导读:本文包含了免疫原性相异株论文开题报告文献综述及选题提纲参考文献，主要关键词:巨型艾美耳球虫,cDNA,差异表达基因,卵囊
免疫原性相异株论文文献综述
刘丹丹,李建梅,韩宏晓,王尚尚,曹李琴[1]（2011）在《巨型艾美耳球虫免疫原性相异株间差异表达基因消减cDNA文库的构建与分析》一文中研究指出为了探索巨型艾美耳球虫上海株和南通株球虫在免疫原性上差异的分子基础,分别以上海株未孢子化卵囊cDNA为试验组,南通株未孢子化卵囊cDNA为驱动组,或相反,以南通株未孢子化卵囊cDNA为试验组,上海株未孢子化卵囊cDNA为驱动组,分别构建了2个抑制性消减文库。随机从两个消减文库中挑取阳性克隆,用接头引物Nest PCR primer 1和Nest PCR primer 2R进行PCR扩增,经PCR鉴定显示,上海株和南通株未孢子化卵囊消减cDNA文库的重组率分别为95%(284/300)和89%(231/261),差异基因片段大小分布在0.25 kb～1.0 kb之间。随后,用地高辛标记方法制备了4种探针,即上海株消减组cDNA探针、上海株未消减组cDNA探针和南通株消减组cDNA探针、南通株未消减组cDNA探针。分别用同源株消减组探针和异源株未消减组探针对同一克隆进行检测,筛选差异表达克隆。在被检测的515个克隆(上海株284个,南通株231个)中,共获得86个差异表达克隆,其中上海株63个,南通株23个。对差异表达克隆测序和同源性比对,共获得10个重迭群(Contigs),其中上海株6个,南通株4个。通过BLAST分析,上海株的6个contigs中5个见有同源序列,1个未见同源序列,可能为新基因;南通株的4个contigs中3个见有同源序列,1个未见同源序列,可能为新基因。最后,选取6个差异表达基因,根据其序列分别设计引物,进行RT-PCR检测,结果发现这些基因在两个虫株内均有表达;随后又从RT-PCR验证的6个差异表达基因中选取2个基因,重新设计引物进行实时定量PCR验证,结果显示这2个差异表达基因在SH株和NT株中确实存在着表达量上的差异。(本文来源于《中国畜牧兽医学会家畜寄生虫学分会第六次代表大会暨第十一次学术研讨会论文集》期刊2011-11-18）
刘丹丹[2]（2011）在《巨型艾美球虫免疫原性相异株间消减cDNA文库的构建及其差异表达基因分析》一文中研究指出鸡球虫病(Coccidiosis)是由数种艾美球虫(Eimeria)寄生在鸡肠道黏膜细胞内引起的一种寄生性原虫病。在鸡的各类疾病中,球虫病发病率最高,是养禽业危害最严重的禽病之一。目前,鸡球虫病的防治仍然以药物预防为主,但随着耐药虫株的广泛出现,药物预防的效果越来越差,而且药物的长期使用会残留肉蛋,污染环境,影响人体健康,故球虫病的防治趋势由药物转向了免疫预防。巨型艾美球虫(Eimeria. maxima)是在田间最常见的3种球虫之一,具有最强的免疫原性和一定的交叉免疫保护力,故在球虫疫苗中,E. maxima是不可缺少的虫种之一,但E. maxima在不同株间抗原变异最显着,有时可因疫苗株与田间株间的抗原差异而导致免疫效果不佳,甚至失败。本实验室前期研究发现,巨型艾美球虫上海株(SH strain)和南通株(NT strain)在免疫原性方面存在着显着的差异,即上海株仅对同源株攻击产生免疫保护力,而南通株对同源株与异源株攻击均能产生免疫保护力。为了探索这两株球虫在免疫原性上差异的分子基础,本文开展了下列研究工作。1E. maxima SH株和NT株未孢子化卵囊阶段消减cDNA文库的构建用常规方法分别从E. maxima SH株和NT株未孢子化卵囊中提取总RNA,并用纤维素柱纯化得到mRNA。在分别用球虫的mRNA为模板进行反转录获得cDNA后,分别以SH株cDNA为试验组(tester), NT株cDNA为驱动组(driver),或相反以NT株cDNA为tester,SH株cDNA为驱动组driver,经过两轮消减杂交和两轮抑制性PCR后,将PCR产物连接pGEM-T Easy载体,并转化到大肠杆菌感受态细胞DH5α,经过蓝白斑筛选,分别构建了2个抑制性消减文库。随机从两个消减文库中挑取阳性克隆,用接头引物nest primer1和nest primer2R进行PCR扩增,经PCR鉴定显示E. maxima SH株和E.maxima NT株未孢子化卵囊消减cDNA文库的重组率分别为95%(284/300)和89%(231/261),差异基因片段大小分布在0.25kb～1.0kb之间。2E. maxima SH株和NT株未孢子化卵囊阶段消减cDNA文库中差异表达基因的筛选与分析首先,用地高辛标记方法制备了4种探针,即SH株消减组cDNA探针、SH株未消减组cDNA探针和NT株消减组cDNA探针、NT株未消减组cDNA探针。随后,分别用同源株消减组探针和异源株未消减组探针对同一克隆进行检测,筛选差异表达克隆。在被检测的515个克隆(SH株284个,NT株231个)中,共获得86个差异表达克隆,其中SH株63个,NT株23个。对差异表达克隆测序和同源性比对,共获得10个重迭群(Contigs),其中SH株6个,NT株4个。通过BLAST分析,SH株的6个contigs扣5个见有同源序列,1个未见同源序列,可能为新基因；NT株的4个contigs中3个见有同源序列,1个未见同源序列,可能为新基因。最后,选取6个差异表达基因,根据其序列分别设计引物,进行RT-PCR检测,结果发现这些基因在两个虫株内均有表达；随后又从RT-PCR验证的6个差异表达基因中选取2个基因,重新设计引物进行实时定量PCR验证,结果显示这2个差异表达基因在SH株和NT株中确实存在着表达量上的差异。(本文来源于《扬州大学》期刊2011-05-01）
孙文瑶[3]（2008）在《巨型艾美球虫免疫原性相异株间差异表达基因消减文库的构建与初步分析》一文中研究指出鸡球虫病(Coccidiosis)是由一种或几种鸡艾美球虫引起的以肠道病变为主的寄生原虫病,对养禽业的危害很大,每年由鸡球虫病造成的直接和间接经济损失难以估计。巨型艾美球虫(Eimeria maxima)是诱发鸡球虫病的3种常见球虫之一,具有很强的免疫原性,对其它几种鸡球虫有部分的交叉免疫力,故在各种研制的鸡球虫病疫苗中,E.maxima是必不可少的虫种之一。但是,E.maxima株免疫原性差异最显着,在田间有时可因E.maxima免疫变异株的出现导致疫苗免疫失败。因此,疫苗的研制和使用有赖于对各地虫株的免疫原性进行深入研究,特别是免疫原性相异株间差异表达基因的研究。抑制消减杂交技术(suppression subtractive hybridization,SSH)是一种以抑制性PCR为基础的寻找差异表达基因的方法,是获得新基因乃至分子进化分析的重要研究手段。为了分离与鉴定E.maxima免疫原性相异株间的差异表达基因,探索球虫抗原变异的分子机理,为此,本研究首先以平均增重与病变记分减少率和卵囊减少率等为指标,对实验室保存的E.maxima南通株(NT)和E.maxima上海株(SH)进行了免疫原性差异的分析;然后,利用抑制消减杂交方法,分别以E.maxima SH株孢子囊cDNA为驱动组,以E.maxima NT株孢子囊cDNA为试验组,或以E.maxima NT株孢子囊的cDNA为驱动组,E.maxima SH孢子囊的cDNA为试验组,分别构建了2个抑制性消减文库,并对文库进行了分析。一、E. maxima南通株与上海株间的交叉保护力试验分别以平均增重与病变记分减少率和卵囊减少率等为指标,对实验室传代保存的E.maxima NT株和E.maxima SH株进行了株间交叉免疫力的分析。用E.maxima NT株和E.maxima SH株每鸡免疫接种2 500个、2周后每鸡攻击10×104个孢子化卵囊时,同源株攻击试验组鸡的平均增重与对照组相近(P> 0.05),病变记分减少率分别为79.55 %与88.46 %;E.maxima NT株免疫、E.maxima SH株攻击时,试验鸡的平均增重与对照组相近(P> 0.05),病变记分减少率为71.15 %;E.maxima SH株免疫、E.maxima NT株攻击时,试验鸡的平均增重与对照组间有显着差异(P< 0.05),病变记分减少率仅为36.36 %。用E.maxima NT株和SH株免疫接种100个、攻击100个孢子化卵囊时,同源株攻击后的卵囊减少率分别为100 %与97.56 %;E.maxima NT株免疫、E.maxima SH株攻击时的卵囊减少率为80.98 %;E.maxima SH株免疫、E.maxima NT株攻击时的卵囊减少率为41.20 %。结果显示:2株球虫对同源株攻击均能产生有效的保护力,E.maxima NT株对E.maxima SH株有交叉保护力,E.maxima SH株对E.maxima NT株无交叉保护力;这2株E.maxima的免疫原性特征没有随虫株在实验室的传代和保存而发生改变。二、E. maxima南通株与上海株间差异表达基因消减杂交文库的构建与初步分析为了分离与鉴定E.maxima SH株与E.maxima NT株间的差异表达基因,利用抑制消减杂交(SSH)方法,分别以E.maxima NT株孢子化卵囊cDNA为试验组(Tester),以E.maxima SH株孢子化卵囊cDNA为驱动组(Driver),或以E.maxima SH株孢子化卵囊cDNA作为Tester,E.maxima NT株孢子化卵囊cDNA作为Driver,通过两轮杂交和两次PCR后,将第二次PCR产物连接、克隆转化,经过蓝白斑筛选,分别构建了2个抑制性消减文库。随机从两个消减文库中分别挑取96个克隆,经PCR鉴定显示E.maxima SH株和E.maxima NT株孢子化卵囊cDNA消减文库的重组率分别为91 %和93 %,差异基因片段大小分布在0.25～1.0 kb之间。从每个文库中随机挑取30个阳性克隆测序,并进行同源性比较分析,结果显示:共获得了36个有效序列,其中E.maxima SH株的cDNA消减文库有4个单一序列与已知基因同源性较高,E.maxima NT株cDNA消减文库有3个单一序列与已知基因同源性较高,其余28个序列均无同源性相似基因,可能为E.maxima的新基因。这些结果将为分离E.maxima新的功能基因和进一步探索球虫抗原变异相关的分子机理奠定基础。(本文来源于《扬州大学》期刊2008-05-01）
免疫原性相异株论文开题报告
（1）论文研究背景及目的
此处内容要求：
首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景，再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题，并提出你的论文准备的观点或解决方法。
写法范例：
鸡球虫病(Coccidiosis)是由数种艾美球虫(Eimeria)寄生在鸡肠道黏膜细胞内引起的一种寄生性原虫病。在鸡的各类疾病中,球虫病发病率最高,是养禽业危害最严重的禽病之一。目前,鸡球虫病的防治仍然以药物预防为主,但随着耐药虫株的广泛出现,药物预防的效果越来越差,而且药物的长期使用会残留肉蛋,污染环境,影响人体健康,故球虫病的防治趋势由药物转向了免疫预防。巨型艾美球虫(Eimeria. maxima)是在田间最常见的3种球虫之一,具有最强的免疫原性和一定的交叉免疫保护力,故在球虫疫苗中,E. maxima是不可缺少的虫种之一,但E. maxima在不同株间抗原变异最显着,有时可因疫苗株与田间株间的抗原差异而导致免疫效果不佳,甚至失败。本实验室前期研究发现,巨型艾美球虫上海株(SH strain)和南通株(NT strain)在免疫原性方面存在着显着的差异,即上海株仅对同源株攻击产生免疫保护力,而南通株对同源株与异源株攻击均能产生免疫保护力。为了探索这两株球虫在免疫原性上差异的分子基础,本文开展了下列研究工作。1E. maxima SH株和NT株未孢子化卵囊阶段消减cDNA文库的构建用常规方法分别从E. maxima SH株和NT株未孢子化卵囊中提取总RNA,并用纤维素柱纯化得到mRNA。在分别用球虫的mRNA为模板进行反转录获得cDNA后,分别以SH株cDNA为试验组(tester), NT株cDNA为驱动组(driver),或相反以NT株cDNA为tester,SH株cDNA为驱动组driver,经过两轮消减杂交和两轮抑制性PCR后,将PCR产物连接pGEM-T Easy载体,并转化到大肠杆菌感受态细胞DH5α,经过蓝白斑筛选,分别构建了2个抑制性消减文库。随机从两个消减文库中挑取阳性克隆,用接头引物nest primer1和nest primer2R进行PCR扩增,经PCR鉴定显示E. maxima SH株和E.maxima NT株未孢子化卵囊消减cDNA文库的重组率分别为95%(284/300)和89%(231/261),差异基因片段大小分布在0.25kb～1.0kb之间。2E. maxima SH株和NT株未孢子化卵囊阶段消减cDNA文库中差异表达基因的筛选与分析首先,用地高辛标记方法制备了4种探针,即SH株消减组cDNA探针、SH株未消减组cDNA探针和NT株消减组cDNA探针、NT株未消减组cDNA探针。随后,分别用同源株消减组探针和异源株未消减组探针对同一克隆进行检测,筛选差异表达克隆。在被检测的515个克隆(SH株284个,NT株231个)中,共获得86个差异表达克隆,其中SH株63个,NT株23个。对差异表达克隆测序和同源性比对,共获得10个重迭群(Contigs),其中SH株6个,NT株4个。通过BLAST分析,SH株的6个contigs扣5个见有同源序列,1个未见同源序列,可能为新基因；NT株的4个contigs中3个见有同源序列,1个未见同源序列,可能为新基因。最后,选取6个差异表达基因,根据其序列分别设计引物,进行RT-PCR检测,结果发现这些基因在两个虫株内均有表达；随后又从RT-PCR验证的6个差异表达基因中选取2个基因,重新设计引物进行实时定量PCR验证,结果显示这2个差异表达基因在SH株和NT株中确实存在着表达量上的差异。
（2）本文研究方法
调查法：该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。
观察法：用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。
实验法：通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。
文献研究法：通过调查文献来获得资料，从而全面的、正确的了解掌握研究方法。
实证研究法：依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。
定性分析法：对研究对象进行“质”的方面的研究，这个方法需要计算的数据较少。
定量分析法：通过具体的数字，使人们对研究对象的认识进一步精确化。
跨学科研究法：运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。
功能分析法：这是社会科学用来分析社会现象的一种方法，从某一功能出发研究多个方面的影响。
模拟法：通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。
免疫原性相异株论文参考文献
[1].刘丹丹,李建梅,韩宏晓,王尚尚,曹李琴.巨型艾美耳球虫免疫原性相异株间差异表达基因消减cDNA文库的构建与分析[C].中国畜牧兽医学会家畜寄生虫学分会第六次代表大会暨第十一次学术研讨会论文集.2011
[2].刘丹丹.巨型艾美球虫免疫原性相异株间消减cDNA文库的构建及其差异表达基因分析[D].扬州大学.2011
[3].孙文瑶.巨型艾美球虫免疫原性相异株间差异表达基因消减文库的构建与初步分析[D].扬州大学.2008