单药和顺铂联合氯化镧作用于COC1/DDP中的表达情况,结果表明:顺铂联合氯化镧组EB1和c-Cbl表达量显着高于对照组和氯化镧组,而ERCC1、Ki67、CDK6在耐药株的表达量与EB1和c-Cbl表达量相反。提示氯化镧可能通过多种途径下调ERCC1、Ki67和CDK6的表达,上调EB1和c-Cbl的表达增强顺铂的抑瘤作用。结论:氯化镧通过多种途径下调BCL-2、Ki-67、ERCC1和CDK6的表达,上调BRCA1、BRCA2、EB1和c-Cbl的表达,增强卵巢癌顺铂的敏感性;氯化镧与顺铂联合作用在体内大大促进COC1,COC1/DDP细胞体内移植瘤细胞的凋亡,从而增强顺铂的抑瘤作用,抑制体内肿瘤的生长,但其具体调控机制还需更多的研究。(本文来源于《南昌大学》期刊2018-12-01）
张韫琪,李国锋,宋志华[7]（2018）在《阿法替尼对卵巢癌阿霉素耐药细胞的增敏作用及其机制》一文中研究指出目的探讨阿法替尼增强耐药性卵巢癌细胞对阿霉素化疗敏感度的作用及机制。方法 MTT法检测联用阿法替尼对阿霉素作用于卵巢癌A2780及A2780T细胞的IC_(50)的影响;不同浓度的阿法替尼干预后,罗丹明123蓄积实验检测ABCB1外排功能;ABCB1-Glo?Assay Systems实验检测ABCB1ATPase活性;Westernblot检测A2780T细胞EGFR、p-EGFR、HER-2、p-HER-2及ABCB1的表达;RTPCR实验检测A2780T细胞MDR1mRNA的表达。结果无毒浓度的阿法替尼显着降低了阿霉素对耐药卵巢癌A2780T细胞的IC_(50)(P<0.05),而对A2780细胞没有影响;阿法替尼浓度依赖性地增加罗丹明123在A2780T细胞内的蓄积量及ABCB1 ATPase活性(P<0.05);阿法替尼下调A2780T细胞ABCB1的编码基因MDR1的mRNA水平及ABCB1的蛋白表达水平,抑制了EGFR及HER-2的磷酸化水平。结论阿法替尼可能通过抑制ABCB1转运体的外排功能,下调ABCB1的表达,进而增敏耐药卵巢癌细胞A2780T对阿霉素的化疗敏感度,是一种有开发前景的卵巢癌化疗增敏剂。(本文来源于《肿瘤防治研究》期刊2018年10期）
汪静,黄利红[8]（2018）在《MI-219和阿霉素联合处理对卵巢癌耐药细胞A2780/ADM增殖的抑制作用》一文中研究指出目的探讨MDM2抑制剂MI-219与抗癌药物阿霉素(ADM)联合应用对卵巢癌耐药细胞株A2780/ADM增殖的抑制作用。方法通过四甲基偶氮唑盐(MTT)比色法检查不同浓度MI-219 (5. 000μmol/L、2. 500μmol/L、1. 250μmol/L和0. 625μmol/L)对A2780/ADM细胞株增殖的抑制作用,以无毒(0. 625μmol/L)和低毒(1. 250μmol/L)剂量的MI-219与ADM联合处理A2780/ADM细胞,观察细胞增殖率变化;流式细胞术Annexin V-FITC/PI双染法分析细胞凋亡水平,通过Western印迹法检测细胞p53、MDM2、XIAP、Caspase3和Caspase9蛋白水平,酶联免疫吸附试验(ELISA)分析胞质Cytochrome C释放水平。结果联合处理组细胞增殖率明显低于对照组和ADM单独处理组(P<0. 01),细胞凋亡率则显着高于对照组和ADM单独处理组(P<0. 05);联合处理组细胞MDM2、XIAP水平降低,活化型p53、Caspase3和Caspase9水平明显升高,同时,胞质Cytochrome C释放水平亦显着高于对照组和ADM单独处理组(P<0. 01)。结论 MDM2抑制剂MI-219能增加ADM对卵巢癌耐药细胞株A2780/ADM诱导的凋亡,其机制可能是通过下调MDM2进而增加p53和降低凋亡抑制因子XIAP表达而发挥作用的。(本文来源于《中国老年学杂志》期刊2018年19期）
卢丹华,洪莉,杨将,高利昆,曾婉玲[9]（2018）在《KDM2A对人卵巢癌顺铂耐药细胞株A2780增殖和凋亡的影响及机制研究》一文中研究指出目的:探讨赖氨酸脱甲基酶2A(Lysine-specific demethylase 2A,KDM2A)对顺铂(cisplatin,DDP)耐药的人卵巢癌细胞A2780细胞增殖和凋亡的影响及其可能作用机制。方法:通过构建慢病毒载体转染A2780/DDP,分为A2780、A2780/DDP、A2780/DDP/KDM2A(转染KDM2A)、A2780/DDP/Jagged1(转染Jagged1)以及A2780/DDP/NC(转染病毒载体)组。采用Western blot检测3组KDM2A、Jagged1、Bcl2和BAX蛋白表达,CCK8和平板克隆形成实验检测细胞对顺铂的敏感性,流式细胞术检测细胞凋亡情况。结果:A2780/DDP细胞KDM2A和Jagged1的蛋白表达水平均显着高于A2780细胞(P<0.05),且A2780/DDP/KDM2A细胞中KDM2A和Jagged1的蛋白表达均低于A2780/DDP以及阴性对照组A2780/DDP/NC(P<0.05);A2780/DDP/Jagged1细胞的Jagged1蛋白表达低于A2780/DDP以及A2780/DDP/NC(P<0.05),而其KDM2A蛋白的表达比较差异无统计学意义(P>0.05)。不同浓度DDP处理的A2780/DDP/KDM2A细胞的生长抑制率均显着高于A2780/DDP/NC和A2780/DDP细胞(P<0.05),A2780/DDP/KDM2A细胞克隆形成数量亦明显高于A2780/DDP/NC和A2780/DDP细胞(P<0.05)。A2780/DDP/KDM2A细胞凋亡率为(25.84±3.27)%,明显高于A2780/DDP细胞[(14.29±1.96)%](P<0.05)和A2780/DDP/NC细胞[(12.46±2.15)%](P<0.05)。A2780/DDP/KDM2A细胞中Bcl-2蛋白表达明显低于A2780/DDP细胞(P<0.05),而A2780/DDP/KDM2A细胞Bax的表达水平却高于A2780/DDP细胞(P<0.05)。结论:KDM2A可能通过上调Jagged1的表达,促进人卵巢癌细胞A2780的增殖并抑制其凋亡,进而降低人卵巢癌耐药细胞A2780的顺铂敏感性。(本文来源于《现代生物医学进展》期刊2018年16期）
李婷[10]（2018）在《抑癌基因SPARCL1的表达调控机制及其在卵巢癌顺铂耐药细胞中的功能研究》一文中研究指出研究目的:SPARCL1与卵巢癌或肿瘤耐药相关的研究薄弱,而与卵巢癌耐药调控相关的报道更是罕见。基于生物信息学手段挖掘SPARCL1对于肿瘤进展及卵巢癌耐药的调控,并通过体外实验验证SPARCL1对卵巢癌SKOV3/DDP细胞生物学功能的影响,进而筛选参与调控SPARCL1表达的miRNA,分析其在卵巢癌耐药中的表达变化及其调控机制。研究方法:通过Coremine medical和GeneMANIA进行生物学过程/通路注释、基因-蛋白互作等生物信息学方法;通过Oncomine及TCGA等数据库提取基因表达信息及相关临床数据。利用慢病毒载体构建过表达SPARCL1的SKOV3/DDP细胞,利用RT-qPCR和Western blot检测SPARCL1表达水平,CCK8法检测IC50和生长曲线,平板克隆和划痕实验检测细胞增殖能力,流式细胞术检测细胞周期和细胞凋亡。用生物信息学技术如TargetScan、microRNA.org及microT-CDS数据库预测靶点SPARCL1的miRNA,并对筛选miRNA进行验证。研究结果:1.生物信息学分析结果:SPARCL1作为潜在抑癌基因,在包括卵巢癌在内的多数肿瘤中下调表达。SPARCL1与肿瘤进展、诊断及预后显着相关,并与至少9种肿瘤病人的不良生存显着相关。SPARCL1表达差异与卵巢癌的组织学分级具有相关性,SPARCL1与6个基因(TNF、FOS、ABCB1、STAT3、WWOX、PMS2)存在直接互作,且通过多种方式参与卵巢癌耐药调控,如细胞增殖、细胞周期、细胞迁移、凋亡过程和血管生成等。2.体外实验验证结果:在SKOV3/DDP中稳定转染SPARCL1过表达病毒,过表达SPARCL1后,SKOV3/DDP对顺铂的IC50明显下降。SKOV3/DDP细胞组从48h开始SKOV3/DDP-OE与SKOV3/DDP及SKOV3/DDP-EV组比较生长速度降低,差异有统计学意义(P<0.05)。在7.5μM顺铂加药处理条件下,SPARCL1过表达的SKOV3/DDP细胞的克隆形成能力明显降低(P<0.05)。SPARCL1过表达的SKOV3/DDP细胞的划痕愈合能力也显着降低。流式细胞仪检测发现,SPARCL1基因过表达可阻滞SKOV3/DDP细胞周期于G0/G1期,但细胞凋亡实验无明显差异。3.调控SPARCL1的microRNA筛选及验证结果:在预测软件的基础上,筛选出3个能够潜在调控SPARCL1表达的microRNAs,通过双荧光素酶报告进一步确认miR-448可以抑制SPARCL1基因的表达。结论:1.SPARCL1作为潜在抑癌基因,在卵巢癌中下调表达,通过细胞增殖、细胞周期、血管形成等生物学方式影响卵巢癌耐药发生,并与6个基因直接互作影响卵巢癌耐药进展。2.SPARCL1能够提高耐药细胞对顺铂的敏感性,并抑制细胞增殖和细胞迁移,阻滞细胞周期。3.miR-448能靶向调节SPARCL1基因,且在预测位点区域中(Position62-68/211-218)发挥抑制作用。(本文来源于《广西医科大学》期刊2018-05-01）
卵巢癌耐药细胞论文开题报告
（1）论文研究背景及目的
此处内容要求：
首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景，再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题，并提出你的论文准备的观点或解决方法。
写法范例：
目的:检测昼夜节律基因CRY1与细胞自噬在卵巢癌顺铂耐药细胞株A2780/DDP及其亲本细胞株A2780中的表达差异,探讨CRY1与细胞自噬的相关性及其是否参与A2780/DDP耐药性的产生。方法:1.qRT-PCR及Western Blot检测A2780及A2780/DDP细胞株中细胞自噬和昼夜节律基因及相关蛋白表达水平;细胞免疫荧光检测LC3和CRY1的表达及分布情况。2.顺铂处理肿瘤细胞后,CCK8检测细胞1~5天的存活率;吖啶橙及Hoechst33342观察自噬囊泡和细胞核形态;Western Blot检测自噬和昼夜节律基因表达。3.3-甲基腺嘌呤处理肿瘤细胞后,Western Blot检测自噬和昼夜节律基因的表达变化。4.慢病毒介导CRY1干扰及过表达质粒分别调控A2780和A2780/DDP细胞CRY1基因的表达水平;qRT-PCR和Western Blot检测CRY1稳定转染细胞CRY1及细胞自噬相关蛋白;CCK8比较调控CRY1前后细胞顺铂敏感性变化。结果:1.与A2780细胞相比,qRT-PCR结果显示A2780/DDP中CRY1、CRY2、CLOCK、LC3表达明显上调,p62/SQSTM1下调;Western Blot结果示LC3上调,p62/SQSTM1、CRY1、CRY2、CLOCK的表达明显下调,其中CRY1和CLOCK差异最为明显;细胞免疫荧光法结果显示A2780/DDP细胞中LC3的表达明显增加、CRY1减少。2.顺铂处理A2780和A2780/DDP后,CCK8结果显示A2780/DDP的顺铂抵抗性明显强于A2780,A2780/DDP的24h和48h IC50分别为22.131μg/ml、25.378μg/ml,A2780 IC50分别为6.066μg/ml、4.316μg/ml。3.顺铂处理48h后,吖啶橙结果显示顺铂可诱导A2780和A2780/DDP的自噬效应。Hoechst33342观察细胞核形态,结果为当顺铂浓度分别为5μg/ml和10μg/ml时A2780和A2780/DDP的凋亡效应明显增加。与A2780相比,Western Blot结果显示:顺铂浓度≤5μg/ml时,诱导A2780/DDP细胞自噬效应增加不明显,CRY1呈上升趋势。但当顺铂浓度达到20μg/ml时,A2780/DDP自噬效应明显增加,CRY1下调。4.3-MA抑制细胞自噬后,Western Blot结果显示:A2780及A2780/DDP细胞CRY1表达均呈上升趋势,且两者增加程度差异相当。5.分别将慢病毒介导的shCRY1和3xflag CRY1重组质粒稳定转染到A2780和A2780/DDP细胞中并获得稳转株,前者CRY1的mRNA和蛋白水平均呈下降趋势,后者为上调显着。Western Blot检测LC3,结果显示干扰CRY1后,自噬效应变化差异均无统计学意义;CRY1过表达后,A2780自噬效应无明显变化,A2780/DDP细胞自噬效应明显增加。CCK8检测稳定转染细胞株顺铂处理后1~5天的存活率,发现CRY1过表达,自噬效应增加,但细胞的存活率下降;而CRY1敲减后,自噬表达差异无统计学意义,但其存活率却呈现上升趋势。结论:1.与A2780细胞相比,昼夜节律基因CRY1在A2780/DDP中表达明显降低,自噬效应显着增加。顺铂可诱导细胞自噬效应的增加,降低CRY1的表达。2.抑制细胞自噬CRY1表达明显增加。CRY1基因沉默使A2780和A2780/DDP细胞对顺铂的敏感性下降,且前者下降更为明显。CRY1过表达能有效逆转A2780/DDP细胞对顺铂的耐药性。3.细胞自噬可能通过下调CRY1表达在A2780/DDP细胞中发挥作用,上调CRY1可增加A2780/DDP的顺铂敏感性。CRY1可能成为难治性卵巢癌的靶向治疗的新靶点。
（2）本文研究方法
调查法：该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。
观察法：用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。
实验法：通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。
文献研究法：通过调查文献来获得资料，从而全面的、正确的了解掌握研究方法。
实证研究法：依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。
定性分析法：对研究对象进行“质”的方面的研究，这个方法需要计算的数据较少。
定量分析法：通过具体的数字，使人们对研究对象的认识进一步精确化。
跨学科研究法：运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。
功能分析法：这是社会科学用来分析社会现象的一种方法，从某一功能出发研究多个方面的影响。
模拟法：通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。
卵巢癌耐药细胞论文参考文献
[1].简露,陈林,陈俞先,李涛.塞来昔布联合顺铂对人卵巢癌顺铂耐药细胞株COC1/DDP生长和凋亡的影响[J].中国妇幼保健.2019
[2].王冰蓉.昼夜节律基因CRY1介导细胞自噬调控卵巢癌顺铂耐药细胞株A2780/DDP耐药性的相关机制研究[D].福建中医药大学.2019
[3].封洁珠,李恩泽,彭子瀚,裴一飞,朱林燕.卵巢癌顺铂敏感与耐药细胞ClC-3蛋白表达及通道功能的差异[J].中国病理生理杂志.2019
[4].冯勤梅,候茜媛,吕真娇.1-甲基色氨酸作用卵巢癌耐药细胞后对免疫细胞功能的影响[J].中国药物与临床.2019
[5].续云洁.Bcl-2抑制剂ABT737通过调节糖代谢增加卵巢癌顺铂耐药细胞凋亡敏感性机制的研究[D].吉林大学.2018
[6].王芬.氯化镧增强卵巢癌顺铂耐药细胞敏感性及其机制的实验研究[D].南昌大学.2018
[7].张韫琪,李国锋,宋志华.阿法替尼对卵巢癌阿霉素耐药细胞的增敏作用及其机制[J].肿瘤防治研究.2018
[8].汪静,黄利红.MI-219和阿霉素联合处理对卵巢癌耐药细胞A2780/ADM增殖的抑制作用[J].中国老年学杂志.2018
[9].卢丹华,洪莉,杨将,高利昆,曾婉玲.KDM2A对人卵巢癌顺铂耐药细胞株A2780增殖和凋亡的影响及机制研究[J].现代生物医学进展.2018
[10].李婷.抑癌基因SPARCL1的表达调控机制及其在卵巢癌顺铂耐药细胞中的功能研究[D].广西医科大学.2018