导读:本文包含了肌细胞促进因子论文开题报告文献综述及选题提纲参考文献，主要关键词:椎间盘退变,髓核干细胞,原位椎间盘再生,干细胞迁移
肌细胞促进因子论文文献综述
应金威[1]（2019）在《基质细胞衍生因子-1α激活募集髓核干细胞促进椎间盘原位再生的潜能及机制研究》一文中研究指出背景椎间盘退变(intervertebral disc degeneration.IDD)是引起下腰痛 Clow back pain,LPB)的主要原因,目前缺乏长期而有效的治疗方法。近年来,活化募集椎间盘干/祖细胞,为椎间盘内源性修复提供了新的治疗策略。研究表明,损伤组织表达分泌的趋化性因子在自我修复过程中发挥重要作用。其中,基质细胞衍生因子-1α(stromal cell-derived factor-1α,SDF-1α)通过与C-X-C趋化因子受体4(C-X-C chemokine receptor 4,CXCR4)结合调节干细胞的增殖、迁移和分化等,具有良好的生物学功能。虽然SDF-1α也在退变椎间盘中高度表达,但它对椎间盘内源性干/祖细胞的生物学作用及潜在机制尚不明确。目的1、证实退变椎间盘高表达SDF-1α及髓核干细胞(nucleus pulposus-derived stem cells,NPSCs)内源性表达CXCR4;2、研究SDF-1/CXCR4轴对NPSCs增殖活力、成软骨分化及迁移能力的影响;3、明确自噬在SDF-1/CXCR4轴介导NPSCs迁移中的作用;4、探讨SDF-1/CXCR4轴调控NPSCs自噬活性及细胞迁移的信号通路方法1、采用差速贴壁法分离纯化大鼠NPSCs后,进行干细胞生物学特性鉴定。利用实时定量 RT-PCR、酶联免疫吸附测定(enzyme-linked immunosorbent assay,ELISA)和免疫组化,比较SDF-1α在正常和退变椎间盘组织细胞中表达的差异。通过CCK-8和EdU细胞增殖试验,流式细胞检测细胞周期分布及Annexin V/PI染色情况,分析SDF-1α对NPSCs细胞增殖活力及凋亡的影响。通过诱导NPSCs成软骨分化,检测SDF-1/CXCR4轴对软骨标志物表达的影响。2、除划痕实验和Transwell细胞迁移实验外,通过观察NPSCs分别在牛尾椎间盘离体器官模型和大鼠退变尾椎间盘内的迁移情况,评价SDF-1/CXCR4轴对NPSCs在体外、体内迁移能力的影响。通过实时定量RT-PCR、Western blot和免疫荧光,检测CXCR4在NPSCs中的表达变化,分析SDF-1/CXCR4轴在NPSCs迁移过程中的作用。3、通过观察自噬体(autophagosome)形成及自噬相关蛋白表达变化,评价SDF-1/CXCR4轴对NPSCs自噬活性的影响。经雷帕霉素(rapamycin)和3-甲基腺嘌呤(3-methyladenine,3-MA)处理后,通过体外迁移实验评价mTOR(mammalian target of rapamycin)通路和自噬活性对NPSCs迁移能力的影响。此外,通过观察mTOR/p70 S6K活化水平与F-actin细胞骨架重塑、自噬表达水平之间的关系,进一步明确SDF-1/CXCR4轴诱导NPSCs迁移的潜在机制。结果1、通过干细胞鉴定,证实分离培养的NPSCs具有集落形成、叁系分化能力及高表达间充质干细胞(mesenchymal stem cells,MSCs)特异性表面标志物。SDF-1α在退变椎间盘组织和细胞中的表达和分泌水平显著上调。2、除提高后期增殖活力和成软骨分化能力外,SDF-1α还能增强NPSCs在体外、体内的迁移能力。SDF-1α不仅增加NPSCs的CXCR4表达量,而且促进CXCR4从胞质转移至胞膜,同时伴有F-actin细胞骨架重组。此外,拮抗剂AMD3100有效抑制SDF-1α诱导的软骨分化和迁移能力。3、随着SDF-1α浓度增加,NPSCs的自噬活性逐渐减弱。AMD3100显着抑制SDF-1α介导的mTOR通路激活及自噬表达下调。雷帕霉素抑制SDF-1α诱导的NPSCs迁移,而3-MA促进SDF-1α诱导的NPSCs迁移。此外,SDF-1/CXCR4轴激活下游mTOR/p70 S6K信号通路,参与F-actin细胞骨架重组及抑制NPSCs自噬活性。结论1、退变椎间盘高表达分泌趋化因子SDF-1α,椎间盘内源性干细胞NPSCs内源性表达受体CXCR4。2、SDF-1/CXCR4轴促进NPSCs增殖、软骨分化及迁移能力,有助于椎间盘原位修复与再生。3、SDF-1α诱导NPSCs迁移可能与SDF-1/CXCR4轴激活下游mTOR/p70 S6K通路及抑制自噬活性有关。4、在椎间盘退变早期,SDF-1α通过激活募集椎间盘内源性干/祖细胞,具有促进内源性椎间盘修复的潜能,为原位组织工程修复椎间盘提供了新的治疗靶点。(本文来源于《南方医科大学》期刊2019-04-25）
李程豪,王厚明,骆亚莉,刘永琦[2]（2019）在《肿瘤相关中性粒细胞促进肿瘤过程中细胞因子影响作用的研究进展》一文中研究指出肿瘤微环境中的中性粒细胞作为主要的肿瘤浸润性髓系细胞,在肿瘤生长和恶性转化中起着重要作用。近期研究证明,肿瘤相关中性粒细胞通过促进肿瘤生长、转移、血管生成及免疫抑制等途径影响肿瘤发展,并且细胞因子在其中各个阶段均发挥了关键作用。现从细胞因子的角度对肿瘤相关中性粒细胞促进肿瘤作用途径及机制的研究进展进行综述,为肿瘤防治研究提供新的思路。(本文来源于《生命科学》期刊2019年01期）
邓明,谢萍,马永刚,明江华,周炎[3]（2018）在《脂质体包埋脑源性神经营养因子联合骨髓间充质干细胞促进脊髓损害后突触再生》一文中研究指出目的研究脂质体包埋脑源性神经营养因子(BDNF)联合骨髓间充质干细胞(BMSCs)对大鼠脊髓损伤(SCI)后神经功能恢复的效果。方法选用改良的Allen’s法制作SCI模型。SD大鼠30只随机分为5组:假手术组、模型组、BMSCs组、BDNF组、BMSCs+BDNF组,每组6只。假手术组只切除椎板,不打击脊髓。模型组和假手术组均经大鼠尾静脉注射等体积0.9%氯化钠,并一次性在损伤节段脊髓注入等容积0.9%氯化钠1 ml。BMSCs组在损伤节段脊髓注入BMSCs 1 ml;BDNF组经大鼠尾静脉注射10μg/kg BDNF脂质体;BMSCs+BDNF组经大鼠尾静脉注射10μg/kg BDNF脂质体,并一次性在损伤节段脊髓注入BMSCs 1 ml。采用Basso Beattie Bresnahan(BBB)运动功能评分评价后肢运动功能,Western blot法检测脊髓组织中生长相关蛋白43(GAP-43)、微管相关蛋白-1B(MAP1B)蛋白的表达水平。结果术后7 d和14 d时,各组的BBB评分较假手术组均降低,差异有统计学意义(P<0.05)。BMSCs组、BDNF组、BMSCs+BDNF组的BBB评分均显着高于模型组(P<0.05),而BMSCs+BDNF组的BBB评分均显着高于BMSCs组和BDNF组(P<0.05)。术后7 d和14 d时,BMSCs组、BDNF组、BMSCs+BDNF组的GAP-43、MAP1B表达水平均显着高于模型组(P<0.05),而BMSCs+BDNF组的GAP-43、MAP1B表达水平均显着高于BMSCs组和BDNF组(P<0.05)。结论脂质体包埋BDNF联合BMSCs移植修复SCI具有显着的效果。(本文来源于《山西医科大学学报》期刊2018年09期）
郝哲[4]（2018）在《同时转染表皮生长因子与血管内皮生长因子基因的脂肪干细胞促进皮肤损伤修复潜能的体外研究》一文中研究指出目的通过研究同时转染表皮生长因子与血管内皮生长因子基因的脂肪干细胞表达相关因子的水平,及其对成纤维细胞增殖、迁移和血管内皮细胞成管能力的影响,探讨生长因子基因转染脂肪干细胞用于皮肤损伤修复的可行性。方法(一)取4周龄雄性SD大鼠,取双侧腹股沟区脂肪组织,利用酶消化法,提取大鼠脂肪干细胞,取P2代,流式细胞术检测细胞表面标志物CD73、CD90、CD45、CD11b,并诱导其向成骨细胞和成脂细胞方向分化。(二)构建带荧光慢病毒载体,将大鼠表皮生长因子与血管内皮生长因子基因同时转入脂肪干细胞,荧光显微镜下检测转染效率。(叁)通过定量逆转录-聚合酶链式反应和酶联免疫吸附实验,检测基因转染后脂肪干细胞合成相关基因的水平和分泌相应生长因子的能力。(四)将基因转染脂肪干细胞的培养上清,用来培养成纤维细胞和血管内皮细胞,通过成纤维细胞增殖、成纤维细胞划痕、成纤维细胞Transwell迁移和血管内皮细胞成管等实验,检测其对成纤维细胞增殖、迁移和血管内皮细胞成管能力的影响。结果(一)分离培养的脂肪干细胞倒置显微镜下呈长梭形、集落状生长,流式细胞术测定细胞的相关表面分子表达率,显示CD73、CD90的表达呈阳性,CD45、CD11b的表达呈阴性,P4代脂肪干细胞经诱导向成骨细胞和成脂细胞方向分化后,分别用茜素红和油红O染色,均呈阳性;(二)慢病毒载体介导的表皮生长因子与血管内皮生长因子基因能有效转染脂肪干细胞;(叁)同时转染表皮生长因子与血管内皮生长因子基因的脂肪干细胞能表达高水平的EGF、VEGF m RNA和蛋白;(四)同时转染表皮生长因子与血管内皮生长因子基因的脂肪干细胞培养上清能促进成纤维细胞增殖、成纤维细胞划痕愈合、成纤维细胞Transwell迁移和血管内皮细胞成管。结论(一)同时转染表皮生长因子与血管内皮生长因子基因的脂肪干细胞能表达高水平的EGF、VEGF m RNA和蛋白;(二)同时转染表皮生长因子与血管内皮生长因子基因的脂肪干细胞培养上清能在体外促进成纤维细胞增殖、迁移和血管内皮细胞成管的能力,因此具有促进皮肤损伤修复的潜能。(本文来源于《华中科技大学》期刊2018-05-01）
朱喜忠,刘子铭,刘毅,熊华章,杨继滨[5]（2018）在《低氧诱导因子1α联合Scleraxis修饰人羊膜间充质干细胞促进腱骨愈合的体外实验》一文中研究指出背景:由于肌腱与骨的愈合缓慢而复杂,往往影响临床治疗效果,提高腱骨接触面细胞活性是损伤治疗的新策略。Scleraxis是肌腱细胞的特异性标志分子,低氧诱导因子1α(hypoxia inducible factor 1α,HIF-1α)可通过多种途径诱导血管和骨组织的形成。但HIF-1α能否增强Scleraxis诱导人羊膜间充质干细胞分化并用于腱骨损伤的修复还尚未研究。目的:探讨HIF-1α联合Scleraxis修饰人羊膜间充质干细胞在体外促进腱骨愈合的能力并研究其分子机制。方法:取第3代人羊膜间充质干细胞,分别经AdHIF-1α、AdScx、AdGFP和AdHIF-1α+AdScx腺病毒载体感染第3天和第7天后检测肌腱、软骨和骨组织相关基因的表达。结果与结论:(1)倒置相差显微镜观察显示,第3代人羊膜间充质干细胞呈长梭形、漩涡状贴壁生长;(2)透射电镜观察显示,人羊膜间充质干细胞呈椭圆形,结构清晰,胞浆含丰富的内质网及线粒体;(3)荧光显微镜观察显示,腺病毒感染24 h后,AdHIF-1α组表达红色荧光,荧光表达量约为50%,AdScx组和Ad GFP组均表达绿色荧光,荧光表达量约为70%;(4)实时荧光定量PCR显示,感染第3天和第7天时,AdHIF-1α+Ad Scx组、AdH IF-1α组和Ad Scx组Ⅰ型胶原、Fibronectin、RUNX2、VEGF和ALP的mRNA表达量均高于AdGFP组(P<0.05),AdHIF-1α+AdScx组Ⅰ型胶原、Fibronectin、RUNX2、VEGF和ALP的mRNA表达量均显着性高于AdScx组(P<0.05);(5)荧光免疫组化分析显示,AdHIF-1α+AdScx组感染第7天时Ⅰ型胶原表达量高于感染第3天;(6)结果表明,体外HIF-1α和Scleraxis基因联合修饰后可促进人羊膜间充质干细胞表达肌腱细胞、软骨细胞和骨细胞的标志分子,具有促进腱骨愈合的能力。(本文来源于《中国组织工程研究》期刊2018年01期）
付秀美,杨海艳,王荣良,杨振江,付文亮[6]（2017）在《脂肪源性干细胞促进大鼠受损坐骨神经传导及脊髓脑源性神经营养因子和睫状神经营养因子的表达》一文中研究指出目的:探讨脂肪源性干细胞(ADSCs)对坐骨神经损伤大鼠神经传导功能以及脊髓脑源性神经营养因子(BDNF)和睫状神经营养因子(CNTF)表达的影响。方法:将第4代ADSCs移植入脱细胞神经移植物(ANA)中,构建组织工程神经。大鼠随机分为正常组、杜氏改良Eagle培养基营养混合物F12(DMEM)组和ADSC组。DMEM组和ADSC组均建立坐骨神经损伤模型,后用相应的组织工程神经桥接损伤神经的断端。术后6周采用神经电生理记录仪检测各组大鼠坐骨神经传导速度和波幅,采用免疫荧光和Real-time PCR检测各组大鼠脊髓脑源性神经营养因子(BDNF)、睫状神经营养因子(CNTF)蛋白和mRNA的表达。结果:ADSC组大鼠坐骨神经传导速度、波幅和脊髓BDNF和CNTF蛋白及mRNA表达均显着高于DMEM组。结论:ADSCs可增加坐骨神经传导速度和波幅、上调脊髓BDNF和CNTF的表达。(本文来源于《解剖学杂志》期刊2017年01期）
李静,李勇,郑春泉[7]（2016）在《肝细胞生长因子基因修饰的脐带间充质干细胞促进鼻黏膜创伤愈合的实验研究》一文中研究指出目的探讨过表达肝细胞生长因子(HGF)的入脐带间充质干细胞(hUCMSCs)对鼻黏膜上皮和兔鼻窦黏膜机械损伤模型的修复作用,为促进鼻内镜术后损伤的黏膜上皮修复提供新思路。方法 1、通过酶消化法和组织块培养法分离hUC-MSCs,按照间充质干细胞国际标准,倒置显微镜下观察细胞形态学,CCK-8法监测细胞增殖能力,流式细胞术检测间充质干细胞表面标记物,体外成骨、成软骨、成脂定向诱导检测hUCMSCs的多向分化潜能;2、使用腺病毒载体构建含有HGF基因的重组腺病毒(Ad-HGF),以MOI=100转染hUCMSCs(HGF-MSCs),PCR以及ELISA鉴定HGF在HGF-MSCs中的表达;3、体外原代培养鼻上皮细胞,建立鼻黏膜上皮机械划痕模型,利用hUCMSCs以及HGF-MSCs的条件培养液观察对上皮愈合能力的影响,并采用CCK-8法检测其能否促进上皮细胞增殖。3、建立兔上颌窦黏膜机械损伤模型,实验组24小时内经静脉注射GFP-MSCs、HGF-MSC以及Ad-HGF损伤部位直接注射,对照组注射等量生理盐水,4天、8天、28天每组处死3只兔子,记录上颌窦造口的孔径,并采用免疫荧光等方法检测兔鼻窦黏膜愈合情况、hUC-MSCs的分布及其在体内的分化,扫描电镜检测新生鼻黏膜纤毛覆盖率及纤毛形态,ELISA法检测HGF以及纤维化标记物TGF-beta1。结果 1、hUCMSCs条件培养液可促进鼻上皮细胞增殖、划痕愈合,通过过表达HGF能够增强这种效应。2、实验组黏膜缺口面积小于对照组、Ad-HGF注射组,差异具有统计学意义(P<0.05),组织切片见实验组黏膜水肿较对照组轻,免疫荧光见hUC-MSCs在新生黏膜中有存活,大部分位于固有层,部分能表达上皮角蛋白和纤毛标记物β-Tubulin蛋白,实验组纤毛覆盖率和形态均优于对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。另外,在HGF-MSCs组中,其胶原沉积明显下降,并且能够降低TGF-beta1在损伤组织中的浓度。结论成功从人脐带中分离培养hUC-MSCs,并且符合国际标准;hUC-MSCs能在体外促进鼻黏膜上皮增殖、划痕愈合,体内移植能促进黏膜的愈合,部分能分化为上皮和纤毛细胞。HGF-MSCs不仅具有增强以上效应还能降低组织修复时胶原沉积以及纤维化程度。(本文来源于《2016年浙江省医学会耳鼻咽喉头颈外科学学术年会论文汇编》期刊2016-09-16）
赵友光[8]（2016）在《肌细胞增强因子2D促进恶性胶质瘤细胞致瘤性机制研究》一文中研究指出背景和目的恶性胶质瘤是中枢神经系统最常见的原发性脑肿瘤,约占所有脑肿瘤的50%以上,星形细胞瘤是最常见的脑胶质瘤。根据他们的侵袭性,世界卫生组织(WHO)将它们划分为(1)I级:毛细胞型星形细胞瘤(PA),好发于儿童;(2)II级:低度恶性星形细胞瘤(LGA),占所有神经胶质瘤的25%,好发年龄为30-40岁;(3)III级:间变型星形细胞瘤(AA),易转化为Ⅳ级;(4)IV级:多形性胶质母细胞瘤(GBM),好发年龄为45~60岁。恶性星形细胞瘤(MA)主要包括AA及GBM,其中GBM占50%~80%。其中I级和II级的低度恶性神经胶质瘤(LGG)和III级和IV级或高度恶性神经胶质瘤(HGG)。在过去的十年中,尽管在脑胶质瘤治疗方面,包括手术切除、放化疗及肿瘤免疫治疗等综合治疗取得了巨大的进展,但高度恶性胶质瘤患者中位生存期仅12-15个月,主要是由于对恶性胶质瘤形成的潜在分子机制缺乏了解。脑恶性胶质瘤具有侵袭性极高、预后极差的生物学特点,从而导致其易复发,死亡率高,为了有效解决这一临床难题,非常有必要深入研究恶性胶质瘤发生及侵袭的分子机制,识别参与胶质瘤形成与发展的新基因,从而有针对性的研究预防和治疗恶性胶质瘤,才能有效的寻找新的治疗策略,改善患者的预后。肌细胞增强因子2家族(myocyte enhancer factor 2,MEF2)是一类发挥多种生理功能的细胞内转录因子,该家族包括MEF2A、MEF2B、MEF2C和MEF2D四个成员。它们在骨骼肌、心肌、神经组织和免疫系统的发育过程和正常生理功能的维持中发挥重要功能。如同其他重要的发育相关因子一样,MEF2D也参与了癌症的发生过程。MEF2D促使正常细胞发生恶性转化的现象在白血病中被首先报道。部分急性淋巴细胞白血病的患者的1号染色体与19号染色体发生易位,造成了MEF2D部分编码区与DAZAP1发生融合,产生了MEF2D/DAZAP1与DAZAP1/MEF2D两种融合蛋白。通过体外细胞实验,研究者发现过表达MEF2D不仅赋予正常细胞在低血清条件下的增殖能力,加快其分裂速度,而且对细胞凋亡的产生也有抑制作用,能够增强转化细胞的存活。后来有研究发现,MEF2D参与了肝癌的发生。研究证实,MEF2D在肝癌中异常高表达,这种高表达与肝癌的预后不良相关。而且MEF2D通过调控细胞周期g2/m,在肝癌的致瘤性方面扮演着重要角色。在肝癌细胞中下调mef2d表达,将导致细胞生长抑制。有研究证实mef2d的替代多聚腺苷酸化亚型在正常和gbm脑组织差异表达。而且,mef2家族蛋白还参与了神经胶质瘤相关因子2的调控。此外,mef2d能够激活bcl-w的转录表达,这使得mef2d可以在肿瘤细胞的抗凋亡中发挥作用。然而,对于mef2d在恶性神经胶质瘤的表达谱和功能知之甚少。我们前期的研究发现mef2d在恶性胶质瘤组织及恶性胶质瘤细胞系(u87mg、u251mg)中异常高表达,不断有证据表明mef2d表达可能是恶性胶质瘤发生和进展中的关键因子。在这项研究中,我们试图研究恶性胶质瘤中mef2d的功能和表达,通过研究mef2d表达水平与恶性胶质瘤细胞致瘤性的相关性,进一步阐明mef2d在恶性胶质瘤发生中的生物学功能,提供新的用于恶性胶质瘤临床预后参考的蛋白分子,为今后针对恶性胶质瘤发生、发展制定新的治疗策略提供新靶点。方法:1.细胞系和细胞培养人恶性胶质瘤细胞系,u87mg(从含有gfap阳性细胞恶性脑瘤衍生)和u251mg(从一个恶性胶质瘤患者分类为iv级来源的),hela细胞(hela细胞用作mef2d阳性对照)均购自美国典型培养物保藏中心。初级星形胶质细胞培养物根据前人方法所述取得。生长环境:细胞培养液dmem,10%胎牛血清,置于含有5%二氧化碳、37摄氏度的培养箱中,根据细胞在镜下观察的生长情况,判定细胞传代时间,通常每1-2天将生长旺盛的u87mg、u251mg、hela、星形胶质细胞传代。2.原代培养/伦理声明本研究所采用的人脑恶性胶质瘤标本(肿瘤组织及癌旁正常组织)从成都军区总医院神经外科手术切除获得,由成都军区总医院的伦理审查委员会审查批准,并取得病人或亲属的书面知情同意。恶性胶质瘤组织切成小块。机械操纵后获得单细胞悬浮液。对于原发性星形胶质细胞培养,样品按照前人方法(具体见实验部分)的程序,由成都军区总医院的伦理审查委员会批准,取得孕妇的书面知情同意,从流产胎儿获得。方法简要地说,在除去脑膜后,从前囟脑组织切成片,用胰蛋白酶消化。将消化的细胞通过一个钢网过滤并在补充有15%fbs中dmem中培养,免疫荧光法检测gfap的表达。3.免疫组化免疫组织染色是关于使用链霉菌抗生物素-过氧化物酶连接法,对手术获取的恶性胶质瘤标本,进行福尔马林固定、石蜡包埋和组织切片。用mef2d和ki67抗体分别检测mef2d和ki67的表达。苏木素用于对细胞核染色。根据tunel细胞凋亡检测试剂盒的实验方法进行凋亡实验。4.实时荧光定量pcr(qrt-pcr)根据rna提取试剂盒的操作指南对恶性胶质瘤细胞系(u87mg、u251mg)提取总rna。实时荧光定量pcr按照前人实验描述的方法进行。简要地说,第一链cdna合成和扩增根据primescripttmrt试剂盒的操作进行;实时荧光定量pcr根据sybr预混料前的taq与rotor-gene的6000qrt-pcr系统的操作说明进行。以下为引物序列:mef2d(正向)5'-agggaaataaccaaaaaactaccaaa-3';mef2d(反向)5'-gctacatgaacacaaaaacagagacc-3';gapdh(正向)5'-gcgagatcgcactcatcatct-3';gapdh(反向)5'-tcagtggtggacctgacc-3'。gapdh的mrna水平被用于归一化。在基因表达水平上的变化倍数使用2△△ct法计算。5.病毒载体慢病毒载体由王博士(病理科,哈佛大学医学院)提供,其中包括lv-gfp(过表达绿色荧光蛋白对照组),lv-mef2d(过表达mef2d),lv-shmef2d-1、lv-shmef2d-2(不同程度下调mef2d表达)和lv-ctrl(阴性对照组)。6.westernblot分析根据标准实验方法进行蛋白质样品和免疫印记。简言之,将细胞用裂解缓冲液在12,000rpm离心15min后,用bca蛋白测定试剂盒对组织或细胞蛋白质的浓度进行测定。然后通过sds-page在凝胶上分离总蛋白。7.增殖试验被不同慢病毒感染后的细胞以1000个每孔的浓度种植于96孔板中。mts溶液(3-(4,5-diethylthiazol-2-yl)-5-(3-carboxymethoxyphenyl)-2-(4-sulfophenyl)-2h-etrazolium,innersalt,四氮唑蓝盐化合物)根据promega推荐的方法来检测细胞增殖率。8.克隆形成实验u87mg细胞用文中所示的慢病毒载体感染后,按照每个培养皿2000个细胞浓度接种在3.5cm的培养皿中。u251mg细胞和星形胶质细胞用文中所示的慢病毒载体感染后,每孔100个细胞的浓度接种于24孔板中。将细胞放置在37℃,在5%co2细胞培养箱中培养10天。随后将细胞用福尔马林固定,用结晶紫染色。我们定义50个细胞作为一个克隆。9.细胞周期检测通过流式细胞仪pi染色后如前人中描述的细胞周期流程操作。简而言之,将细胞铺于6孔板中,每孔2×105个细胞的浓度并用慢病毒处理。处理后48小时,收集细胞于240μlpbs和560μl的100%乙醇中,并在-20℃下固定过夜。细胞沉淀通过离心收集,并再悬浮于含有20mmedta和1mg/mlrna酶的500μlpbs中,然后在37℃下孵育1小时。pi溶液(50微克/毫升)的混合物用于样品染色。然后将样品进行流式细胞仪分析,并在536nm的激发波长和617nm的发射波长进行检测。10.流式细胞仪检测细胞凋亡将需检测的细胞铺于6孔板中,每孔2×105个细胞的浓度,并用慢病毒处理。慢病毒处理后48小时,收集细胞,胰蛋白酶处理,并用完全培养基洗涤一次。细胞(5×105)重新悬浮500μl1×bindingbuffer缓冲液中,并用异硫氰酸荧光素(fitc)标记的膜联蛋白v染色。染色后立即进行流式细胞仪检测分析。11.动物实验研究六周龄的雄性balb/c裸小鼠用于本研究,购自成都达硕实验动物有限公司。在小鼠(n=12)颅内注射感染了10moi的lv-shmef2d-1或lv-ctrl5×106u87mg细胞。40天内每天记录他们的死亡情况。所有动物实验均经成都军区总医院动物研究伦理审查委员会审查通过。肿瘤的体积通过公式计算“v=(长度×宽度2)/2”。12.统计分析每组实验至少重复叁次,实验所得数据,采用spss20.0软件进行统计分析。mef2d表达和存活之间的相关性由秩数检验评估。mef2d表达与其他变量之间的关系,我们使用了两种独立样本t检验。实时荧光定量pcr、细胞的生长速度和克隆形成的结果均通过双侧独立样本t检验。比较多样本量差异的显着性使用单向评估anova或双向anova方差分析,所有数值以平均值±标准差表示。p<0.05(*)和p<0.01(**)分别表示“差异显着”和“差异非常显着”。结果:1.mef2d表达水平升高预示恶性胶质瘤患者预后不良。为了研究mef2d的在患有恶性胶质瘤患者预后中的作用,我们使用qrt-pcr法进行检测恶性胶质瘤患者中mef2d的mrna水平。在iii级和iv级组织学分类的恶性胶质瘤标本中,分为一个mef2d高组和mef2d低组(我们通过相对定量rq平均值定义mef2d高/低)。与mef2d低组中相比,在mef2d高组中的患者预后较差(p=0.031)。此外,这些患者的样本mef2dmrna水平与世界卫生组织分级(2007年)正相关(p=0.048)。idh1/2突变也与mef2dmrna水平正相关(p=0.029)。但是,mef2dmrna水平和组织学分类之间没有显着的关联(p=0.064)。为了确认mef2d在肿瘤细胞中的定位,我们对恶性神经胶质瘤样本进行免疫组织化学检测。免疫组织化学染色表明,mef2d蛋白主要定位于癌细胞的细胞核中。因此,通过westernblot和免疫组化评估,mef2d蛋白的表达水平在恶性胶质瘤肿瘤组织与邻近正常组织相比表达更高。mef2dmrna表达水平在这些样品中也通过qrt-pcr进行测定,mef2d在肿瘤组织中mrna的表达水平比相邻的正常组织表达显着更高(p=0.03,0.02和0.02)。此外,与mef2d的蛋白水平低的星形胶质细胞相比,u87mg,u251mg和hela癌细胞(hela细胞用作mef2d阳性细胞系),mef2d在癌细胞系中的表达水平比星形胶质细胞更高(p<0.04)。这些结果表明,恶性神经胶质瘤细胞系具有异常高表达的mef2d。2.mef2d下调抑制恶性神经胶质瘤细胞系的增殖。因为恶性神经胶质瘤细胞系的mef2d表达水平高,我们用携带特异性靶向的mef2dmrna的短发夹rna的慢病毒载体(lv-shmef2d-1,lv-shmef2d-2)或对照组(lv-ctrl)感染的u87mg和u251mg细胞。感染后72小时,我们通过免疫印迹和qrt-pcr检测,研究u87mg和u251mg细胞的mef2d蛋白和mrna的水平。在u87mg和u251mg恶性神经胶质瘤细胞系中,lv-shmef2d-1和lv-shmef2d-2导致了大约65-95%mef2d蛋白表达下降。qrt-pcr数据还显示,在恶性神经胶质瘤细胞系中,shrna也下调了mef2d的mrna水平。mef2d下调被认为减少了u87mg细胞的增殖。在感染lv-shmef2d-1或lv-shmef2d-2的u251mg细胞中也有同样的情况,但对照组lv-ctrl细胞没有这种效果(p=0.02和0.01)。此外,u87mg细胞感染lv-shmef2d-1或lv-shmef2d-2后的细胞克隆数受此影响,随mef2d的水平下降而减少(p=0.01和0.01)。在u251mg细胞中也得到了类似的结果(p=0.01和0.02)。因此,mef2d的下调可以减少u87mg和u251mg细胞中的克隆数,这表明mef2d在恶性神经胶质瘤细胞系的增殖中至关重要。3.mef2d影响恶性神经胶质瘤细胞系的细胞周期和凋亡。为了研究mef2d促进恶性神经胶质瘤细胞系的增殖机制,使用流式细胞术分析细胞周期进程。u87mg和u251mg恶性胶质瘤细胞感染了lv-shmef2d-1,lv-shmef2d-2,或是lv-ctrl。这与此前肝癌中的报道结果相一致,在u87mg和u251mg细胞沉默mef2d表达导致细胞周期的s期和g2/m期的阻滞。mef2d可以调节在肝癌中靶基因如cdkn1a,gadd45a,和gadd45b的转录。为了证实在恶性胶质瘤中,mef2d是否调节这些基因,我们研究了mef2d的靶基因mrna水平。我们的数据证实,在u87mg细胞中沉默mef2d表达导致cdkn1a,gadd45a和gadd45b的表达增加。我们还研究mfe2d的下调是否导致恶性神经胶质瘤细胞的凋亡。使用流式细胞术分析检测lv-shmef2d-1或lv-shmef2d-2处理后的肿瘤细胞凋亡水平。凋亡细胞的百分比通过fitc-膜联蛋白v/pi染色来确定。我们的数据表明,不同mef2d水平细胞凋亡率显着不同。在lv-shmef2d-1和lv-shmef2d-2感染组凋亡率分别为39.4%和38.2%。与此相反,lv-ctrl感染组有较低的凋亡率(6.1%)。这些结果表明,mef2d通过诱导细胞周期s期和g2/m期的延迟,影响肿瘤细胞凋亡、抑制恶性胶质瘤细胞的增殖。另外,剪切的parp水平表明,细胞凋亡途径被诱导。因此,在mef2d沉默的细胞系中,剪切的parp蛋白的水平升高。综上所述,我们的结果强化了先前的发现,即mef2d促进癌细胞的增殖,参与细胞周期进展,并且在抑制细胞凋亡中起重要作用。4.mef2d的过表达促进星形胶质细胞的增殖和细胞周期进程。我们接下来研究mef2d过表达是否促进了正常脑的星形胶质细胞的增殖和细胞周期进程。感染过表达lv-mef2d的星形胶质细胞的mef2d水平升高,western印迹分析证实感染lv-mef2d之后的mef2d蛋白水平显着增加。qrt-pcr数据表明,lv-mef2d感染的星形胶质细胞的mfe2d的mrna水平高于对照细胞(p=0.01)。通过mts测定感染lv-mef2d或lv-gfp的星形胶质细胞的增殖率。我们发现,mef2d过表达增加星形胶质细胞的增殖(p=0.03)。此外,与对照病毒相比(lv-gfp),过表达mef2d升高星形胶质细胞的菌落数(p=0.04)。此外,我们对慢病毒过表达mef2d的星形胶质细胞的细胞周期进程进行了评估的。在星形胶质细胞的过度表达mef2d增加g0/g1期的细胞的百分比,同时降低细胞百分比中的g2/m和s期。总的来说,mef2d促进星形胶质细胞的增殖,并加速在星形胶质细胞g2/m期的过渡。5.mef2d的下调削弱了恶性胶质瘤细胞的致瘤性。为了研究mef2d是否促进恶性胶质瘤的致瘤性,在已建立的小鼠恶性胶质瘤模型基础上进行mef2d下调影响的检测。与对照组相比,mef2d低表达的恶性胶质瘤异种移植组具有更高的存活率。值得注意的是,颅内注射的u87mg细胞40天后,mef2d缺陷组有50%的存活率,而对照组均没有存活。lv-shmef2d-1感染组(5.6±5.3立方毫米)比Lv-CTRL感染组中肿瘤的平均大小显着较小(15.2±8.7立方毫米)(P=0.04)。Western免疫印迹、q RT-PCR和免疫组化染色检测均显示MEF2D在LV-CTRL感染组肿瘤中存在广泛表达,而在LV-sh MEF2D-1感染组的肿瘤中,MEF2D的表达明显降低。为了确认移植了shMEF2D的恶性神经胶质瘤细胞的小鼠的存活率增加是否是由于细胞增殖抑制或细胞毒作用影响,我们通过Ki67染色和TUNEL测定法,分别分析移植瘤肿瘤细胞的增殖和凋亡。结果表明,相比于Lv-CTRL感染组,Lv-shMEF2D-1感染组具有更弱的Ki67染色和更强的TUNEL染色。对MEF2D表达情况、Ki67和TUNEL阳性细胞进行计数。结果表明在Lv-CTRL-和Lv-shMEF2D-1治疗组,MEF2D阳性率分别为82.5%,3.9%。Lv-CTRL-和Lv--shMEF2D-1治疗组的Ki67在细胞中表达百分比分别为64.2%和28.6%。TUNEL染色表明他们的凋亡率分别为8.6%和57.8%。这些结果表明体内的MEF2D缺陷降低了恶性胶质瘤的致瘤性。结论:1.在恶性胶质瘤患者标本中,异常高表达MEF2D,从而导致恶性胶质瘤的预后较差。2.通过下调MEF2D介导了细胞周期S期和G2/M期的阻滞并促进细胞凋亡,进而抑制恶性神经胶质瘤细胞系的增殖。3.MEF2D在星形胶质细胞的过度表达通过调节细胞周期进程加速细胞增殖。4.裸鼠恶性胶质瘤模型显示,MEF2D缺乏可以阻止恶性神经胶质瘤在体内形成。5.最后我们的结论是MEF2D可以充当恶性神经胶质瘤的潜在致癌基因,因此可作为一个恶性胶质瘤治疗的候选目标。(本文来源于《第叁军医大学》期刊2016-04-01）
赵英华,刘晓昌,高乐,陈李彤,杨子桧[9]（2016）在《神经生长因子修饰的间充质干细胞促进兔下颌骨牵张成骨时下牙槽神经损伤修复的实验研究》一文中研究指出目的探讨慢病毒介导的人神经生长因子β(h NGFβ)在兔下颌骨牵张成骨模型中促进下牙槽神经损伤修复的作用。方法分离兔下颌骨中的骨髓间充质干细胞(MSC)并通过重组的慢病毒将h NGFβ基因插入到其基因序列中。对20只新西兰白兔进行下颌骨牵张成骨,并在手术时向骨牵张缝隙下牙槽神经周围植入经h NGFβ基因重组质粒转染的MSC或对照MSC(每组10只)。经过牵张,在固定期第14天处死动物并获取下牙槽神经样本进行神经组织学分析和神经组织形态定量分析。结果下牙槽神经组织分析显示,移植h NGFβ基因修饰MSC组与对照组相比较,有更多的再生神经纤维和更少的神经变性。神经组织形态定量分析显示,与对照组相比,移植h NGFβ基因修饰MSC组的有髓纤维密度显着增多,提示移植h NGFβ基因修饰MSC能够显着地加快兔下颌骨牵张成骨过程中的下牙槽神经的修复。结论慢病毒介导h NGFβ基因修饰MSC将有希望为临床减少牵张成骨造成的下牙槽神经损伤提供一种有效的基因治疗方法。(本文来源于《创伤外科杂志》期刊2016年03期）
伞光,宋佳[10]（2015）在《血小板衍生内皮细胞生长因子转染脂肪间充质干细胞促进移植脂肪血管化》一文中研究指出背景:血小板衍生内皮细胞生长因子在脂肪移植中可促进血运重建。目的:探索血小板衍生内皮细胞生长因子和脂肪间充质干细胞的双重促进脂肪移植成活率的作用。方法:1从新西兰大白兔腹股沟皮下脂肪中获取脂肪间充质干细胞,将第3代脂肪间充质干细胞分为实验组、对照组和空白组。实验组以Lenti-PD-ECGF-EGFP转染脂肪间充质干细胞,对照组以Lenti-EGFP转染脂肪间充质干细胞,空白组脂肪间充质干细胞未转染任何病毒。2取已被Lenti-PD-ECGF转染的脂肪间充质干细胞与DMEM完全培养基混合,然后与脂肪组织混合,作为A组;同样的方法用未转染任何病毒液的脂肪间充质干细胞制备B组,单独应用DMEM完全培养基而没有任何细胞成分的为C组。3组移植物注射于大白兔背部左上(A组)、左下(B组)、右上(C组)部皮下组织中。结果与结论:1实验组脂肪间充质干细胞中血小板衍生内皮细胞生长因子mR NA与蛋白的表达水平高于对照组和空白组,且细胞增殖速度也比对照组和空白组快。2A组移植物质量及毛细血管数量大于B组和C组。提示血小板衍生内皮细胞生长因子基因转染脂肪间充质干细胞后不仅可以持续的表达该蛋白,同时也能促进脂肪间充质干细胞的增殖。(本文来源于《中国组织工程研究》期刊2015年41期）
肌细胞促进因子论文开题报告
（1）论文研究背景及目的
此处内容要求：
首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景，再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题，并提出你的论文准备的观点或解决方法。
写法范例：
肿瘤微环境中的中性粒细胞作为主要的肿瘤浸润性髓系细胞,在肿瘤生长和恶性转化中起着重要作用。近期研究证明,肿瘤相关中性粒细胞通过促进肿瘤生长、转移、血管生成及免疫抑制等途径影响肿瘤发展,并且细胞因子在其中各个阶段均发挥了关键作用。现从细胞因子的角度对肿瘤相关中性粒细胞促进肿瘤作用途径及机制的研究进展进行综述,为肿瘤防治研究提供新的思路。
（2）本文研究方法
调查法：该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。
观察法：用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。
实验法：通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。
文献研究法：通过调查文献来获得资料，从而全面的、正确的了解掌握研究方法。
实证研究法：依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。
定性分析法：对研究对象进行“质”的方面的研究，这个方法需要计算的数据较少。
定量分析法：通过具体的数字，使人们对研究对象的认识进一步精确化。
跨学科研究法：运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。
功能分析法：这是社会科学用来分析社会现象的一种方法，从某一功能出发研究多个方面的影响。
模拟法：通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。
肌细胞促进因子论文参考文献
[1].应金威.基质细胞衍生因子-1α激活募集髓核干细胞促进椎间盘原位再生的潜能及机制研究[D].南方医科大学.2019
[2].李程豪,王厚明,骆亚莉,刘永琦.肿瘤相关中性粒细胞促进肿瘤过程中细胞因子影响作用的研究进展[J].生命科学.2019
[3].邓明,谢萍,马永刚,明江华,周炎.脂质体包埋脑源性神经营养因子联合骨髓间充质干细胞促进脊髓损害后突触再生[J].山西医科大学学报.2018
[4].郝哲.同时转染表皮生长因子与血管内皮生长因子基因的脂肪干细胞促进皮肤损伤修复潜能的体外研究[D].华中科技大学.2018
[5].朱喜忠,刘子铭,刘毅,熊华章,杨继滨.低氧诱导因子1α联合Scleraxis修饰人羊膜间充质干细胞促进腱骨愈合的体外实验[J].中国组织工程研究.2018
[6].付秀美,杨海艳,王荣良,杨振江,付文亮.脂肪源性干细胞促进大鼠受损坐骨神经传导及脊髓脑源性神经营养因子和睫状神经营养因子的表达[J].解剖学杂志.2017
[7].李静,李勇,郑春泉.肝细胞生长因子基因修饰的脐带间充质干细胞促进鼻黏膜创伤愈合的实验研究[C].2016年浙江省医学会耳鼻咽喉头颈外科学学术年会论文汇编.2016
[8].赵友光.肌细胞增强因子2D促进恶性胶质瘤细胞致瘤性机制研究[D].第叁军医大学.2016
[9].赵英华,刘晓昌,高乐,陈李彤,杨子桧.神经生长因子修饰的间充质干细胞促进兔下颌骨牵张成骨时下牙槽神经损伤修复的实验研究[J].创伤外科杂志.2016
[10].伞光,宋佳.血小板衍生内皮细胞生长因子转染脂肪间充质干细胞促进移植脂肪血管化[J].中国组织工程研究.2015