三峡大学科技学院，湖北宜昌443000
摘要：香菇多糖具有疗效高，剂量低，毒副作用小的特点，可用于身体情况无法进行手术或化疗的肿瘤病人，临床上大量研究显示香菇多糖对治疗肿瘤有很好的疗效，但是所有研究都是直接针对于免疫淋巴细胞的，所以我们直接研究香菇多糖对CAF细胞的作用，可以得出香菇多糖治疗肿瘤的疗效。本次通过实验，使用香菇多糖注射剂研究其对肿瘤CAF细胞、脾细胞中T细胞的影响。并分别记录了三种不同剂量对上述两种细胞的影响。希望本身实验结果能够给到大家更多的参考和帮助。
关键词：香菇多糖，CAF细胞，T细胞，细胞凋亡，MTT法，流式细胞仪。
本次我们主要通过香菇多糖对肿瘤CAF细胞和T细胞分别开展了两次实验，得出两组的不同数据，从而更直接的验证香菇多糖对治疗肿瘤的疗效。
一、香菇多糖对T细胞的作用实验
用移液管将脾脏单细胞悬液移入试管，离心。倒掉离心后的上清，加入红细胞裂解剂，放入37℃的培养箱中，静置一分钟。离心后，细胞颜色由红色转为白色。去除裂解后的上清，并加入PBS。吸取混合液，放入细胞计数板，在显微镜下计数。（细胞数16个/mm3）
将细胞液铺入培养皿，将香菇多糖注射剂加入培养皿形成四组。放入37℃培养箱培养24小时。取出培养好的培养板，在培养板中加入三联试剂，进行染色，做实验组与对照组。染色完后上流式细胞仪统计结果。另外上酶联检测仪统计细胞数。
二、香菇多糖对肿瘤CAF细胞的作用实验
在空试管中加入DMEM，胎牛血清，双抗溶液充分混合。在CAF培养皿中加入3mlDMEM培养液中和。离心，加入第一步混合液，重悬，取EP管，加入2mlpbs，再加入重悬液，混匀。在计数板上滴入混合液。在显微镜下计数。（20个/立方毫米）
取培养皿铺入细胞液，并加入香菇多糖形成四组，放入37℃培养箱培养24小时。在四个离心管中分别取出100μl细胞液放入流式细胞管中，并分别加入1μl的AnnexinV、PI、CD4抗体和CD8抗体。作为对照组。再取四个流式细胞管，加入100μl细胞液，并分别全部加入1μlAnnexinV、PI、CD4抗体、CD8抗体。避光染色，上流式细胞仪观察。
三、实验结果：
1、MTT实验数据显示香菇多糖浓度的改变对T细胞没有什么影响，对CAF细胞有明显杀伤作用。
2、流式细胞仪结果显示，香菇多糖浓度的改变明显提高了CAF细胞晚期凋亡的数量。
结论：香菇多糖能使后期凋亡或坏死的CAF细胞数显著增加，对T细胞没有明显影响。香菇多糖具有疗效高，剂量低，毒副作用小的特点，可用于身体情况无法进行手术或化疗的肿瘤病人，有效防止肿瘤复发、免疫力下降和自身免疫性疾病。故香菇多糖是较理想的肿瘤治疗药物。
四、讨论：
香菇多糖可通过抑制PI3K/AKT信号通路诱导白血病HL-60细胞凋亡。【1】
香菇多糖联合化疗治疗晚期非小细胞肺癌与单纯化疗相比疗效相当,但不良反应轻、免疫功能明显改善。【2】
香菇多糖通过激活机体的免疫系统具有抑制肿瘤生长的活性。【3】
临床上大量研究显示香菇多糖对治疗肿瘤有很好的疗效，但是所有研究都是直接针对于免疫淋巴细胞，所以我们直接研究仙姑多糖对CAF细胞的作用，可以得出香菇多糖治疗肿瘤的机制。
参考文献：
【1】马莉，荣芳，王建宾，张年萍，刘宏。中国病理生理杂志ChineseJournalofPathophysiology2019年06期。
【2】张海梅，徐建华，任韶韶。中国肿瘤生物治疗杂志ChineseJournalofCancerBiotherapy2009年05期。
【3】彭煦，范晓静，石贤爱，陈剑锋，郭养浩，孟春。中国临床药理学杂志TheChineseJournalofClinicalPharmacology2008年03期。