导读:本文包含了成肝诱导论文开题报告文献综述及选题提纲参考文献，主要关键词:成体干细胞,小涎腺间充质干细胞,肝细胞样细胞,细胞治疗
成肝诱导论文文献综述
浦雯雯[1]（2018）在《人小涎腺间充质干细胞体外快速成肝诱导相关研究》一文中研究指出研究背景及意义成体干细胞源肝细胞为肝病的治疗提供了新思路,其中种子细胞的获得和肝功能重塑是关键环节。目前对于不同成体干细胞成功诱导功能性肝细胞的报道很多,但诱导的低效性大大限制了其临床应用。小涎腺同属消化道腺体,具有来源广泛,取材方便与供区损伤小的优点,是非常理想的成体干细胞来源,具有巨大的研究价值和应用潜力。此外,我课题组进行人小涎腺干细胞研究时发现,人小涎腺间充质干细胞(hMSG-MSCs)表达较多肝细胞相关蛋白,提示hMSG-MSCs可能成为体外快速获得功能性肝细胞的种子细胞。利用人小涎腺间充质干细胞进行快速体外成肝诱导,将为肝病细胞治疗提供理论基础和技术支持。目的1.从人小涎腺组织分离获得间充质干细胞,对hMSG-MSCs进行鉴定,为体外快速成肝诱导做干细胞源基础。2.对hMSG-MSCs进行快速体外成肝诱导,并鉴定诱导细胞相关基因和蛋白表型,检测最终诱导获得细胞是否具有成熟肝脏细胞相关功能。方法1.对人小涎腺组织进行原代培养,从中分离培养出间充质干细胞,体外传代扩增。利用流式细胞仪对获得细胞进行表型鉴定,并进行成骨成脂分化诱导。2.在体外二维培养环境下,通过叁步法利用CHIR99021、HGF、FGF4、EGF等细胞诱导因子对hMSG-MSCs进行快速成肝诱导,观察诱导过程中细胞状态及形态变化,利用Real-time PCR及免疫荧光检测诱导细胞相关表型的表达,并通过PAS染色和ICG摄取检测最终诱导获得细胞相关成熟肝脏细胞功能。结果1.从人小涎腺组织块中成功分离培养获得hMSG-MSCs,该细胞呈纺锤样(长梭形),体外增殖迅速,且其细胞特性保存完整。细胞流式分析表明,获得的hMSG-MSCs表达CD29、CD90和CD166等间充质干细胞标记物,不表达CD117、CD45等造血干细胞标记,也不表达CD49f等上皮类细胞标记,并且可成功向骨、脂肪方向进行分化。2.在体外二维培养环境下,叁步法hMSG-MSCs体外成肝诱导共用时6天。诱导第一天后,80%-90%的细胞形态由长梭形变为短梭形;第二天后细胞形态变为多角形,第六天后最终变为类肝细胞形态。Real-time PCR显示,内胚系祖细胞标志物F0XA2、S0X17及新生肝细胞标志物AFP先升高后降低,成熟肝细胞标志物ALB、CYP3A4和AAT持续升高。免疫荧光检测不同阶段相关蛋白阳性表达。ICG摄取和PAS染色均为阳性。结论1.由人小涎腺组织可分离培养获得hMSG-MSCs,该细胞具有强大自我更新能力和多向分化潜能,可以作为体外快速成肝诱导的种子细胞。2..hMSG-MSCs在体外二维培养环境下通过叁步法6天成肝诱导,最终所获得的细胞为成熟且具有一定功能的肝细胞。(本文来源于《北京协和医学院》期刊2018-03-01）
张辰[2]（2017）在《人小涎腺上皮干/祖细胞成肝诱导的相关研究》一文中研究指出目的1.体外对人小涎腺上皮干/祖细胞(hMSG-EpiPCs)进行成肝诱导,鉴定诱导获得细胞的表型和检测其是否具有成熟肝脏细胞相关功能。2.移植hMSG-EpiPCs给急性肝损伤模型小鼠,鉴定其对小鼠急性肝功能损伤的修复能力,评估移植细胞成活率及肝内转归。方法1.利用组织块贴壁法从人小涎腺组织中分离培养出上皮干/祖细胞,体外传代扩增培养。利用免疫荧光和流式细胞术鉴定其干细胞表型和特异性标记物。体外Matrigel构建叁维培养环境下对hMSG-EpiPCs进行成肝诱导并设立空白对照组。利用免疫荧光及Real-time PCR检测诱导而来的细胞相关肝脏细胞表型表达,并通过PAS染色、ICG摄取和CYP450功能测定检测其相关成熟肝脏细胞功能。2.使用CM-Dil荧光标记hMSG-EpiPCs并观察标记后细胞生长情况。建立联合免疫缺陷(SCID/Beige)小鼠20%CC14腹腔注射急性肝损伤模型,随机分为两组:实验组移植hMSG-EpiPCs(n=12),对照组注射PBS(n=12),另取正常SCID小鼠作为空白对照组(n=3)。术后观察小鼠体重变化。并于移植后1天、3天、1周及2周分别取材。检测小鼠血清中人血清白蛋白含量和肝功。对取材肝脏组织进行HE染色和肝细胞表型免疫荧光鉴定,观察炎症反应和注射细胞存活及转归情况。结果1.成功分离培养获得人小涎腺上皮干/祖细胞。该细胞生长良好,呈铺路石状。免疫荧光及细胞流式分析表明,获得的hMSG-EpiPCs表达CD29、CD49f、ABCG2、PLET-1及细胞角蛋白等上皮干/祖细胞标记、涎腺上皮细胞标记CD44及CD166、人端粒酶逆转录酶(human telomerase reverse transcriptase,hTERT)、胸腺上皮祖细胞标记物K5和K8、内皮细胞标记物CD31、基底膜黏蛋白(LAMININ)及Wnt信号通路标记LGR5和LGR6,部分表达胚胎干细胞标记SOX2。hMSG-EpiPCs在体外叁维培养环境下可诱导向肝细胞样细胞分化。诱导而来细胞表达肝细胞标记蛋白ALB、CK18、CYP3A4和AAT,不表达AFP。ICG摄取和PAS染色均为阳性。CYP3A4和CYP2C19功能检测阳性。2.CM-Dil红色荧光标记hMSG-EpiPCs生长状况好。实验组小鼠体重恢复速度比对照组快,肝重-体重比值更低,ALT、AST及TBIL下降速度与下降程度显着优于对照组。两周后实验组小鼠血清中可检测到HSA。肝脏病理切片显示,实验组小鼠一周后肝脏病变已基本恢复正常,而对照组小鼠一周后肝脏仍有病变肝细胞。肝脏组织切片显示,两周后实验组有红色荧光标记hMSG-EpiPCs存活,表达肝细胞相关标记AFP、ALB和CK18。结论1.hMSG-EpiPCs可在体外成肝诱导分化为肝细胞样细胞,表达相关表型,并具有一定的肝细胞功能。2.移植hMSG-EpiPCs可促进急性肝损伤模型小鼠的肝脏功能恢复,移植细胞存活并参与病变肝脏组织修复重建。(本文来源于《北京协和医学院》期刊2017-04-01）
李艳[3]（2014）在《人小涎腺间充质干细胞、上皮祖细胞生物学特性鉴定及体内外成肝诱导的实验研究》一文中研究指出目的1.对小涎腺组织分别进行间充质干细胞方向培养和上皮祖细胞方向培养；在先前研究的基础上进一步深入鉴定小涎腺两种类型干细胞表型；对两种细胞的生物学特性如生长曲线、倍增时间、克隆形成率等进行检测,分析其干细胞增殖潜能；选用2D平面培养和3D matrigel培养两种诱导方案,对两种类型细胞分别进行2D及3D成肝诱导分化实验,探索小涎腺间充质干细胞(Minor Salivary Gland-derived Mesenchymal Stem Cells, MSG-MSCs)及上皮祖细胞(Minor Salivary Gland-derived Epithelial Progenitor Cells, MSG-EpiPCs)体外成肝诱导方法,分析确定其成肝分化潜能。2.建立小鼠2/3肝大部分切除损伤模型,设立对照组；对小涎腺间充质干细胞和上皮祖细胞进行CM-Dil荧光标记示踪；分别移植小涎腺间充质干细胞及上皮祖细胞到小鼠肝损伤模型,评估移植细胞在肝损伤模型中的分布及转化,探讨这两种类型细胞在体内成肝的可能性。方法1.对小涎腺组织进行免疫荧光鉴定,分析从小涎腺组织中获得干细胞的可能性；通过组织块培养法从人小涎腺组织中培养间充质干细胞及上皮祖细胞,进行纯化扩增；利用免疫荧光、流式细胞仪等对获得的细胞进行表型鉴定；检测克隆形成率、生长曲线及倍增时间,对间充质干细胞进行成骨成软骨成脂分化诱导,研究两种细胞的生物学特性。QPCR检测干细胞及成肝相关基因的表达情况,并与骨髓间充质干细胞进行比较,深入探讨细胞的干细胞特征及成肝分化的可能性。2.分别对两种细胞进行体外2D及3D成肝分化诱导,观察细胞生长及形态的变化,通过免疫荧光、吲哚青绿ICG摄取及QPCR检测不同诱导条件下的成肝分化情况。3.对小涎腺间充质干细胞和上皮祖细胞进行CM-Dil荧光标记；建立小鼠2/3肝大部分切除模型,随机分为3组：MSG-MSCs组移植小涎腺间充质干细胞(n=15,其中有3只做流式分析用),MSG-EpiPCs组移植小涎腺上皮祖细胞(n=12),及正常对照组(n=3)；细胞通过尾静脉注射移植到小鼠体内,移植后1周、2周、3周、4周分别取材；荧光显微镜及流式细胞仪分析移植2周后细胞在小鼠体内的分布,观察移植细胞的归巢情况；并将细胞移植后肝组织消化进行再培养,评估细胞移植后的活力；对取材组织进行免疫荧光鉴定,观察成肝相关标记蛋白的表达。结果1.小涎腺组织表达白蛋白(Albumin, ALB)、甲胎蛋白(a-Fetoprotein, AFP)、细胞角蛋白(Cytokeratin) CK15、CK18及CK19、富含亮氨酸重复序列G-蛋白偶联受体(Leucine-rich repeat-containing G Protein-coupled Receptor, LGR) LGR5及LGR6；分离获得的间充质干细胞及上皮祖细胞生长良好,体外传代均可达25次。免疫荧光及流式分析表明,小涎腺间充质干细胞表达谱与公认的骨髓间充质干细胞表型相似,上皮祖细胞表达细胞角蛋白、ATP结合盒转运蛋白G2(ATP-binding cassette superfamily G member2, ABCG2)、胎盘表达转录本-1(Placenta-expressed Transcript-1, PLET-1)等上皮祖细胞标记,两种细胞均表达LGR5和LGR6,其中部分间充质干细胞特异性表达阶段特异性胚胎抗原1(stage-specific embryonic antigen-1, SSEA-1)(27.63%±1.88%),上皮祖细胞特异性表达转录因子性别决定区Y框蛋白2(sex determining region Y-box2,SOX2)(19.2%±8.94%)。P5代间充质干细胞和上皮祖细胞的倍增时间分别为19.77小时和24.93小时,克隆形成率分别为41%±5.4%和10.7%±3.0%。间充质干细胞可成功向成骨、成软骨、成脂方向分化。QPCR检测显示与骨髓间充质干细胞相比,小涎腺间充质干细胞高表达LGR5,上皮祖细胞高表达LGR6。2.两种细胞在2D及3D诱导情况下均可向肝细胞样细胞分化,其中间充质干细胞在2D诱导情况下效果较好,而上皮祖细胞在3D诱导优于2D诱导。ICG摄取阳性。免疫荧光和QPCR结果显示二者在诱导后均能表达肝细胞相关蛋白。3.小涎腺间充质干细胞移植2周后,在小鼠肝、脾、胸腺、心、肺、胰腺、肾、皮肤中均可观察到CM-Dil红色荧光信号,其中肝脏组织中最多,肺和脾脏次之。间充质干细胞移植2周后肝组织再培养后多数贴壁细胞为CM-Dil阳性细胞,免疫荧光显示表达LGR5。对不同时间取材的肝组织切片免疫荧光染色显示小涎腺间充质干细胞及上皮祖细胞均可在体内表达肝细胞相关标记,部分上皮祖细胞位于胆管上皮间且CK19阳性。结论1.人小涎腺可成功获得间充质干细胞和上皮祖细胞两种类型的干／祖细胞。两种细胞均具有较强的自我更新能力,表达相关干细胞标记；两种细胞均表达LGR5和LGR6,其中间充质干细胞高表达LGR5,上皮祖细胞高表达LGR6,这是在涎腺中首次发现参与Wnt信号调控的干细胞。2.小涎腺间充质干细胞及上皮祖细胞在体外2D及3D成肝分化诱导下均可成功分化为肝细胞样细胞,表达肝细胞相关蛋白。3.在小鼠肝大部分切除模型中,小涎腺间充质干细胞及上皮祖细胞向损伤肝脏聚集,并表达肝细胞标记蛋白,参与到肝细胞再生过程中。其中上皮祖细胞还可参与到胆管再生中,表达胆管上皮标记CK19。(本文来源于《北京协和医学院》期刊2014-03-01）
成肝诱导论文开题报告
（1）论文研究背景及目的
此处内容要求：
首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景，再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题，并提出你的论文准备的观点或解决方法。
写法范例：
目的1.体外对人小涎腺上皮干/祖细胞(hMSG-EpiPCs)进行成肝诱导,鉴定诱导获得细胞的表型和检测其是否具有成熟肝脏细胞相关功能。2.移植hMSG-EpiPCs给急性肝损伤模型小鼠,鉴定其对小鼠急性肝功能损伤的修复能力,评估移植细胞成活率及肝内转归。方法1.利用组织块贴壁法从人小涎腺组织中分离培养出上皮干/祖细胞,体外传代扩增培养。利用免疫荧光和流式细胞术鉴定其干细胞表型和特异性标记物。体外Matrigel构建叁维培养环境下对hMSG-EpiPCs进行成肝诱导并设立空白对照组。利用免疫荧光及Real-time PCR检测诱导而来的细胞相关肝脏细胞表型表达,并通过PAS染色、ICG摄取和CYP450功能测定检测其相关成熟肝脏细胞功能。2.使用CM-Dil荧光标记hMSG-EpiPCs并观察标记后细胞生长情况。建立联合免疫缺陷(SCID/Beige)小鼠20%CC14腹腔注射急性肝损伤模型,随机分为两组:实验组移植hMSG-EpiPCs(n=12),对照组注射PBS(n=12),另取正常SCID小鼠作为空白对照组(n=3)。术后观察小鼠体重变化。并于移植后1天、3天、1周及2周分别取材。检测小鼠血清中人血清白蛋白含量和肝功。对取材肝脏组织进行HE染色和肝细胞表型免疫荧光鉴定,观察炎症反应和注射细胞存活及转归情况。结果1.成功分离培养获得人小涎腺上皮干/祖细胞。该细胞生长良好,呈铺路石状。免疫荧光及细胞流式分析表明,获得的hMSG-EpiPCs表达CD29、CD49f、ABCG2、PLET-1及细胞角蛋白等上皮干/祖细胞标记、涎腺上皮细胞标记CD44及CD166、人端粒酶逆转录酶(human telomerase reverse transcriptase,hTERT)、胸腺上皮祖细胞标记物K5和K8、内皮细胞标记物CD31、基底膜黏蛋白(LAMININ)及Wnt信号通路标记LGR5和LGR6,部分表达胚胎干细胞标记SOX2。hMSG-EpiPCs在体外叁维培养环境下可诱导向肝细胞样细胞分化。诱导而来细胞表达肝细胞标记蛋白ALB、CK18、CYP3A4和AAT,不表达AFP。ICG摄取和PAS染色均为阳性。CYP3A4和CYP2C19功能检测阳性。2.CM-Dil红色荧光标记hMSG-EpiPCs生长状况好。实验组小鼠体重恢复速度比对照组快,肝重-体重比值更低,ALT、AST及TBIL下降速度与下降程度显着优于对照组。两周后实验组小鼠血清中可检测到HSA。肝脏病理切片显示,实验组小鼠一周后肝脏病变已基本恢复正常,而对照组小鼠一周后肝脏仍有病变肝细胞。肝脏组织切片显示,两周后实验组有红色荧光标记hMSG-EpiPCs存活,表达肝细胞相关标记AFP、ALB和CK18。结论1.hMSG-EpiPCs可在体外成肝诱导分化为肝细胞样细胞,表达相关表型,并具有一定的肝细胞功能。2.移植hMSG-EpiPCs可促进急性肝损伤模型小鼠的肝脏功能恢复,移植细胞存活并参与病变肝脏组织修复重建。
（2）本文研究方法
调查法：该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。
观察法：用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。
实验法：通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。
文献研究法：通过调查文献来获得资料，从而全面的、正确的了解掌握研究方法。
实证研究法：依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。
定性分析法：对研究对象进行“质”的方面的研究，这个方法需要计算的数据较少。
定量分析法：通过具体的数字，使人们对研究对象的认识进一步精确化。
跨学科研究法：运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。
功能分析法：这是社会科学用来分析社会现象的一种方法，从某一功能出发研究多个方面的影响。
模拟法：通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。
成肝诱导论文参考文献
[1].浦雯雯.人小涎腺间充质干细胞体外快速成肝诱导相关研究[D].北京协和医学院.2018
[2].张辰.人小涎腺上皮干/祖细胞成肝诱导的相关研究[D].北京协和医学院.2017
[3].李艳.人小涎腺间充质干细胞、上皮祖细胞生物学特性鉴定及体内外成肝诱导的实验研究[D].北京协和医学院.2014