导读:本文包含了绵羊卵母细胞论文开题报告文献综述及选题提纲参考文献，主要关键词:白藜芦醇,绵羊,卵母细胞,活性氧
绵羊卵母细胞论文文献综述
努日比娅姆·麦麦提托合提,张博,赵茜,阿尔曼·海热,宋玉坤[1]（2019）在《白藜芦醇对绵羊卵母细胞体外成熟的影响》一文中研究指出本实验探究体外成熟(IVM)培养基中添加不同浓度白藜芦醇(0、0.5、2.0、5.0μmol/L RES)对绵羊卵母细胞核质成熟的影响。IVM 24 h后观察卵丘细胞扩展率和卵母细胞第一极体形成情况,并检测卵母细胞细胞质内活性氧(ROS)和谷胱甘肽(GSH)含量。结果表明:与对照组相比,0.5μmol/L RES组的卵丘细胞扩展率无显着差异,卵母细胞第一极体的形成显着提高,卵母细胞胞质中ROS显着降低,GSH含量显着提高;添加量增至5.0μmol/L卵丘扩展率、第一极体形成率、胞质内GSH含量显着下降。综上所述,在绵羊卵母细胞IVM液中添加0.5μmol/L RES通过降低胞质内ROS及提高GSH含量增强卵母细胞抗氧化能力,提高卵母细胞核成熟率及胞质质量,而促进卵母细胞体外成熟。(本文来源于《中国畜牧杂志》期刊2019年11期）
张通,栗瑞兰,范晓梅,刘春洁,海日汗[2]（2019）在《p66Shc在绵羊卵母细胞中的表达及其与胞质氧化还原稳态的关系》一文中研究指出【目的】研究p66Shc在绵羊卵母细胞中的表达特征及其与卵母细胞胞质氧化还原稳态的关系,为揭示p66Shc参与调控卵母细胞胞质氧化还原稳态分子机制提供理论依据。【方法】试验所用卵丘-卵母细胞复合体(cumulus-oocyte complexes, COCs)来源于屠宰场的绵羊卵巢。分别收集成熟前优质和劣质、常规成熟24 h及成熟30 h老化的卵母细胞,采用实时荧光定量PCR对成熟前后不同质量绵羊卵母细胞中p66Shc mRNA的表达量进行分析,利用细胞免疫荧光结合MitoTracker Red探针对p66Shc蛋白和线粒体进行共定位,同时利用荧光探针DCFH-DA和卵母细胞自发荧光分别对成熟前后不同质量卵母细胞内ROS水平和氧化还原稳态进行检测。此外,采用外源H_2O_2诱导的氧化应激处理成熟前优质卵母细胞,并对p66Shc蛋白的表达及定位进行了检测分析。【结果】实时荧光定量PCR结果显示,成熟前劣质和成熟后老化卵母细胞中p66Shc mRNA表达量分别显着(P<0.05)高于成熟前优质和常规24 h成熟的卵母细胞。然而优质卵母细胞成熟前后p66Shc mRNA表达量没有显着差异(P>0.05)。共定位结果表明,p66蛋白主要分布在线粒体分布活跃的区域。细胞免疫荧光结果显示,成熟前劣质和成熟后老化卵母细胞中p66Shc蛋白表达量也分别显着(P<0.05)高于成熟前优质和常规24 h成熟的卵母细胞。与成熟前优质和常规24 h成熟的卵母细胞相比,成熟前劣质和成熟后老化卵母细胞表现出线粒体分布紊乱和活性下降、ROS水平升高以及氧化还原稳态的失衡。此外,与未添加外源H_2O_2的对照组相比,外源H_2O_2处理成熟前优质卵母细胞诱导的氧化应激显着(P<0.05)上调p66Shc蛋白的表达并促使p66Shc由胞质向细胞核定位。【结论】p66Shc基因在劣质和老化的绵羊卵母细胞中呈现高水平的表达,H_2O_2诱导的氧化应激显着上调p66Shc蛋白的表达并影响其亚细胞定位。总之,绵羊卵母细胞中p66Shc表达上调影响了胞质的氧化还原稳态。(本文来源于《中国农业科学》期刊2019年12期）
王骏[3]（2019）在《Clathrin Heavy Chain 1在绵羊卵母细胞减数分裂成熟及早期胚胎发育过程中的作用》一文中研究指出网格蛋白(Clathrin)不仅是通过囊泡运输来介导细胞内吞作用的胞质蛋白,而且在稳定微管蛋白和染色体排列中也具有重要作用。Clathrin是由叁条重链和叁条轻链组成的蛋白。网格重链蛋白1(Clathrin heavy chain 1,CLTC)是Clathrin其中的一条的重链,每条链的N-末端结构域可以与有丝分裂纺锤体结合。在本实验中,我们研究了CLTC在绵羊卵母细胞减数分裂成熟和早期胚胎发育中的功能。蛋白质免疫印迹表明,在绵羊卵母细胞成熟中CLTC蛋白维持高水平表达。尽管CLTC在生发泡(Germinal vesicle,GV)和生发泡破裂(Germinal vesicle breakdown,GVBD)阶段的细胞质中没有特异性定位,但CLTC在卵母细胞的中期Ⅰ(Metaphase Ⅰ,MⅠ)和中期Ⅱ(Metaphase Ⅱ,MⅡ)阶段定位于纺锤体区域。在绵羊卵母细胞成熟过程中,使用taxol、nocodazole和冷处理(cold treatment)来研究卵母细胞中CLTC和β-微管蛋白(β-tubulin,TUBB)之间的关系。我们发现药物和cold处理虽然没有影响CLTC在卵母细胞中的表达,但是影响了CLTC在卵母细胞中的分布。在绵羊卵母细胞中,使用显微注射技术将CLTC特异的Morpholino(MO)注射到卵母细胞,从而敲减CLTC蛋白。CLTC蛋白的敲减破坏了纺锤体的组装和染色体排列,并且降低了第一极体的排放率。免疫荧光染色结果表明,CLTC在绵羊早期胚胎发育各时期均有亚细胞定位。在MII期敲减CLTC蛋白,严重降低了绵羊的早期胚胎发育率。综上所述,我们的研究结果表明,CLTC在绵羊卵母细胞减数分裂成熟和早期胚胎发育中起着至关重要的作用。(本文来源于《内蒙古大学》期刊2019-06-05）
赵玉芬,娜美尔格,杨炳雪,白玥,于泊洋[4]（2019）在《绵羊卵母细胞不同cAMP水平模型的构建》一文中研究指出环腺苷酸(cAMP)是维持哺乳动物卵母细胞减数分裂停滞的关键分子.本试验利用ELISA和地衣红染色技术,检测了西洛酰胺(Cilostamide)与乌药醚内酯(Linderane)对绵羊卵母细胞和卵丘细胞内cAMP水平以及生发泡破裂(GVBD)的影响.结果显示:体外培养3h后,10μmol/L Cilostamide和5μmol/L Linderane分别能显着提升和抑制卵母细胞而非卵丘细胞内的cAMP水平;体外培养6h后,Cilostamide组卵母细胞GVBD率(14.91%)显着低于对照组(34.45%)与联合添加组(33.47%)(P<0.05),而Linderane组与其相反,表明不同cAMP水平卵母细胞模型构建成功.(本文来源于《内蒙古大学学报(自然科学版)》期刊2019年04期）
瞿静雯,王健,李拥军,王强,尹修远[5]（2019）在《绵羊卵母细胞成熟培养的研究进展》一文中研究指出卵母细胞培养是胚胎工程的重要组成部分,是体外受精、胚胎移植及转基因技术的基础。不断完善卵母细胞成熟培养条件,可以大大提高卵母细胞体外成熟的质量,充分发挥绵羊卵母细胞的繁殖潜力。绵羊卵母细胞体外成熟培养受到多种因素的限制,其中培养液成分包括基础培养基、血清、激素、卵泡液、生长因子、抗氧化物和维生素等6个方面。笔者对绵羊卵母细胞成熟培养的培养液成分相关研究进展进行综述,旨在提高绵羊卵母细胞体外成熟培养的质量和促进体外胚胎技术研究。(本文来源于《江苏农业科学》期刊2019年10期）
张博,努日比娅姆·麦麦提托合提,宋玉坤,郜宇,王旭光[6]（2019）在《α-亚麻酸通过提高培养基抗氧化能力促进绵羊卵母细胞体外核成熟》一文中研究指出本实验旨在研究体外成熟(IVM)培养基中添加不同浓度α-亚麻酸(ALA)(0、10、50、100、200μmol/L)对绵羊卵丘扩展和卵母细胞核成熟的影响,测定IVM 24 h后培养基中超氧化物歧化酶(SOD)和谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)活力以及脂质过氧化产物丙二醛(MDA)含量。结果表明:与添加0μmol/L ALA相比,培养基中添加50、100μmol/L ALA促进绵羊卵母细胞的卵丘扩展(P<0.05),且100μmol/L ALA卵丘细胞扩展率最高;添加100μmol/L ALA促进绵羊卵母细胞的核成熟(P<0.05);添加200μmol/L ALA则具有抑制卵丘扩展和细胞核成熟的趋势(P<0.05);添加100μmol/L ALA增加SOD活力(P<0.05)和GSH-Px活力(P<0.05);添加50、100μmol/L ALA显着降低MDA含量(P<0.05),又以添加100μmol/L ALA效果最好。综上,添加100μmol/L ALA可以通过抗氧化作用改善绵羊体外成熟培养基微环境,促进卵丘扩展和卵母细胞核成熟。(本文来源于《中国畜牧杂志》期刊2019年05期）
曹忻,邹云龙,陆会宁,高丹丹,周平[7]（2018）在《绵羊卵母细胞3种体外培养方式下外源添加血管内皮生长因子对FLT-1表达的影响》一文中研究指出本研究旨在探究外源添加血管内皮生长因子(VEGF)对绵羊卵母细胞体外成熟过程中FLT-1表达的影响。采用3种不同的体外成熟培养方式:裸卵单独培养、颗粒细胞与裸卵共培养以及卵丘-卵母细胞复合体(cumulus-oocytes complexes,COCs)培养,外源添加5ng·mL-1血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)为试验组,不添加为对照组,采用qPCR、Western blot分别检测绵羊卵母细胞及颗粒细胞中FLT-1mRNA和蛋白表达水平。结果表明:1)3种不同培养方式下,无论是否添加VEGF,颗粒细胞与卵母细胞中均能检测到FLT-1mRNA和蛋白表达。添加VEGF能极显着降低共培养试验组12、16和20h以及COCs试验组4、8、12、16和24h颗粒细胞FLT-1mRNA表达(P<0.01),能极显着降低共培养试验组12、20和24h以及COCs试验组4、8和12h卵母细胞FLT-1mRNA表达(P<0.01),但会极显着增加裸卵试验组4~24h卵母细胞FLT-1mRNA表达(P<0.01)。2)添加VEGF能够极显着降低共培养试验组和COCs试验组中颗粒细胞FLT-1蛋白4~12h的表达量(P<0.01),共培养试验组和COCs试验组中颗粒细胞FLT-1蛋白表达呈波动性下降趋势。COCs对照组和试验组颗粒细胞中FLT-1蛋白表达量在各时间点均高于同期共培养试验组。3)3种不同培养方式中,除裸卵试验组在20~24h有一个急剧升高外,其余组中卵母细胞FLT-1蛋白表达量总体均呈波动性下降趋势。综上表明,卵母细胞和颗粒细胞中存在FLT-1的自分泌和旁分泌,卵母细胞中FLT-1mRNA的表达与外围颗粒细胞的存在与否、数量多少以及包裹方式息息相关;在体外培养环境下,添加VEGF有效地激活了FLT-1mRNA表达,但同时结合FLT-1蛋白以促进卵母细胞成熟的生物学效应,从而减少了FLT-1蛋白的表达。(本文来源于《畜牧兽医学报》期刊2018年09期）
海日汗,张通,王兆琛,张家新[8]（2018）在《C型钠肽预处理对绵羊卵母细胞体外成熟及相关基因表达的影响》一文中研究指出本实验旨在研究C型钠肽(CNP)预处理对绵羊卵母细胞体外成熟(IVM)及相关基因(Dnmt1、Zar1、Mater、HAS2、PTX3和PTGS2)表达的影响。以体外成熟24 h为对照组,研究CNP预处理组(200nmol/L CNP预处理4 h然后体外成熟24 h)中卵母细胞经孤雌激活(PA)后的发育情况,并通过RT-q PCR检测CNP预处理对成熟相关基因表达的影响。结果表明:200 nmol/L CNP可在4 h内有效抑制卵母细胞减数分裂进程。CNP预处理组中孤雌胚胎囊胚率显着高于对照组(P<0.05);绵羊卵母细胞成熟培养前,CNP预处理组中卵丘细胞扩展相关基因HAS2、PTGS2和PTX3表达量较对照组极显着上调(P<0.01);CNP预处理组中母源基因Dnmt1、Zar1和Mater表达量与对照组均无显着差异(P>0.05)。绵羊卵母细胞成熟培养后,CNP预处理组中PTX3表达量极显着高于对照组(P<0.01),而CNP预处理组中HAS2表达量较对照组极显着下调(P<0.01);CNP预处理组中母源基因Dnmt1、Zar1和Mater表达量均显着高于对照组(P<0.05)。综上表明,CNP预处理可影响绵羊卵丘细胞扩展相关基因HAS2、PTGS2、PTX3和母源基因Dnmt1、Zar1、Mater的表达,并提高绵羊卵母细胞成熟质量及早期胚胎发育能力。(本文来源于《中国畜牧杂志》期刊2018年07期）
张通[9]（2018）在《绵羊卵母细胞“双阶段”成熟培养及p66Shc在绵羊卵母细胞和早期胚胎的表达调控》一文中研究指出哺乳动物胚胎体外生产效率低,很大程度上与卵母细胞体外成熟质量差以及卵母细胞和早期胚胎暴露于人工化学合成静态的、不适的体外培养环境中造成的氧化应激有关。哺乳动物卵母细胞和胚胎胞质氧化还原稳态的维持是影响卵母细胞体外成熟质量以及胚胎发育潜能的关键因素之一。科学研究表明,哺乳动物卵巢上卵泡内壁层颗粒细胞产生的生理性旁分泌因子C型利钠肽(C-type Natriuretic Peptide,CNP)具有维持卵母细胞减数分裂停滞的特性。此外,近年的研究表明,原癌基因SHC(Src homology 2 domain-containing transforming protein C,SHC)编码的亚型66KDa线粒体氧化应激蛋白(p66Shc)及其信号特性在调控细胞氧化应激、细胞凋亡和机体衰老过程中发挥了重要作用。本研究旨在探讨C型利钠肽预孵育绵羊卵丘卵母细胞复合体对卵母细胞核减数分裂进程及成熟质量的影响,采用C型利钠肽暂时抑制绵羊卵母细胞核减数分裂进程延长胞质成熟时间,促进核质同步成熟,以期提高绵羊卵母细胞体外成熟质量及其受精后胚胎的发育潜能,同时研究了氧化应激蛋白p66Shc在绵羊卵母细胞和胚胎中的表达特征以及对胞质氧化还原稳态调控的分子机理,为改善绵羊体外培养体系,提高体外胚胎生产效率提供理论依据。本研究构建了绵羊卵母细胞体外“双阶段”成熟培养体系,分析了氧化应激基因p66Shc在卵母细胞和早期胚胎中mRNA和蛋白的表达模式,以及与线粒体分布和活性、ROS水平及氧化还原稳态的关系,为进一步研究p66Shc对卵母细胞和早期胚胎氧化还原调控分子机制网络以及p66Shc的功能作用提供理论依据。综上所述,得到如下研究结果:1.利用C型利钠肽构建绵羊卵母细胞体外“双阶段”成熟培养体系。首先使用生理性减数分裂抑制剂C型利钠肽预孵育液孵育绵羊卵丘卵母细胞复合体(Cumulus Oocyte Complexes,COCs),然后转入成熟液中进行第二阶段的体外成熟(In Vitro Maturation,IVM)。结果表明,200 nM/L CNP能够在4 h之内有效维持绵羊COCs的减数分裂停滞,而且CNP受体NPR2(Natriuretic Peptide Receptor 2,NPR2)主要在绵羊卵丘颗粒细胞上表达。与常规标准24 h IVM和其他实验组相比,200nM/L CNP预孵育COCs 4 h,然后体外成熟24 h的囊胚率和囊胚质量显着优于其他实验组(P<0.05)。此外,成熟前生发泡期(Germinal Vesicle,GV)卵母细胞中线粒体主要呈现明亮的周边分布和整个细胞质中细微的弥散分布模式。而200 nM/L CNP预孵育COCs 4 h后,线粒体颗粒定位到胞质外周和核周区域。200 nM/L CNP预孵育4 h然后体外成熟24 h的卵母细胞线粒体分布与常规24 h成熟卵母细胞的线粒体分布模式相似,线粒体主要集中于卵母细胞的皮质区域,但线粒体簇更多、更大。这些结果表明,CNP预孵育绵羊COCs提高了卵母细胞的成熟质量和发育能力,并且具有促进体外胚胎生产效率的巨大潜力。2.p66Shc在绵羊卵母细胞中的表达特征及其与胞质氧化还原稳态的关系。采用RT-qPCR(Real-Time quantitative PCR,RT-qPCR)对成熟前后不同质量绵羊卵母细胞中p66Shc mRNA的表达丰度进行分析,利用细胞免疫荧光结合MitoTracker Red探针对p66Shc蛋白和线粒体进行共定位,同时利用荧光探针DCFH-DA和卵母细胞自发荧光分别对成熟前后不同质量卵母细胞内ROS水平和氧化还原稳态进行检测,此外,采用外源促氧化剂过氧化氢(Hydrogen Peroxide,H_2O_2)诱导的氧化应激处理成熟前优质卵母细胞。结果表明,成熟前劣质和成熟后老化卵母细胞中p66Shc mRNA和蛋白的表达分别显着高于成熟前优质和常规24 h成熟的卵母细胞(P<0.05);与成熟前优质和常规24 h成熟的卵母细胞相比,成熟前劣质和成熟后老化卵母细胞表现出线粒体分布紊乱和活性下降、ROS水平升高以及氧化还原稳态失衡的状态,此外,外源H_2O_2诱导的氧化应激显着上调p66Shc蛋白的表达(P<0.05)并促使p66Shc由胞质向细胞核定位。综上表明,p66Shc在劣质和老化的绵羊卵母细胞中呈现高水平的表达特征,p66Shc高表达影响了绵羊卵母细胞胞质氧化还原稳态。3.p66Shc在绵羊早期植入前胚胎发育过程中的表达和空间定位模式。采用RT-qPCR技术和细胞免疫荧光技术检测p66Shc基因在早期胚胎发育过程中mRNA表达丰度和蛋白表达水平及空间定位模式。结果表明,p66Shc mRNA和蛋白在早期胚胎发育的各个阶段均有表达,p66Shc mRNA在4-8细胞阶段显着下调(P<0.05),在胚胎基因组激活后的桑椹胚和囊胚阶段显着上调(P<0.05)。细胞免疫荧光染色结果表明,p66Shc蛋白主要定位于植入前胚胎发育各个阶段卵裂球细胞质的周边区域。值得注意的是,36位丝氨酸(Ser-36)磷酸化的p66Shc在胚胎基因组激活之前2-8细胞阶段仅定位于细胞质,胚胎基因组激活后磷酸化的(Ser-36)p66Shc不仅定位于细胞质区域,而且主要在细胞核定位。由此推测,p66Shc基因的表达与定位与绵羊早期胚胎发育调控存在密切的关系。4.p66Shc参与绵羊早期植入前胚胎发育过程中过氧化氢诱导的细胞质氧化应激。研究结果表明,早期卵裂(≤28 h)胚胎的囊胚率(66.67%)显着高于晚期卵裂(>28 h)胚胎的囊胚率(22.93%)(P<0.05)。与早期卵裂胚胎相比,晚期卵裂胚胎p66Shc mRNA和蛋白高丰度表达并且线粒体活性较低。此外,外源性H_2O_2诱导的氧化应激显着降低胚胎发育能力(P<0.05),上调p66Shc蛋白的表达丰度(P<0.05),然而抗氧化剂(1U/ul过氧化氢酶和10~-66 mol/L褪黑素)处理缓解了H_2O_2诱导胚胎发育能力衰退、ROS积累以及p66Shc表达的累积。外源性H_2O_2诱导的氧化应激诱导了36位丝氨酸(Ser-36)磷酸化的p66Shc从胞质向细胞核定位。这些结果表明p66Shc及其Ser-36磷酸化参与了绵羊植入前胚胎发育过程中的胞质氧化应激调节。5.siRNA显微注射敲低p66Shc降低了绵羊胚胎氧化损伤的风险并提高了胚胎的发育能力。将靶向p66Shc特异的CH2结构域的3种特异性siRNA分子显微注入绵羊合子阶段的细胞质中,同时设计了3个对照组(没有注射,注射溶剂无酶水和注射非特异性siRNA)以测试显微注射技术的潜在作用及干扰分子的特异性。结果表明,在绵羊合子阶段显微注射p66Shc siRNA导致p66Shc的mRNA和蛋白质水平显着降低(P<0.05)。p66Shc敲低胚胎表现出细胞内ROS水平显着降低(P<0.05)和DNA氧化损伤标志物8-OHdG的显着减少(P<0.05),并且p66Shc敲低胚胎表现出发育至桑葚胚的倾向。这些发现表明,敲低p66Shc可能提高了胚胎在基因组激活阶段对氧化应激的抵抗力。(本文来源于《内蒙古农业大学》期刊2018-06-01）
海日汗[10]（2018）在《CNP预处理对绵羊卵母细胞成熟、母源基因和卵丘细胞扩展相关基因表达的影响》一文中研究指出本论文研究了C型钠肽(C-type natriuretic peptide,CNP)预处理对绵羊卵母细胞减数分裂阻滞和后续发育能力的影响,以及对绵羊卵母细胞成熟前后母源基因和卵丘细胞扩展相关基因表达的影响。研究结果如下:1.绵羊卵母细胞用含有200 nM CNP的TCM199分别处理0 h,2 h,4 h,6 h,或8 h,通过DAPI染色检测卵母细胞经不同时间培养后所处GV期比例。结果表明CNP可在4 h内有效的维持卵母细胞减数分裂阻滞。以体外成熟(In vitro maturation,IVM)24 h为对照组,研究CNP预处理组(200 nmol/L CNP预处理4 h然后体外成熟24 h)中卵母细胞经孤雌激活(Parthenogenetic activation,PA)后的发育情况。结果表明,CNP预处理组中孤雌胚胎囊胚率(43.44%)显着高于对照组(31.72%,P<0.05);而两组间的卵裂率和囊胚细胞数相似。2.以IVM 24 h为对照组,200 nmol/L CNP预处理4 h然后体外成熟24 h作为CNP预处理组,通过RT-qPCR检测绵羊卵母细胞中母源基因Dnmt1、Zar1、Mater表达。结果表明,母源基因Dnmt1、Zar1和Mater在绵羊卵母细胞中均有所表达,不论CNP预处理与否,卵母细胞成熟后的母源基因Zar1、Mater表达量均显着下调(P<0.05),而Dnmt1表达量显着上调(P<0.05);卵母细胞成熟培养前,CNP预处理组和对照组的卵母细胞中Dnmt1、Zar1、Mater表达量无显着差异(P>0.05);卵母细胞成熟后,CNP预处理组中卵母细胞的Dnmt1、Zar1、Mater表达量较对照组均显着上调(P<0.05)。3.以IVM 24 h为对照组,200 nmol/L CNP预处理4 h然后体外成熟24 h作为CNP预处理组,通过RT-qPCR检测卵丘细胞内PTGS2、HAS2和PTX3表达。结果表明,卵丘细胞扩展相关基因HAS2、PTX3和PTGS2在绵羊卵丘细胞内均有表达,不论CNP预处理与否,卵母细胞成熟后,卵丘细胞中的HAS2、PTX3和PTGS2表达量均极显着上调(P<0.01);卵母细胞成熟培养前,CNP预处理组中卵丘细胞扩展相关基因PTGS2、HAS2和PTX3表达量较对照组均极显着上调(P<0.01);卵母细胞成熟后,CNP预处理组较对照组中HAS2表达量极显着下调(P<0.01),PTX3表达量极显着上调(P<0.01),而PTGS2表达量并无显着变化(P>0.05)。总之,CNP预处理影响了绵羊卵母细胞成熟过程中母源基因Dnmt1、Zar1、Mater和卵丘细胞扩展相关基因HAS2、PTGS2、PTX3的表达,可暂时阻止绵羊卵母细胞减数分裂的恢复,并提高绵羊卵母细胞成熟质量及早期胚胎发育能力。这一结果为进一步研究绵羊卵母细胞成熟机制提供了依据。(本文来源于《内蒙古农业大学》期刊2018-06-01）
绵羊卵母细胞论文开题报告
（1）论文研究背景及目的
此处内容要求：
首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景，再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题，并提出你的论文准备的观点或解决方法。
写法范例：
【目的】研究p66Shc在绵羊卵母细胞中的表达特征及其与卵母细胞胞质氧化还原稳态的关系,为揭示p66Shc参与调控卵母细胞胞质氧化还原稳态分子机制提供理论依据。【方法】试验所用卵丘-卵母细胞复合体(cumulus-oocyte complexes, COCs)来源于屠宰场的绵羊卵巢。分别收集成熟前优质和劣质、常规成熟24 h及成熟30 h老化的卵母细胞,采用实时荧光定量PCR对成熟前后不同质量绵羊卵母细胞中p66Shc mRNA的表达量进行分析,利用细胞免疫荧光结合MitoTracker Red探针对p66Shc蛋白和线粒体进行共定位,同时利用荧光探针DCFH-DA和卵母细胞自发荧光分别对成熟前后不同质量卵母细胞内ROS水平和氧化还原稳态进行检测。此外,采用外源H_2O_2诱导的氧化应激处理成熟前优质卵母细胞,并对p66Shc蛋白的表达及定位进行了检测分析。【结果】实时荧光定量PCR结果显示,成熟前劣质和成熟后老化卵母细胞中p66Shc mRNA表达量分别显着(P<0.05)高于成熟前优质和常规24 h成熟的卵母细胞。然而优质卵母细胞成熟前后p66Shc mRNA表达量没有显着差异(P>0.05)。共定位结果表明,p66蛋白主要分布在线粒体分布活跃的区域。细胞免疫荧光结果显示,成熟前劣质和成熟后老化卵母细胞中p66Shc蛋白表达量也分别显着(P<0.05)高于成熟前优质和常规24 h成熟的卵母细胞。与成熟前优质和常规24 h成熟的卵母细胞相比,成熟前劣质和成熟后老化卵母细胞表现出线粒体分布紊乱和活性下降、ROS水平升高以及氧化还原稳态的失衡。此外,与未添加外源H_2O_2的对照组相比,外源H_2O_2处理成熟前优质卵母细胞诱导的氧化应激显着(P<0.05)上调p66Shc蛋白的表达并促使p66Shc由胞质向细胞核定位。【结论】p66Shc基因在劣质和老化的绵羊卵母细胞中呈现高水平的表达,H_2O_2诱导的氧化应激显着上调p66Shc蛋白的表达并影响其亚细胞定位。总之,绵羊卵母细胞中p66Shc表达上调影响了胞质的氧化还原稳态。
（2）本文研究方法
调查法：该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。
观察法：用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。
实验法：通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。
文献研究法：通过调查文献来获得资料，从而全面的、正确的了解掌握研究方法。
实证研究法：依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。
定性分析法：对研究对象进行“质”的方面的研究，这个方法需要计算的数据较少。
定量分析法：通过具体的数字，使人们对研究对象的认识进一步精确化。
跨学科研究法：运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。
功能分析法：这是社会科学用来分析社会现象的一种方法，从某一功能出发研究多个方面的影响。
模拟法：通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。
绵羊卵母细胞论文参考文献
[1].努日比娅姆·麦麦提托合提,张博,赵茜,阿尔曼·海热,宋玉坤.白藜芦醇对绵羊卵母细胞体外成熟的影响[J].中国畜牧杂志.2019
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[3].王骏.ClathrinHeavyChain1在绵羊卵母细胞减数分裂成熟及早期胚胎发育过程中的作用[D].内蒙古大学.2019
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[5].瞿静雯,王健,李拥军,王强,尹修远.绵羊卵母细胞成熟培养的研究进展[J].江苏农业科学.2019
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[7].曹忻,邹云龙,陆会宁,高丹丹,周平.绵羊卵母细胞3种体外培养方式下外源添加血管内皮生长因子对FLT-1表达的影响[J].畜牧兽医学报.2018
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[9].张通.绵羊卵母细胞“双阶段”成熟培养及p66Shc在绵羊卵母细胞和早期胚胎的表达调控[D].内蒙古农业大学.2018
[10].海日汗.CNP预处理对绵羊卵母细胞成熟、母源基因和卵丘细胞扩展相关基因表达的影响[D].内蒙古农业大学.2018