本文主要研究内容
作者邹琳（2019）在《鲣鱼黄嘌呤氧化酶抑制肽的酶解制备及功能活性评价》一文中研究指出：高尿酸血症(Hyperuricemia,HUA)及痛风是由长期血尿酸水平升高引起的一类代谢性疾病。目前用于治疗高尿酸血症的西药普遍存在较明显的毒性不良反应。因此,开发高效低毒的降尿酸活性物质具有重要的意义。铿鱼(Skipjack tuna),俗称炸弹鱼,属于金枪鱼科,具有高蛋白、低脂肪等特点,是制备生物活性肽的良好来源。本文以鲣鱼背腹肉为原料,运用可控酶解技术制备鲣鱼黄嘌呤氧化酶(Xanthine oxidase,XOD)抑制肽,利用膜分离及亲和超滤-液质技术对其进行分离纯化及结构鉴定,最后通过分子对接技术分析其构效关系。主要研究结果如下:(1)筛选了酶解优化用的原料——鲣鱼背腹肉。建立了测定肌肽、鹅肌肽含量的高效液相色谱法:采用氨基柱,流动相为50mM pH 6.8磷酸二氢钾和磷酸氢二钾缓冲溶液:乙腈=4:6,流速为lmL/min,柱温为25 ℃,检测波长为210nm。分别测定了鲣鱼六个不同部位中肌肽、鹅肌肽的含量,发现鲣鱼背腹肉中含量最高,故适合作为酶解底物。同时,测定鲣鱼背腹肉的水分含量为70.43%,粗蛋白26.83%,灰分1.63%,脂肪1.36%,是一种高蛋白、低脂肪且营养丰富的食品来源。(2)确定了酶解制备鲣鱼XOD抑制肽的最佳工艺条件。以水解度、氮回收率、XOD抑制活性、肌肽和鹅肌肽含量为响应值,对酶解工艺中蛋白酶种类、加酶量、酶解pH和温度等影响因素进行了优化,得到酶解的最优工艺为:采用中性蛋白酶,加酶量为489.86 U/g,酶解pH为7.08,温度为49.5 ℃,时间为5 h。在此条件下,鲣鱼酶解产物的水解度为22.38%,氮回收率为83.31%,XOD抑制活性达到62.26%,肌肽和鹅肌肽含量分别为0.50 mg/g和24.50 mg/g(以干基计),与模型方程理论预测值基本一致。由本法所得的鲣鱼XOD抑制肽以分子质量低于1000 Da的寡肽为主。皮尔逊相关性分析表明,XOD抑制活性与肌肽或鹅肌肽含量无相关性,推测在酶解的过程中产生了其他具有XOD抑制活性的小分子肽。(3)膜分离鲣鱼XOD抑制肽并进行多种功能评价。采用1000、600和300 Da的聚酰胺膜对酶解优化得到的鲣鱼XOD抑制肽进行膜分离,功能活性评价结果发现600～1000 Da组分的XOD抑制活性最高,其IC50值是9.18 mg/mL,同时,该部分的抗氧化活性也最高,说明这部分产物能够在减少尿酸生成的同时减缓伴随产生的氧化应激造成的损伤;300～600 Da组分的血管紧张素转化酶(Angiotensin converting enzyme,ACE)抑制活性最高,IC50 值为 0.12 mg/mL。(4)亲和超滤-液质技术分离鉴定得到具有XOD抑制活性的五肽——Ala-Cys-Glu-Cys-Asp(ACECD)。人工合成后证实,ACECD具有较强的XOD抑制活性,其IC50值为7.23 mg/mL。分子对接结果显示,ACECD能够进入XOD中含Mo原子的活性中心,并通过氢键、疏水作用力及范德华力等与活性中心周围的氨基酸残基产生相互作用,与XOD催化底物黄嘌呤之间存在竞争同一结合位点的现象。以上研究结果表明鲣鱼蛋白肽具有潜在的降尿酸作用,值得进一步深入挖掘。
Abstract
gao niao suan xie zheng (Hyperuricemia,HUA)ji tong feng shi you chang ji xie niao suan shui ping sheng gao yin qi de yi lei dai xie xing ji bing 。mu qian yong yu zhi liao gao niao suan xie zheng de xi yao pu bian cun zai jiao ming xian de du xing bu liang fan ying 。yin ci ,kai fa gao xiao di du de jiang niao suan huo xing wu zhi ju you chong yao de yi yi 。keng yu (Skipjack tuna),su chen zha dan yu ,shu yu jin qiang yu ke ,ju you gao dan bai 、di zhi fang deng te dian ,shi zhi bei sheng wu huo xing tai de liang hao lai yuan 。ben wen yi jian yu bei fu rou wei yuan liao ,yun yong ke kong mei jie ji shu zhi bei jian yu huang piao ling yang hua mei (Xanthine oxidase,XOD)yi zhi tai ,li yong mo fen li ji qin he chao lv -ye zhi ji shu dui ji jin hang fen li chun hua ji jie gou jian ding ,zui hou tong guo fen zi dui jie ji shu fen xi ji gou xiao guan ji 。zhu yao yan jiu jie guo ru xia :(1)shai shua le mei jie you hua yong de yuan liao ——jian yu bei fu rou 。jian li le ce ding ji tai 、e ji tai han liang de gao xiao ye xiang se pu fa :cai yong an ji zhu ,liu dong xiang wei 50mM pH 6.8lin suan er qing jia he lin suan qing er jia huan chong rong ye :yi jing =4:6,liu su wei lmL/min,zhu wen wei 25 ℃,jian ce bo chang wei 210nm。fen bie ce ding le jian yu liu ge bu tong bu wei zhong ji tai 、e ji tai de han liang ,fa xian jian yu bei fu rou zhong han liang zui gao ,gu kuo ge zuo wei mei jie de wu 。tong shi ,ce ding jian yu bei fu rou de shui fen han liang wei 70.43%,cu dan bai 26.83%,hui fen 1.63%,zhi fang 1.36%,shi yi chong gao dan bai 、di zhi fang ju ying yang feng fu de shi pin lai yuan 。(2)que ding le mei jie zhi bei jian yu XODyi zhi tai de zui jia gong yi tiao jian 。yi shui jie du 、dan hui shou lv 、XODyi zhi huo xing 、ji tai he e ji tai han liang wei xiang ying zhi ,dui mei jie gong yi zhong dan bai mei chong lei 、jia mei liang 、mei jie pHhe wen du deng ying xiang yin su jin hang le you hua ,de dao mei jie de zui you gong yi wei :cai yong zhong xing dan bai mei ,jia mei liang wei 489.86 U/g,mei jie pHwei 7.08,wen du wei 49.5 ℃,shi jian wei 5 h。zai ci tiao jian xia ,jian yu mei jie chan wu de shui jie du wei 22.38%,dan hui shou lv wei 83.31%,XODyi zhi huo xing da dao 62.26%,ji tai he e ji tai han liang fen bie wei 0.50 mg/ghe 24.50 mg/g(yi gan ji ji ),yu mo xing fang cheng li lun yu ce zhi ji ben yi zhi 。you ben fa suo de de jian yu XODyi zhi tai yi fen zi zhi liang di yu 1000 Dade gua tai wei zhu 。pi er xun xiang guan xing fen xi biao ming ,XODyi zhi huo xing yu ji tai huo e ji tai han liang mo xiang guan xing ,tui ce zai mei jie de guo cheng zhong chan sheng le ji ta ju you XODyi zhi huo xing de xiao fen zi tai 。(3)mo fen li jian yu XODyi zhi tai bing jin hang duo chong gong neng ping jia 。cai yong 1000、600he 300 Dade ju xian an mo dui mei jie you hua de dao de jian yu XODyi zhi tai jin hang mo fen li ,gong neng huo xing ping jia jie guo fa xian 600～1000 Dazu fen de XODyi zhi huo xing zui gao ,ji IC50zhi shi 9.18 mg/mL,tong shi ,gai bu fen de kang yang hua huo xing ye zui gao ,shui ming zhe bu fen chan wu neng gou zai jian shao niao suan sheng cheng de tong shi jian huan ban sui chan sheng de yang hua ying ji zao cheng de sun shang ;300～600 Dazu fen de xie guan jin zhang su zhuai hua mei (Angiotensin converting enzyme,ACE)yi zhi huo xing zui gao ,IC50 zhi wei 0.12 mg/mL。(4)qin he chao lv -ye zhi ji shu fen li jian ding de dao ju you XODyi zhi huo xing de wu tai ——Ala-Cys-Glu-Cys-Asp(ACECD)。ren gong ge cheng hou zheng shi ,ACECDju you jiao jiang de XODyi zhi huo xing ,ji IC50zhi wei 7.23 mg/mL。fen zi dui jie jie guo xian shi ,ACECDneng gou jin ru XODzhong han Moyuan zi de huo xing zhong xin ,bing tong guo qing jian 、shu shui zuo yong li ji fan de hua li deng yu huo xing zhong xin zhou wei de an ji suan can ji chan sheng xiang hu zuo yong ,yu XODcui hua de wu huang piao ling zhi jian cun zai jing zheng tong yi jie ge wei dian de xian xiang 。yi shang yan jiu jie guo biao ming jian yu dan bai tai ju you qian zai de jiang niao suan zuo yong ,zhi de jin yi bu shen ru wa jue 。
论文参考文献
论文详细介绍
论文作者分别是来自浙江大学的邹琳，发表于刊物浙江大学2019-04-12论文，是一篇关于鲣鱼论文,抑制肽论文,酶解工艺论文,膜分离论文,亲和超滤液质论文,分子对接论文,浙江大学2019-04-12论文的文章。本文可供学术参考使用，各位学者可以免费参考阅读下载，文章观点不代表本站观点，资料来自浙江大学2019-04-12论文网站，若本站收录的文献无意侵犯了您的著作版权，请联系我们删除。
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